草鱼细菌性败血症病疫苗的研究
草鱼病毒性出血病灭活疫苗的简易制备与应用
组别 接种方法 腹腔注射 腹腔注射 腹腔注射 腹腔注射 腹腔注射
不同剂量灭活苗的安全测定
剂量 （67 0 尾） "+$ "+! "+& "+% "+* 观察时间 （天） $% $% $% $% $% 实验尾数 存活尾数 !" !" !" !" !" !" !" !" !" !"
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灭活苗的效力检验
04淡水渔业2002年第32山东省临沂师范学院东院区生物系临沂276003临沂师范学院实习基地水产繁育养殖研究中心原临沂农校实习基地1992年建场养鱼1994始陆续有草鱼出血病的发生我们自1995年开始着手进行出血病免疫预防试验采用本场出血病鱼病料做病毒种源制做灭活苗对本场草鱼进行免疫注射有效的预防了本病的发生取得满意的效果
《淡水渔业》 !""! 年第 &! 卷第 & 期草鱼Leabharlann 毒性出血病灭活疫苗的简易制备与应用
刘德福 孙世友 彭福峰 王兴礼
（山东省临沂师范学院东院区生物系， 临沂 !’(""&） 临沂师范学院实习基地水产繁育养殖研究中心 （原临沂农校实习基地） $))! 年建场养鱼， $))% 年开 始陆续有草鱼出血病的发生， 我们自 $))* 年开始着 手进行出血病免疫预防试验， 采用本场出血病鱼病 料做病毒种源制做灭活苗， 对本场草鱼进行免疫注 射， 有效的预防了本病的发生， 取得满意的效果。现 将草鱼病毒性出血病灭活疫苗的简易制备与应用试 验报告如下。 $ 病料来源与确认 $+$ 病料毒种的来源 取新鲜出血症状表现明显 的自然死亡或濒临死亡的鱼， 要求皮下肌肉、 口腔周 围、 鳍基部、 鳃盖、 肠道、 肝脏等部位出血或全身肌肉 鲜红的病死鱼为好， 主要用其肝脏、 脾脏、 肾脏和肌 肉， 称重后放入 # %, 冰箱保存备用。 $+! 病料毒种的实验室确认 取上述病料少许立 即送化验室进行检验， 使用快速诊断方法， 确认出血 性病毒病后， 方可进行出血病灭活疫苗的制作。 $+& 种毒病料的继代生产 取 $+$ 所述野毒病料 少许， 组织捣碎机捣碎， 用 "+-*. 的生理盐水 $" 倍 稀释。选健康无病长 $" 厘米左右的幼龄草鱼进行 继代接种培养， 每尾接种 "+& / "+* 毫升， 要求水温 大部分在 $% 天内死亡， 用 !’, 左右进行培养观察， 同样方法用将接种后 $% 天内死亡的病死鱼病料进 行第二代接种， 这样连续进行五代以上。无菌取连 续五代以上， 出血症状表现明显， $% 日内死亡或濒 临死亡的病死鱼肝脏、 脾脏、 肾脏和肌肉， 称重后放 入 # %, 冰箱保存备用。 ! 出血病灭活疫苗的简易制备步骤 无 !+$ 病料的加工 取新鲜或 $+& 所述备用病料， 菌操作， 将其剪成小块， 然后放入组织捣碎机捣碎 $ 分钟。加入 $" 倍 "+-*. 的无菌生理盐水， 稀释成匀 浆。然后在 &""" 转 0 每分钟下离心沉淀 &" 分种， 取 上悬液测量后每毫升加入青霉素、 链霉素各 -"" / $""" 单位备用。
草鱼人工免疫防疫技术及相关疫苗介绍
草鱼人工免疫防疫技术及相关疫苗介绍中国水产养殖网出处：水产前沿浏览量：次文中国水产科学研究院珠江水产研究所陈总会巩华黄志斌近几年，我国对养殖鱼类的免疫研究，取得了可喜成绩，特别在草鱼养殖方面，代表了我国水产疫苗的发展水平，目前已经有注射型疫苗、浸泡型疫苗取得生产批准文号，口服型疫苗也在实验室阶段完善中，目前尚无产品面市。
国内比较成熟的注射用水产疫苗产品是珠江水产研究研制的草鱼出血病活疫苗（株），年月获得国家一类新兽药证书（证书号：（）新兽药证字号），年月获得生产批准文号（兽药生字（））。
该疫苗的特点是用量少、效价高、保护力强、免疫产生期快、免疫期长、使用安全方便，克服了组织苗（土法疫苗）效果不稳定和细胞灭活疫苗免疫期较短的缺点，主要应用于对草鱼病毒性出血病（株）的免疫防病，使用浓度为，注射剂量毫升，免疫时效为年。
一、注射免疫在冬末春初，气温在℃时放养草鱼种期间适宜注射疫苗。
夏季高温鱼病易发的时候不适宜注射疫苗。
注射规格：通常寸（）以上的鱼种，就可以注射疫苗。
如在操作熟练的情况下，小规格鱼种也可以注射疫苗，但注射的剂量要减少，且保证鱼种体长在以上。
、注射免疫准备工作注射免疫准备工作首先要选择型号合适的连续注射器，使用时须用的酒精消毒或用开水煮沸分钟消毒。
一般来说，规格在朝寸的鱼种一般选用注射针头，规格在寸以上的鱼种一般选用注射针头。
若采用腹腔注射时，要防止扎针太深伤及鱼体内脏，可在注射针头上套一小截塑料管或剪短针头，暴露出的针尖长度略长于鱼体腹肌厚度。
由于鱼类种苗大多对溶解氧等水质因子要求较高，抗应激能力较差，对环境胁迫敏感，免疫接种过程中稍不注意就可能发生损伤鱼类甚至导致死亡的意外，给疫苗接种操作带来了一定的难度。
