6-羟基多巴胺作用于PC12细胞中的信号转导通路
《中药药理学》第二十一章收涩药、驱虫药、外用药授课教案
《中药药理学》第二十一章收涩药、驱虫药、外用药教案教案第二十一章收涩药、驱虫药、外用药第一节收涩药凡以收敛固涩为主要功效的药物，称为收涩药，又称为固药。
此类药有敛汗、止泻、固精、缩尿、止血和止咳功效，适用于气血精津滑脱耗散之证，如自汗，盗汗、久咳虚喘，久泻脱肛、遗精，遗尿，尿频，崩带不止等病症。
本类药味多多酸涩，性温或平，主入肺，脾，肾，大肠经。
收敛药分为固表止汗药，敛肺涩肠药，固精缩尿止带药三类。
滑脱证候的病因和病证部位各有不同，但其根本原因是由于久病或体虚使得正气不固，脏腑功能衰退，导致滑脱证产生。
如气虚自汗；阴虚盗汗；脾肾阳虚致久泻，久痢；肾虚致遗精，滑精，遗尿，尿频；冲任不固致崩漏下血；肺肾虚损则久咳虚喘。
而滑脱不禁者，又可致正气亏虚，产生恶性循环，严重者可危及生命，故需及时固脱胎换骨，收敛耗散。
中医药学理论认为：收涩药味多酸涩，有收敛固涩功效，《本草纲目》曰：“脱则散而不收，用酸涩温平之药，敛其耗散。
”收涩药的主要药理作用如下：1、收敛作用该类药中植物类药物多含鞣质、有机酸，如五倍子，诃子，石榴皮中的鞣质含量分别高达84.3%，35.5%，50.2%，矿物类药物如明矾，赤石脂，禹余粮中含无机盐，这些成分均有收敛作用，与创面，黏膜，溃疡面等部位接触后，可凝固表层蛋白质，形成较为致密的保护层，减轻创面刺激。
鞣质还可使血液中的蛋白质凝固，堵塞小血管，有助于局部止血。
鞣质与腺细胞结合，可减少分泌和渗出，有助于创面愈合。
鞣质可凝固汗腺，消化腺，生殖器官等分泌细胞中的蛋白质，使细胞功能改变，减少分泌，使黏膜干燥。
2、止泻诃子，肉豆蔻，金樱子，赤石脂、禹余粮等有较明显的止泻作用，该类药有收敛作用，可减轻内容物对神经丛的刺激，使肠蠕动减慢，赤石脂，禹余粮等口服后能吸附于胃肠黏膜起保护作用，还能吸附细菌，毒素及其代谢产物，减轻刺激作用。
此外鞣质能凝固细菌体内蛋白质而产生抑菌作用。
罂粟壳含吗啡，可提高胃肠平滑肌张力，减少小肠及结肠的蠕动。
7_8_二羟基黄酮对6_羟基多巴胺诱导PC12细胞损伤的保护作用_祝绍磊
是最常见的神经退行性疾病之 Ｐ Ｄ） 帕金森病 （ 其主要病理改变为黑质致密带多巴胺 （ 能神 一， Ｄ Ａ）
１］ 。 导 致 黑 质 －纹 状 体 通 路 功 能 减 退 ［ 经元变性死 亡 ，
应激损伤 。 为黄酮类化合 ７， ８ ＤＨＦ） －二 羟 基 黄 酮 （ 最近被 发 现 是 一 种 选 择 性 神 经 营 养 因 子 Ｔ 物， ｒ ｋ Ｂ ， 、 受体激动剂 在 Ｐ Ｄ 阿尔茨海默病及卒中等多种动
［ 摘要 ］ 对６ 诱导 Ｐ ８ ＤＨＦ） ６ Ａ） Ｃ １ ２ 细胞损伤的保护作用及其 目的 探讨 ７， －二羟基黄酮 （ －羟基多巴胺 （ －ＯＨＤ ／ 和Ｐ 观察６ 以 ＤＨＦ 机制 。 方法 将 ６ Ａ（ ２ ５～２ ０ ０μ ｍ ｏ ｌ Ｌ） Ｃ １ ２细胞混合后孵育２ ４ｈ， Ａ 的 毒 性 作 用； －ＯＨＤ －ＯＨＤ （ ／ ／ ， 预处理细胞 １ｈ， 再加入 １ 观察 ＤＨＦ 对 ６ １～２ ５μ ｍ ｏ ｌ Ｌ） ０ ０μ ｍ ｏ ｌ Ｌ ６ Ａ 继续培养 ２ ４ｈ Ａ 诱导 Ｐ Ｃ １ ２细 －ＯＨＤ －ＯＨＤ ／ ／ 胞损伤的保护作用 ； 观察 ＤＨＦ 的保护 作 用 是 否 可 被 ２ ５μ ｍ ｏ ｌ Ｌ ＤＨＦ 预处理前 ３ ０ｍ ｉ ｎ 加入 １ ０ｎ ｍ ｏ ｌ Ｌ Ｌ Ｙ ２ ９ ４ ０ ０ ２， ／ 磷酸肌醇 ３ 激酶 （ 抑制剂所阻断 。 采用 ＭＴ Ｐ Ｉ ３ Ｋ） Ｔ 法测定细胞存活率 。 结果 与对照 组 相 比 ， ５ ０～２ ０ ０μ ｍ ｏ ｌ Ｌ ６ － ／ 其中１ ＯＨＤ Ａ 作用 ２ ４ｈ 可明显降低细胞存活率 ， ０ ０μ ｍ ｏ ｌ Ｌ ６ Ａ 可 导 致 半 数 细 胞 死 亡 。ＤＨＦ 预 处 理 剂 量 依 －ＯＨＤ 该作用部分被 Ｐ 赖性抑制了 ６ Ａ 诱导的细胞损伤 ， Ｉ ３ Ｋ 抑制剂所阻断 。 结论 ＤＨＦ 对 ６ Ａ 诱导 Ｐ Ｃ １ ２细 －ＯＨＤ －ＯＨＤ 胞损伤具有明显的保护作用 ， 该作用可能与 Ｐ Ｉ ３ Ｋ 信号通路有关 。 ［ 关键词 ］ 羟基多巴胺类 ； 细胞保护 Ｐ Ｃ １ ２ 细胞 ； 黄酮类 ； ［ （ ） 中图分类号 ］ 文献标志码 ］ 文章编号 ］ ３ ３ ８． ２ ［ ６ ７ ２ ４ ４ ８ ８ ２ ０ １ ４ ０ １ ０ ０ ０ ４ ０ ３ Ｒ Ａ ［ １ － － －
6-OHDA诱导PC12细胞凋亡及作用机制
测 该 病 毒 引起 的 Ｃ ＮＳ感染 是 导致 惊 厥发 作 的 主要
原 因［ 。而我 们在 此类病 例进行 脑 电图检查 未见 明 ３ ］
显 的脑 炎改 变 （ 漫 性 或局 灶性 慢波 ） 以及 进行 脑 弥 ， 脊 液检 查 未 见 明 显 异 常 ， 支 持 Ｒ 脑 炎 说 法 。 不 Ｖ
参考 文献
Ｅ ３ Ｕｅ ｒ １ ｍｕａＮ，Ｏ ｕ ｒ ＮｅｏｏＴ，ｔ １ Ｃ ｉｉ ｌｅｔ ｒｓｏ ｋ ｍｕａＡ， ｇ ｒ ｅ ａ ． ｌ ｃ ａｕｅ ｆ ｎａｆ
轻 度 胃肠炎 伴 良性婴 幼 儿惊 厥 早 在 １ ８ ９ ２年 就
由 日本 学 者 Ｍｏｏ ｋ ｒｏ ａ提 出。我 国对 该 病 的认 识 较
４ 讨 论
已经 申请市级 科研 项 目对 轻度 胃肠炎 并婴 幼儿 良性 惊 厥 的患儿进 行更 多病原 体 的检测 。 总之 ， 轻度 胃肠 炎并 良性 婴幼 儿惊 厥 的发 病 机 制 尚不 十分 清楚 ， 然众 多 临 床观 察 表 明本 病 与 轮 虽
状 病毒 感染有 明显 相 关 性 ， 轮状 病 毒 致病 机 制 有 而 待进一 步研究 。
ｓ ｎ ｓｏｉｔｄｗｉ ｌ ａｔｏｎｅｉｓＥ］ Ｅ ｉ ｐｉ， ９ ９ ｉ ｓａｓｃ ｅ ｔ ｍｉ ｇ ｓｒｅｔｒ ｉ Ｊ ． ｐｌ ｓ １ ９ ， ｏ ａ ｈ ｄ ｔ ｅ ａ
４ （ ０ １ ５ － ４ ８ ０ １ ）： ４ ５１ ５ ．
［ ３ Ａｂ Ｋｏ ａ ａｈ ， ａ ｉ ｅ １ Ｉｆｎｉ ｏ ｖ ｌｏ ｓｗ ｔ ３ ｅＴ， ｂ ｙｓ ｉ Ａｒｋ Ｋ，ｔ ．ｎａ ｔｅｃｎ ｕｓ ｎ ｉ Ｍ ａ ｌ ｉ ｈ ｍｉ ａｔ ｅ ｔｒ ｉ［］Ｂ ａｎＤ ｖ ２ ０ ，２ ５ ：０ —０ ． ｄ ｌ ｇｓｒ ｎｅｉｓＪ ． ｒｉ ｅ ，０ ０ ２ （ ） ３ １３ ６ ｏ ｔ ［ ］ Ｋｏ ｒＨ ， ａａＭ ， ｔ ，ｔ １Ｂ ｎｇ ｎ ｕｓ ｎ ｔ ｌ ４ ｍｏｉ Ｗ ｄ Ｅ ｏＭ ｅ ． ｅ ｉｎｃ ｖ ｌｉ ｓ ｈｍｉ ａ ｏ ｏ ｗｉ ｄ
6羟基多巴胺诱导PC12细胞帕金森模型中GRP78表达的研究
文章编号:1003-2754(2007)02-0154-036-羟基多巴胺诱导PC 12细胞帕金森模型中GRP 78表达的研究徐 卉, 常 明, 张 磊, 杜丹华, 胡林森收稿日期:2006-10-30;修订日期:2007-03-16作者单位:(吉林大学第一医院神经内科,吉林长春130021;胡林森,通讯作者) 摘 要: 目的 探讨神经毒素6-羟基多巴胺(6-O HDA )诱导PC12细胞的帕金森(PD)模型中G RP 78的表达。
方法 在建立6-O HD A 诱导PC 12细胞帕金森模型的基础上,M T T 法测细胞存活率和Ho echst 33342染色检测细胞凋亡。
分别提取6-O HDA 处理组和对照组细胞总蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(Differential G el Electr ophor esis ,DIG E)技术获得蛋白点的差异表达信息,运用M AL DI -T O F 质谱鉴定出差异蛋白质。
结果 实验组细胞存活率为60%±4.8%,与对照组比较显著下降(P <0.05)。
