非洲猪瘟病毒检测试剂盒的研制

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非洲猪瘟诊断试剂盒的研发及现场应用评价

非洲猪瘟诊断试剂盒的研发及现场应用评价非洲猪瘟（African Swine Fever，简称ASF）是一种极具传染性和病毒致死性的猪类疾病，对猪类养殖业造成了巨大的经济损失。

为了有效诊断和控制ASF，非洲猪瘟诊断试剂盒的研发及现场应用评价成为当下的关键研究领域。

本文将对非洲猪瘟诊断试剂盒的研发及其在现场应用中的评价进行探讨。

一、非洲猪瘟诊断试剂盒的研发非洲猪瘟的早期诊断对于及时采取措施限制病情蔓延至关重要。

因此，研发一种高效准确的非洲猪瘟诊断试剂盒至关重要。

一般而言，非洲猪瘟的诊断试剂盒包括病毒抗原检测试剂盒和抗体检测试剂盒。

病毒抗原检测试剂盒主要通过检测猪体内的非洲猪瘟病毒抗原来判断猪是否感染了ASF病毒。

这种试剂盒通常采用免疫层析、PCR等技术，通过检测猪体分泌物、血液等样品中的非洲猪瘟病毒抗原来进行诊断。

这种试剂盒具有快速、准确的优点，可以在病毒感染的早期阶段及时发现感染病例，有助于控制病情的扩散。

抗体检测试剂盒主要通过检测猪体内产生的非洲猪瘟病毒抗体来判断猪是否感染了ASF病毒。

这种试剂盒通常采用酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术，通过检测猪体血液样本中非洲猪瘟病毒抗体的存在来进行诊断。

抗体检测试剂盒的研发对于疫情的监测和疫苗接种的效果评估十分重要。

二、非洲猪瘟诊断试剂盒的现场应用评价非洲猪瘟诊断试剂盒的研发只是第一步，其在实际场景中的应用表现需要进行细致评价。

现场应用评价主要包括对诊断试剂盒的准确性、灵敏度、特异性、重复性等方面进行评估。

准确性是评价诊断试剂盒的关键指标之一。

通过将试剂盒应用于实际检测样本，与传统的ASF病毒诊断方法进行比对，评估试剂盒的准确性。

同时，还需考虑不同病毒株或突变株对试剂盒检测结果的影响，确保试剂盒对不同株系的ASF病毒都具有准确的诊断能力。

灵敏度和特异性是评价试剂盒优劣的重要指标。

灵敏度是指诊断试剂盒能够正确检测到感染非洲猪瘟病毒阳性样本的能力，特异性是指诊断试剂盒能够正确判断非感染非洲猪瘟病毒阴性样本的能力。

基于p72_蛋白的非洲猪瘟病毒抗体检测试纸研制

河南农业科学，2023，52（10）：120‑130Journal of Henan Agricultural Sciencesdoi:10.15933/ki.1004-3268.2023.10.013基于p72蛋白的非洲猪瘟病毒抗体检测试纸研制孙亚宁，卢清侠，邢云瑞，杨苏珍，范璐，乔松林，张改平（河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州450002）摘要：为了研制灵敏、准确、特异及稳定的非洲猪瘟抗体快速检测试纸产品，以非洲猪瘟病毒（ASFV ）p72蛋白为检测抗原，以金黄色葡萄球菌A 蛋白（SPA ）为拦截线，对比重组蛋白p72的不同状态对试纸检测性能影响，优化标记条件、喷膜浓度、样品垫缓冲体系及成分、显色时间等因素，确定ASFV 抗体检测试纸产品化的具体参数，并对试纸的特异性、均一性、准确性及稳定性进行鉴定。

结果显示，试纸的检测敏感性为1∶51200，优于商业化ASFV 检测试剂盒，与其他猪源病毒阳性血清无交叉反应，变异系数小于10%，在临床样本检测中未见假阴性及假阳性结果，具有良好的敏感性、特异性、均一性及准确性；经加速稳定试验验证，可以室温保存1a 以上；与进口商品化试剂盒的总符合率为91.6%。

综上，成功研制了ASFV 抗体检测试纸，且试纸的检测性能良好，可以用于ASFV 抗体的快速筛查。

关键词：非洲猪瘟；p72蛋白；抗体；试纸；优化中图分类号：S854.4文献标志码：A文章编号：1004-3268（2023）10-0120-11收稿日期：2023-03-31基金项目：“中原英才计划”（育才系列）-中原青年拔尖人才项目（ZYYCYU202012148）；河南省重点研发与推广专项（科技攻关）（222102110413）；河南省农业科学院优秀青年科技基金项目（2022YQ25）；河南省自然科学基金青年基金项目（232300421274）作者简介：孙亚宁（1986-），女，河南濮阳人，副研究员，博士，主要从事免疫学检测技术研究。

