实验一 蛋白质的沉淀及变性
蛋白质的沉淀和变性实验.
实验五蛋白质的沉淀和变性实验一、实验目的1.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。
二、实验原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
1.可逆的沉淀反应。
此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解在原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
2.不可逆沉淀反应。
此时蛋白质分子内部结构发生大改变，蛋白质常因变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
如加热引起的蛋白质沉淀于凝固，蛋白质于重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类反应。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷）并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
三、实验材料、器材与试剂1. 材料鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1：9）。
2. 器材（1）试管及试管架；（2）吸量管；（3）滴灌；（4）小烧杯；（5）容量瓶。
3. 试剂（1）3%硝酸银溶液；（2）5%三氯乙酸溶液（3）95%乙醇；（4）饱和硫酸铵溶液；（5）硫酸铵结晶粉末。
四、实验方法1.蛋白质的盐析中性无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。
盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。
如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。
由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析是可逆的过程。
加蛋清溶液5mL于试管中，再加入等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。
倒出少量浑浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。
实验一蛋白质变性凝固及沉淀(WT)
蛋白质的变性、凝固及沉淀
生物化学与分子生物学教研室
精品课件
实验目的
能够说出蛋白质变性、凝固反应的原理及实验方法 能够说出蛋白质沉淀反应的原理及实验方法 能够运用盐析法及重金属沉淀法
精品课件
主要实验内容
蛋白质的加热变性凝固 蛋白质沉淀反应
蛋白质盐析 重金属盐沉淀蛋白质 生物碱试剂沉淀蛋白质
变性实质：
高浓度尿素、盐酸胍等
破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、
分子量不变）。
精品课件
变性的可逆性
可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构可 以恢复原状。
不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构 不能恢复原状。
利的保存 保护体内蛋白质
精品课件
蛋白质的胶体性质及沉淀:
不同蛋白质盐析时所需的盐浓度不同，可以通过 不同浓度盐溶液分离不同蛋白质，就是分段盐析。
大部分蛋白质都可用饱和(NH4)2SO4溶液盐析出来。 某些蛋白质在半饱和(NH4)2SO4溶液中析出。 盐析是一个可逆沉淀反应。
精品课件
实验内容
① 取一只小玻璃试管，加入2mL蛋白质溶液；
② 加入等体积饱和(NH4)2SO4溶液，混匀后静置3min。
观察现象（
）
③ 对该溶液进行过滤，将滤液收集于一只干净试管中， 取部分转入另一只试管中；
④ 向一只试管中加入结晶(NH4)2SO4粉末，直到粉末不 再溶解（成为饱和(NH4)2SO4溶液）；
⑤ 比较两只试管现象（
）
精品课件
蛋白质沉淀反应
重金属盐沉淀蛋白质
在碱性条件下，重金属离子与蛋白质结合成不溶 性蛋白盐而沉淀。
1. 向1号管中加入：pH4.8缓冲液10d 。混匀，于酒精灯
生化实验蛋白质的变性凝固及沉淀反应性质
注意事项
逐滴加入，仔细观察 酒精灯使用前注意酒精量的多少，加热时试管
口不可对人，不用时熄灭 酒精灯加热时，要进行晃动,避免局部高温,引起
试管炸裂 用过的枪头、滤纸放于污物缸 苦味酸属危险试剂 用过的试管仔细清洗
