蛋白质的沉淀及变性实验
蛋白质沉淀反应实验
蛋白质沉淀反应实验集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-蛋白质的沉淀反应一、目的和要求1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识2、掌握几种沉淀蛋白质的方法3、了解蛋白质变性与沉淀的关系二、沉淀反应（一）原理在水溶液中，蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用，所以成为稳定的胶体颗粒。
但这种稳定的状态是有条件的。
在某些理化因素的作用下，蛋白质分子表面带电性质发生变化、脱水甚至变性，则会以固态形式从溶液中析出，这个过程就称为蛋白质的沉淀反应。
蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型：1、可逆沉淀反应沉淀反应发生后，蛋白质分子内部结构并没有发生大的或者显着变化。
在沉淀因素去除后，又可恢复其亲水性，这种沉淀反应就是可逆沉淀反应，也叫做不变性沉淀反应。
属于这类沉淀反应的有盐析作用、等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂沉淀法等。
2、不可逆沉淀反应蛋白质在沉淀的同时，其空间结构发生大的改变，许多副键发生断裂，即使除去沉淀因素，蛋白质也不会恢复其亲水性，并丧失生物活性，这种沉淀反应就是不可逆沉淀反应。
重金属盐、生物碱试剂、强酸、强碱、加热、强烈震荡、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
（二）盐析1、材料与试剂（1）10%的卵清蛋白溶液（要求新鲜配制）、浓蛋白溶液（2）饱和硫酸铵溶液（3）固体硫酸铵（4）滤纸、玻棒2、操作方法（1）取试管一支，加入浓蛋白溶液2ml，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置10分钟将出现沉淀。
此沉淀物为球蛋白。
（2）取上清液于另一支试管。
（3）向上清液液中加入硫酸铵粉末，边加边用玻棒搅拌，直至粉末不再溶解为止。
静置数分钟后，沉淀析出的是清蛋白。
（4）向两支试管中分别加水，观察其沉淀是否溶解。
（三）重金属盐沉淀重金属离子如Pb2+、Cu2+、Hg2+、Ag2+等可与蛋白质分子上的羟基结合生成不溶性金属盐而沉淀：重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全，特别是在碱金属盐类存在时。
实验一蛋白质变性凝固及沉淀(WT)
蛋白质的变性、凝固及沉淀
生物化学与分子生物学教研室
精品课件
实验目的
能够说出蛋白质变性、凝固反应的原理及实验方法 能够说出蛋白质沉淀反应的原理及实验方法 能够运用盐析法及重金属沉淀法
精品课件
主要实验内容
蛋白质的加热变性凝固 蛋白质沉淀反应
蛋白质盐析 重金属盐沉淀蛋白质 生物碱试剂沉淀蛋白质
变性实质：
高浓度尿素、盐酸胍等
破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、
分子量不变）。
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变性的可逆性
可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构可 以恢复原状。
不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构 不能恢复原状。
利的保存 保护体内蛋白质
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蛋白质的胶体性质及沉淀:
不同蛋白质盐析时所需的盐浓度不同，可以通过 不同浓度盐溶液分离不同蛋白质，就是分段盐析。
大部分蛋白质都可用饱和(NH4)2SO4溶液盐析出来。 某些蛋白质在半饱和(NH4)2SO4溶液中析出。 盐析是一个可逆沉淀反应。
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实验内容
① 取一只小玻璃试管，加入2mL蛋白质溶液；
② 加入等体积饱和(NH4)2SO4溶液，混匀后静置3min。
观察现象（
）
③ 对该溶液进行过滤，将滤液收集于一只干净试管中， 取部分转入另一只试管中；
④ 向一只试管中加入结晶(NH4)2SO4粉末，直到粉末不 再溶解（成为饱和(NH4)2SO4溶液）；
⑤ 比较两只试管现象（
）
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蛋白质沉淀反应
重金属盐沉淀蛋白质
在碱性条件下，重金属离子与蛋白质结合成不溶 性蛋白盐而沉淀。
1. 向1号管中加入：pH4.8缓冲液10d 。混匀，于酒精灯