因此按常规法取养殖池、塘、网箱水域水样，检测水质的盐度、溶解氧、氨氮、亚硝酸盐等理化因子，并结合经验性水色观察，判断水质质量，必要时做优势藻类镜检分析，以确认是否存在有害藻类优势种群。
草鱼出血病防治技术(下)
2019.9邱军强1房元喧2(1.上海海洋大学，农业部淡水水产种质资源重点实验室，水产动物遗传育种中心上海市协同创新中心，水产科学国家级实验教学示范中心，上海201306；2.泰州市春达动物药业饲料有限公司，江苏兴化225763）五、防控措施草鱼出血病尚无有效的治疗药物，目前主要从提高鱼体免疫力、减少诱发因素两方面着手，做到预防疫病发生和控制死亡量，以减少草鱼出血病带来的经济损失。
1.预防措施①清除池底过多淤泥，用生石灰或漂白粉进行彻底清塘消毒，条件允许，可干塘曝晒半个月。
②切断病原传播，禁止将带有病毒的鱼苗、鱼种输出及运入。
③鱼种在放养时要用10毫克/升的聚维酮碘溶液浸泡6～8分钟，放养密度应控制在800尾/亩以下为宜。
④免疫预防。
注射或浸泡草鱼出血病组织浆灭活疫苗或细胞弱毒疫苗进行预防。
草鱼出血病活疫苗(GCHV-892株)是目前国内唯一获批上市的水产疫苗，通过天然活性物质对病毒减毒处理制备而成，具有使用剂量小、易保存、养殖当年鱼免疫1次即可达到保护效果的优点，免疫保护率高达90%以上。
⑤发病季节的药物预防。
全池泼洒二氧化氯、戊二醛、苯扎溴铵溶液(水产用)等消毒剂。
⑥加强饲养管理，定期加注新水，保证池水透明度大于30厘米，保持优良水质。
⑦投喂营养丰富、全价的配合饲料，提高鱼体抗病能力。
2.治疗措施(1)采用聚维酮碘溶液(水产用)泼洒，每立方米水体0.5毫升，连续泼洒两次，隔天1次。
(2)全池施用三黄散(水产用)抗病毒中草药，用量为1～2.5毫克/升水体。
泼洒前1天傍晚将三黄散(水产用)用温水浸泡10～12小时。
(3)每亩水深1米，用金银花75克、菊花75克、大黄375克、黄柏225克研成细末，加食盐150克，混合后加适量水全池泼洒。
(4)内服：每1千克饲料用三黄散(水产用)20克＋菌立清10克混饲内服，连用5～7天。
六、华中地区防治经验目前我国草鱼养殖已经遍布全国各地，但仍然以华中地区(如湖北、湖南)为主要养殖区。
草鱼疫苗注射技术
草鱼疫苗注射技术作者：暂无来源：《渔业致富指南》 2020年第7期杜莉宁草鱼为中国主要淡水鱼类养殖对象，分布广泛，全国各大水系都有分布，2018年草鱼养殖产量550万吨，占全国淡水养殖产量18.6%。
草鱼疫苗研制成功和推广使用，对于草鱼养殖成活率和养殖产量起关键性作用。
草鱼种下塘前注射出血病疫苗和草鱼细菌性三病疫苗。
草鱼免疫注射技术是目前能解决草鱼“四病”的一条有效途径。
本文对草鱼疫苗注射技术进行初步探讨。
一、原理在低温情况下（8~20℃），草鱼的新陈代谢能力较弱，通过注射接种途径可使二龄草鱼鱼种获得免疫抗原，经过5~30天的低温（10~15℃）诱导，使注射过的草鱼鱼种完成初次免疫反应，在水温提高到20℃以上时草鱼的免疫抗病水平能得到迅速加强，产生足够能抵御草鱼疾病的相应抗体，从而达到减少二龄草鱼发病机会及提高草鱼成活率的生产目的。
二、疫苗的种类目前，我国的水产用草鱼疫苗主要有草鱼出血病灭活疫苗、草鱼出血病活疫苗、淡水鱼类细菌性败血症疫苗、草鱼细菌性三联疫苗等。
灭活疫苗是以含有细菌或病毒的材料利用物理或化学的方法处理，使其丧失感染性和毒性而保持有免疫原性，并结合相应的佐剂，接种动物后能产生自动免疫、预防疾病的一类生物制品，如草鱼出血病灭活疫苗。
活疫苗是微生物的自然强毒株通过物理的、化学的和生物学的方法连续传代，使其对原宿主动物丧失致病力，或只引起亚临诊感染，但仍保持良好的免疫原性、遗传特性的毒株，用以制备的疫苗，如草鱼病毒性出血病活疫苗（GCHV—892株），草鱼细菌性烂鳃、败血、赤皮三联灭活疫苗，淡水鱼类细菌性败血症疫苗等。
三、疫苗的使用1.注意事项。
要选择质量合格，效力较好，正规厂家生产有国家兽药批准文号的疫苗。
疫苗保存要按说明低温保存，草鱼出血病疫苗免疫期为12个月，开瓶后12小时用完。
2.时间选择。
选择在水温为8~22℃的冬春季进行。
已感染患病的草鱼不宜进行注射免疫。
3.鱼种准备。
各种健壮无病的草鱼鱼种均可实行免疫注射，注射前用0.5%的食盐水溶液或漂白粉10mg/L和硫酸铜8mg/L混合溶液，将鱼从暂养网箱移到消毒液器具中进行注射。
鱼用疫苗免疫途径的研究概况(下)
2.提高口服免疫效果的措施口服疫苗免疫效果并不十分理想，主要是由于抗原受到胃酸的作用和蛋白酶的水解，使抗原到达后肠部位时，其完整性和免疫部位已被破坏或抗原被消化掉，没有足够的抗原到达后肠(Quentel C等，1997)。
因此，为了使抗原在鱼的前肠不被消化，则发展了许多的包裹材料来保护抗原。
现如今，常用的有海藻酸钠、明胶、聚交酯醣酯聚合物、卤虫、生物被膜等材料。
(1)海藻酸钠。