荧光染色可见细胞核呈固缩状或碎裂状的典型的凋亡形态学改变。
D IGE 分析发现6-OHDA 组表达明显增高的一个蛋白质点,经质谱分析鉴定确认为GR P 78。
结论 6-O HDA 能够诱导P C12细胞凋亡,凋亡过程中GRP 78表达增高,提示GR P78增高可能与PD 的发病机制有关。
关键词: P C12; 6-O HD A ; GR P78; DIGE 中图分类号:R 742.5 文献标识码:AThe expression of glucose regulating protein 78in a model of Parkinson 's disease induced by 6-Hydroxydopamine in PC 12cells X U H ui ,CH A N G M ing ,ZH A N G L ei ,et al .(D ep artment of N eur ology ,the First H osp ital of J ilin University ,Chang chun 130021,China )Abstract : Obj ective T o evaluate t he ex pr ession lev el of g lucose reg ulating pr ot ein 78(GR P 78)in the mo del of Par kinson's disease (P D)induced by 6-Hy dr ox y do pamine(6-O HD A )in PC12cells.Methods A fter establish-ment of a mo del of P D induced by 6-O HD A in P C12cells,M T T assay w as applied to measur e the cell vitality and Hoechst 33342fluor escence staining w as used to estimat e the apopto tic percentag e .P ro teins o f PC 12cells t reated w ith and w ithout 6-O HD A w ere ex tr act ed ,and then the maps o f t he pro teins wer e est ablished by 2D -D IGE (Differ -ent ial Gel Elect ro pho resis).T he alter ed pr otein spot s wer e identified w ith M A LD I-T OF M S and database sear ch -ing.Results T he PC12cells expo sed to 6-O HDA sho w ed a sig nificant decr ease in cell vit ality (P <0.05).T he nu-clei of PC 12cells appeared co ndensed a nd fr ag ment ed which was consistent w ith nuclear mor pholog y in Hoechst fluo rescence sta ining .GR P 78,a pr ot ein increased obviously after 6-OHDA tr eated ,w as identified by M A L DI -T OF M S.C onclusion O ur study indicated t ha t 6-O HDA induced P C12cells'apopto sis a nd the increasing expr essio n of GR P78.I t dem onstrat es t ha t the increase o f GRP 78be involv ed in the pathog enesis of P D.Key words : PC 12; 6-O HDA ; G RP 78; DIG E 帕金森病(PD)是一种常见的中老年神经系统变性疾病,其病理特征是中脑黑质致密部多巴胺(DA )能神经元选择性变性、缺失,但是DA 能神经元死亡机制迄今尚未完全明了。
天然冰片对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤的保护作用
冰片包括天然冰片和合成冰片，天然冰片由樟科 植物樟 Cinnamomum camphora (L.) presl 的新鲜枝、 叶经提取加工制成。冰片在古籍中多以“龙脑香”“龙 脑”为正名。宋代《本草衍义》记载 ：“此物大通， 利关膈热塞，其清香为百药之先”。明代《本草纲目》 记载：“龙脑香，释名片香、羯婆罗香。辛、苦，微寒， 无毒。疗脑痛，通诸窍，散郁火”。研究表明冰片可 通过镇痛 [1]、抗炎 [2]、抗氧化 [3] 和抗癫痫 [4] 等机制
现代中药研究与实践2021年第35卷第3期 Chin. Med. J. Res. Prac., 2021 Vol. 35 No. 3
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天然冰片对 6-OHDA 诱导的 PC12 细胞损伤的保护作用
孙志军 1，吴 丹 1，张俊婷 1，郑 琴 2，张群林 1*
（1. 安徽医科大学 药学院，安徽 合肥 230032 ；2. 江西中医药大学 现代中药制剂教育部重点实验室， 江西 南昌 330004）
Medicine, Nanchang 330004, China )
Abstract: Objective To study the protective effect of natural borneol on PC12 cells injury induced by 6-hydroxydopamine (6-OHDA). Methods The PC12 cells injury model is induced by 6-OHDA, the survival rate, the morphology and the apoptosis are observed for assessing the effect of natural borneol on PC12 cells injured by 6-OHDA. Results Natural borneol can facilitate the proliferation of normal PC12 cells when the concentration is lower than 140 μg/mL; natural borneol has morphological protective effect on PC12 cells injured by 6-OHDA; the survival rate of PC12 cells in natural borneol group is higher than that in model group, and the difference is statistically significant (P < 0.05); the apoptotic rate of PC12 cells in natural borneol group is lower than that in model group, the difference is statistically significant (P < 0.01). Conclusion Natural borneol can prevent PC12 cells injury induced by 6-OHDA.
