实验二、蛋白质沉淀、变性反应ppt课件
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少量蒸馏水
试管 3
①1mL蛋白质溶液 ②3-4滴1%硫酸铜 ③过量的硫酸铜
观察有无蛋 弃 去 上清 液 ，取 出 观察沉淀 白质的沉淀 部 分 蛋白 沉 淀 ， 加 的再溶解
少量蒸馏水
4. 蛋白质的不可逆反应——有机酸（2支试管）
试管 操作
现象
操作
现象
试 管 ①1mL蛋白质溶 观 察 有 无 蛋 白 弃 去 上 清 液 ， 观察沉淀的再溶
(NH4)2S04、Na2S04、 Na3P04、NaCl、MgS04
乙醇、丙酮、甲醇
常用此法来分离和 纯化蛋白质。
低温乙醇提取血液 中的蛋白质组分
强酸、强 破坏蛋白质分子结构发 盐酸, 硫酸, 硝酸、氢
碱沉淀
生蛋白质变性
氧化钠
灭活病毒
加热
变性
鸡蛋、肉类等加工
重金属盐 沉淀
变性；生成不溶性盐
Ag+，Hg2+，Cu2+和 Pb2+
四、实验操作
1. 蛋白质的可逆反应——盐析
步骤
现象
取试管1，加入3mL蛋白质氯化钠 溶液和等量的饱和硫酸铵溶液， 混匀，静置10分钟
倒出上清液于试管2，取试管1中 沉淀，加少量蒸馏水
观察有无蛋白质（球蛋 白）的沉淀
观察沉淀的再溶解
往试管2中，加入硫酸铵粉末，边 加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不 再溶解，直至饱和
临床上常用蛋清或 牛乳解救误服重金
属盐的病人
有机酸沉 淀
生成不溶性盐
苦味酸、鞣酸、三氯醋 酸、磺基水杨酸等生物
碱试剂
沉淀蛋白滤液等
蛋白质沉淀分类 （1）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生显著变化，基本保持原有 的性质，沉淀因素除去后，能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短 时作用，可用于蛋白质提纯。
1. 试剂 • 蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至200ml，搅拌后用2-3层纱布过
滤，新鲜配制。加入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。 • 试剂：饱和硫酸铵溶液，硫酸铵粉，95%乙醇，2%硝酸银，0.5%乙酸铅，1%硫
酸铜，10%三氯乙酸溶液，5%磺基水杨酸。
2. 仪器 漏斗,滤纸,吸管,试管及试管架,量筒、离心机等。
一、实验目的
1、了解使蛋白质胶体溶液稳定的因素。 2、了解蛋白质的可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应。 3、掌握蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及
它们的相互关系。
二、实验原理
维持蛋白质胶体溶液稳定的因素：
水化膜 同种电荷 同种蛋白质表面 带有相同电荷
外面的亲水基团结合一层 水，形成水化膜
使蛋白质沉淀的原理 破坏水化膜
1
液
质的沉淀
取出部分蛋白沉 解
② 3 滴 10% 三 氯
淀，加少量蒸馏
乙酸溶液
水
试 管 ①1mL蛋白质溶 观 察 有 无 蛋 白 弃去上清液，取 观察沉淀的再溶
2
液
质的沉淀
出部分蛋白沉淀，解
②3滴5%磺基水
加少量蒸馏水
杨酸
五、结果与分析 ✓ 列出表格，记录相应的实验现象并对实验现象进行分析！
六、实验结论
观察有无沉淀（清蛋白） 析出
静置，弃去上清液，取出部分清 蛋白沉淀，加少量蒸馏水
观察沉淀的再溶解
解释结论
2. 蛋白质的可逆反应——乙醇
步骤
现象
取试管1，加入1mL蛋白质氯化钠 溶液和21mL95%乙醇
观察有无蛋白质的沉淀
静置，弃去上清液，取出部分蛋 白沉淀，加少量蒸馏水
观察沉淀的再溶解
解释结论
3. 蛋白质的不可逆反应——重金属盐（3支试管）
中和电荷
聚集体的直径＞100nm即为不 稳定的粗分散系
使蛋白质沉淀的方法
（1）盐析 （2）有机试剂 （3）重金属盐 （4）有机酸 （5）加热
…………
蛋白质沉淀变性的常见方法
常用方法
原理
常用试剂
实用
盐析
破坏蛋白质胶体溶液的 水化层和电荷层
脱水作用；降低水的介 有机试剂
电常数和蛋白质溶解度； 盐析
蛋白质析出
试管 试管 1
操作
①1mL蛋白质溶液 ②3-4滴2%硝酸银溶液 ③过量的硝酸银
试管 2
①1mL蛋白质溶液 ②1-3滴0.5%乙酸铅 ③过量的乙酸铅
现象
操作
现象
观察有无蛋 弃去上清液，取出 观 察 沉 淀 白质的沉淀 部 分 蛋白 沉 淀 ， 加 的再溶解
少量蒸馏水
观察有无蛋 弃去上清液，取出 观 察 沉 淀 白质的沉淀 部 分 蛋白 沉 淀 ， 加 的再溶解