生化实验蛋白质的变性凝固及沉淀反应性质
注意事项
逐滴加入，仔细观察 酒精灯使用前注意酒精量的多少，加热时试管
口不可对人，不用时熄灭 酒精灯加热时，要进行晃动,避免局部高温,引起
试管炸裂 用过的枪头、滤纸放于污物缸 苦味酸属危险试剂 用过的试管仔细清洗
老年痴呆者脑血管中产生大量难溶性蛋白的诱因
蛋白质变性、沉淀和凝固可在细胞、组织的哪 些生命过程中出现？试举例与哪些疾病（或病 变）的发生相关？
验证关于蛋白质的相关理论 学会分析蛋白质的基本实验方法 讨论蛋白质分析在科研和临床工作中的意义
在某些物理和化学因素作用下，蛋白质 理化性质的改变和生物学活性的丧失。
引起蛋白质变性的理化因素
加热 乙醇等有机溶剂 强酸、强碱 重金属盐 生物碱试剂
学习蛋白质变性的意义
消灭病原微生物
蛋白质制剂的保存 保护体内蛋白质
结构和性质都发生变化
沉淀不再溶解于水
变性蛋白易于沉淀 沉淀蛋白不一定变性
接近于等电点附近的蛋白质溶液加热， 可使蛋白质发生凝固
不可逆变性状态
加热醋酸法 水/无机盐/尿素 水/无机盐/尿素/蛋白质 蛋白质变性凝固
变性、沉淀、凝固之间关系
变性属于蛋白质本质的变化，沉淀和凝固属于 一种现象
变性不一定沉淀，变性蛋白质只在等电点附近才沉 淀，沉淀的变性蛋白质也不一定凝固
变性的可逆性 可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构
可以恢复原状。 不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构 不能恢复原状。
一般轻度变性是可逆，过度变性是不可逆。
颗粒表面水化膜 胶粒表面同种电荷
疏水领域
破坏蛋白质的水化层和 电荷，使蛋白质从溶液 中ห้องสมุดไป่ตู้出的现象
蛋白质沉淀是一种现象
结构和性质都不变 适当条件下可重新溶解 是分离和纯化的基本方法
实验一 蛋白质的沉淀及变性
实验一蛋白质的沉淀及变性发布时间：2010-12-23 浏览次数：850一、实验目的1．熟悉蛋白质的沉淀反应。
2．进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、实验原理蛋白质因受某些物理或化学因素的影响，分子的空间构象被破坏，从而导致其理化性质发生改变并失去原有的生物学活性的现象称为蛋白质的变性作用。
变性作用并不引起蛋白质一级结构的破坏，而是二级结构以上的高级结构的破坏，变性后的蛋白质称为变性蛋白。
引起蛋白质变性的因素很多，物理因素有高温、紫外线、X-射线、超声波、高压、剧烈的搅拌、震荡等。
化学因素有强酸、强碱、尿素、胍盐、去污剂、重金属盐（如Hg2+、Ag+、Pb2+等）三氯乙酸，浓乙醇等。
不同蛋白质对各种因素的敏感程度不同。
用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。
蛋白质是亲水胶体，在高浓度的中性盐影响下脱去水化层，同时，蛋白质分子所带的电荷被中和，结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。
经透析或用水稀释时又可溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH 有关。
分子量大的蛋白质(如球蛋白)比分子量小的(如白蛋白)易于析出。
改变盐浓度，使不同分子量的蛋白质分别析出。
三、实验材料1．新鲜蛋清或血清，蛋白质溶液。
2．固体硫酸铵及饱和硫酸铵溶液。
3．95％乙醇，1％CuSO4，饱和苦味酸，0.1mol/LHAC，NaCl,4．试管，三角漏斗、玻棒，滤纸，试管架酒精灯，移液管。
四、操作方法1．卵清蛋白的分离(1)、取卵清约2 ml于试管中，加等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀，蛋白质析出，静置，用滤纸过滤致滤液澄清，沉淀为卵球蛋白，将此沉淀用2 ml半饱和硫酸铵洗涤一次。
(2)、将析出卵清球蛋白后的滤液放人试管中，再加人固体硫酸铵使之达饱和，观察有无沉淀产生，若有沉淀，则过滤之，滤出的沉淀却为卵清白蛋白。
2．乙醇沉淀蛋白质（乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质的水化层而使其沉淀析出）。
蛋白的沉淀实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质的沉淀原理及其应用；2. 掌握常用蛋白质沉淀方法，如盐析、酸沉、有机溶剂沉淀等；3. 学习蛋白质沉淀实验的操作步骤及注意事项。
二、实验原理蛋白质在溶液中处于溶解状态，当受到某些物理或化学因素的影响时，其溶解度会降低，从而导致蛋白质从溶液中析出。
这种现象称为蛋白质的沉淀。
蛋白质沉淀的方法有很多种，常见的有盐析、酸沉、有机溶剂沉淀等。
盐析：在一定浓度的盐溶液中，蛋白质的溶解度降低，从而使蛋白质从溶液中析出。