尼古丁对6-羟多巴胺诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用
２ 结果
细胞损伤的保护 ２ ． １ 尼古丁对 ６ Ｏ Ｈ Ｄ Ａ所致 Ｐ Ｃ １ ２ 作用 正常对照组 Ｐ 细胞生长旺盛， 加入 ５ · Ｃ １ ２ ０ ｍ ｏ ｌ μ － １ ， 用Ｍ Ｌ ６ Ｏ Ｈ Ｄ Ａ Ｔ Ｔ法检测细胞的存活率为（ ４ ５ ± ） 加入不同浓度的尼古丁预处理 ２ｈ 后， 加入 ５ ８ ％， ０ － １ · 。结果显示， 尼古丁对 ６ ｍ ｏ ｌ Ｌ ６ Ｏ Ｈ Ｄ Ａ作用 ２ ４ｈ μ 细胞损伤有明显的保护作用， 作用 Ｏ Ｈ Ｄ Ａ所致 Ｐ Ｃ １ ２ 随尼古丁的浓度而变化， 呈钟型量 效关系， · １ ０ ｍ ｏ ｌ μ
］ ８ 细胞培养及凋亡模型的建立［ １ ． ２ Ｐ Ｃ １ ２
大鼠 肾 上 腺 嗜 铬 细 胞 瘤 细 胞 株 Ｐ Ｃ １ ２细 胞 在 培养基（ 内含 ５ Ｒ Ｐ Ｍ１ ６ ４ ０ ％马 血 清、 ５ ％小 牛 血 清 和 中分裂增殖， 并保持嗜铬细胞瘤的特 ５ ％胎牛血清） ， 细胞即停止分裂增 性。当培养基中加入 Ｎ Ｇ Ｆ Ｐ Ｃ １ ２ 殖， 胞体增大并形成突起， 表现交感神经元的特征。
Ｔ ａ ｂ２ ． Ａ ｎ ｔ ａ ｇ ｏ ｎ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｎ ｉ ｃ ｏ ｔ ｉ ｎ ｅｏ ｎＰ Ｃ １ ２ｃ ｅ ｌ ｌ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄｂ ｙ６ Ｏ Ｈ Ｄ Ａｗ ｉ ｔ ｈｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｉ ｎｄ ｉ ａ ｃ ｅ ｔ ａ ｔ ｅ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｒ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ
－ １ · 后， 细胞密度明显 ５ ０ ｍ ｏ ｌ Ｌ ６ Ｏ Ｈ Ｄ Ａ处理细胞 ２ ４ｈ μ 减少， 核仁聚集、 胞体皱缩、 正常胞突网状连接消失，
百可利对6-羟多巴胺不同注射位点帕金森病模型大鼠的治疗作用
百可利对6-羟多巴胺不同注射位点帕金森病模型大鼠的治疗作用何国荣;穆鑫;李晓秀;王月华;方莲花;孙岚;吕扬;杜冠华【摘要】目的：观察百可利对6-羟多巴胺（6-OHDA）内侧前脑束（MFB）和纹状体尾壳核（CPu）两个不同注射位点帕金森病（PD）模型大鼠的治疗作用，两个注射位点模型分别记为：MFB-M，CPu-M。
方法运用6-OHDA两点注射法，损毁大鼠左侧中脑多巴胺能神经元，制备PD模型。
记录大鼠后肢肌电（EMG）信号频率观察肌肉震颤；测定大鼠自主活动；电化学法检测纹状体内多巴胺（DA）及其代谢产物含量；免疫组化法检测大鼠脑内酪氨酸羟化酶（TH）、OX-42表达；观察神经元超微结构变化。
结果给药3周后，两个注射位点的模型组行为改变趋势一致，百可利在两个注射位点的模型动物上药效表现不同，在CPu-M组可明显提高PD大鼠自主活动数（P＜0.05）。
EMG信号分析显示，在MFB-M组，给予百可利，肌电频率降低55％；在CPu-M组，给予百可利，肌电频率降低60％。
EMG时效研究表明，在 CPu-M组，百可利药效持续420 min以上。
纹状体递质水平显示，两个注射位点的模型组DA递质水平差异很大，在CPu-M组，百可利能够明显升高DA水平（P＜0.05）。
两个注射位点的模型组免疫组织化学结果趋势一致，在CPu-M组，百可利有更明显神经元保护作用（P＜0.05），在MFB-M组，百可利抑制小胶质细胞过度激活作用更强（P＜0.01）。
结论不同注射位点制备的PD模型能够反映不同时期PD的病理变化，百可利可通过抑制炎性介质生成和释放、保护残存神经元、恢复神经元功能等机制改善PD不同发病时期模型动物的行为学症状。
%Aim To explore the therapeutical effect and mechanism of baicalein on two 6-hydroxydopamine (6-OHDA ) induced Parkinson′s disease (PD ) rat models,which received unilateral lesions of the left medialforebrain bundle (MFB ) or caudate putamen (CPu ) made by stereotaxic injection of 6-OHDA (MFB-M,CPu-M).Methods PD rat modelswere established by microinjection of 6-OHDA into MFB or CPu.The anti-tremor effect of baicalein on PD rat models wasexamined.Spontaneous activity was recor-ded. Dopamine (DA ), dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC)and homovanilic acid (HVA)in striatum were quantified by HPLC-ECD.The tyrosine hydroxy-lase (TH)and OX-42 positive cells were detected by immunohistochemical method.The morphological vari-ation of the neurons was confirmed by analysis at an ul-trastructural level.Results Baicalein significantly in-creased the spontaneous activity in CPu-M.The elec-tromyography (EMG ) recordings revealed that com-pared with 6-OHDA group,the tremor frequency in ba-icalein group was decreased by 55% in MFB-M,and by 60% in CPu-M.6-OHDA treatment decreased DA levels in the striatum,while treatment with baicalein attenuated the DA decreases in CPu-M.Moreover,ba-icalein treatment could increase TH-positive neurons and decrease OX-42-postive microglia compared with 6-OHDA group in both MFB-M and CPu-M.Conclu-sions In the present study,it is illustrated that ①micr oinjection of 6-OHDA into the MFB and the CPu could cause different pathological changes of PD, which is important for efficacy evaluation;②baicalein showed the ability to alleviate the behavior symptoms in PD-rats at different stages by improving motor function and attenuating muscle tremor;③therapeutic effect of baicalein was produced by inhibiting theinflammatory medium production and release,anti-apoptosis,chan-ging dopamine catabolism, and inhibiting dopamine turnover.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】8页(P623-629,630)【关键词】百可利;帕金森病;6-羟多巴胺;黑质纹状体通路;内侧前脑束;纹状体尾壳核;神经保护【作者】何国荣;穆鑫;李晓秀;王月华;方莲花;孙岚;吕扬;杜冠华【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院药物研究所药物靶点研究与新药筛选”北京市重点实验室，北京 100050;中国医学科学院北京协和医学院药物研究所药物靶点研究与新药筛选”北京市重点实验室，北京 100050;中国医学科学院北京协和医学院药物研究所药物靶点研究与新药筛选”北京市重点实验室，北京100050;中国医学科学院北京协和医学院药物研究所药物靶点研究与新药筛选”北京市重点实验室，北京 100050;中国医学科学院北京协和医学院药物研究所药物靶点研究与新药筛选”北京市重点实验室，北京 100050;中国医学科学院北京协和医学院药物研究所药物靶点研究与新药筛选”北京市重点实验室，北京100050;中国医学科学院北京协和医学院药物研究所晶型药物研究”北京市重点实验室，北京 100050; 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能”国家重点实验室，北京 100050;中国医学科学院北京协和医学院药物研究所药物靶点研究与新药筛选”北京市重点实验室，北京 100050; 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能”国家重点实验室，北京 100050【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.81;R282.71;R745.705.31帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是严重危害中老年人健康的神经退行性疾病，目前现有的治疗药物有很大的局限性和副作用，因此建立能够反映PD临床病因、病理过程的动物模型，寻找新的有效防治PD的药物具有重要意义。