海藻酸钠是一种天然多糖类化合物，是从褐藻中提取而来的，现已作为包裹药品和细胞的材料，具有药物制剂辅料所需的稳定性、溶解性、黏性和安全性等特性(Chan L W等，2002)，Joosten等(1997)用海藻酸钠包裹溶藻弧菌免疫虹鳟和鲤鱼，其结果显示在鱼体中有抗体产生。
Tian等(2008)用海藻酸钠包裹含有能够表达淋巴囊肿病毒蛋白的质粒进行口服免疫日本牙鲆，检测免疫3～16周牙鲆的抗体效价，表明其效果明显。
Romalde等(2004)认为通过口服海藻酸钠微囊化的疫苗虽然不能作为初次免疫的方法，但对鱼有较好的保护效果。
Altun等(2010)也用海藻酸钠包裹L.garvieae bacterin疫苗口服免疫虹鳟鱼，其结果表明，在免疫30天后的RPS为53%，61天后对鱼体进行二次免疫，120天时其RPS达到61%，效果明显。
李新华等(2007)用海藻酸钠包裹嗜水气单胞菌疫苗口服免疫银鲫，结果表明微胶囊疫苗组血清抗体效价较高，且维持时间长，对口服免疫效果有明显的提升。
(2)聚交酯醣酯聚合物。
目前，聚交酯醣酯聚合物也被应用于鱼类口服疫苗的包裹技术上，它是一种疏水型的聚酯(Tian J Y等，2008)，降解性好且无毒，而且容易生产，价格便宜。
Tian等(2008)利用聚交酯醣酯聚合物包裹LCDV的DNA疫苗免疫日本牙鲆，免疫90天后，在日本牙鲆体内各组织中检测到LCDV的mRNA，而且用ELISA在1～24周均可检测到抗体。
Altun等(2010)分别利用聚交酯醣酯聚合物和海藻酸钠包裹L.garvieae bac-terin免疫虹鳟，聚交酯醣酯聚合物为包裹材料的免疫效果比海藻酸钠为包裹材料的好。
草鱼人工免疫防疫技术及相关疫苗介绍
草鱼人工免疫防疫技术及相关疫苗介绍草鱼人工免疫防疫技术及相关疫苗介绍2012-04-27 10:35:00中国水产养殖网出处：水产前沿浏览量：4597 次我要评论文/ 中国水产科学研究院珠江水产研究所陈总会巩华黄志斌近几年，我国对养殖鱼类的免疫研究，取得了可喜成绩，特别在草鱼养殖方面，代表了我国水产疫苗的发展水平，目前已经有注射型疫苗、浸泡型疫苗取得生产批准文号，口服型疫苗也在实验室阶段完善中，目前尚无产品面市。
国内比较成熟的注射用水产疫苗产品是珠江水产研究研制的草鱼出血病活疫苗（GCHV-892株），2010年12月获得国家一类新兽药证书（证书号：（2010）新兽药证字51号），2011年3月获得生产批准文号（兽药生字（2011）190986021）。
该疫苗的特点是用量少、效价高、保护力强、免疫产生期快、免疫期长、使用安全方便，克服了组织苗（土法疫苗）效果不稳定和细胞灭活疫苗免疫期较短的缺点，主要应用于对草鱼病毒性出血病（GCHV-892株）的免疫防病，使用浓度为10-2，注射剂量0.2毫升，免疫时效为1年。
一、注射免疫在冬末春初，气温在10-20℃时放养草鱼种期间适宜注射疫苗。
夏季高温鱼病易发的时候不适宜注射疫苗。
注射规格：通常3寸（10cm）以上的鱼种，就可以注射疫苗。
如在操作熟练的情况下，小规格鱼种也可以注射疫苗，但注射的剂量要减少，且保证鱼种体长在3cm以上。
1、注射免疫准备工作注射免疫准备工作首先要选择型号合适的连续注射器，使用时须用75%的酒精消毒或用开水煮沸15-20分钟消毒。
一般来说，规格在11朝-4寸的鱼种一般选用4#注射针头，规格在5寸以上的鱼种一般选用5#注射针头。
若采用腹腔注射时，要防止扎针太深伤及鱼体内脏，可在注射针头上套一小截塑料管或剪短针头，暴露出的针尖长度略长于鱼体腹肌厚度。
由于鱼类种苗大多对溶解氧等水质因子要求较高，抗应激能力较差，对环境胁迫敏感，免疫接种过程中稍不注意就可能发生损伤鱼类甚至导致死亡的意外，给疫苗接种操作带来了一定的难度。
草鱼细菌性败血症治疗实例
该 养殖户在前期 治疗过程 中出现了 三个方面的错误造成了治疗效果不理想。 第一 是 恩 诺 沙 星和 氟苯 尼 考 配 伍 错 发病 基 本 情况 误。 恩诺沙星和氟苯尼考同时使用会出现 发病 池塘 面 积 ｌ ８ 亩， 水 深２ ｍ 左右。 养 拮 抗作 用， 这两种 药物不能 配伍同时使 殖模式为以草鱼养殖为主的鱼苗养殖， 鱼 用 。 而该养殖户并不了解这一点， 为了追 苗均为自己培育。 亩放 养量 １ ２ ０ ０ ０ 尾， 其 中 求更好的治疗效果， 错误的同时使用了这 草鱼 占放 养量 的８ ０ ％左右， 搭配品种为鲢 两种药物 ， 造 成了内服药效果下降， 外用 鱼、 鳙 鱼和 鲫 鱼。 药有不 能杀死体 内的病原菌， 所 以， 病情 从７ 月底 开始 ， 草 鱼 出现零 星死 亡 ， 至 直 出现 反复 。 ８ 月初每天死亡量超过百条。 先后外用二 第二 是 药饵 拌 合 方法 不对 。 该 养 殖 在 氧化氯 、 聚维酮碘 ； 内服恩诺 沙星 、 氟苯 拌药饵时， 只是单纯的将药物拌打湿的饲 尼考 、 多维 、 三黄散治疗多次治疗 ， 未得 料 上， 阴干后投喂。 这种拌合方法 ， 药物 到有 效控制， 每次治 疗后， 死鱼有 一定程 和饲 料结 合的不紧密， 在投饵机 投饵的 度的减少， 但一直未停止死 鱼， ｌ ０ 天左右 高速运动过程中， 会有大量的药物和饲料 病情出现反复 ， 有开展大量死鱼。 