老年痴呆者脑血管中产生大量难溶性蛋白的诱因
蛋白质变性、沉淀和凝固可在细胞、组织的哪 些生命过程中出现？试举例与哪些疾病（或病 变）的发生相关？
验证关于蛋白质的相关理论 学会分析蛋白质的基本实验方法 讨论蛋白质分析在科研和临床工作中的意义
在某些物理和化学因素作用下，蛋白质 理化性质的改变和生物学活性的丧失。
引起蛋白质变性的理化因素
加热 乙醇等有机溶剂 强酸、强碱 重金属盐 生物碱试剂
学习蛋白质变性的意义
消灭病原微生物
蛋白质制剂的保存 保护体内蛋白质
结构和性质都发生变化
沉淀不再溶解于水
变性蛋白易于沉淀 沉淀蛋白不一定变性
接近于等电点附近的蛋白质溶液加热， 可使蛋白质发生凝固
不可逆变性状态
加热醋酸法 水/无机盐/尿素 水/无机盐/尿素/蛋白质 蛋白质变性凝固
变性、沉淀、凝固之间关系
变性属于蛋白质本质的变化，沉淀和凝固属于 一种现象
变性不一定沉淀，变性蛋白质只在等电点附近才沉 淀，沉淀的变性蛋白质也不一定凝固
变性的可逆性 可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构
可以恢复原状。 不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构 不能恢复原状。
一般轻度变性是可逆，过度变性是不可逆。
颗粒表面水化膜 胶粒表面同种电荷
疏水领域
破坏蛋白质的水化层和 电荷，使蛋白质从溶液 中ห้องสมุดไป่ตู้出的现象
蛋白质沉淀是一种现象
结构和性质都不变 适当条件下可重新溶解 是分离和纯化的基本方法
蛋白质变性与沉淀
如果能除去其水化膜并中和其电荷，则蛋白质可从溶液中沉淀出来。单独使用脱水剂（如乙醇、丙酮、硫酸钠等）破坏其水化膜或调整pH使其达到蛋白质的等电点，消除其电荷，都不能使蛋白质立即沉淀。只有两者合用，才能有效地沉淀蛋白质。常用的沉淀试剂有中性盐、有机溶剂、某些沉淀生物碱的试剂、重分子酸类及重金属盐类。
蛋白质有可逆变性 变性并未破坏一级结构，因此在蛋白质变性开始不久，构象变化较小时，去除变性剂后，又可恢复其一定变性
（4）重金属盐：蛋白质在碱性溶液中（pH＞pI）带负电荷，能与带正电荷的重金属离子如汞、铅、铜、银等结合生成不溶性沉淀。此种沉淀蛋白质都已变性。临床上常用口服大量牛乳并用催吐剂抢救误服重金属中毒的病人
2. 蛋白质的变性
蛋白质的变性 在某些物理或化学因素作用下，使蛋白质的空间构象破坏（但不包括肽链的断裂等一级结构的变化），导致蛋白质若干理化性质（如溶解度、粘度、吸收光谱、电泳行为等）和生物学性质（如催化活性、免疫学特性等）的改变，这种现象称为蛋白质的变性。
（1）盐析： 高浓度中性盐沉淀水溶液中的蛋白质，称为盐析。
（2）有机溶剂沉淀：乙醇和丙酮等有机溶剂在蛋白质溶液处于等电点时加入，能破坏蛋白质颗粒的水化膜使蛋白质沉淀，但沉淀过程必须保持低温，否则会引起蛋白质变性。
（3）沉淀生物碱的试剂：蛋白质在酸性溶液中（pH＜pI）带正电荷，能与沉淀生物碱的试剂（苦味酸、鞣酸、钨酸等）及三氯乙酸、磺基水杨酸、浓硝酸等酸根部分作用而析出沉淀。此种析出的蛋白质多已变性。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告
实验目的，通过对蛋白质的沉淀反应进行实验，掌握蛋白质的沉淀方法和技巧，了解蛋白质的性质和特点。
实验原理，蛋白质的沉淀反应是利用蛋白质与醋酸和酒精混合后在酸性条件下
沉淀出来的特性进行实验。
醋酸和酒精可以使蛋白质变性并沉淀出来，酸性条件有利于蛋白质的沉淀。
实验步骤：
1. 取少量蛋白质溶液放入试管中；
2. 加入少量醋酸，并充分混合；
3. 加入适量酒精，再次充分混合；
4. 观察蛋白质的沉淀情况。
实验结果，经过以上步骤，观察到蛋白质在酸性条件下与醋酸和酒精混合后发
生了沉淀反应，沉淀物呈现白色。
实验分析，蛋白质的沉淀反应是由于醋酸和酒精的作用下，蛋白质发生变性并
沉淀出来。
酸性条件有利于蛋白质的沉淀，而酒精可以加速蛋白质的沉淀过程。
因此，通过本实验可以初步了解蛋白质的性质和特点。
实验结论，蛋白质的沉淀反应是一种常见的实验方法，通过本实验可以掌握蛋
白质的沉淀技巧，并了解蛋白质的性质和特点。
在实际应用中，蛋白质的沉淀反应可以用于蛋白质的提取和分离，具有一定的应用价值。
实验注意事项：
1. 实验操作要注意安全，避免醋酸和酒精的接触；
2. 实验过程中要注意观察蛋白质的沉淀情况，及时记录实验结果；
3. 实验结束后要及时清理实验器材，保持实验环境整洁。
通过本实验，我对蛋白质的沉淀反应有了更深入的了解，掌握了蛋白质的沉淀
方法和技巧，对蛋白质的性质和特点有了更清晰的认识。
希望通过今后的实验实践，能够进一步提高自己的实验技能，为科学研究和实际应用做出更多的贡献。
实验一 蛋白质的颜色反应和沉淀反应.DOC附图