多巴胺诱导PC12细胞凋亡的免疫组织化学及超微结构分析
多巴胺诱导PC12细胞凋亡的免疫组织化学及超微结构分析李立宏高国栋王学廉张宝国【关键词】超微结构关键词: 超微结构;PC12细胞;凋亡;帕金森病;多巴胺摘要:目的研究帕金森病（PD）多巴胺能神经元的死亡机制. 方式在免疫组织化学基础上，采纳流式细胞仪、电泳及电镜技术观看不同浓度多巴胺（DA）诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的超微结构及生化改变. 结果适当浓度DA可诱导PC12细胞凋亡.初期表现为线粒体结构及功能的改变并有抗凋亡蛋白bcl-2的表达，后期电镜下可见凋亡特点性核结构改变及典型的DNA“阶梯状”电泳带. 结论细胞凋亡参与了PD的病变进程，线粒体在初期细胞凋亡中起着重要的调剂作用.Keywords: ultrastructure; PC12 cells; apoptosis;Parkinson’s disease;dopamineAbstract:AIM To study the mechanism of dopaminergic neuronal death of Parkinson’s diseases（PD）.METHODS Using the flow cytometry，electron microscope，elec-trophoresis and theimmunohistochemistry technology，we observed the alteration of ultrastructure and biochemistry of the apoptosis on PC12cells induced by dopamine with differ-ent Moderate concentrations of dopamine（DA）induced apoptosis in early al-teration was that of structure and function of mitochondrion and the expression of bcl-2anti-apoptosis the specific nuclear ultrastructure of apoptosis and the typical DNA“ladder”electrochromatography were ┐CLUSION Apoptosis may be involved in the pathogenesis of PD，and the mitochodria plays a significant role in the early apoptosis of cells.0 引言帕金森病的特点性病理改变成黑质-纹状体多巴胺能神经元进行性死亡、缺失.其具体机制迄今尚不完全明确，目前以为PD患者脑内氧化应激反映过强，致使脑内神经递质多巴胺异样代谢产生过量的反映性氧自由基在其中起重要作用［1］ .细胞凋亡是致病因子或异样信号诱导发生的“生理性”的主动细胞死亡进程.它可能参与了PD 的发病进程［2，3］ .PC12细胞株做为一种儿茶酚胺类细胞株，被普遍应用于神经细胞死亡方式及毒性损害研究.咱们要紧观看多巴胺（DA）诱导PC12细胞凋亡的初期超微结构转变，以探讨细胞凋亡在PD的发病机制中的作用.1 材料和方式细胞培育 PC12细胞株（购于中国科学院上海细胞生物研究所）置于RPMI-1640培育液中，内含200mL・L-1 胎牛血清，谷氨酰胺2mmol・L-1 ，青霉素50ku・L-1 ，链霉素25mg・L-1 ，培育瓶中预先铺以200mg・L -1 鼠尾胶，用于细胞传代，置于50mL・L-1 CO2 孵箱37℃培育，隔天换液.药物处置待PC12细胞生长良好时加入多巴胺・L-1 ，同时将部份细胞置于培育皿中，进行细胞爬片.空白对照组加入RPMI-1640培育液.别离培育12及24h.形态学观看别离取・L-1 多巴胺培育12h及24h的细胞片，福尔马林固定30min，・L-1 PBS缓冲液洗涤3次，每次5min，HE染色光镜下观看.流式细胞仪检测别离取・L-1 DA处置12及24h的细胞液经・L-1 胰酶和・L-1 EDTA液消化，制成细胞悬液，调整细胞浓度1×109 ・L-1 ，离心后弃去上清液，重悬浮于5mL，4℃预冷的葡萄糖盐水中，按每1mL悬液加入2mL4℃冷乙醇的量固定24h，按1∶1加入碘化丙啶（PI）染色，4℃放置25min，流式细胞仪中进行分析.免疫组织化学bcl┐2染色应用SABC 试剂盒，将细胞片置于30mL・L-1 H2 O2 中常温处置10min;蒸镏水洗涤3次;加入血清封锁液20min;加入bcl-2抗体37℃1h;・L-1 PBS洗涤3次;加入生物素化二抗37℃20min;PBS洗涤3次;加入SABC 试剂37℃20min;PBS洗涤4次;DAB显色;苏木素轻度复染，脱水封片镜检.电镜检查别离将・L-1 DA处置12及24h的细胞悬液离心后弃去上清，加入30mL・L-1 戊二醛固定30min，送电镜室做超薄切片，JEM-2000EX型透射电镜下观看照相.DNA凝胶电泳别离取・L-1 DA处置12及24h的细胞液，调整细胞浓度5×109 ・L-1 ，裂解液裂解，RNAase，蛋白酶K孵育，酚抽提，乙醇沉淀，每样品提取DNA10μg经琼脂糖凝胶行电泳分析.2 结果形态学观看 ・L-1 多巴胺作用12h细胞HE染色形态学无明显改变，可见核割裂相减少（1个/HP）.24h那么呈典型凋亡形态学改变，可见凋亡小体.空白对照组细胞生长旺盛，核割裂相明显（6个/HP）.流式细胞仪检测 ・L-1 多巴胺作用PC12细胞12h 时流式细胞仪检测未见凋亡峰，但同空白对照组比较“S”期细胞明显下降，由%下降为%，说明细胞增殖明显抑制.而・L-1 多巴胺作用PC12细胞24h时流式细胞仪检测可见典型亚二倍体凋亡峰（AP），凋亡率为%（Fig1～4）.图1 －图4 略免疫组化bcl┐2表达在・L-1 多巴胺作用的PC12细胞中，不管12h仍是24h光镜下都可见部份细胞胞质呈棕黄色，有棕黄色颗粒（bcl-2阳性细胞），部份细胞胞质呈淡紫色（阴性细胞）.但12h表达阳性率明显高于24h，呈强阳性，以后慢慢下降.而空白对照组胞质均为淡紫色未见bcl-2表达，细胞生长旺盛（Fig5）.电镜检查 ・L-1 DA作用PC12细胞12h时电镜下未见明显凋亡特点性核改变，细胞形态稍有转变，可见线粒体肿胀、嵴不明显及内质网扩张.而24h那么可见典型核结构改变:即核浓缩及凋亡小体.空白对照组细胞及细胞器形态正常，可见核割裂相（Fig6，7）.电泳分析 24h条件可见典型“阶梯样”DNA降解片段，而空白对照组及12h组无此转变（Fig8）.3 讨论目前PD的临床药物医治主若是左旋多巴（L-dopa）类药物替代疗法，通过补充外源性DA来弥补脑内多巴胺的不足，减缓临床病症.但最近几年来研究以为DA可能对PD患者残余的多巴胺能神经元具有损伤作用，从而加速PD的进展进程［1］ .细胞凋亡是致病因子或异样信号诱导发生的“生理性”的主动细胞死亡进程.这是一种受基因调控的特殊类型的细胞死亡.最近几年来研究发觉PD患者多巴胺能神经元在形态学上呈凋亡样改变，提示细胞凋亡可能参与了PD的发病进程［2］ .PC12细胞做为一种儿茶酚胺类细胞，其胞质中含有大量嗜铬颗粒，富含合成及分解多巴胺所必需的酶类（如TH，DG，MAO及COMT 等），在有神经生长因子存在的培育条件下可分化为交感神经元样细胞，使其在形态、生理及生化功能等方面更接近神经元.被普遍应用于神经元死亡方式及毒性损害的研究，专门是PD的研究，为国内外研究PD的常见的细胞模型［4］ . 图5 －图8 略许多实验说明多巴胺可诱导PC12细胞凋亡，且在必然范围内这种凋亡呈剂量及时刻依托性，以・L-1 多巴胺诱导的凋亡率为最高［3］ .其12h流式细胞仪虽未见明显凋亡峰，但可见细胞生长“S”期明显呈抑制状态，现在bcl-2染色呈强阳性，说明细胞正在动用自身调剂机制对抗凋亡.24h那么可见明显凋亡峰，凋亡率为%，现在bcl-2染色强度较12h明显下降，说明细胞凋亡已不可逆转.bcl-2蛋白作为BCL-2家族中起抗凋亡作用的一种蛋白，要紧定位于线粒体外膜，本实验中在电镜及电泳尚未显现凋亡典型的核结构改变时，在凋亡初期12h内即有bcl-2的表达，这说明初期的凋亡同线粒体有重要联系.最近几年来线粒体在凋亡中的重要作用日趋引发人们的普遍关注.Guideok等研究发觉多种因素诱导细胞显现凋亡特点性细胞核改变之前，都可观看到线粒体跨膜电位（Δφm）的下降，提示Δφm下降是凋亡的初期特点.其要紧功能是维持细胞正常的通透性.bcl-2做为一种抗凋亡作用的蛋白质，主若是通过稳固Δφm、阻止线粒体细胞色素C的释放、抑制Ca2+ 的外流及自由基的形成等机制来维持线粒体结构及功能稳固性，从而发挥其抗凋亡作用的［5］ .