非洲猪瘟诊断试剂盒的研发及现场应用评价

非洲猪瘟诊断试剂盒的研发及现场应用评价非洲猪瘟（African Swine Fever，简称ASF）是一种由非洲猪瘟病毒引起的急性、高度接触性的疾病，对猪类具有高度致死性。

该疾病自20世纪初在非洲首次发现以来，迅速传播至欧亚大陆和其他地区，给全球猪肉业造成了巨大的经济损失。

为了及时诊断和控制疫情，研发一种高效可靠的非洲猪瘟诊断试剂盒势在必行。

非洲猪瘟的迅速传播和高度致死性给猪肉产业带来了巨大挑战。

传统的诊断方法主要包括病毒分离、血清学检测和多重聚合酶链反应（PCR）。

尽管这些方法在非洲猪瘟的诊断中发挥了重要作用，但其操作复杂、耗时长、设备要求高，不适合于现场快速诊断和大规模应用。

因此，迫切需要开发一种便捷、灵敏、特异的非洲猪瘟诊断试剂盒，以提高疫情的诊断效率和准确性。

针对这一需求，研究人员开始着手开发非洲猪瘟诊断试剂盒。

该试剂盒主要包括抗原检测试剂、抗体检测试剂和其他辅助试剂。

抗原检测试剂用于检测猪体组织或病毒样本中的非洲猪瘟病毒抗原，而抗体检测试剂用于检测猪血清中的非洲猪瘟病毒特异性抗体。

这些试剂的研发需要大量的实验验证和不断的优化，确保其在不同病毒株和不同环境条件下的准确性和稳定性。

研发非洲猪瘟诊断试剂盒的关键技术主要包括病毒抗原的制备、抗体的制备和标记技术的应用。

病毒抗原的制备是试剂盒研发的基础，需要通过病毒培养、提取和纯化等步骤获取高纯度的非洲猪瘟病毒抗原。

抗体的制备则需要利用合成的多肽或蛋白免疫动物，得到能与非洲猪瘟病毒抗原特异性结合的抗体。

标记技术的应用可以提高诊断试剂盒的敏感性和特异性，常用的标记技术包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、荧光标记等。