实验一蛋白质的颜色反应和沉淀反应一、实验目的（1）掌握鉴定蛋白质的原理和方法（2）熟悉蛋白质的沉淀反应；进一步掌握蛋白质的有关性质二、实验原理（1）蛋白质颜色反应原理：蛋白质分子中的某些或某种基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，是一些常用蛋白质定量测定的依据；但颜色反应不是蛋白质的专一反应；1、米伦反应原理：米伦试剂是硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物。
他能与苯酚及某些二羟基苯衍生物起颜色反应。
组成蛋白质的氨基酸中只有酪氨酸含苯酚基团，因此该反应为蛋白质中酪氨酸存在的依据。
2、双缩脲反应原理：尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。
双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，故也能进行此反应。
双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。
3、黄色反应原理：蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等），于浓硝酸可反应并生成黄色物质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物硝醌酸等。
4、茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。
此反应为一切蛋白质及a-氨基酸所共有。
亚氨基酸（脯氨酸和羟脯氨酸）与茚三酮反应呈黄色，含有氨基的其他物质亦呈此反应。
（2）蛋白质沉淀反应原理：多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。
1、蛋白质的盐析作用原理：向蛋白质中加入大量的中性盐（硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等），使蛋白质胶体颗粒脱水，破坏其水化层，同时它所带有的电荷亦被中性盐上所带的相反电荷的离子所中和。
于是稳定因素被破坏，蛋白质聚集沉淀。
盐析作用一般不使蛋白质变性。
2、有机溶剂沉淀蛋白质原理：某些有机溶剂（如乙醇、甲醇、丙醇等），因引起蛋白质脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用，致使蛋白质颗粒容易凝聚而沉淀3、重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质原理：重金属离子（如Pb2+、Cu2+等）与蛋白质的羧基等结合生成不溶性的金属盐类而沉淀，同时蛋白质发生变性。
蛋白质的沉淀与变性实验报告
蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质是生物体内非常重要的一类有机化合物，它们在细胞的结构、功能和代谢中发挥着关键的作用。
为了研究蛋白质的性质和功能，科学家们经常进行各种实验。
本实验旨在探究蛋白质的沉淀与变性过程。
实验首先进行的是蛋白质的沉淀实验。
我们选取了鸡蛋清作为实验样品，因为鸡蛋清中含有丰富的蛋白质。
我们将鸡蛋清倒入试管中，并加入适量的乙醇。
乙醇可以与蛋白质发生相互作用，使其沉淀下来。
实验中我们使用了不同浓度的乙醇溶液，观察其对蛋白质沉淀的影响。
实验结果显示，随着乙醇浓度的增加，蛋白质的沉淀量逐渐增加。
这是因为乙醇能够与蛋白质中的水分子发生氢键作用，导致蛋白质分子间的相互作用力增强，从而使蛋白质变得不溶于水而沉淀下来。
当乙醇浓度达到一定程度时，蛋白质的沉淀量达到最大值，此后再增加乙醇浓度并不会引起更多的蛋白质沉淀。
这是因为乙醇的浓度过高会导致蛋白质分子间的相互作用力过强，使其聚集成大块而不是沉淀下来。
在进行蛋白质的变性实验时，我们选取了鸡蛋清中的卵清蛋白作为实验样品。
卵清蛋白是一种具有稳定的三维结构的蛋白质，通过变性处理可以使其失去原有的结构和功能。
我们采用了两种方法对卵清蛋白进行变性处理：热变性和酸变性。
首先进行的是热变性实验。
我们将卵清蛋白溶液加热至80摄氏度，并保持一段时间。
实验结果显示，随着加热时间的增加，卵清蛋白的结构逐渐破坏，失去了原有的透明度，变得浑浊。
这是因为高温可以破坏蛋白质分子内部的氢键、疏水作用力和范德华力等相互作用，使蛋白质分子失去稳定的三维结构。
接下来进行的是酸变性实验。
我们将卵清蛋白溶液加入适量的盐酸，使其呈酸性。
实验结果显示，随着酸性溶液的加入，卵清蛋白的结构发生了明显的改变，透明的溶液变得浑浊。