进一步研究发觉当线粒体细胞色素C释放后，bcl-2那么不能阻止细胞凋亡的发生，说明bcl-2对凋亡的调控部位在线粒体，而后者的结构和功能的改变是凋亡细胞超微结构的初期转变.最近研究发觉PD患者黑质纹状体细胞线粒体内复合物I缺点［6］，从而致使其通透性增加对自由基损伤加倍灵敏，ATP合成障碍，引发DA能神经元死亡，这与本实验研究有相同的地方.在本实验中，当DA作历时刻进一步延长（>12h），致使线粒体细胞色素C释放、bcl-2表达量下降、能量代谢障碍功能丧失时，说明凋亡已不可逆转.现在电镜下可见典型凋亡细胞超微结构改变:染色体浓缩并聚积在核膜周围形成新月样结构、核浓缩，随之显现核碎裂及凋亡小体形成等［7］ .DNA电泳那么可见典型“阶梯状”“阶梯状”DNA电泳主若是由于凋亡细胞自身的核酸内切酶被激活，引发自身DNA被降解成180～200bp的寡核苷酸片段而形成的，在流式细胞仪检测时那么表现为亚二倍体凋亡峰（AP）.关于PD患者黑质多巴胺能神经元具体死亡机制迄今尚未完全明了，目前以为与PD患者脑内氧化应激反映增强，加速了DA的氧化，产生过量的反映性自由基紧密相关.在脑内DA既可通过自身氧化亦可通过MAO-B酶氧化产生大量超氧自由基、H2 O2 及高毒性的羟自由基等产物，诱导神经元发生死亡［8］ .同时最新研究发觉PD患者黑质部位还原型GSH及谷胱甘肽超氧化物酶减少约50%左右，致使该区域神经元爱惜功能明显减弱［9］ .因此咱们以为初期利用MAO-B 抑制剂及抗氧化类神经元爱惜剂有助于PD的医治，延缓病程进展.参考文献:［1］Olanow CW MD，F R reactions in Parkinson’s disease ［J］.Neurology，1990;40（Suppl3）:32-37.［2］Shaw MK，Yuasa cell death in neuronal PC12cells is mediated by induction of apoptosis ［J］.Neuro-science，1994;63（3）:975-987.［3］Tanak M，Sotomat SA，Kanai H，Stone JM，Heron Dopaminecause culture neuronal death in the presence of iron ［J］.J Neurol Sci，1991;101（1）:198-203.［4］Loyd A，Greene of a noradrenergic colonial line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor ［J］.Proc Natl Acad Sci，1976;73（7）:2424-2428.［5］Oltvai ZN，Milliman CL，Korsmeyer in vivo with a conserved homology Bax that accelerates pro-grammed cell death ［J］.Cell，1993;74（3）:609-612.［6］Schapira AHV，Cooper JM，Dexter D，Carter CJ，Wells complex I deficiency in Parkinson’s disease ［J］.Lancet，1989;32（2）:1269-1276.［7］Roy S，Wolman observations in Parkinson’s disease ［J］.J Pathol，1969;99（5）:39-43.［8］Bindoli A，Rigobello P，Deeble and toxicological properties of the oxidation products of catecholamines ［J］.Free Bad Med，1992;13（6）:391-405.［9］Perry TL，Yong Parkinson’s disease，progres-sive supranuclear palsy and glutathine metabolism in the sub-stantia nigra of patients ［J］.Neurosci Lett，1989;67（4）:269-274.。
香椿子多酚通过JNK通路抑制6羟多巴胺诱导PC12细胞炎症损伤
ＬＩ ＫａｎꎬＬＩ Ｇａｎｇ￣ＡｏꎬＭＡ Ｙｉ￣Ｗｅｎꎬｅｔ ａｌ. Ｗｅｉｆａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｗｅｉｆａｎｇ ２６１０５３ꎬ Ｓｈａｎｄｏｎｇꎬ Ｃｈｉｎａ
【 Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ａｎｔｉ￣ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｆｒｏｍ ｔｏｏｎａｓｉｎｅｎｓｉｓ ｓｅｅｄｓ ( ＰＴＳＳ) ｏｎ ６￣ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ ( ＯＨＤＡ) ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ'ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ( ＰＤ) ｖｉａ ｔｈｅ ｃ￣Ｊｕｎ Ｎ￣ｔｅｒｍｉｎａｌ ｋｉｎａｓｅ ( ＪＮＫ) ｐａｔｈｗａｙ. Ｍｅｔｈｏｄｓ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ꎬ ｍｏｄｅｌ (６￣ＯＨＤＡ １００ μｍｏｌ / Ｌ) ꎬ ａｎｄ ＰＴＳＳ (６￣ＯＨＤＡ＋ＰＴＳＳ １００ μｍｏｌ / Ｌ) ｇｒｏｕｐｓ. Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ａｎ ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ. Ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＣＣＫ￣８ ｍｅｔｈｏｄ. Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＪＮＫꎬ ｐ￣ＪＮＫꎬ ＩＬ￣１β ａｎｄ ＩＬ￣６ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ. Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ａｂｕｎｄａｎｔ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｅｖｅｎｌｙ. Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐꎬ ｔｈｅ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｒｅｄｕｃｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ａｎｄ ｄｅｆｏｒｍｅｄ ｅｖｉｄｅｎｔｌｙ ａｆｔｅｒ ６￣ＯＨＤＡ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ２４ ｈ. Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ＰＴＳＳ ｔｒｅａｔ￣ ｍｅｎｔ ｆｏｒ １２ ｈ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅｄ. Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐꎬ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ ( Ｐ<０. ０５) . ＰＴＳＳ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ １２ ｈ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ ｔｈｅ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ( Ｐ<０. ０５) . Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐꎬ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＩＬ￣１βꎬ ＩＬ￣６ꎬ ＪＮＫ ａｎｄ ｐ￣ＪＮＫ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｏｂｖｉ￣ ｏｕｓｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ( Ｐ<０. ０５) ꎬ ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ＰＴＳＳ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ( Ｐ<０. ０５) . Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＰＴＳＳ ｃｏｕｌｄ ｃｏｕｎｔｅｒａｃｔ ６￣ＯＨＤＡ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＪＮＫ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒｓ.