盐析过程中，盐的浓度越高，蛋白质的沉淀效果越好。
酸沉：在酸性条件下，蛋白质的溶解度降低，从而使蛋白质从溶液中析出。
酸沉过程中，pH值越低，蛋白质的沉淀效果越好。
有机溶剂沉淀：有机溶剂能破坏蛋白质的氢键、疏水作用等，使蛋白质的溶解度降低，从而使其从溶液中析出。
有机溶剂沉淀过程中，溶剂的浓度越高，蛋白质的沉淀效果越好。
三、实验材料1. 蛋白质溶液：牛血清白蛋白（BSA）溶液；2. 盐析试剂：饱和硫酸铵溶液；3. 酸沉试剂：0.1mol/L HCl溶液；4. 有机溶剂沉淀试剂：无水乙醇；5. 实验器材：试管、移液管、量筒、磁力搅拌器、离心机等。
四、实验步骤1. 取5支试管，分别编号为1-5；2. 在1-5号试管中分别加入2ml牛血清白蛋白溶液；3. 在1号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，充分振荡后静置观察；4. 在2号试管中加入2滴0.1mol/L HCl溶液，充分振荡后静置观察；5. 在3号试管中加入1ml无水乙醇，充分振荡后静置观察；6. 在4号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，再加入2滴0.1mol/L HCl溶液，充分振荡后静置观察；7. 在5号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，再加入1ml无水乙醇，充分振荡后静置观察；8. 将所有试管在室温下静置30分钟；9. 观察各试管中蛋白质的沉淀情况，记录实验结果；10. 将沉淀后的溶液进行离心，取上清液进行分析。
五、实验结果与分析1. 盐析：在1号试管中加入饱和硫酸铵溶液后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；2. 酸沉：在2号试管中加入HCl溶液后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；3. 有机溶剂沉淀：在3号试管中加入无水乙醇后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；4. 盐析+酸沉：在4号试管中加入饱和硫酸铵溶液和HCl溶液后，蛋白质的沉淀效果更好；5. 盐析+有机溶剂沉淀：在5号试管中加入饱和硫酸铵溶液和无水乙醇后，蛋白质的沉淀效果更好。
蛋白质加热沉淀实训报告
一、实验目的1. 了解蛋白质加热沉淀的原理和过程；2. 掌握蛋白质加热沉淀实验的操作方法；3. 分析实验结果，加深对蛋白质加热沉淀现象的理解。
二、实验原理蛋白质加热沉淀是一种常见的蛋白质分离方法，其原理是利用蛋白质在高温下的不稳定性，使其发生变性并沉淀下来。
蛋白质在加热过程中，其空间结构被破坏，分子内部结构松散，导致蛋白质颗粒失去水膜，进而引起分子间相互碰撞而聚集沉淀。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：蛋白质溶液、1%醋酸溶液、10%醋酸溶液、10%氢氧化钠溶液、饱和氯化钠溶液、蒸馏水；2. 实验仪器：试管、移液管、酒精灯、沸水浴装置、磁力搅拌器、电子天平。
四、实验步骤1. 准备实验材料，分别配制蛋白质溶液、1%醋酸溶液、10%醋酸溶液、10%氢氧化钠溶液、饱和氯化钠溶液；2. 取4支试管，分别编号为1、2、3、4；3. 在试管1中加入1.0ml蛋白质溶液，滴加1滴1%醋酸溶液；4. 在试管2中加入1.0ml蛋白质溶液，滴加10滴10%醋酸溶液；5. 在试管3中加入1.0ml蛋白质溶液，滴加10滴10%氢氧化钠溶液；6. 在试管4中加入1.0ml蛋白质溶液，滴加10滴蒸馏水；7. 混匀各试管溶液，观察溶液状态；8. 将各试管放入沸水浴中加热10分钟；9. 观察各试管溶液在加热过程中的变化，记录沉淀现象；10. 取出试管，冷却至室温，观察沉淀情况。
五、实验结果与分析1. 实验结果：试管1：溶液中出现白色沉淀；试管2：溶液中出现大量白色沉淀；试管3：溶液中出现白色沉淀；试管4：溶液中无明显变化。
2. 实验分析：试管1和3中溶液出现白色沉淀，说明在加热条件下，蛋白质发生变性并沉淀。
试管1中滴加1滴1%醋酸溶液，使溶液接近于蛋白质等电点，导致蛋白质不稳定，加热后容易沉淀。
试管3中滴加10滴10%氢氧化钠溶液，使溶液呈碱性，蛋白质在碱性条件下加热后也容易沉淀。
试管2中滴加10滴10%醋酸溶液，溶液呈酸性，蛋白质在酸性条件下加热后也容易沉淀。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告
实验目的，通过对蛋白质的沉淀反应进行实验，掌握蛋白质的沉淀方法和技巧，了解蛋白质的性质和特点。
实验原理，蛋白质的沉淀反应是利用蛋白质与醋酸和酒精混合后在酸性条件下
沉淀出来的特性进行实验。
醋酸和酒精可以使蛋白质变性并沉淀出来，酸性条件有利于蛋白质的沉淀。