这是因为酸性条件下，蛋白质分子中的氨基酸残基带正电荷，导致蛋白质分子间的相互排斥增强，结构发生变化。
通过这两个实验，我们可以看到蛋白质在不同条件下的沉淀和变性过程。
蛋白质的沉淀与变性实验报告
蛋白质的沉淀与变性实验报告一、实验目的1、掌握蛋白质沉淀和变性的原理及方法。
2、观察蛋白质沉淀和变性的现象，区分二者的不同。
3、了解影响蛋白质沉淀和变性的因素。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物，其分子表面带有许多可解离的基团，如氨基、羧基等，在一定的溶液 pH 值条件下，这些基团会解离而使蛋白质带电。
此外，蛋白质分子还具有亲水基团，能够与水分子形成氢键，从而使其溶解于水溶液中。
当溶液的条件发生改变时，如加入某些试剂、改变溶液的 pH 值、温度等，蛋白质的性质会发生改变，可能会出现沉淀或变性的现象。
蛋白质沉淀是指蛋白质分子从溶液中析出的过程，其原因可能是由于蛋白质分子表面电荷被中和、水化膜被破坏等。
蛋白质沉淀后，如果去除引起沉淀的因素，蛋白质可以重新溶解，恢复其原有的性质。
蛋白质变性是指蛋白质在某些物理或化学因素的作用下，其空间结构被破坏，从而导致其生物活性丧失的现象。
蛋白质变性后，通常不能再恢复其原有的结构和功能。
三、实验材料与仪器1、材料鸡蛋清溶液牛奶饱和硫酸铵溶液乙醇硝酸银溶液硫酸铜溶液氢氧化钠溶液盐酸溶液乙酸铅溶液2、仪器试管滴管玻璃棒酒精灯恒温水浴锅四、实验步骤（一）蛋白质的沉淀实验1、盐析沉淀取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。
静置一段时间，观察沉淀现象。
2、有机溶剂沉淀取两支试管，分别加入 2ml 牛奶。
向其中一支试管中逐滴加入乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。
静置一段时间，观察沉淀现象。
3、重金属盐沉淀取三支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向第一支试管中滴加几滴硝酸银溶液，向第二支试管中滴加几滴硫酸铜溶液，向第三支试管中滴加几滴乙酸铅溶液。
观察沉淀现象。
4、生物碱试剂沉淀取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向其中一支试管中滴加几滴氢氧化钠溶液，向另一支试管中滴加几滴盐酸溶液。
观察沉淀现象。
实验一 蛋白质的沉淀与凝固
实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液是一稳定的亲水性胶体溶液。
其稳定的因素有二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥;不易凝集成团；二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融恰相依，又在胶粒之间起了隔离作用。
如果上述二种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。
一.蛋白质的盐析[原理]高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又是强电解质，可抑制蛋白质的解离。
因而用高浓度的中性盐，使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。
盐析沉淀蛋白质一般不引起蛋白质变性，故常用于分离各种天然蛋白质。
由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。
例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的硫酸铵则沉出清蛋白。
[操作]1.取一试管，加入3m15％蛋白质溶液及3m1饱和硫酸铵溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。
2.将试管内容物过滤，加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱和状态。
摇匀后观察现象。
(注意固体硫酸铵加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。
)3.取上项混浊液1m1，加水2ml，观察是否复溶。
二.乙醇沉淀蛋白质[原理]乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜，此外，加入乙醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。
故加入乙醇可使蛋白质沉淀。