经6-羟多巴处理的PC12细胞骨髓间充质干细胞共培养的细胞活力及多巴胺分泌
Yue Tang1, Yongchun Cui1, Fuliang Luo1, Xiaopeng Liu1, Xiaojuan Wang2, Aili Wu1, Junwei Zhao1, Zhong Tian1, Like Wu2
1State Key Laboratory of Translational Cardiovascular Medicine, Fuwai Hospital & Cardiovascular Institute, Chinese Academy of Medical Sciences, Peking Union Medical College, Beijing 100037, China 2Beijing Wu Stem Cells Medical Center, Beijing 100070, China
Key Words
bone marrow-derived mesenchymal stem cells; α-synuclein; 6-hydroxydopamine; PC12 cells; dopamine; cell apoptosis; neurotoxicity; neural regeneration
Abstract
In the present study, PC12 cells induced by 6-hydroxydopamine as a model of Parkinson’s Disease, were used to investigate the protective effects of bone marrow-derived mesenchymal stem cells bone marrow-derived mesenchymal stem cells against 6-hydroxydopamine-induced neurotoxicity and to verify whether the mechanism of action relates to abnormal α-synuclein accumulation in cells. Results showed that co-culture with bone marrow-derived mesenchymal stem cells enhanced PC12 cell viability and dopamine secretion in a cell dose-dependent manner. MitoLight staining was used to confirm that PC12 cells co-cultured with bone marrow-derived mesenchymal stem cells demonstrate reduced levels of cell apoptosis. Immunocytochemistry and western blot analysis found the quantity of α-synuclein accumulation was significantly reduced in PC12 cell and bone marrow-derived mesenchymal stem cell co-cultures. These results indicate that bone marrow-derived mesenchymal stem cells can attenuate 6-hydroxydopamine-induced cytotoxicity by reducing abnormal α-synuclein accumulation in PC12 cells.
6－羟基多巴胺作用于PC12细胞中的信号转导通路
6－羟基多巴胺作用于PC12细胞中的信号转导通路
汪军兵（综述）;胡景鑫（审校）
【期刊名称】《现代保健：医学创新研究》
【年(卷),期】2008(005)021
【摘要】以6-羟基多巴胺（6-OHDA）作用于大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PCI2细胞）是目前公认的帕金森病体外细胞模型。
最近又发现在人体内存在内源性的6-OHDA，且与帕金森病的发病有关。
6-OHDA可致PC12细胞凋亡，在此过程中有多种信号转导通路参与。
弄清6-OHDA致PC12细胞凋亡中的信号转导通路将有助于弄清帕金森病的发病机制及指导临床上帕金森病的治疗。
【总页数】2页(P37-38)
【作者】汪军兵（综述）;胡景鑫（审校）
【作者单位】荆门理工学院病理教研室,湖北荆门448000
【正文语种】中文
【中图分类】R363
【相关文献】
1.6-羟基多巴胺诱导PC12细胞帕金森病模型中CaBP1表达的研究 [J], 徐卉;付军;常明;张磊;胡林森
2.6-羟基多巴胺诱导PC12细胞帕金森模型中GRP78表达的研究 [J], 徐弃;常明;张磊;杜丹华;胡林森
3.枳实黄酮提取物对6-羟基多巴胺所致PC12细胞损伤的保护作用 [J], 梁曾恩妮;李志坚;单杨
4.天麻活性成分20C对6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞损伤及帕金森病模型小鼠的保护作用 [J], 杜雨生;张钊;何新;陈乃宏
5.7,8-二羟基黄酮对6-羟基多巴胺诱导PC12细胞损伤的保护作用 [J], 祝绍磊;曲志强;牛雅文;宋丹羽;成梦南;韩晓华
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6-OHDA诱导PC12细胞改变的机制与帕金森病伴发抑郁模型大鼠的制备
6-0HDA诱导PC12细胞改变的机制与帕金森病伴发抑郁模型大鼠的制备第一部分6-0HDA对PC12细胞凋亡的影响目的：探讨6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-0HDA)对大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡的影响及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine NAC)囊泡单胺类转运体(Vesicular Monoamine Transporter, VMAT) 功能抑制对其作用。
方法：阴性对照、6-OHDA(25,50,100,200umol/L)、NAC(20mmol/L与上述不同浓度6-OHDA 不同浓度的VMA■功能抑制剂利血平(50、100、400、1600nmol/L)与6-OHDA(100umol/L) 作用于PC12细胞，前三大组于不同时间点(0、12、24、36、48h),后一大组于0、24h 用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 法检测细胞活性, 以流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用western blot 法测PC12细胞Bc12蛋白及Bax蛋白活性。
结果：加入不同浓度的6-OHDA寸,PC12细胞中细胞活性随6-OHDA浓度增加而下降,并随作用时间的延长活性降低更加明显。
加入NAC后,相应的细胞活性增加，而在100卩mol/L6-OHDA组中，随着利血平浓度的增加，细胞活性显著下降，差异有统计学意义。
PC12细胞凋亡随6-OHDA浓度增加显著上升，引起Bc12蛋白表达下降,Bax 蛋白表达上升,具有时间依赖性。
加入NAC后,相应的细胞凋亡减少,Bc12蛋白表达较相应组升高,Bax蛋白表达减少,差异有显著性。
而在100umol/L6-OHDA组中,随着利血平浓度的增加,相应的细胞凋亡增多,Bc12蛋白表达降低明显,Bax蛋白表达增多,差异有显著性。
结论：本研究提示6-OHDA能诱导PC12细胞活性降低,诱导PC12细胞凋亡,并呈剂量及时间依赖性,并抑制细胞内Bc12表达,促进Bax的表达,VMAT功能抑制加重上述变化,进步抑制Bcl2蛋白表达,促进细胞内Bax的表达,进而诱发多巴胺能神经元的凋亡。
尼古丁对6-羟多巴胺诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用
