血栓与止血检验的基本方法

血浆凝固,测定凝固时间。纤维蛋白的量
与凝固时间成负相关，检测结果与参比血 浆制成的标准曲线对比，可得出纤维蛋白 原的含量。 2.正常参考值：2—4g/L。
血液检验
3.临床意义 (1) 增高 ①机体感染；毒血症、肝炎、轻型肝炎、胆囊炎及 长期局部炎症 ②无菌性炎症：糖尿病、肾病综合症、尿毒症、风 湿热、恶性肿瘤、风湿性关节炎等。 ③糖尿病酸中毒。 ④心血管疾病：动脉硬化症、脑血栓、血栓静脉炎、 心肌梗塞、放射治疗。 ⑤妇女经期、妊趁晚期、妊高症及剧烈运动后。 ⑥放疗后，灼伤，休克，外科大手术后，恶性肿瘤 等。
越低，试剂对有关凝血因子降低的敏感度越高。
再按下式求得INR： INR=PTR[S]
血液检验
3.临床意义：是外源性凝血途径的筛选试验。 (1)PT延长 ①Vitk缺乏：Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ统称为依赖Vitk凝 血因子。Vitk↓、因子↓→ PT↑。 ②抗凝治疗，香豆素类抗凝药物与Vitk化织因子（Ⅲ）、钙（Ⅳ） 及Ⅷ因子外其他因子的主要场所，肝受损→凝 血因子合成↓→PT↑。 ④先天性凝血因子缺乏症：Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ。 ⑤抗凝物质增多。 (2)PT缩短：常见于血栓前状态和血栓性疾病。
血液检验
(二)血浆D-二聚体检测
——乳胶颗粒浊度分析法
1.原理：受检血浆中加入标有D-二聚体单抗的胶乳 颗粒悬液，如果血浆中D-二聚体含高于0.5mg/L 时即可与胶乳颗粒上的抗体结合，发生胶乳颗 粒凝集。
血液检验
2．血浆D-二聚体 是交联纤维蛋白降解产物之一，为继发 纤溶特有的代谢物。
血液检验
内皮损伤（内皮下组织暴露） 血小板粘附 血小板初期释放 ADP等
血小板聚集
ADP 血小板进一步激活、释放 血小板促凝作用 纤维蛋白形成 血块收缩 坚固的凝血块 5-HT
血小板的主要释放产物
类 别 活性胺 腺嘌呤核苷酸 阳离子 血小板因子 凝血因子 血小板蛋白 血栓烷
成分 5-HT，组胺，肾上腺素， 去甲肾上腺素 ADP,ATP,cAMP Ca2+, K+ PF3, PF4等 凝血因子I，V，VIII，XIII β-TG，血小板糖蛋白等 TXA2
血浆血栓调节蛋白，TM 放射免疫法
原理将抗人凝血酶调节蛋白（Thrombomdulin,TM）单克 隆抗体包被于聚苯乙烯放免小杯中，样本中的TM结合于 包被的放免小杯上，加入125I-抗人TM单抗，根据结合的 125I放射性强度计算出样品中TM的含量。
TM ：Ag参考区间 20～35ng/mL
TM:Ag的水平升高 见于血栓性疾病，如糖尿病、 心肌梗死、脑血栓、深静脉血栓形成（ DVT）、 DIC等。 降低见于TM缺乏。

14个：12个经典凝血因子 激肽释放酶原+高分子量激肽原

特征：因子Ⅳ为钙离子（Ca2+）,其余均为蛋白质
除因子Ⅲ即组织因子外，其余均存在于新鲜血浆中 依赖维生素K的凝血因子 ：因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ
接触凝血因子 ：因子Ⅻ、Ⅺ、激肽释放酶原及高分子量激
肽原。 对凝血酶敏感的凝血因子 ：因子Ⅰ、V、Ⅷ、ⅩⅢ
血液检验
参考值
41.1%～125.9%（O型）； 61.3%～
157.8% （A+B+AB型） O型人群明显低于A+B+AB型人群
vWF:Ag 应用评价
血管性血友病因子抗原测定主要用于血管性血友病的诊 断和鉴别诊断 1.减低 见于血管性血友病（vWD），是诊断vWD及其分 型的重要依据 2.升高 见于血栓性疾病，如急性冠脉综合征（ASC）、 心肌梗死、脑血管病变、妊娠高血压综合征、肾小 球疾病等，同时也见于剧烈运动后，肾上腺素受体 被兴奋等。 应用评价以前vWF：Ag定量常采用免疫火箭电泳，由于操 作较为复杂，现在少用。ELISA常用于定量检测vWF： Ag，但是胶乳增强的免疫比浊法更为简便快速，而 且可以在全自动血凝仪上进行测定。
（原）降解产物（FDPs）的试验，临床常用
的有：凝血酶时间（thrombin time，TT）、
血浆鱼精蛋白副凝固试验（plasma protamine pracoagulation test，3P
test）。
血液检验
(一)可溶性纤维蛋白单体试验：3P试验
1．原理：血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（plasma
血小板膜糖蛋白测定
血小板膜糖蛋白（Glucoprotein，GP）是血小板功能和血 小板与其他活性物质作用的基础，一些糖蛋白如GP Ia、GP Ib、 GP IIb、GP IIIa等已被确定为血小板特异抗原。 GP 分子数量或结构异常均可导致出血或血栓形成。
活化血小板与静止血小板相比，GP 的种类、结构、含量等 亦呈现显著变化。 多采用流式细胞术（FCM）分析血小板膜糖蛋白的表达。
血小板相关抗体测定的应用评价
特发性血小板减少性紫癜（ITP）：
90% 以上的病人 PAIgG 增加，同时测定 PAIgA 、 PAIgM 及 PAC3阳性率达100%。 ITP病人在皮质激素治疗后，PAIgG不下降可作为切脾的 指征。 ITP 疗效监测指标，治疗有效上述指标下降，复发则增 加。
第三节 血液凝固及检验
血小板自身抗体测定
血小板自身抗体包括： 血小板相关免疫球蛋白（platelet associated immunoglobulin， PAIg）（包括PAIgG、PAIgA、PAIgM） 特异性膜糖蛋白自身抗体 药物相关自身抗体 抗同种血小板抗体 血小板自身抗体测定表达有助于判断血小板减少的原因。 检测血小板免疫相关球蛋白的常用方法为ELISA及流式 细胞术。
纤维蛋白（原）降解过程及产物
凝血酶 XIIIa 纤维蛋白（原） 可溶性纤维蛋白 交联纤维蛋白
纤 溶 酶
FPA、FPB （Aα1-6 ） (Bβ1-14)
纤 溶 酶
纤 溶 酶
Bβ1-42 Aα极附属物 （A、B、C、H） X、Y、D、E 、E’
Bβ15-42 Aα极附属物多聚体 Aα极附属物 D-二聚体 （A、B、C 、H） DD/E复合物 X’、Y’、D、E’ X’、Y’、D
第二节 血小板止血作用及检验