用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及生物学活性，但于室温中操作则往往使蛋白质变性。
[操作]1.取试管4支，标以1、2、3、4号码，按下表操作2.将3管及4管置冰水浴中，放置5分钟，然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中并混匀，同时向第1及第2管中加入未冰浴的乙醇2ml混匀。
观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml，混匀(注意此步要求迅速)比较各管变化并解释之。
三.重金属盐、生物碱试剂沉淀蛋白质[原理]在溶液的PH值大于或小于蛋白质的等电点时，带负电荷或带正电荷的蛋白质可与Pb2+、Hg2+、Cu2+、Ag+等重金属离子或苦味酸、三氯醋酸、钨酸、磷钼酸等生物碱试剂(能使生物碱沉淀的试剂)结合成盐而沉淀析出。
实验一蛋白质变性凝固及沉淀(WT)
蛋白质的加热变性凝固
蛋白质分子受热作用，分子空间结构变化，疏 水基团暴露于分子表面，溶解度降低。
当蛋白质分子不带电荷（处于等电点条件下）， 则蛋白质发生聚集出现沉淀；
当蛋白质分子带电（处于非等电点条件下）， 则蛋白质因静电排斥作用而不出现沉淀；
精品课件
实验内容
取三只小玻璃试管，各加入10%蛋白质溶液 10d，分别标记为1、2和3号管；
实验内容
① 取一只小玻璃试管，加入1mL蛋白质溶液； ② 加入0.1mol/mL NaOH 2d，混匀； ③ 逐滴加入CuSO4，摇匀，直至出现沉淀为止。
精品课件
蛋白质沉淀反应
生物碱试剂沉淀蛋白质
在酸性条件下，蛋白质可与生物碱试剂(如苦味酸、 钨酸、鞣酸)以及某些酸(如三氯醋酸、过氯酸、硝 酸)结合成不溶性的盐沉淀，此时蛋白质带正电荷 易于与酸根负离子结合成盐。
变性实质：
高浓度尿素、盐酸胍等
破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、
分子量不变）。
精品课件
变性的可逆性
可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构可 以恢复原状。
不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构 不能恢复原状。
利用 避免
消灭病原微生物
蛋白质制剂的保存 保护体内蛋白质
精品课件
蛋白质的胶体性质及沉淀:
结构和性质都发生变化 沉淀不再溶解于水
精品课件
蛋白质的凝固
蛋白质变性沉淀并凝聚成块状称为凝固。 不可逆变性状态
精品课件
蛋白质变性、沉淀与凝固的关系
变性属于蛋白质本质的变化，沉淀和凝固属于 一种现象
变性不一定沉淀，变性蛋白质只在等电点附近 才沉淀
变性蛋白易于沉淀， 沉淀蛋白不一定变性 沉淀的变性蛋白质也不一定凝固
实验一 蛋白质的变性、凝固及沉淀反应
理是什么？
变性、沉淀与凝固的关系
变性：蛋白质特定的空间构象被破坏而导致其
理化性质的改变和生物活性的丧失。一定条件 下可复性。
沉淀：蛋白质颗粒失去电荷、脱水，以固态的
形式从溶液中析出。
凝固：
操作步骤
1.蛋白质热变性：
2. 蛋白质的盐析作用
0.3g
3、重金属离子沉淀蛋白质：
取试管一只，加入: 蛋白液1mL+0.1mol/L NaOH 2滴+CuSO4溶液， 随加随摇匀，至出现沉淀为止。
1.蛋白质胶体分子的稳定因素。
掌握:
1.蛋白质变性的原理。
重 点: 蛋白质两性反应和等电点。 难 点: 蛋白质沉淀反应的原理和意义。
蛋白质的理化性质
▪ 蛋白质的两性电离性质 ▪ 蛋白质的变性 ▪ 蛋白质的胶体性质 ▪ 蛋白质的紫外吸收特性 ▪ 蛋白质的呈色反应
蛋白质的两性解离：
pH < pI 阳离子
4、生物碱试剂沉淀蛋白质：
取试管一只，加入: 蛋白液1mL，滴加饱和苦味酸6滴，观察并 解释所见。
注意事项:
1. 严格操作，逐滴加入，边加边摇晃。 2. 酒精灯加热，务必正确操作，严防液体 喷出伤
人。 3. 苦味酸属危险试剂，注意安全。
思考题
▪ 请简述蛋白质热变性的基本原理，日常生活中你 观察到那些热变性现象。
属离子（Cu2+、Ag+、Hg2+等）结合形成不溶性蛋白 盐类而沉淀。
特点：重金属沉淀蛋白质的反应通常很完全，属于不可 逆的沉淀反应。 应用：生活中；科研分析；临床上
点豆腐：蛋白质（胶体）颗粒的沉淀。
生化实验绪论及蛋白质沉淀、变性反应1
• 必须存放的少量即将使用的易燃物，也应将它放在远离
火源处，火焰熄灭后才可大量倾倒这些液体。
• 低沸点的有机溶剂不准在火焰上直接加热，只能利用带
回流冷凝管的装置在水浴上加热或蒸馏。
7
实验室安全-- 防止火灾
2008.03.13 东南大学
2007.03.28 兰州理工大学
8
常见有机溶剂的易燃性