尼古丁对6-羟多巴胺诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用朱小南;汪雪兰;何进;余剑平;王琴;陈汝筑【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2004(18)1【摘要】目的探讨尼古丁对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用及其与烟碱受体的关系.方法用6-OHDA诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞凋亡的细胞模型;用MTT、二乙酸荧光素活细胞染色、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳等方法检测PC12细胞的凋亡;用尼古丁及N型和M型受体拮抗剂预处理,观察尼古丁的拮抗作用及其与受体的关系.结果尼古丁可明显拮抗6-OHDA(50 μmol·L-1)诱导PC12细胞凋亡,呈钟型浓度效应关系,10 μmol·L-1尼古丁的拮抗作用最强.用10 μmol·L-1尼古丁预处理PC12细胞2 h可明显降低6-OHDA诱导的细胞凋亡.用10 μmol·L-1六甲溴胺阻断烟碱受体,可取消尼古丁对6-OHDA诱导细胞凋亡的拮抗作用;但用阿托品阻断M型胆碱受体,对尼古丁的拮抗作用则无明显影响.结论尼古丁对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡有明显的拮抗作用,这种作用由烟碱受体所介导.【总页数】5页(P6-10)【作者】朱小南;汪雪兰;何进;余剑平;王琴;陈汝筑【作者单位】中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510089;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510089;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510089;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510089;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510089;中山大学中山医学院药理学教研室,广东,广州,510089【正文语种】中文【中图分类】R971.91【相关文献】1.α-硫辛酸对6-羟多巴胺诱导PC12细胞损伤的保护作用 [J], 李成朋;韩飞;董智慧;罗坤;胡玉梅;官志忠;吴昌学;禹文峰;;;;;;;;;2.联合6-羟多巴胺及囊泡单胺类转运功能抑制对PC12细胞凋亡的影响及机制 [J], 邢红霞;刘胜;袁燕;周慧聪;田小军;苏洲;张博爱3.6-羟多巴胺及囊泡单胺类转运功能抑制对PC12细胞凋亡的影响 [J], 邢红霞;杨大飞;刘胜;朱元凯;田小军;史莉瑾;张博爱4.α-硫辛酸对6-羟多巴胺诱导的PC12细胞凋亡的影响 [J], 袁崇刚;何令;薛小琳;施英唐;毕秀华5.香椿子多酚通过JNK通路抑制6-羟多巴胺诱导PC12细胞炎症损伤 [J], 李侃;李港澳;马一闻;庄文欣;付文玉;吕娥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
6-OHDA对PC12细胞的凋亡及内质网应激的影响
6-OHDA对PC12细胞的凋亡及内质网应激的影响李艳霞;高华;王丹;杨新玲【期刊名称】《新疆医学》【年(卷),期】2018(48)5【摘要】目的使用6-OHDA(6羟基多巴胺)作用于PC12细胞建立帕金森病细胞模型,探讨模型细胞的凋亡与HtrA2及Bip/Grp78表达的关系;方法将不同浓度(10-200μM)6-OHDA加入传代培养的PC12细胞中,作用24 h后采用CCK8法检测细胞活力,筛选细胞存活率为50％左右的6-OHDA浓度为造模浓度,并观察24 h 内细胞活力的变化,使用Annexin V-PE/7AAD试剂盒检测细胞凋亡,并使用蛋白免疫印迹法检测HtrA2、Bip/Grp78的表达;结果在6-OHDA诱导下,PC12细胞活力呈剂量依赖性和时间剂量依赖性下降,其浓度为60μM时,细胞存活率为43.89％±0.90％,模型细胞的凋亡率、HtrA2和Bip/Grp78的表达较对照组明显增加(P<0.05);结论选择60μM 6-OHDA为PC12细胞帕金森病细胞模型的造模浓度,6-OHDA刺激PC12细胞的内质网应激,诱导PC12细胞的凋亡,HtrA2参与内质网应激且促进细胞凋亡.【总页数】4页(P467-470)【作者】李艳霞;高华;王丹;杨新玲【作者单位】新疆医科大学第二附属医院,乌鲁木齐830063;新疆医科大学第五附属医院,乌鲁木齐830011;新疆医科大学第二附属医院,乌鲁木齐830063;新疆医科大学第二附属医院,乌鲁木齐830063【正文语种】中文【中图分类】R74【相关文献】1.JNK信号转导通路在NGF抗6-OHDA诱导PC12细胞凋亡中的作用 [J], 汪军兵;胡景鑫2.环孢菌素A抑制内质网应激减轻β淀粉样蛋白25-35对PC12细胞凋亡的研究[J], 孔敏;巴茂文;梁辉;田丽3.6-OHDA诱导PC12细胞凋亡及作用机制 [J], 叶锡勇;程畅河;林泉峰4.异氟醚对β淀粉样蛋白诱导的大鼠PC12细胞凋亡和内质网应激的影响及其机制[J], 邹泳国;周春燕;朴美花;刘楠;岳云;冯春生5.PC12细胞氧糖剥夺不同时间段再灌注后内质网应激及细胞凋亡 [J], 郑菊; 刘雨霞; 张文萍; 吴昌学; 李毅; 齐晓岚; 官志忠; 肖雁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞的凋亡和谷氨酸的释放不依赖蛋白激酶C
6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞的凋亡和谷氨酸的释放不依赖蛋白激酶C李皓;丁建花;胡刚【期刊名称】《脑与神经疾病杂志》【年(卷),期】2002(010)006【摘要】目的:了解6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞凋亡及谷氨酸(Glu)的释放与蛋白激酶C(PKC)的关系, 为探讨6-OHDA的毒性作用机制及诱导Glu释放的信号传递途径提供实验依据. 方法: 培养PC12细胞, 以特定浓度6-OHDA刺激24h, 用缺口末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡, 用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率, 用高效液相色谱法(HPLC)检测Glu的释放量. 提前1h加入蛋白激酶C抑制剂HA-100, 观察细胞活力和Glu水平的变化. 结果:HA-100对6-OHDA诱导的PC12细胞外Glu水平无明显影响, 且不能减少6-OHDA诱导的细胞凋亡. 结论:6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞凋亡和谷氨酸的释放是PKC非依耐性的.【总页数】3页(P324-326)【作者】李皓;丁建花;胡刚【作者单位】210029,南京医科大学;210029,南京医科大学;210029,南京医科大学【正文语种】中文【中图分类】R362【相关文献】1.Ⅰ组亲代谢型谷氨酸受体配基不影响6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞死亡及谷氨酸的释放 [J], 李皓;丁建花;胡刚2.五味子醇甲抑制6-羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡的研究 [J], 李海涛;胡刚3.Ⅱ、Ⅲ组亲代型谷氨酸受体激动剂对6-羟基多巴诱导的PC12细胞毒性无保护作用 [J], 孟长虹;丁建花;胡刚4.6-羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡及其可能分子机制 [J], 荣娟;陈生弟;李彪;刘振国5.7,8-二羟基黄酮对6-羟基多巴胺诱导PC12细胞损伤的保护作用 [J], 祝绍磊;曲志强;牛雅文;宋丹羽;成梦南;韩晓华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
