实验二、蛋白质沉淀、变性反应

往试管2中，加入硫酸铵粉末， 观察有无沉淀（清蛋 边加边用玻璃棒搅拌，直至粉 白）析出 末不再溶解，直至饱和 静置，弃去上清液，取出部分 清蛋白沉淀，加少量蒸馏水 观察沉淀的再溶解
2. 蛋白质的可逆反应——乙醇
步骤
取试管1，加入1mL蛋白质氯化 钠溶液和21mL95%乙醇 静置，弃去上清液，取出部分 蛋白沉淀，加少量蒸馏水
2. 仪器
漏斗,滤纸,吸管,试管及试管架,量筒、离心机等。
四、实验操作
1. 蛋白质的可逆反应——盐析
步骤 取试管1，加入3mL蛋白质氯化 钠溶液和等量的饱和硫酸铵溶 液，混匀，静置10分钟 倒出上清液于试管2，取试管1 中沉淀，加少量蒸馏水 现象 观察有无蛋白质（球 蛋白）的沉淀 解释结论
观察沉淀的再溶解
有机试剂
盐析 强酸、强 碱沉淀 加热 重金属盐 沉淀
Leabharlann Baidu
低温乙醇提取血液中
的蛋白质组分
灭活病毒 鸡蛋、肉类等加工 临床上常用蛋清或牛
变性；生成不溶性盐
Ag+，Hg2+，Cu2+和Pb2+
乳解救误服重金属盐
的病人
苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、 磺基水杨酸等生物碱试剂
有机酸沉 淀
生成不溶性盐
沉淀蛋白滤液等
蛋白质沉淀分类
（1）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生 显著变化，基本保持原有的性质，沉淀因素除去后， 能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短时作 用，可用于蛋白质提纯。 （2）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空 间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，不再溶于 原溶剂。例如：加热、有机酸反应。
蛋白质分 子表面
五、结果与分析
列出表格，记录相应的实验现象并对实 验现象进行分析！
六、实验结论
哪些反应使蛋白可逆沉淀？ 哪些反应使蛋白不可逆沉淀？
七、思考题
教材p199思考题？ 举例说明蛋白质变性和沉淀之间的关系？
试管 2
试管 3
4. 蛋白质的不可逆反应——有机酸（2支试管）
试管 操作 现象 操作 现象
试 管 ① 1mL 蛋 白 质 观 察 有 无 蛋 弃去上清液， 观 察 沉 淀 的 再 1 溶液 白质的沉淀 取 出 部 分 蛋 白 溶解 ②3滴10%三氯 沉淀，加少量 乙酸溶液 蒸馏水
试 管 ① 1mL 蛋 白 质 观 察 有 无 蛋 2 溶液 白质的沉淀 ② 3 滴 5% 磺 基 水杨酸 弃去上清液， 观察沉淀的再 取 出 部 分 蛋 白 溶解 沉淀，加少量 蒸馏水
现象
观察有无蛋白质的沉 淀 观察沉淀的再溶解
解释结论
3. 蛋白质的不可逆反应——重金属盐（3支试管）
试管 试管 1 操作 ①1mL蛋白质溶液 ②3-4滴2%硝酸银溶液 ③过量的硝酸银 ①1mL蛋白质溶液 ②1-3滴0.5%乙酸铅 ③过量的乙酸铅 ①1mL蛋白质溶液 ②3-4滴1%硫酸铜 ③过量的硫酸铜 现象 操作 现象
一、实验目的
1、了解使蛋白质胶体溶液稳定的因素。
2、了解蛋白质的可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应。
3、掌握蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及 它们的相互关系。
二、实验原理
维持蛋白质胶体溶液稳定的因素： 水化膜 同种电荷
同种蛋白质 表面带有相 同电荷 外面的亲水基团结 合一层水，形成水 化膜
使蛋白质沉淀的原理 破坏水化膜 中和电荷
聚集体的直径＞100nm 即为不稳定的粗分散系
使蛋白质沉淀的方法
（1）盐析 （2）有机试剂 （3）重金属盐 （4）有机酸 （5）加热 …………
蛋白质沉淀变性的常见方法
常用方法 盐析 原理 破坏蛋白质胶体溶液的水化 层和电荷层 脱水作用；降低水的介电常 数和蛋白质溶解度；蛋白质 析出 破坏蛋白质分子结构发生蛋 白质变性 变性 盐酸, 硫酸, 硝酸、氢氧 化钠 乙醇、丙酮、甲醇 常用试剂 (NH4)2S04、Na2S04、 Na3P04、NaCl、MgS04 实用 常用此法来分离和纯 化蛋白质。
水化膜 稳定的亲水胶 同种电荷 脱水，失去电荷 沉淀反应
可逆沉淀反应 （不变性沉淀反应） 如：盐析作用…
不可逆沉淀反应 （变性沉淀反应） 如：重金属盐沉淀作用…
三、实验仪器和试剂
1. 试剂
• 蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至
200ml，搅拌后用2-3层纱布过滤，新鲜配制。加
入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。 • 试剂：饱和硫酸铵溶液，硫酸铵粉，95%乙醇，2% 硝酸银，0.5%乙酸铅，1%硫酸铜，10%三氯乙酸溶 液，5%磺基水杨酸。
观 察 有 无 弃去上清液，取 观 察沉 淀 蛋 白 质 的 出部分蛋白沉淀， 的再溶解 沉淀 加少量蒸馏水 观 察 有 无 弃 去 上 清 液 ， 取 观 察沉 淀 蛋 白 质 的 出部分蛋白沉淀， 的再溶解 沉淀 加少量蒸馏水 观 察 有 无 弃 去 上 清 液 ， 取 观察沉淀 蛋 白 质 的 出部分蛋白沉淀， 的再溶解 沉淀 加少量蒸馏水