研发完成的非洲猪瘟诊断试剂盒需要进行临床试验和现场应用评价。

临床试验旨在验证试剂盒在不同病毒株和疫情样本中的准确性和可靠性。

现场应用评价则是将试剂盒应用于实际疫区进行测试，评估其在大规模应用中的诊断效果和稳定性。

这些验证工作对于确保试剂盒在实际应用中的可靠性至关重要。

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非洲猪瘟（ＦＡＳ）作为猪的一种急性、热性、高发出可供推广使用的非洲猪瘟病毒荧光ＰＲ检测用Ｃ度接触的烈性传染性疾病，世界动物卫生组织（Ｉ试剂盒。ＯＥ）
列为Ａ类动物疫病，受到世界各国的高度重视，已１材料与方法
被我国规定为一类动物传染病，并作为动物外来疫病１１材料与试剂．进行研究】由于ＡＳ。Ｆ的高致死性和高度传染性，ｐＴｐ４质粒（本实验室构建）；ＪＴｕｃＥ－５Ｅｑｉｋ目前尚无有效的疫苗，所以采用对进出境动物检疫及ｐａｍｉｎｐｅｐｎｋｔ（ｅｍｅｔｓ公司产品）；ｌｓｄｍｉｉｒｐｓｉｉＦｒｎａ对感染动物进行屠宰成为控制ＡＳＦ流行与传播的主ｐａｉｍｑＣｕｅＭｉ— ＤＧ（ｎｉｏｅｌｎＰＲＳｐｒｘＵｔｕＩｖｔｇｎ公司产品）ｒ；要手段。建立灵敏、快速、安全的诊断方法及实用、有效、稳定的检测用试剂盒十分必要。该病由非洲猪瘟病毒（ＦＡＳＶ）引发，该病毒不属于国际病毒分类委员会所核定的任何一种病毒科，引物及探针由上海英骏公司合成。
发了ＡＦＳＶ检测的荧光ＰＲ检测试剂盒。经灵敏度的重复性试验及３种不同型号荧光ＰＲ仪使用验证，所研发的试剂盒灵敏ＣＣ
度为１ｏｙ￣，适用于不同型号荧光ＰＲ仪使用，可用于对非洲猪瘟病毒的快速检测。０ｃｐ／ＬＣ
关键词：非洲猪瘟病毒；荧光定量ＰＲ；试剂盒Ｃ中图分类号：￥５．３８２６９１文献标识码：Ａ文章编号：１０．４Ｘ（０２１０１３８４４；￥５．５．０５９４２１）０－３－００
ＤｅｅｏｖｌｐｍｅｆｒｃｎＳｎｅＦｅｅｒｓＤｅｅｔｏｉｎｔｏｉａｗｉｖｒＶｉｕｔｃｉｎＫｔＡｆ
ＤｏｇＺｉｈｎＺｈｏＸｉｎｐｉｇ，ＺａｇＸｉ，ＸｉｏＹａ，ＬｕｎＳｅｓｕｎｈｚｅ，ａａｇｎｈｎａａｈａｈｎｈｎ
ｈｒｔｅｐｉｒａｄｔｅｆｏｅｃｎｅｌｂｌｄＴｑａｒｂｏｃｎｍｅｕｒｓｅｃｅｅａＭｎｐｏｅｃｎｅ￣ｉｎａｄｒａｔｎｔｍｐｒｔｒ．ｅｅｎｎｉｖｔｓｓａｄｖｎｃｏｔｎｈｌａｏｃｉｎｅｏｅｅａｕｅＳｖｒｓｓｉｉｔｔｅｆｍｉｎｗｉｌｔｙｅｎｉｌｔｒｅｄｆｅｅｔｉｓｕｎｏｅｓｓｏｄｔａ，ｔｅｓｎｉｖｔｆｋｔｓ１ｏｙｕｎｕｔｂｅｆｒｄｆｅｅｔｔｐｓｏｓｒｍｅｔ１ｈｅｉｒｎｔｍｅｔｎｒｍｄｌｈｗｅｔｈｅｓｔｉｏｉｗａ０ｃｐ／Ｌａｄｓｉｌｏｉｒｎｅｆｉｔｕｎ．ｈｉｙａｙｎＡ１ｔｅｅｐｏｅａｅｋｔｏｌｅｕｅｒｆｓｄｔｃｉｎｏＡＳＶｈｓｒｖｄｔｔｔｉｃｕｄｂｓｄｆｔｅｅｔｏｆＦｈｈｏａＫｅｒｓＡｆｉａｎｖｒｉｓＲｅ１ｉ＿Ｒ：Ｔｓｋｔｖｗｏｄ：ｒｃｓｎｗｉｅｆｅｒ：ｅｖｕａ．ｍｅＲｒＰＣｔｅｔｉ
中国动物检疫２１第２０２年９卷第１期
主持人：胡藕祥
ｇｗｙｉａ。ｄｊ＠．ｍｎｃ
Байду номын сангаас非洲猪瘟病毒检测试剂盒的研制
董志珍，赵祥平，张霞，肖妍，栾慎顺
（津出入境检验检疫局，天津３０６）天０４１
摘要：针对非洲猪瘟病毒（ＦＡＳＶ）Ｐ４基因建立荧光ＰＲ检测方法，通过优化引物、Ｔｑｎ探针浓度及反应温度，研５ＣａＭａ
（ｉｊｘｔｎｎｒｓｅｔｎａｄＱａａｔｕｅｕｉｊ０４１ＴａｉＥｉａｄＥｔＩｐｃｏｕｒｎｉＢｒａ，Ｔａｉ３０６）ｎｎｙｎｉｎｍｅｎｎ
ＡｂｔａｔＡｕｒｓｅｃｏｙｒｓｈｉｅｃｉｎ（ＣＲ）ａｓｙｗａｅｅｏｅｔＦｐ４ｇｎｏｅｄｔｃｉｎｏＡｆｉａｓｒｃ：ｆｏｅｃｎｅｐｌｍｅａｅｃａｎｒａｔｌｏＰｓａｓｄｖｌｐｄｗｉＡＳＶ５ｅｅｆｒｔｅｅｔｆｒｃｎｈｈｏ
ｓｎｖｒｉｓｄｔｅＡＳＶｌｏｅｃｎｕｎｉｔｅｐｌｍｅａｅｃａｎｒａｔｏ（ＣＲ）ｔｓｉｗａｂａｎｄｔｒｕｈｏｔｚｔｏｆｗｉｅｆｅｒ．ｅｖｕＡｎＦｆｒｓｅｔａｔａｉｏｙｒｓｈｉｅｃｉｎＰｈｕｑｔｖｅｔｔｓｏｔｉｅｏｇｐｉａｉｎｏｋｈｍｉ