芍药苷对6羟基多巴胺诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究
芍药苷对6羟基多巴胺诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究顾晓苏;王芬;胡丽芳;刘春风【摘要】目的探讨芍药苷(PF)对6羟基多巴胺(6-OHDA)损害的PC12细胞的保护作用.方法检测各组6-OHDA诱导PC12损伤细胞相对存活率和乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用免疫荧光和免疫印迹技术检测PC12细胞α-突触核蛋白(α-syn)、自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、p62)以及酸敏感离子通道(ASIC1a)的蛋白水平.结果与正常对照组比较,6-OHDA组相对细胞存活率显著下降,LDH活性显著升高(均P<0.01).与6-OHDA组比较,PcTx1组、阿米洛利组、PF各亚组相对细胞存活率均显著升高,LDH活性显著降低(P<0.05～0.01).与正常对照组比较,6-OHDA组ASIC1a蛋白水平显著升高(P<0.01).与6-OHDA组比较,PcTx1组、阿米洛利组、PF各亚组ASIC1a蛋白水平均显著降低(P<0.05～0.01).与正常对照组比较,6-OHDA组α-syn、LC3-Ⅱ、p62蛋白水平均显著增加(均P<0.01).与6-OHDA组比较,PcTx1组、阿米洛利组、PF各亚组α-syn、LC3-Ⅱ、p62蛋白水平均显著降低(P<0.05～0.01).结论 PF可能通过提高α-syn的自噬性降解,对6-OHDA毒素损害的PC12细胞起到保护作用.PF的神经保护作用可能与抑制ASIC1 a的活性有关.【期刊名称】《临床神经病学杂志》【年(卷),期】2018(031)004【总页数】5页(P283-287)【关键词】芍药苷;6-OHDA;α-突触核蛋白;自噬;酸敏感离子通道;PC12细胞【作者】顾晓苏;王芬;胡丽芳;刘春风【作者单位】226001 南通大学附属医院神经内科;苏州大学神经科学研究所;苏州大学神经科学研究所;苏州大学附属第二医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R741.05帕金森病(PD)是以黑质多巴胺(DA)能神经元变性缺失和含有错构、聚集α-突触核蛋白(α-syn)的包涵体-路易小体形成为主要病理特征的神经变性性疾病[1]。
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抑制 ６一Ｏ Ｄ Ｈ Ａ诱导 的细胞色素 ｃ的释 放及 凋亡。 ３３ Ｎ ． Ｆ—Ｋ Ｂ信号传 导通路 机制 Ｎ Ｆ—Ｋ ， Ｂ 通常 由 ｐＯ和 ｐ ５ Ｓ ６／
并采 用基 因系列分析 ， 发现 同一个应激 激活通路诱导 的转 录反应
既可促 生存 ， 也可促 死亡 ， 是生存还 是死亡取决于 具体 的条 件 。６
汪军兵 （ 综述 ） 胡景 鑫（ 审校 ） 荆 门理 工学院病 理教研 室（ 湖北
【 中图分类号】 ３３ Ｒ ６ 【 文献标识码】 Ａ
荆 门４ ８０ ） ４ ０ ０
【 文章编号】６ １ ７２ （０８３ — ０７— ２ １７ — ８ １２０ ）２ ０３ ０
【 要】 ６ 羟基 多巴胺 （ Ｏ Ｄ ） 用于大鼠 肾上腺嗜铬 细胞 瘤细胞 （Ｃ ２ 摘 以 一 ６一 Ｈ Ａ 作 Ｐ １ 细胞 ） 目 公认 的帕金森病体 外 细胞模 型。最 是 前 近 又发现在人体 内 在 内源性 的 ６ Ｏ Ｄ ， 存 一 Ｈ Ａ 且与 帕金森病 的发病 有关 。 Ｏ Ｄ ６一 Ｈ Ａ可致 Ｐ １ Ｃ２细胞 凋亡 ， 在此过 程 中有 多种 信号转 导
性 系， 当生长在血清充足 的培养基时拥有正常 嗜铬 细胞 的许 多特 征 ， 能合 成多 巴胺和去 甲肾上腺 素。 如
２ ６一Ｏ Ｄ Ｈ Ａ对 Ｐ １ Ｃ ２细胞 的作用
胞更 强抵抗力 ， 以对 抗多种致死性 的细胞损伤 。暴露 细胞于 高强 度 的应 激能导致细胞 的死亡 ， 短暂和温 和的应激刺激 包括促生存 蛋 白 的诱 导 在 内 的保 护 策 略 的 激 活。例 如 ， 休 克 蛋 白 ２ 热 ７ （ ｓ２ ） Ｈ ｐ７ 和热休克 蛋 白 ７ （ ｐ０ 的表 达增 加发 生在 细胞 暴露 Ｏ Ｈｓ７ ） 在非 致死的温度 升高 或氧 化增强 。Ｈ ｐ ７通 过在 几个 不 同的水 ｓ２ 平干 扰 ｃｓａｅ的激 活来 抑制 凋 亡。它 能直 接 与线 粒体 相 互作 ａｐｓ 用， 因此防止细胞色 素 Ｃ 的释放 。在胞浆 ， 它也能分解细胞色素 Ｃ
和 ｃｓａｅ一 ， ａｐｓ ３ 因此防止 凋亡体 的形成 。在 Ｐ １ Ｃ ２细 胞 ， ｓ２ Ｈ ｐ ７可
在体外 ， Ｏ Ｄ ６一 Ｈ Ａ能诱导 Ｐ １ Ｃ ２细胞 的死 亡 。低 浓度 的 ６一 ＯＤ Ｈ Ａ诱导 Ｐ １ Ｃ ２细胞 的凋亡 ， 而高 浓度诱 导 Ｐ １ 胞 的坏死 。 Ｃ ２细
６ Ｈ Ａ对其细胞存活率 的影 响均呈时 间和剂量依 赖性 。时间 一Ｏ Ｄ
越长 、 浓度越 高 ， 则细胞 的存 活率越低 。
３ ６一Ｏ Ａ作 用 于 Ｐ １ 胞 过 程 中 的 信 号 转 导 机 制 ＨＤ Ｃ ２细
Ｅｉ ｂｔ ． ｙ ｌａｅｈＪＲ ｕ等用 ６一Ｏ Ｄ ｚ Ｈ Ａ作用 于分化 的 Ｐ 胞凋亡过程中关键 的调控子之一。 ３ ２ 热休克蛋 白（ ｓ ） 制 ． Ｈｐ 机 热休克 蛋 白属 于应激 蛋 白的 一个
亚类 ， 它在所有组织 中均能检测到 。Ｈ Ｐ ７的表达增 加给予 了细 Ｓ２
１２ Ｐ １ ． Ｃ ２细胞的特性
Ｐ１ Ｃ ２细胞来 源 于大 鼠嗜铬细 胞瘤 的无
医学创新研究
≯
２０ ０ ８年 １ １月 第 ５卷
第３ ２期
０ ０≯
ＭＥ Ｃ ＮＥ Ｉ Ｎ０ＶＡＴ ０Ｎ ＲＥ ＥＡＲＣ ＤＩ Ｉ Ｎ １ Ｓ Ｈ
≯ ≯ ≯≯≯ 萋 ０ ０ ０
碧≯ 露 蛋 蕾 ≯ ≯ 。 多 ０曩 ∥ 综
述
６一羟 基 多 巴胺 作 用 于 Ｐ Ｃ １ ２细胞 中的 信 号 转 导 通 路
的死 亡 。
转染到 Ｐ １ Ｃ ２细胞也 能对 ６一Ｏ Ｄ Ｈ Ａ诱 导的凋亡起 到保 护作用 ， 而 且 ｃｓａｅ ３活性的下降程度与前 者基本相 同， 明 ｃｓａｅ ６ ａｐｓ 一 说 ａ ｓ在 ｐ
一
Ｏ Ａ诱导 的 Ｐ １ ＨＤ Ｃ ２细胞凋 亡 中起重 要作用 ， 提示 ｃｓａｅ是神 ａｐｓ
等将一个 ｃｓａｅ一 ａｐｓ ３核酶（ 能特异 性地下调 ｃｓａｅ一 ） ａｐ ｓ ３ 表达质粒
１ ６一羟基 多 巴 胺 与 Ｐ １ 胞 的特 性 Ｃ ２细 ６一Ｏ Ｄ 是 多 巴 胺 的 羟 化 物 ， 是 一 Ｈ Ａ 亦
种神经毒物 。它可在体 内氧化 ， 生多种 自由基 ， 产 对多 巴胺 能 神 经元有 选择性的毒性 。６一Ｏ Ｄ Ｈ Ａ通常用来 制作模 拟 帕金森病 的 动物模 型。因为帕金森病 是 由于 中脑 多 巴胺 能神 经元 选择 性 的 死亡所致 ， ６一Ｏ Ｄ 而 Ｈ Ａ在体外 和体 内均诱 导 了多 巴胺 能神 经元
合成 ， 当受到凋亡 刺 激时被 激 活 。一 般认 为 凋亡 是 因 由 ｃｓａｅ ａｐ ｓ
并 通过蛋 白水解降解 ， Ｎ 使 Ｆ—Ｋ Ｂ核易 位。然后 Ｎ Ｆ—Ｋ Ｂ与 同源 的 Ｄ Ａ序列结合 ， 导靶 基 因 的转 录。多个 研 究支 持 Ｎ Ｎ 诱 Ｆ—Ｋ Ｂ 的抗 凋亡作用 。研究显 示 Ｎ Ｆ—Ｋ Ｂ的激 活可 保护原 代神 经元 对
通路参与 。弄 清 ６一Ｏ Ｄ Ｈ Ａ致 Ｐ １ Ｃ ２细胞凋亡 中的信 号转导通路将有助 于弄清帕金 森病的发病机制及 指导临床 上帕金森病 的治疗。
【 关键词 】 — Ｈ Ａ Ｃ ２细胞 ６ ０ Ｄ Ｐ １
１ １ ６一 ＨＤ 的 特 性 ． Ｏ Ａ
凋亡
类蛋 白酶的参 与并 能充分避 免 Ｐ １ Ｃ ２细胞 的凋 亡。Ｒ ｎ—Ｈ ａＸ ｅ ｕｎ ｕ
一
Ｒｌ ｅ Ａ蛋 白组 成 ， 细胞质 中通 过与 ＩＢ家 族 的一个 抑制 蛋 白相 在 ｚ
互作用保持非活化状态 。在 受到刺激 的情况 下 ，Ｋ ＩＢ蛋 白磷酸 化
Ｏ Ａ作用于 Ｐ １ ＨＤ Ｃ ２细胞过程 中的分 子机制主要有介绍如 下 ：
３ １ 半胱 天冬蛋 白酶 （ ａｐ ｓ ） ． ｃｓａｅ 信号 转 导通 路机 制 象 许 多其 它 的细胞蛋 白酶一样 ， 有 的 ｃｓａｅ首先 以无 活性 的酶原形 式 所 ａｐｓ