名称 乙醚 丙酮 二硫化碳 苯 乙醇 沸点/℃ 34.5 56 46 80 78 闪点/℃ －40 －17 －30 －11 12 自燃点/℃ 180 538 100 － 400
吸量管量取这些试剂(包括有毒物)时，必须使用橡
皮球，绝对不能用口吸取。
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实验室安全--预防生物危害
微生物、动物的组织、细胞培养物、血液和分泌物 都可能存在细菌和病毒感染的潜在危害，处理生物材 料必需小心谨慎，做完实验必须用肥皂、洗涤剂或消 毒液洗手。 被污染的物品，必须进行高压消毒或烧成灰烬。 被污染的玻璃用具应在清洗和高压消毒前立即浸泡在 适当的消毒液中。
由于蛋白质溶液具有水化层和双电层两方面的稳定因素，所以胶体 系统是相当稳定的。 在一定物理化学因素(如盐析、重金属离子、有机酸、无机酸和加热) 影响下,蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，以固态形式从溶液中析 出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应。这种反应可分为两种类型： 1、可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生显著变化，基本保持 原有的性质，沉淀因素除去后，能溶于原来的溶剂中。 2、不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏， 失去原来的天然性质。
如 定果 性条 ，件 稳 蛋发 定 白生 是 质改 相 就变 对 会， 的 从破 溶坏 ， 液了 有 中蛋 条 沉白 件 淀质 的 出溶 。 来液 。的 稳
实验一蛋白质的沉淀与变性、染料结合法测定蛋白质含量
实验一蛋白质的沉淀与变性、染料结合法测定蛋白质含量蛋白质的沉淀与变性一、目的要求1.学习和掌握蛋白质沉淀反应的原理和方法；2.进一步掌握蛋白质的有关性质；3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。
二、原理蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或者与某些试剂结合成不溶性盐类后，可以从溶液中沉淀析出。
此现象叫蛋白质的沉淀反应。
蛋白质的沉淀反应分为两类。
1.可逆沉淀反应：此时蛋白质分子的结构并未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性，如大多数蛋白质的盐析作用或在低用温下乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
这是制备酶、激素等蛋白类药物时常用的方法。
2.不可逆沉淀反应，蛋白质分子内部结构特别是空间结构遭到破坏，失去其天然蛋白质的性质，这种蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶剂中。
如重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱和加热等反应均属此类。
三、沉淀反应1.蛋白质的盐析作用（1）原理一般蛋白质在高浓度盐溶液中溶解度下降，因此，向其溶液中加入中性盐至一定浓度时，蛋白质即从溶液中沉淀析出，此现象称为盐析。
盐析作用与两种因素有关：①蛋白质分子被浓盐脱水；②分子所带电荷被中和。
用盐析方法沉淀蛋白质时，较少引起蛋白质变性，经透析或用水稀释时又可溶解，因此蛋白质的盐析作用是可逆过程。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH有关。
分子量大的蛋白质（如球蛋白）比分子量小的（如清蛋白）易于析出。
球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中即可析出，而清蛋白需在饱和硫酸铵溶液中才能析出。
（2）器材与试剂器材： 滴管 烧杯、滤纸、药匙、漏斗 玻棒。
试剂：○1蛋白质溶液:鸡蛋清。
○2饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100mL加硫酸铵至饱和。
○3硫酸铵结晶粉末。
（3）实验方法1)取鸡蛋清约5mL于一烧杯中，加等量(5mL)饱和硫酸铵溶液(此时硫酸铵浓度为50%饱和)，搅拌均匀，即有蛋白质析出，静置数分钟，用滤纸过滤，沉淀即为卵球蛋白。
蛋白质_实验报告
实验名称：蛋白质的性质与功能实验实验目的：1. 了解蛋白质的基本结构和组成。
2. 掌握蛋白质的性质和功能。
3. 学习蛋白质的提取和鉴定方法。
实验原理：蛋白质是生命活动的基础物质，由氨基酸通过肽键连接而成。