分离 ， 造成药物散失， 从而使病鱼药物摄 在塘口本 人发现池水透 明度２ ５ ｅ ａ左 食 量不足， ｒ 药物防 治效果 不明显 。 对此 ， 右， 水色较浓 、 发暗， 下风头有大量浮沫。 本人指导养殖户， 先用面粉打稀一点的浆 死亡草鱼规 格２ ５ ～ ３ ０ 尾／ ｋ ｇ ， 病鱼体 色发 糊 ， 待浆糊冷到室温后， 再将药物倒人浆 黑， 体 表充血 ， 腹 部膨大 ， 腹腔内积有 大 糊中充分搅拌 ， 然后再将拌有药物的浆糊 量腹水并有溶血现象， 个 别肠道内有少量 和饲料拌合， 阴干后投喂。 这种拌合方法 食物， 并 且有充气 的现象 、 多粘液 ， 同时 有效的增强了药物和饲料的粘合度， 避免 鳃 丝末端腐 烂。 本人现 场初步诊 断为细 了投喂过程中药物散失。 菌性败血症 ， 后经实验室检测， 在病 鱼体 第三是投饵方法存在问题。 该养殖户 内分离 出了温和气单胞菌 ， 证实了本人的 在投喂药饵时， 一直是按照平时７ ０ ％的投 判断。 饵量 全程投喂药饵 。 这 种投饵方法造 成 二、 治疗 方 法 大 量的药饵被健 康的鱼摄 食 ， 浪费了药 在现场经详细了解发现， 该 养殖户使 饵 。 对 此本人 指导养殖户在投喂药 饵时 用的药物虽然都对治疗细菌性败廊症 有 先投喂２ ０ ％投饵量的未添加药物的饲料， 作用， 但是在使用的过 程中存在严重的问 再投喂５ ０ ％投饵量的药饵， 这样既保 证病 题， 进 而造成治疗没有取得良好的效果。 鱼能够 吃到足够的药饵 ， 有减少了药饵的 对此 ， 本人建议 ： 外用二氧化氯全池泼洒 使用量 ， 降低了病害治疗成本。 ２ 次。 同时， 从９ 月９ Ｅ ｌ 起停食２ 天， 然后先投 （ 通联 ： ２ ２ １ ３ ０ ０ ， 江苏省邳州市农业委 喂２ ０ ％的正常投饵 量的未添加药 物的配 员 会）
池塘草鱼细菌性败血症治疗一例
根据 以上 调查数据与分析结果，我们提 出以下两点
调 查结 论 并提 出一些 建 议 ：
首 先排除事故虾塘养殖的斑节对虾因有毒、有害浮 游生物影响、暴发流行性病害以及水体水质变坏而造成
况，及时发现 问题及时解决 。④在排换水期问池塘中一
定要 采 取 增 氧措 施 （ 增 氧 泵 ） 以预 防 缺 氧 。 开 ，
色浓 ，水面有蓝绿色浮沫。部分病鱼离群独游，有 的靠
边缓 慢游 动 、体 色 暗黑 消 瘦 、有 的鳃 部 已有 轻微 腐 烂 ， 鳃 盖 充血 发 红 ， 口腔 微 红 ，尾 鳍充 【 ，不 吃 食 。而 大 部 ｆ 【 Ｌ
１该养殖池发病原因与放养搭配不合理 、水质调控 ． 不好 、疾病预防重视不够有关。该养殖池在放养时，没 有搭配一定数量的白鲢 ，在养殖过程 中，随着池塘投饲 量增加，残饵、鱼类排泄物、死亡藻类不断增加，底部 有机物沉积严重 ，这些有机物发酵大量耗氧 ，分解产生 氨氮、亚硝酸盐等，导致池塘底质水质酸化 ，水 中有益
状 态 ，造 成 疾 病 的暴 发 。
虾塘 中水仅为 正常水位 的２ ３ ／ ，造成事 故虾池水 中缺 氧。同时在生物学习性方面来说，由于大规格生物在水
中的耗 氧 量大 ， 因此 相 同 的外 界情 况 下 ，水体 中大 规格 （ 体积 较大 ） 生物 比小规格 （ 积 较 小） 生物 更容 易缺 的 体 的 氧 死 亡 。我 们在 对 事 故发 生后 虾 塘 中捕 捉 的存 活 的对 虾
该养殖ｆ 养殖生物的大量死亡。其次虾塘养殖斑节对虾
死亡 的 主要 原 因是 阴 天 的夜 间虾 塘 水位 降低造 成 养 殖水 体 中对虾 密度 增 加 ， 同时 未及 时 换水 和 采取 增 氧 措施 造
草鱼出血性疾病病原体的鉴定、致病性及免疫防治研究
草鱼出血性疾病病原体的鉴定、致病性及免疫防治研究鱼类出血性败血症(Septicemia)是我国水产养殖业中最为常见的流行病,随着集约化模式的发展以及水环境的严重恶化,由气单胞菌属(Aeromonas)感染导致的爆发性出血病症状极为严重,该病发病时间短、致死率高,带来了巨大的经济损失,严重的阻碍了水产养殖业的健康发展。
本研究拟通过病原物的分离、鉴定及致病性的综合分析,推测其致病机理。
在此基础上,将益生菌添加到鱼类饲料中应用到草鱼的养殖生产中,检测益生菌发酵饲料对细菌感染后草鱼的抗病能力,以探讨益生菌作为免疫刺激剂在防御出血性疾病中的作用。
主要研究如下:从新乡市某鱼塘采集具有该病病症的草鱼样本,取患病皮肤、肝、脾和肠等组织,经初筛、复筛后得4株纯化的病原菌,16S rDNA的鉴定后分别为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)、腐败希瓦氏菌(Shewanella sp.)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)。