实验步骤：
1. 取少量蛋白质溶液放入试管中；
2. 加入少量醋酸，并充分混合；
3. 加入适量酒精，再次充分混合；
4. 观察蛋白质的沉淀情况。
实验结果，经过以上步骤，观察到蛋白质在酸性条件下与醋酸和酒精混合后发
生了沉淀反应，沉淀物呈现白色。
实验分析，蛋白质的沉淀反应是由于醋酸和酒精的作用下，蛋白质发生变性并
沉淀出来。
酸性条件有利于蛋白质的沉淀，而酒精可以加速蛋白质的沉淀过程。
因此，通过本实验可以初步了解蛋白质的性质和特点。
实验结论，蛋白质的沉淀反应是一种常见的实验方法，通过本实验可以掌握蛋
白质的沉淀技巧，并了解蛋白质的性质和特点。
在实际应用中，蛋白质的沉淀反应可以用于蛋白质的提取和分离，具有一定的应用价值。
实验注意事项：
1. 实验操作要注意安全，避免醋酸和酒精的接触；
2. 实验过程中要注意观察蛋白质的沉淀情况，及时记录实验结果；
3. 实验结束后要及时清理实验器材，保持实验环境整洁。
通过本实验，我对蛋白质的沉淀反应有了更深入的了解，掌握了蛋白质的沉淀
方法和技巧，对蛋白质的性质和特点有了更清晰的认识。
希望通过今后的实验实践，能够进一步提高自己的实验技能，为科学研究和实际应用做出更多的贡献。
蛋白质的沉淀与变性实验报告
蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质是生物体内非常重要的一类有机化合物，它们在细胞的结构、功能和代谢中发挥着关键的作用。
为了研究蛋白质的性质和功能，科学家们经常进行各种实验。
本实验旨在探究蛋白质的沉淀与变性过程。
实验首先进行的是蛋白质的沉淀实验。
我们选取了鸡蛋清作为实验样品，因为鸡蛋清中含有丰富的蛋白质。
我们将鸡蛋清倒入试管中，并加入适量的乙醇。
乙醇可以与蛋白质发生相互作用，使其沉淀下来。
实验中我们使用了不同浓度的乙醇溶液，观察其对蛋白质沉淀的影响。
实验结果显示，随着乙醇浓度的增加，蛋白质的沉淀量逐渐增加。
这是因为乙醇能够与蛋白质中的水分子发生氢键作用，导致蛋白质分子间的相互作用力增强，从而使蛋白质变得不溶于水而沉淀下来。
当乙醇浓度达到一定程度时，蛋白质的沉淀量达到最大值，此后再增加乙醇浓度并不会引起更多的蛋白质沉淀。
这是因为乙醇的浓度过高会导致蛋白质分子间的相互作用力过强，使其聚集成大块而不是沉淀下来。
在进行蛋白质的变性实验时，我们选取了鸡蛋清中的卵清蛋白作为实验样品。
卵清蛋白是一种具有稳定的三维结构的蛋白质，通过变性处理可以使其失去原有的结构和功能。
我们采用了两种方法对卵清蛋白进行变性处理：热变性和酸变性。
首先进行的是热变性实验。
我们将卵清蛋白溶液加热至80摄氏度，并保持一段时间。
实验结果显示，随着加热时间的增加，卵清蛋白的结构逐渐破坏，失去了原有的透明度，变得浑浊。
这是因为高温可以破坏蛋白质分子内部的氢键、疏水作用力和范德华力等相互作用，使蛋白质分子失去稳定的三维结构。
接下来进行的是酸变性实验。
我们将卵清蛋白溶液加入适量的盐酸，使其呈酸性。
实验结果显示，随着酸性溶液的加入，卵清蛋白的结构发生了明显的改变，透明的溶液变得浑浊。
这是因为酸性条件下，蛋白质分子中的氨基酸残基带正电荷，导致蛋白质分子间的相互排斥增强，结构发生变化。
通过这两个实验，我们可以看到蛋白质在不同条件下的沉淀和变性过程。
蛋白质的沉淀与变性实验报告
蛋白质的沉淀与变性实验报告一、实验目的1、掌握蛋白质沉淀和变性的原理及方法。
2、观察蛋白质沉淀和变性的现象，区分二者的不同。
3、了解影响蛋白质沉淀和变性的因素。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物，其分子表面带有许多可解离的基团，如氨基、羧基等，在一定的溶液 pH 值条件下，这些基团会解离而使蛋白质带电。
此外，蛋白质分子还具有亲水基团，能够与水分子形成氢键，从而使其溶解于水溶液中。
当溶液的条件发生改变时，如加入某些试剂、改变溶液的 pH 值、温度等，蛋白质的性质会发生改变，可能会出现沉淀或变性的现象。
蛋白质沉淀是指蛋白质分子从溶液中析出的过程，其原因可能是由于蛋白质分子表面电荷被中和、水化膜被破坏等。
蛋白质沉淀后，如果去除引起沉淀的因素，蛋白质可以重新溶解，恢复其原有的性质。
蛋白质变性是指蛋白质在某些物理或化学因素的作用下，其空间结构被破坏，从而导致其生物活性丧失的现象。
蛋白质变性后，通常不能再恢复其原有的结构和功能。
三、实验材料与仪器1、材料鸡蛋清溶液牛奶饱和硫酸铵溶液乙醇硝酸银溶液硫酸铜溶液氢氧化钠溶液盐酸溶液乙酸铅溶液2、仪器试管滴管玻璃棒酒精灯恒温水浴锅四、实验步骤（一）蛋白质的沉淀实验1、盐析沉淀取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。
静置一段时间，观察沉淀现象。
2、有机溶剂沉淀取两支试管，分别加入 2ml 牛奶。
向其中一支试管中逐滴加入乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。