蛋白质具有多种性质和功能，如结构支持、催化反应、运输物质、信号传递等。
本实验通过观察蛋白质的沉淀、变性、凝胶化等性质，以及蛋白质的鉴定方法，来了解蛋白质的性质和功能。
实验材料：1. 鸡蛋清2. 硫酸铵3. 氯化钠4. 硫酸铜5. 茚三酮6. 硝酸7. 脱脂牛奶8. 试剂瓶9. 烧杯10. 试管11. 离心机12. 恒温水浴锅实验步骤：一、蛋白质的沉淀实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入硫酸铵，观察蛋白质的沉淀现象。
2. 将沉淀离心，观察沉淀物的变化。
3. 用氯化钠溶液处理沉淀物，观察蛋白质的溶解现象。
二、蛋白质的变性实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加热至沸腾，观察蛋白质的变性现象。
2. 将变性后的蛋白质溶液冷却，观察蛋白质的重新沉淀现象。
三、蛋白质的凝胶化实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入硫酸铜，观察蛋白质的凝胶化现象。
2. 将凝胶化后的蛋白质取出，观察其形状和质地。
四、蛋白质的鉴定实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入茚三酮，观察蛋白质的显色反应。
2. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入硝酸，观察蛋白质的显色反应。
3. 取一定量的脱脂牛奶，加入硫酸铜，观察酪蛋白的显色反应。
实验结果：一、蛋白质的沉淀实验1. 加入硫酸铵后，鸡蛋清溶液中出现白色沉淀。
2. 离心后，沉淀物变为白色絮状。
3. 加入氯化钠溶液后，沉淀物溶解。
二、蛋白质的变性实验1. 加热至沸腾后，鸡蛋清溶液中出现白色沉淀。
2. 冷却后，沉淀物重新溶解。
三、蛋白质的凝胶化实验1. 加入硫酸铜后，鸡蛋清溶液中出现凝胶状物质。
2. 凝胶质地柔软，可塑性好。
四、蛋白质的鉴定实验1. 加入茚三酮后，鸡蛋清溶液出现蓝色。
2. 加入硝酸后，鸡蛋清溶液出现橙黄色。
蛋白质的沉淀和变性实验
蛋白质的沉淀与变性反应目的(1)了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。
(2)学习盐析和透析等生物化学的操作技术。
原理在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应。
这种反应可分为以下两种类型:一、可逆淀汲反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应，又叫作不变性沉淀反应。
属于这一类的反应有盐析作用; 在低温下，乙醇、丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉淀等。
二、不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解于原来溶剂中的作用叫作不可逆沉淀反应。
重金属盐、植物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超声波，有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
试剂和器材一、试剂1．蛋白质溶液取5m1鸡蛋蛋白蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后用4-8层纱布过滤，新鲜配制。
2．蛋白质氯化钠溶液取20ml蛋清，加蒸馏水200ml和饱和氯化钠溶液100ml，充分搅匀后，以纱布滤去不溶物(加入氯化钠的目的是溶解球蛋白)。
硫酸铵粉末，饱和硫酸铵溶液，3%硝酸银，0.5% 醋酸铅，10% 三氯醋酸，浓盐酸，浓硫酸，浓硝酸，5% 磺基水杨酸(sulfosalicyclic acid)，0.1% 硫酸铜，饱和硫酸铜溶液，0.1% 醋酸，10% 醋酸，饱和氯化钠溶液，10%氢氧化钠溶液。
二、器材试管，试管架，小玻璃漏斗，滤纸，玻璃纸，玻璃棒，500ml烧杯，10 ml量筒。
实验一蛋白质的变性凝固及沉淀反应
实验一 蛋白质的变性、凝固及沉淀反应一、蛋白质的加热变性凝固( 一 )原理蛋白质受热作用后，其分子内部结构发生变化，常使疏水基暴露于表面，因而失去原有的亲水性质，成为溶解度很低的变性蛋白。
蛋白质在其等电点或等电点附近受热作用，则凝固而沉淀。
若在稀酸稀碱中加热，由于变性蛋白质带正电荷或负电荷，故不易析出，此时如调节到等电点或等电点附近则沉淀析出，称为结絮。
结絮的变性蛋白尚可溶于稀酸或稀碱中。
结絮蛋白继续加热，则成较大的块状凝固蛋白，此时即不再溶于稀酸或稀碱中。