将四种菌株分别对健康草鱼进行回归感染,通过患病症状得出维氏气单胞菌是致草鱼发病的主要菌株,并将其作为目标菌株进行毒性效应的研究。
以气溶素、肠毒素和外膜蛋白三种毒力基因作为靶向基因,得出维氏气单胞菌较其他三株菌毒力基因表达明显;将目标菌株对健康草鱼进行急性毒性研究得:96 h半致死浓度为3.6×10~4 CFU/mL,安全浓度为9.11×10~3 CFU/mL。
以浓度1.82×10~5、2.81×10~6、1.82×10~8 CFU/mL的菌悬液腹腔注射感染草鱼48 h和以浓度为2.81×10~6 CFU/mL的菌悬液感染24 h、48 h、72 h、96 h,分别提取草鱼各组织器官的总RNA,通过RT-qPCR方法检测IL-8和TNF-α基因表达变化,分析病原菌感染后炎症相关基因与草鱼肠道炎症的关联性,结果表明经病原菌感染后草鱼各组织mRNA水平的IL-8和TNF-α转录水平较对照组均不程度的提高。
草鱼和青鱼细菌性败血感染症的病原菌研究
圈直 径 １ ４ ｍ） 对青霉素 Ｇ等 ８种药物耐药或低度敏感（ ６～ ２ｒ ， ａ 抑菌圈直径 ０—１ ｍ） 能引起供试健康鲤鱼的发病 与 ４ｒ ； ａ
一
２ ６一 ３
江苏农 业科 学 ２ １ ０ ０年第 １ 期
秦 国民， 张晓君， 陈翠珍 ， 等．草鱼和 青鱼细菌性败血感染症的病原菌研 究【 ］ Ｊ ．江苏农 业科学 ， ｔ （ ） ２ ６ ２ ９ ２ Ｏ ｉ ：３ — ３ ０
草鱼 和青鱼细菌性败血感染症 的病原菌研究
秦 国民 ，张晓君 ，陈翠珍 ，房 海 ，阎斌 伦
１ 材 料 与 方 法
１ １ 病 例检 验 ．
１３４ １ Ｐ Ｒ模板 Ｄ Ａ的制备 ． ．． Ｃ Ｎ
取代 表菌株接种 于 Ｌ Ｂ肉
汤中 ２ ８℃ 培 养 １ ， 细 菌 小 量 基 因 组 Ｄ Ａ提 取 试 剂盒 （ ６ｈ 按 Ｎ 大
连宝生物工程有限公司产 ， 批号 Ｄ ８０ ） Ｖ １ Ａ 所述方法提取 Ｄ Ａ Ｎ
ｒＮ Ｒ Ａ基 因 Ｐ Ｒ 扩增 的 ２个 引物 分 别 为 ２ Ｆ 正 向引 物 ）５ 一 Ｃ ７（ ：
Ａ Ａ Ｔ Ｔ Ａ Ｃ Ｃ Ａ） Ｇ Ｃ Ｃ Ｇ 一３ （ 应 于 Ｅｃｅｉ ｉ． Ｇ Ｇ ＩＧ Ｔ （／ Ｔ Ｇ Ｔ Ａ 对 ｓ ｒｈ ｈ ｃａ
及主要病理变化检验 ， 同时取其病 变材料做抹 片后 革兰 氏染
胞菌已成 为引人关注的人及动物共患病 的重要病原 ” 。
１３ ３ 主要理化性状测定 取纯培养 菌分别接种 于细菌理 ． ． 化特性鉴 定 用 的培 养基 ， 主要 参 照 《 见 细菌 系 统鉴 定 手 常
一龄草鱼病毒性出血病的预防措施
草鱼出血病是我国最早、最全面系统研究过的一种鱼类病毒性疾病，也是一直危害我国草鱼养殖的一种特别严重的草鱼病毒性疾病，临床以红鳃盖、红肠和红肌肉等其中一种或多种症状显现为特征，对一龄草鱼的鱼种生产和养殖可造成重大经济损失。
2008年农业部公告第1125号将其列为二类动物疫病。
从近几年现场调查和诊断结果来看，该病仍然是危害一龄草鱼鱼种最严重的疾病，每年的发病率和死亡率都非常高。
由于基层水产技术服务及养殖人员缺乏一定临床技术经验，很多病毒性疾病几乎误诊成其他细菌性疾病而错误用药；大部分养殖户也因为对草鱼病毒出血病缺乏认识而盲目乱用药和错误操作，反而刺激鱼体产生应激反应，造成大量死亡，经济损失很大。
一、草鱼出血病病原草鱼呼肠孤病毒(GCRV)又称草鱼出血病病毒，病毒为二十面体的球形颗粒，双层衣壳，无囊膜。
此病毒为我国分离的第一株鱼类病毒。
该病主要传播途径是水平传播(主要通过水和外寄生虫)。
传染源是已经感染或带病毒的草鱼，也可通过卵进行垂直传播。
二、症状流行特点草鱼出血病的临床症状较为复杂，主要是草鱼体内外各个器官和组织表现出斑点状或块状充血，鳍条、鳃盖、眼眶、口腔、下颚等表皮组织不用解剖就可以看到充血现象。
病鱼眼球突出，鳃丝苍白或充血。
肌肉、肠道、肠系膜、鳔壁、胆囊、肝、脾、肾等器官，也往往出现充血现象，故依症状定名为草鱼出血病。
草鱼出血病发病季节比较长，主要发生在每年5―10月、水温在20～30℃的季节，以25～28℃最为流行。
在长江中下游地区有5―6月和9―10月两个主要流行季节，对于高密度饲养、高蛋白质饲料投喂草鱼池危害更甚，常发生全塘大部分死亡，对提高单位池塘草鱼产量是一个严重的威胁因素。
三、发病原因1.草鱼鱼种的投放密度过大许多养殖户盲目追求产量和效益，随意加大投放密度。
由于投放密度过大，在养殖中后期，随着池塘鱼类负载量的加大以及饲料投喂量的增加，水质难以控制，容易老化、恶化。
由于水体环境不良，氨态氮、亚硝酸盐、硫化氢等有害物质含量上升，草鱼体质变弱，导致出血病的发生。
草鱼注射疫酊后大量死亡的病例浅析及防治方法
通过本病例发病原 因的分析和 治疗 ，我们 总结了 以下几点 ：养殖户在购进鱼苗 时要注意检疫 ，不要购 进有寄生虫寄生 的鱼苗 ，防止鱼苗继发性烂鳃 ；养殖 户在鱼苗放养前要检测池塘水质 ，有些池塘用 生石 灰 消毒后碱性没有下 降，这样在鱼苗放养后就会 因为碱 性较 高而对鱼苗产生环境胁迫 ；养殖户在给鱼 苗注射
