蛋白质的沉淀及变性实验

3．某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液1mL，加入5% 三氯乙酸溶液3-5滴，振荡试管，观察沉淀的 生成。放置片刻，向沉淀中加入1mL的水， 观察沉淀是否溶解。
4. 有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液1mL，再加入 1mL 95%乙醇。混匀，观察沉淀的生成。 放置片刻，向沉淀中加入1mL的水，观察 沉淀是否溶解。
二
原理
• 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成
水化层和同性电荷而成为稳定的亲水胶
体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋
白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质胶体稳定的因素
• 水化膜 • 颗粒表面电荷
水化膜 + + + + + + +
带正电荷的蛋白质
酸
碱
－ －
－
－ －
－－ －
在等电点的蛋白质
带负电荷的蛋白质
• 取10ml离心管一支，加入5%卵清蛋白溶液 2.0mL，加2.0mL的饱和硫酸铵溶液，观察 是否有沉淀产生？ • 4000rpm离心5分钟，丢弃上清，在沉淀中 加入2.0mL的清水，观察沉淀是否溶解。
2. 重金属盐沉淀蛋白质
取1支试管，加入蛋白质溶液1mL，再加入 3%硝酸银溶液2滴。振荡试管，有沉淀产 生。放置片刻，向沉淀中加入1mL的水，沉 淀是否溶解？为什么？
5. 乙醇wk.baidu.com起的变性及沉淀：
试剂 1 5%卵清蛋白溶液 pH 4.7缓冲液 0.1 mol/L NaOH 0.1 mol/L盐酸 1.0 1.0 1.0 管号 2 1.0 3 1.0
1.0
观察实验现象
95%乙醇
1.0
1.0
1.0
观察现象。向第1管内加水8mL；向第2、3号管 中各加1滴甲基红，再分别用0.1 mol/L醋酸溶液 及0.05 mol/L碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色 的变化和沉淀的生成。
蛋白质的沉淀及变性
一 目的
1 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识； 2 了解沉淀蛋白质的几种方法； 3 了解蛋白质变性与沉淀的关系。
• 蛋白质的沉淀
分散在溶液中的蛋白质分子发生凝聚，并从溶液 中沉淀、析出的现象
• 蛋白质的变性
在某些因素作用下，蛋白质的空间结构受到破坏 ，生物学活性丧失，理化性质发生改变
蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的
蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的 反应都属于此类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在 (如电荷)，并不析出。如强酸，强碱。 因此变性蛋白质并不一定部表现为沉淀，而沉淀的蛋白质 也未必都已变性。
三 操作
1. 盐析
四、结果处理
如实记录结果，并作出合理解释
The
end
+ + + + + + +
+ +
+
+
+
+ +
• 可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变 化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原 来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或丙酮)短
时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。
不可逆沉淀反应：此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，