血小板（blood platelet）由骨髓中成熟巨核细胞的胞
质分割生成，是哺乳动物血液中体积最小的血细胞。

血小板数量：(100～300) x109个/L（成年人）。 血小板寿命：7～10天。
主要功能：促进止血和加速凝血，在止血、伤口愈合、
炎症反应、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理过程中 起重要作用。
血液检验
3.临床意义
(1)TT延长： ①肝素及肝素类抗凝物增多。 ②FgDP(FbDP)↑→DIC(消耗Fb 或Fg)。 ③先天性纤维蛋白(原)异常或缺乏症。
(2)TT缩短:极罕见,主要见于某些异常蛋
白血症如巨球蛋白血症。
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三、纤溶活性的筛查试验
血浆纤溶活性增强的筛查，一般选用能
直接或间接检测出血浆纤溶酶降解纤维蛋白
血液检验
(一)血浆凝血酶原时间测定（PT） 1.原理
在受检血浆中加入足量组织凝血活酶
（即TF）浸出液和和适量Ca2+离子后，血 浆凝固所需的时间称为血浆PT。
血液检验
2.参考值
(1)平均为12s±1s,男性：11s～13.7s；
女性：11s～14.3s，超过对照3s以下为异 常。 (2)PT时间比值（PTR）=被检血浆PT（s） /正 常参比血浆PT（s），宜用多份正常血浆PT 的几何均数参考值为1.00±0.15 (3)国际标准化比值(INR)=PTR[S]
protamine paracoagulation test,3P test），
是在待测血浆中加入硫酸鱼精蛋白,可使可溶性纤维
蛋白单体(FM)与FDP(主要是X片段)形成可溶性复合
物解离,游离的FM之间自行聚合呈肉眼可见的纤维絮
状或胶冻状沉淀。
血液检验
2.参考值：阴性
3.临床意义
(1)原发性纤溶时：阴性。 (2)继发性纤溶时早期：阳性。 (3)DIC的晚期因FgDP或FbDP（X、Y）被降解为低 分子量小碎片（D、E）：阴性。
血栓与止血检验基本方法
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第一节、血管壁（内皮）检验
基本理论

血管壁的正常结构包括三层：内层、中层和外层
内层：内皮细胞+基底膜
内皮细胞管壁有肝素类物质 内皮细胞内含细胞器 （棒状小体 vWF和t-PA，TM，AT-Ⅲ,PAI-1等 ）
中层：平滑肌细胞（脉细血管无此层）
外层：结缔组织
血管内皮细胞检验
血液检验
3. 临床意义：是内源性凝血系统敏感而简便的筛
选试验。
(1)APTT时间延长：
①内源性凝血途径因子缺乏：Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ。 ②外源性凝血途径因子缺乏：Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ。 ③血中抗凝物质增多。 (2)APTT时间缩短：可见于高凝状态及血栓形成 性疾病。
血液检验
(三)凝血酶时间测定
1.原理：受检血浆中加入“标准化”的凝血酶溶液 后、血浆凝固所需要的时间，即为凝血酶时间。 2.参考值：16s～18s。超过对照3s以上为异常。
3．意义
参考值阴性，在继发纤溶时（DIC）阳性； 原发纤溶时阴性。常作为鉴别原发性纤溶与继发 性纤溶的可靠指标，也是溶栓治疗的有效观察指 标。D-二聚体阳性或增高是诊断DIC的重要依据 之一。
凝血因子的检测
一、血浆纤维蛋白原
1. 原理:Clauss法以凝血酶作用受检血浆中
纤维蛋白原(Fg)，使其形成纤维蛋白而使
血液检验
(二)活化部分凝血活酶时间测定
1. 原理：37℃条件下，以白陶土激活因子Ⅻ和
Ⅺ，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板3
因子，在Ca2+参与下，观察血浆凝固所需的时 间，即为活化部分凝血活酶时间 （APTT）。