止鱼 苗产 生严重的应激 反应。
江西省 水产科 学研 究所 罗 楠
三、发病 原因
饶
毅
徐先栋
周 智勇 盛银平
邮编 ３ ３ ０ ０ ３ ９
用 水 质 快速 分 析 盒检 测 池 塘水 样 ｐ Ｈ 值 和 氨氮 ， 度范 围 内，遇到温 度突变、幅度大 、频率 高，有 利于 刺激车轮 虫繁殖。所 以，该病鱼塘在施药过轻而 未杀
五 、 结 论
晴 交替 天气 ，车轮 虫病 就完全 有可 能在 ２ ～３ 天 内再 暴发 。所 以，该病鱼 塘因施药过轻 ，后 ３ 天 出现死鱼
量 有 增 加 现 象 就 成 自然 。
治疗车轮 虫病 ，选择全 池泼洒 ０ ． ５ 克／ 米。 硫 酸铜 与０ ． ２ 克／ 米。 硫 酸亚铁合剂是 安全有效 的，但 必须深 入调查养殖水体环境因素 ：水温 、透 明度 、ｐ Ｈ 、盐度 等 ，根据硫 酸 铜毒 性随着 温度 的升高 而增 强 ，随着 ｐ Ｈ 值 的增 加 、有机 物 的增 多和 食盐 的存 在 而 减 小 ， 来适 度增调硫酸铜剂量 。同时 ，须考究施药方式 ，以
清 车 轮 虫 的情 况 下 ，适逢 水 温 １ ９ ￣２ ３ ｏ Ｃ的 阴 、 雨 、
者采取 先将硫酸铜 、硫酸 铁各 自用 清水分 开溶解 ， 然后 各取 单位 量混 合 ，逐一 分批 次兑 水均 匀全池 泼
草鱼细菌性与病毒性出血病 - -
草鱼细菌性与病毒性出血病
摘要:1．症状与诊断草鱼细菌性出血病：发病后鱼体表充血，肛门红肿，腹部膨大，腹腔内积有大量腹水并有溶血现象。
早期肠道内有少量食物，并且有充气的现象、多粘液，同时鳃丝末端腐烂。
草鱼病毒性出血病：病鱼体表各组织器官或组织出现斑点或块状出血，甚至全身出血，撕开1．症状与诊断
草鱼细菌性出血病：发病后鱼体表充血，肛门红肿，腹部膨大，腹腔内积有大量腹水并有溶血现象。
早期肠道内有少量食物，并且有充气的现象、多粘液，同时鳃丝末端腐烂。
草鱼病毒性出血病：病鱼体表各组织器官或组织出现斑点或块状出血，甚至全身出血，撕开表皮后可见全身肌肉呈现红色。
鳃丝出血或苍白色，体腔有时有腹水，肠道内无食物，充血但不糜烂。
2．防治方法
(1)草鱼细菌性出血病：
①第一天用二氧化氯每立方米O．4克全池泼洒，第二天用抗暴威每立方米0．05克全池泼洒。
同时用鱼病康(氟苯尼考)每千克鱼20毫克拌饵内服，连用5至7天；
②强氯精每立方米0．3至O．4克全池泼洒，连用2至3天。
同时用诺氟沙星每千克鱼20至30毫克拌饵内服，连用3至5天。
(2)草鱼病毒性出血病：
①在鱼种下塘前用百分之3至5的食盐水药浴片刻，然后采用出血病疫苗注射或浸洗进行免疫预防。
②在发病季节外用二澳海因每立方米0．3克或大黄每立方米1至2．5克全池泼洒，每半月一次，同时每月内服药物1至2个疗程，每100千克鱼每天用三黄粉400克加板蓝根120克拌饵内服5至6天或每千克饲料拌入病毒灵10至15克，连服7日，病情严重者可重复一个疗程。
鱼发炎――细菌性败血病
锦鲤出现精神萎靡、鳍部出血、鳞片脱落、鳃部 肿胀发红等明显症状。
原因
锦鲤细菌性败血病主要是由于细菌感染所致，常 见感染源有水生昆虫、细菌等。
治疗
及时隔离病鱼，使用抗菌药物治疗，如庆大霉素 、土霉素等，同时对鱼缸进行消毒处理。
案例三：热带鱼的细菌性败血病
症状
热带鱼出现食欲不振、鳍部出血、鱼体发黑、鳞片脱落等明显症 状。
检查鱼的体表
细菌性败血病通常会导致鱼的体表出现红斑、溃疡或者 坏疽等症状。通过观察鱼的体表，可以初步判断是否患 有细菌性败血病。
检查鱼的活动场所
细菌性败血病可能会导致鱼的活动场所出现浑浊、臭味 等情况。因此，检查鱼的活动场所也是诊断细菌性败血 病的重要手段之一。
预防措施
01
定期清洁鱼池
定期清洁鱼池是预防细菌性败血病的重要措施之一。通过清除鱼池中
鱼发炎――细菌性败 血病
2023-11-04
目录
• 疾病概述 • 病原菌与病因 • 诊断与预防 • 案例分析 • 结论与展望
01
疾病概述
定义和症状
定义
细菌性败血病是一种由细菌引起的鱼类疾病，也称为细菌性出血病或出血性 败血症。
症状
患病鱼体通常会出现充血、贫血、眼球突出、鳍基部出血、鳃丝颜色变淡等 症状，同时鱼体还会伴有出血、溃疡和坏疽等病理变化。
研究鱼类免疫机制和开发新型免疫 制剂，通过提高鱼体的免疫力来预 防和治疗细菌性败血病。
加强饲养管理技术的研究和推广， 提高鱼体的抗病能力和适应能力， 减少疾病的发生和传播。
THANKS
感谢观看
珊瑚、海藻等。
治疗
03
及时隔离病鱼，使用抗菌药物治疗，如氟苯尼考、庆大霉素等
鱼细菌性败血症怎么治？能治好吗？.doc
鱼细菌性败血症怎么治？能治好吗？
概述：鱼一旦患上细菌性败血症，鱼体病变症状比较明显。
对于患鱼在治疗上，应遵循外用泼洒和内服治疗药物两种方式相结合的方法，来进行治疗，方可更好的达到里表兼治的目的。
鱼细菌性败血症怎么治?