( 二 )操作一、取试管 3 支分别加入10%蛋白液10滴 + pH4.8缓冲液10滴10% 蛋白液10滴 + H20 8滴 + 0.1mol/L HC1 2滴10% 蛋白液10滴 + H20 8滴 + 0.1mol/L NaOH 2滴将上述三管分别混匀，于酒精灯上加热煮沸，观察有何变化。
冷却后向①管加0.1mol/L HC1 2滴观察有何变化?为什么?向②管慢慢滴加0.05mol/L Na2C03边加边摇，直至呈现浓厚之絮状物为止。
天然蛋白质pH 值在等电点或等电点附近的溶液中酸性或碱性溶液中变性蛋白加热或加酒精加热或加酒精凝固蛋白调到等电点结絮蛋白加热向③管慢慢加O.1mol/L HAc直至出现浓厚之絮状为止。
将②③两管分别于酒精灯上煮沸，注意有无凝固现象。
冷却后再分别向②管滴加0.1mol/L HC1 2 滴，③管滴加0.1 mol/L NaOH 2滴，是否仍能溶解?为什么?二、蛋白质沉淀反应蛋白质由于水化层和电荷的存在，因此其水溶液具有亲水胶体的性质。
凡能破坏蛋白质水化层和电荷存在的因素，均可使蛋白质从溶液中沉淀出来，这种蛋白质由溶液中析出的现象称为蛋白质的沉淀反应。
大多数蛋白质经盐析反应或在低温下用乙醇或丙酮短时间作用使蛋白质沉淀后，除去上述因素，蛋白质又能溶于原来的溶液中，属于可逆的沉淀反应。
但用重金属盐类、生物碱试剂、加酸及加热引起的蛋白质沉淀反应，一般均属于不可逆沉淀反应。
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实验一蛋白质的沉淀及变性
发布时间：2010-12-23 浏览次数：850
一、实验目的
1．熟悉蛋白质的沉淀反应。
2．进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、实验原理
蛋白质因受某些物理或化学因素的影响，分子的空间构象被破坏，从而导致其理化性质发生改变并失去原有的生物学活性的现象称为蛋白质的变性作用。
变性作用并不引起蛋白质一级结构的破坏，而是二级结构以上的高级结构的破坏，变性后的蛋白质称为变性蛋白。
引起蛋白质变性的因素很多，物理因素有高温、紫外线、X-射线、超声波、高压、剧烈的搅拌、震荡等。
化学因素有强酸、强碱、尿素、胍盐、去污剂、重金属盐（如Hg2+、Ag+、Pb2+等）三氯乙酸，浓乙醇等。
不同蛋白质对各种因素的敏感程度不同。
用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。
蛋白质是亲水胶体，在高浓度的中性盐影响下脱去水化层，同时，蛋白质分子所带的电荷被中和，结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。
经透析或用水稀释时又可溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH 有关。
分子量大的蛋白质(如球蛋白)比分子量小的(如白蛋白)易于析出。
改变盐浓度，使不同分子量的蛋白质分别析出。
三、实验材料
1．新鲜蛋清或血清，蛋白质溶液。
2．固体硫酸铵及饱和硫酸铵溶液。
3．95％乙醇，1％CuSO4，饱和苦味酸，0.1mol/LHAC，NaCl,
4．试管，三角漏斗、玻棒，滤纸，试管架酒精灯，移液管。
四、操作方法
1．卵清蛋白的分离
(1)、取卵清约2 ml于试管中，加等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀，蛋白质析出，静置，用滤纸过滤致滤液澄清，沉淀为卵球蛋白，将此沉淀用2 ml半饱和硫酸铵洗涤一次。
(2)、将析出卵清球蛋白后的滤液放人试管中，再加人固体硫酸铵使之达饱和，观察有无沉淀产生，若有沉淀，则过滤之，滤出的沉淀却为卵清白蛋白。
2．乙醇沉淀蛋白质（乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质的水化层而使其沉淀析出）。
取蛋白质滤液1ml，加晶体NaCl少许（加速沉淀并使沉淀完全）。
带溶解后再加入95％乙醇2ml混匀，观察有无沉淀析出。
3．重金属盐沉淀蛋白质。
蛋白质与重金属离子结合成不容性盐类而沉淀。
取试管1支加蛋白质溶液2ml，滴加1％CuSO4溶液，至有沉淀生成。
4．生物碱试剂沉淀蛋白质。
植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物称为生物碱。
能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱试剂，如苦味酸。
生物碱试剂能和蛋白质结合生成沉淀，可能因蛋白质和生物碱含有相似的含氮基团。
2ml蛋白质溶液及1％醋酸溶液4－5滴，加5％苦味酸数滴。