静置一段时间，观察沉淀现象。
3、重金属盐沉淀取三支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向第一支试管中滴加几滴硝酸银溶液，向第二支试管中滴加几滴硫酸铜溶液，向第三支试管中滴加几滴乙酸铅溶液。
观察沉淀现象。
4、生物碱试剂沉淀取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向其中一支试管中滴加几滴氢氧化钠溶液，向另一支试管中滴加几滴盐酸溶液。
观察沉淀现象。
蛋白质沉淀条件实验报告
一、实验目的1. 掌握蛋白质沉淀的基本原理和实验方法。
2. 了解不同沉淀剂对蛋白质沉淀效果的影响。
3. 探究蛋白质沉淀的最佳条件。
二、实验原理蛋白质在特定条件下，如pH、温度、离子强度等，会发生沉淀现象。
蛋白质沉淀的原理主要有以下几种：1. 盐析：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。
2. 等电点沉淀：蛋白质在等电点时溶解度最低，此时加入少量电解质即可使蛋白质沉淀。
3. 重金属盐沉淀：重金属离子与蛋白质中的巯基、羧基等官能团结合，使蛋白质变性沉淀。
4. 酶促反应：某些酶可以催化蛋白质变性，使其沉淀。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、硫酸铵、氯化钠、硝酸银、氢氧化钠、盐酸、氢氧化铵、蒸馏水等。
2. 实验仪器：离心机、烧杯、玻璃棒、移液器、pH计、电子天平等。
四、实验方法1. 盐析实验：将鸡蛋清溶液与不同浓度的硫酸铵溶液混合，观察蛋白质沉淀现象。
2. 等电点沉淀实验：将鸡蛋清溶液调至不同pH值，观察蛋白质沉淀现象。
3. 重金属盐沉淀实验：将鸡蛋清溶液与不同浓度的硝酸银溶液混合，观察蛋白质沉淀现象。
4. 酶促反应实验：将鸡蛋清溶液与不同浓度的氢氧化钠溶液混合，观察蛋白质沉淀现象。
五、实验结果与分析1. 盐析实验：随着硫酸铵浓度的升高，蛋白质沉淀现象逐渐明显。
当硫酸铵浓度达到0.8 mol/L时，蛋白质基本完全沉淀。
2. 等电点沉淀实验：当鸡蛋清溶液的pH值为4.7时，蛋白质沉淀现象最为明显。
3. 重金属盐沉淀实验：随着硝酸银浓度的升高，蛋白质沉淀现象逐渐明显。
当硝酸银浓度达到0.1 mol/L时，蛋白质基本完全沉淀。
4. 酶促反应实验：随着氢氧化钠浓度的升高，蛋白质沉淀现象逐渐明显。
当氢氧化钠浓度达到0.5 mol/L时，蛋白质基本完全沉淀。
六、实验结论1. 盐析是蛋白质沉淀的有效方法，随着盐浓度的升高，蛋白质沉淀效果逐渐增强。
实验一蛋白质变性凝固及沉淀(WT)
蛋白质的加热变性凝固
蛋白质分子受热作用，分子空间结构变化，疏 水基团暴露于分子表面，溶解度降低。
当蛋白质分子不带电荷（处于等电点条件下）， 则蛋白质发生聚集出现沉淀；
当蛋白质分子带电（处于非等电点条件下）， 则蛋白质因静电排斥作用而不出现沉淀；
精品课件
实验内容
取三只小玻璃试管，各加入10%蛋白质溶液 10d，分别标记为1、2和3号管；
实验内容
① 取一只小玻璃试管，加入1mL蛋白质溶液； ② 加入0.1mol/mL NaOH 2d，混匀； ③ 逐滴加入CuSO4，摇匀，直至出现沉淀为止。
精品课件
蛋白质沉淀反应
生物碱试剂沉淀蛋白质
在酸性条件下，蛋白质可与生物碱试剂(如苦味酸、 钨酸、鞣酸)以及某些酸(如三氯醋酸、过氯酸、硝 酸)结合成不溶性的盐沉淀，此时蛋白质带正电荷 易于与酸根负离子结合成盐。
变性实质：
高浓度尿素、盐酸胍等
破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、
分子量不变）。
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变性的可逆性
可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构可 以恢复原状。
不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构 不能恢复原状。
利用 避免
消灭病原微生物
蛋白质制剂的保存 保护体内蛋白质
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蛋白质的胶体性质及沉淀:
结构和性质都发生变化 沉淀不再溶解于水
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蛋白质的凝固
蛋白质变性沉淀并凝聚成块状称为凝固。 不可逆变性状态
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蛋白质变性、沉淀与凝固的关系
变性属于蛋白质本质的变化，沉淀和凝固属于 一种现象
变性不一定沉淀，变性蛋白质只在等电点附近 才沉淀