1、先检查鱼是否患寄生虫病，采用肉眼观察和显微镜检查鱼的体表、鳃、肠道等部位，然后对症下药杀灭寄生虫，用杀虫类药物(速效杀虫灵、菌毒杀等)全池泼洒。
2、杀虫后停食1-2天，用抗菌类药物(鱼病灵、内服康、四病灵等)等制成药饵，让鱼内服，5--7天为一疗程。
药饵的制作：先用面粉制成面糊，准确估计池塘中治疗时的载鱼量，按所用药物的剂量称取后拌和成“药糊”，再拌和饵料、晾于(要避免阳光直射)后喂鱼。
治疗鲤、鲫用“药糊”拌豆饼、菜饼等饲料制成沉性药饵投喂在食台上;治疗草鱼、鳊鱼用“药糊”粘在浮萍或水草上投喂在草架内;治疗鲢、鳙鱼用“药糊”拌麸皮等比重轻的饲料，直接撒于水面。
病情严重的塘口，将上述三种药饵同时投喂。
3、药饵投喂一个疗程后，对水体(因鱼的粪便中带有致病菌)进行一次消毒，可用0.5ppm三氯异氰尿酸或每亩水深1米，用生石灰10公斤全池泼洒。
鱼细菌性败血症能治好吗?
该病是可以治好的。
特别是症状较轻，处于发病初期的病鱼更易治愈。
而病情严重的
患鱼，也会症状有所好转。
治疗鱼细菌性败血症要注意什么?
注意要点：
1、在治疗细菌性败血症鱼病的同时，要兼顾其它并发症(肠炎、烂鳃、赤皮等)的治疗。
2、全池泼洒的药，要准确测量水深，计算出水体总体积。
3、用药后要注意巡塘，防止用药后水中浮游生物大量死亡，造成水质恶化，溶氧降低，引起鱼类浮头和泛塘。
草鱼细菌性出血病的治疗
病害防治Disease Control33 ·文章编号：1006-3188（2017）05-0033-02草鱼细菌性出血病的治疗赵素珍 叶建生 袁圣 韩兴鹏 刘美剑（江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300）摘要：针对草鱼养殖生产中经常发生的细菌性出血病，采取积极有效的治疗措施，为养殖户减少经济损失，同时提出治疗过程中的注意事项，以期为广大养殖生产技术人员提供技术指导。
关键词：草鱼；细菌性出血病；治疗中图分类号：S942 文献标识码：B基金项目：江苏省高校“青蓝工程”人才培养专项、江苏省科协“科技服务站”和“首席专家（工程师）”项目共同资助。
作者简介：赵素珍（1979－），女，江苏沛县人，硕士，主要从事经济水产动物养殖和技术推广研究。
草鱼（Ctenopharyngodon idellus ），俗称皖、油皖、草皖等，属鲤形目鲤科雅罗鱼亚科草鱼属，是我国传统的淡水鱼类。
草鱼养殖具有成本低、效益高、生长快、个体大等特点。
近年来，随着养殖规模的不断扩大，养殖环境日益恶化，全国各地纷纷暴发一些传染快、死亡率高、不易控制的疾病，如细菌性败血症。
该病对鱼的种类和年龄无选择性。
现已查明其病原体包括嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、产碱假单胞菌、鲁克氏耶尔森氏菌等多种革兰氏阴性菌 ，其中嗜水气单胞菌致病范围最为广泛，而这些细菌均是水体中或健康鱼体内的常在菌，只在条件恶劣情况下才引起发病[1-3]。
2015年7月，江苏泰州兴化一养殖户池塘主养草鱼混养花白鲢，草鱼发生细菌性出血病，通过笔者一周治疗，疾病得到有效治疗，现将治疗情况介绍如下，以供广大养殖技术人员参考。
1 流行情况该病曾在上70年代末80年代初在国内个别养殖场(如北京、浙江、江苏)有所发生，但未引起人们足够重视。
接着于1987年在上海、江苏、浙江等省市流行，至1991年已在上海、江苏、浙江、安徽、广东、广西、福建、江西、湖南、湖北、河南、河北、北京、天津、四川、陕西、山西、云南、内蒙古、山东、辽宁、吉林等20多个省、市、自治区广泛流行。
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表! 组 数 免疫效果测定试验 （水温 !3 4 #5 ） 尾数 时间 （0）攻毒量 （-.）发病数 保护率 （ 8） !% !% !% !% #/ #/ #/ #/ %"# %"# %"# %"# ! % 1 #% *% #%% +/ %
大约有 +%8 的鱼通过 1 " # 国内外曾有研究报道， 体内注射， 对微生物病是有免疫力的， 免疫期可以持 只测定了 1 续 #3 个月。本研究采用口服方式免疫， 个月的免疫期， 由于养殖场所养鱼已经上市， 无法继 续测定。故把该疫苗的免疫期暂定为 1 个月。对于 商品鱼养殖来说， 这种免疫保护足以满足需要。至 于该苗的免疫期到底有多长， 还需进一步研究。 （甲醛保温灭活） 1 " ! 本试验采用高温灭活加甲醛 处理， 既达到疫苗的彻底灭活作用， 又减少了甲醛对 鱼体的刺激。同时， 采用口服免疫， 使免疫预防方法 在生产容易操作， 免疫效果良好， 其保护率达 ,%8 以上。免疫期至少 1 个月。至于口服方法与肌肉注 射和浸泡免疫的差异有多大， 尚待探讨。 我们发现对草鱼口 1 " 1 从菌苗含菌数比较试验中， #% 服剂量为 # & #% ’() 的菌液 6 ; 9 草鱼有较好的免 疫效果， 与文献报道基本一致。由于在投喂时有一 定的损失， 所以在设计试验时所用细菌量较大。本 实验用含细菌数为 # & #%#% ’() 6 ; 9 草鱼的菌苗进 行投喂， 能使草鱼达到免疫的目的， 但这是否是最佳 浓度尚待进一步比较试验分析。
［%］ 量 ， !" &’ 为 ! 9 # ) !’& 个菌。用 !’ !" &’ 攻击观察 保护情况。
性败血症病嗜水气单胞菌病 （草鱼细菌性败血病， 穿 孔病， 烂尾病） 是草鱼常发生危害严重的传染病， 死
［ #， (］ 亡率高， 其经济损失大 。对于怎样防治该类疾
病， 目前尚无良策， 国内有些专家认为对于草鱼细菌 性败血病症可采用消毒剂和内服痢特灵进行预防和
表# 组数 死亡率 菌苗浓度比较试验结果 （水温 !/ 4 #5 ） #"% & #"% & #"% & #"% & #"% & 对照 #%, ’() #%+ ’() #%* ’() #%#% ’() #%## ’() , 6 #% 3 6 #% 1 6 #% # 6 #% # 6 #% * 6 #%
!"#$%#&’() (* +,-(.()#/ 012-(34’$# 5#66’),
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（$ " /012345 6780139:3849 ;50<=8>0:?， @445 -*+’$)， /012345，A2054； * " #045?457 B5>:0:3:= CD 6780139:3849 /10=51=， #045?457 -*$’’*，/012345，A2054； ! " E0457F057 650G49 H38=43，A2C57I057，E0457F057 )’+*’’，A2C57I057，A2054）
［!］ 一种急性传染病 。主要病原为气单胞菌、 耶尔森 ［"］ 菌等多种病原， 并且还有新病原出现 。草鱼细菌
!$#
菌苗制备
取嗜水气单胞菌各菌株接种于 !’:7 马丁肉汤 中， 以后扩大培养， 同时抽取菌液用生 #.; ， "(< 培养， 物计数法作细菌计数。将上述细菌液按细菌数一定 比例混合， 放入水浴锅内 .’; ， "<。稀释混合液至细 菌数为 ! ) !’!’ *+,， 按体积比加入甲醛使之成 ’ 9 !/ 的终浓度， 经无菌检验合格后置普通冰箱保存。 !$( 小鼠的免疫保护试验 菌苗组和生理盐水 将 !% 只小鼠随机分成 " 组： 对照 组， 初 免 !(- 后， 加 强 免 疫， 按 #&- 后 攻 毒， =>>-?@>ABC< 法 计 算 78 株 对 小 鼠 的 半 数 致 死
表3 组 数 田间试验结果 （3 2 + 月） 平均发病率 / 1/ 8 死亡率 3 !%
对照组全部死 ! " # 试验组小鼠攻毒后全部存活， 亡， 证明菌苗有效。 !"! 免疫剂量试验 将菌苗以不同的稀释度， 分别稀释成 # $ % & #%## ’() ， # $ % & #%#% ’() ， # $ % & #%* ’() ， # $ % & #%+ ’() ， 按每公斤草鱼口服 #%-. （经红薯粉 # $ % & #%, ’() ， 包被） ， #/0 后口服 # $ % & #%* ’() % $ #-. 进行攻毒。 对照组在 1 2 30 内逐渐发病， 多数最终死亡； 试验组 有不同程度的保护， 其中含菌量为 # " % & #%#% ’() 及以上有较好的保护。将 # " % & #%#% ’() 作为一个 免疫计量 （结果见表 #） 。
菲! ，余树明! ，周玉刚" ，石爱华#
%"!’’"； # $ 重庆市梁平县畜牧局，重庆
%"&’!(； " $ 绵阳市农科所，四川 绵阳
淡水鱼细菌性败血症， 最早称为主要淡水养殖 鱼类爆发性流行病， 是我国养鱼史上危害淡水鱼的 种类最多、 危害鱼的年龄范围最大、 流行地域最广、 流行季节最长、 危害养鱼水域最多、 造成损失最大的
［ "， &］ 治疗 。但这些方法势必对水体造成污染， 并且
投入较大。对于草鱼嗜水气单胞菌病人工免疫方法 国内目前还少见报道。本研究从提高鱼体自身的抗 病力入手来预防该爆发性传染病。采用自然发病的 病例中分离出强毒株， 制成灭活菌苗， 以口服投喂方 式进行免疫接种， 观察草鱼的免疫保护情况， 收到防 病效果良好， 现报道如下。
!$&
疫苗免疫剂量试验 分别取不同含菌量的菌苗进行口服免疫接种。
!&- 后用 ! 9 ’ ) !’3 *+, 的活菌液 ’ 9 !:7 进行攻毒 试验， 同时测定疫苗的免疫效力。 !$% 疫苗的安全试验 用含菌数为 ! 9 ’ ) !’3 *+, 的疫苗按 " 倍免疫 剂量投喂免疫， 观察不良反应和副作用。 !$. 免疫保护试验 用含菌数为 ! 9 ’ ) !’3 *+, 的疫苗接种草鱼 (’ 尾， 接 种 # 个 月 后， 用 ! 9 ’ ) !’3 *+, 的 活 菌 液 观察 !’-。 ’ 9 !:7 进行攻毒试验， ! $ 1 田间试验 随机选取湖水养殖场和流水养殖场 # 个， 共设 置 3 口网箱， 每箱养草鱼 !’’’ 尾 （鱼的规格为 !’’ 。试验时随机分为 # 组， 0 !&’ D E 尾） " 组为疫苗接 种组， ! 组为对照组。接种后按常规养殖进行管理。
第 !3 卷 第 # 期 "’’! 年 3 月
四川农业大学学报 FGAHBIJ GK 2LC<AIB 5DHLCAJMAHIJ ,BLN>HOLMP
QGJ$ !3 RG $ # 2>S$ "’’!
草鱼细菌性败血症病疫苗的研究 !
颜其贵! ，刘
（! $ 四川农业大学，四川 雅安 梁平 (’&"’’） 摘要：制备出草鱼细菌性败血症灭活菌苗并以口服方式免疫鱼群， 剂量为： 每公斤草鱼每次服用含菌数为 ! ) !’!’ 每天 # 次， 为一个免疫疗程。结果表明免疫 !&- 后产生免疫力， 而且强毒攻击有 *+, 的灭活菌液。拌料投喂 #-， 免疫期至少 # 个月。现场应用效果良好， 无任何副作用及不良反应， 其发病率可降低 #&/ 以 .’/ 0 1’/ 保护率， 上。 关键词：草鱼；嗜水气单胞菌；菌苗 中图分类号：23%& $ !!" $ (" 4 3 文献标识码：5 文章编号：!’’’ 6 "%&’ （"’’!） ’# 6 ’"%3 6 ’#
试验组 : 口网箱 对照组 1 口网箱