变性蛋白易于沉淀， 沉淀蛋白不一定变性 沉淀的变性蛋白质也不一定凝固
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告一、实验目的1、掌握几种常用的使蛋白质沉淀的方法。
2、理解蛋白质沉淀的原理和应用。
二、实验原理蛋白质是一种大分子化合物，在溶液中以胶体状态存在。
当溶液条件发生改变时，蛋白质的胶体稳定性被破坏，从而发生沉淀。
常见的使蛋白质沉淀的方法有以下几种：1、盐析法：在蛋白质溶液中加入大量中性盐（如硫酸铵、氯化钠等），破坏蛋白质的水化膜和电荷，使其溶解度降低而沉淀。
2、有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂（如乙醇、丙酮等），降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子间的静电引力，导致蛋白质沉淀。
3、重金属盐沉淀法：重金属离子（如汞离子、铅离子等）与蛋白质分子中的巯基等基团结合，使蛋白质变性沉淀。
4、生物碱试剂沉淀法：生物碱试剂（如苦味酸、鞣酸等）能与蛋白质分子中的碱性基团结合，生成不溶性盐而沉淀。
三、实验材料和仪器1、材料鸡蛋白溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清用蒸馏水稀释 10 倍。
10%硫酸铵溶液、饱和硫酸铵溶液、3%硝酸银溶液、01mol/L 硫酸铜溶液、5%三氯乙酸溶液、95%乙醇、1%醋酸铅溶液、10%氢氧化钠溶液、1%醋酸溶液、苦味酸饱和溶液、鞣酸饱和溶液。
2、仪器试管、试管架、滴管、玻璃棒、离心机。
四、实验步骤1、盐析法取两支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向其中一支试管中逐滴加入 10%硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。
观察沉淀的生成情况。
向另一支试管中加入 2mL 饱和硫酸铵溶液，振荡均匀。
静置一段时间后，观察沉淀现象。
2、有机溶剂沉淀法取两支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向其中一支试管中逐滴加入 95%乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。
观察沉淀的生成情况。
向另一支试管中加入 2mL 丙酮，振荡均匀。
静置一段时间后，观察沉淀现象。
3、重金属盐沉淀法取三支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向第一支试管中滴加 3%硝酸银溶液 2~3 滴，振荡均匀，观察沉淀的生成情况。
实验一蛋白质的沉淀与变性、染料结合法测定蛋白质含量
实验一蛋白质的沉淀与变性、染料结合法测定蛋白质含量蛋白质的沉淀与变性一、目的要求1.学习和掌握蛋白质沉淀反应的原理和方法；2.进一步掌握蛋白质的有关性质；3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。
二、原理蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或者与某些试剂结合成不溶性盐类后，可以从溶液中沉淀析出。
此现象叫蛋白质的沉淀反应。
蛋白质的沉淀反应分为两类。
1.可逆沉淀反应：此时蛋白质分子的结构并未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性，如大多数蛋白质的盐析作用或在低用温下乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
这是制备酶、激素等蛋白类药物时常用的方法。
2.不可逆沉淀反应，蛋白质分子内部结构特别是空间结构遭到破坏，失去其天然蛋白质的性质，这种蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶剂中。
如重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱和加热等反应均属此类。
三、沉淀反应1.蛋白质的盐析作用（1）原理一般蛋白质在高浓度盐溶液中溶解度下降，因此，向其溶液中加入中性盐至一定浓度时，蛋白质即从溶液中沉淀析出，此现象称为盐析。
盐析作用与两种因素有关：①蛋白质分子被浓盐脱水；②分子所带电荷被中和。
用盐析方法沉淀蛋白质时，较少引起蛋白质变性，经透析或用水稀释时又可溶解，因此蛋白质的盐析作用是可逆过程。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH有关。
分子量大的蛋白质（如球蛋白）比分子量小的（如清蛋白）易于析出。
球蛋白在半饱和硫酸铵溶液中即可析出，而清蛋白需在饱和硫酸铵溶液中才能析出。
（2）器材与试剂器材： 滴管 烧杯、滤纸、药匙、漏斗 玻棒。
试剂：○1蛋白质溶液:鸡蛋清。
○2饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100mL加硫酸铵至饱和。
○3硫酸铵结晶粉末。
（3）实验方法1)取鸡蛋清约5mL于一烧杯中，加等量(5mL)饱和硫酸铵溶液(此时硫酸铵浓度为50%饱和)，搅拌均匀，即有蛋白质析出，静置数分钟，用滤纸过滤，沉淀即为卵球蛋白。
蛋白质_实验报告
实验名称：蛋白质的性质与功能实验实验目的：1. 了解蛋白质的基本结构和组成。
2. 掌握蛋白质的性质和功能。
3. 学习蛋白质的提取和鉴定方法。
实验原理：蛋白质是生命活动的基础物质，由氨基酸通过肽键连接而成。
蛋白质具有多种性质和功能，如结构支持、催化反应、运输物质、信号传递等。
本实验通过观察蛋白质的沉淀、变性、凝胶化等性质，以及蛋白质的鉴定方法，来了解蛋白质的性质和功能。
实验材料：1. 鸡蛋清2. 硫酸铵3. 氯化钠4. 硫酸铜5. 茚三酮6. 硝酸7. 脱脂牛奶8. 试剂瓶9. 烧杯10. 试管11. 离心机12. 恒温水浴锅实验步骤：一、蛋白质的沉淀实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入硫酸铵，观察蛋白质的沉淀现象。
2. 将沉淀离心，观察沉淀物的变化。
3. 用氯化钠溶液处理沉淀物，观察蛋白质的溶解现象。
二、蛋白质的变性实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加热至沸腾，观察蛋白质的变性现象。
2. 将变性后的蛋白质溶液冷却，观察蛋白质的重新沉淀现象。
三、蛋白质的凝胶化实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入硫酸铜，观察蛋白质的凝胶化现象。
2. 将凝胶化后的蛋白质取出，观察其形状和质地。
四、蛋白质的鉴定实验1. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入茚三酮，观察蛋白质的显色反应。
2. 取一定量的鸡蛋清溶液，加入硝酸，观察蛋白质的显色反应。
3. 取一定量的脱脂牛奶，加入硫酸铜，观察酪蛋白的显色反应。
实验结果：一、蛋白质的沉淀实验1. 加入硫酸铵后，鸡蛋清溶液中出现白色沉淀。
2. 离心后，沉淀物变为白色絮状。
3. 加入氯化钠溶液后，沉淀物溶解。
二、蛋白质的变性实验1. 加热至沸腾后，鸡蛋清溶液中出现白色沉淀。
2. 冷却后，沉淀物重新溶解。
三、蛋白质的凝胶化实验1. 加入硫酸铜后，鸡蛋清溶液中出现凝胶状物质。
2. 凝胶质地柔软，可塑性好。
四、蛋白质的鉴定实验1. 加入茚三酮后，鸡蛋清溶液出现蓝色。
2. 加入硝酸后，鸡蛋清溶液出现橙黄色。
蛋白质的沉淀和变性实验
蛋白质的沉淀与变性反应目的(1)了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。
(2)学习盐析和透析等生物化学的操作技术。
原理在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应。
这种反应可分为以下两种类型:一、可逆淀汲反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应，又叫作不变性沉淀反应。
属于这一类的反应有盐析作用; 在低温下，乙醇、丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉淀等。
二、不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解于原来溶剂中的作用叫作不可逆沉淀反应。
重金属盐、植物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超声波，有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
试剂和器材一、试剂1．蛋白质溶液取5m1鸡蛋蛋白蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后用4-8层纱布过滤，新鲜配制。
2．蛋白质氯化钠溶液取20ml蛋清，加蒸馏水200ml和饱和氯化钠溶液100ml，充分搅匀后，以纱布滤去不溶物(加入氯化钠的目的是溶解球蛋白)。
硫酸铵粉末，饱和硫酸铵溶液，3%硝酸银，0.5% 醋酸铅，10% 三氯醋酸，浓盐酸，浓硫酸，浓硝酸，5% 磺基水杨酸(sulfosalicyclic acid)，0.1% 硫酸铜，饱和硫酸铜溶液，0.1% 醋酸，10% 醋酸，饱和氯化钠溶液，10%氢氧化钠溶液。
二、器材试管，试管架，小玻璃漏斗，滤纸，玻璃纸，玻璃棒，500ml烧杯，10 ml量筒。
蛋白质的沉淀和变性实验.
实验五蛋白质的沉淀和变性实验一、实验目的1.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。
二、实验原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
1.可逆的沉淀反应。
此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解在原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
2.不可逆沉淀反应。
此时蛋白质分子内部结构发生大改变，蛋白质常因变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
如加热引起的蛋白质沉淀于凝固，蛋白质于重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类反应。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷）并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
三、实验材料、器材与试剂1. 材料鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1：9）。
2. 器材（1）试管及试管架；（2）吸量管；（3）滴灌；（4）小烧杯；（5）容量瓶。
3. 试剂（1）3%硝酸银溶液；（2）5%三氯乙酸溶液（3）95%乙醇；（4）饱和硫酸铵溶液；（5）硫酸铵结晶粉末。
四、实验方法1.蛋白质的盐析中性无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。
盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。
如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。
由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析是可逆的过程。
加蛋清溶液5mL于试管中，再加入等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。
倒出少量浑浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。
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二
原理
• 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成
水化层和同性电荷而成为稳定的亲水胶
体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋
白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质胶体稳定的因素
• 水化膜 • 颗粒表面电荷
水化膜 + + + + + + +
带正电荷的蛋白质
酸
碱
－ －
－
－ －
－－ －
在等电点的蛋白质
带负电荷的蛋白质
四、结果处理
如实记录结果，并作出合理解释
The
end
蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的
蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重金属离子或某些有机酸的 反应都属于此类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在 (如电荷)，并不析出。如强酸，强碱。 因此变性蛋白质并不一定部表现为沉淀，而沉淀的蛋白质 也未必都已变性。
三 操作
1. 盐析
蛋白质的沉淀及变性
一 目的
1 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识； 2 了解沉淀蛋白质的几种方法； 3 了解蛋白质变性与沉淀的关系。
• 蛋白质的沉淀
分散在溶液中的蛋白质分子发生凝聚，并从溶液 中沉淀、析出的现象
•Байду номын сангаас蛋白质的变性
在某些因素作用下，蛋白质的空间结构受到破坏 ，生物学活性丧失，理化性质发生改变
• 取10ml离心管一支，加入5%卵清蛋白溶液 2.0mL，加2.0mL的饱和硫酸铵溶液，观察 是否有沉淀产生？ • 4000rpm离心5分钟，丢弃上清，在沉淀中 加入2.0mL的清水，观察沉淀是否溶解。
2. 重金属盐沉淀蛋白质
取1支试管，加入蛋白质溶液1mL，再加入 3%硝酸银溶液2滴。振荡试管，有沉淀产 生。放置片刻，向沉淀中加入1mL的水，沉 淀是否溶解？为什么？
5. 乙醇引起的变性及沉淀：
试剂 1 5%卵清蛋白溶液 pH 4.7缓冲液 0.1 mol/L NaOH 0.1 mol/L盐酸 1.0 1.0 1.0 管号 2 1.0 3 1.0
1.0
观察实验现象
95%乙醇
1.0
1.0
1.0
观察现象。向第1管内加水8mL；向第2、3号管 中各加1滴甲基红，再分别用0.1 mol/L醋酸溶液 及0.05 mol/L碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色 的变化和沉淀的生成。
3．某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液1mL，加入5% 三氯乙酸溶液3-5滴，振荡试管，观察沉淀的 生成。放置片刻，向沉淀中加入1mL的水， 观察沉淀是否溶解。
4. 有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液1mL，再加入 1mL 95%乙醇。混匀，观察沉淀的生成。 放置片刻，向沉淀中加入1mL的水，观察 沉淀是否溶解。
+ + + + + + +
+ +
+
+
+
+ +
• 可逆的沉淀反应：此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变 化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原 来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或丙酮)短
时间作用于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。
不可逆沉淀反应：此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，