✓ 哪些反应使蛋白可逆沉淀？ ✓ 哪些反应使蛋白不可逆沉淀？
七、思考题
✓ 教材p199思考题？ ✓ 举例说明蛋白质变性和沉淀之间的关系？
（2）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去 原来的天然性质，不再溶于原溶剂。例如：加热、有机酸反应。
蛋白质分子 表面
水化膜 同种电荷
稳定的亲水胶 脱水，失去电荷
沉淀反应
可逆沉淀反应 （不变性沉淀反应）
如：盐析作用…
不可逆沉淀反应 （变性沉淀反应） 如：重金属盐沉淀作用…
三、实源自文库仪器和试剂
试管 3
①1mL蛋白质溶液 ②3-4滴1%硫酸铜 ③过量的硫酸铜
观察有无蛋 弃 去 上清 液 ，取 出 观察沉淀 白质的沉淀 部 分 蛋白 沉 淀 ， 加 的再溶解
少量蒸馏水
4. 蛋白质的不可逆反应——有机酸（2支试管）
试管 操作
现象
操作
现象
试 管 ①1mL蛋白质溶 观 察 有 无 蛋 白 弃 去 上 清 液 ， 观察沉淀的再溶
(NH4)2S04、Na2S04、 Na3P04、NaCl、MgS04
乙醇、丙酮、甲醇
常用此法来分离和 纯化蛋白质。
低温乙醇提取血液 中的蛋白质组分
强酸、强 破坏蛋白质分子结构发 盐酸, 硫酸, 硝酸、氢
碱沉淀
生蛋白质变性
氧化钠
灭活病毒
加热
变性
鸡蛋、肉类等加工
重金属盐 沉淀
变性；生成不溶性盐
Ag+，Hg2+，Cu2+和 Pb2+
四、实验操作
1. 蛋白质的可逆反应——盐析
步骤
现象
取试管1，加入3mL蛋白质氯化钠 溶液和等量的饱和硫酸铵溶液， 混匀，静置10分钟
倒出上清液于试管2，取试管1中 沉淀，加少量蒸馏水
观察有无蛋白质（球蛋 白）的沉淀
观察沉淀的再溶解
往试管2中，加入硫酸铵粉末，边 加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不 再溶解，直至饱和
临床上常用蛋清或 牛乳解救误服重金
属盐的病人
有机酸沉 淀
生成不溶性盐
苦味酸、鞣酸、三氯醋 酸、磺基水杨酸等生物
碱试剂
沉淀蛋白滤液等
蛋白质沉淀分类 （1）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生显著变化，基本保持原有 的性质，沉淀因素除去后，能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短 时作用，可用于蛋白质提纯。
1. 试剂 • 蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至200ml，搅拌后用2-3层纱布过
滤，新鲜配制。加入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。 • 试剂：饱和硫酸铵溶液，硫酸铵粉，95%乙醇，2%硝酸银，0.5%乙酸铅，1%硫
酸铜，10%三氯乙酸溶液，5%磺基水杨酸。
2. 仪器 漏斗,滤纸,吸管,试管及试管架,量筒、离心机等。
一、实验目的
1、了解使蛋白质胶体溶液稳定的因素。 2、了解蛋白质的可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应。 3、掌握蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及
它们的相互关系。
二、实验原理
维持蛋白质胶体溶液稳定的因素：
水化膜 同种电荷 同种蛋白质表面 带有相同电荷
外面的亲水基团结合一层 水，形成水化膜
使蛋白质沉淀的原理 破坏水化膜
1
液
质的沉淀
取出部分蛋白沉 解
② 3 滴 10% 三 氯
淀，加少量蒸馏
乙酸溶液
水
试 管 ①1mL蛋白质溶 观 察 有 无 蛋 白 弃去上清液，取 观察沉淀的再溶
2
液
质的沉淀
出部分蛋白沉淀，解
②3滴5%磺基水
加少量蒸馏水
杨酸
五、结果与分析 ✓ 列出表格，记录相应的实验现象并对实验现象进行分析！
六、实验结论
观察有无沉淀（清蛋白） 析出
静置，弃去上清液，取出部分清 蛋白沉淀，加少量蒸馏水
观察沉淀的再溶解
解释结论
2. 蛋白质的可逆反应——乙醇
步骤
现象
取试管1，加入1mL蛋白质氯化钠 溶液和21mL95%乙醇
观察有无蛋白质的沉淀
静置，弃去上清液，取出部分蛋 白沉淀，加少量蒸馏水
观察沉淀的再溶解
解释结论
3. 蛋白质的不可逆反应——重金属盐（3支试管）
中和电荷
聚集体的直径＞100nm即为不 稳定的粗分散系
使蛋白质沉淀的方法
（1）盐析 （2）有机试剂 （3）重金属盐 （4）有机酸 （5）加热
…………
蛋白质沉淀变性的常见方法
常用方法
原理
常用试剂
实用
盐析
破坏蛋白质胶体溶液的 水化层和电荷层
脱水作用；降低水的介 有机试剂
电常数和蛋白质溶解度； 盐析
蛋白质析出
试管 试管 1
操作
①1mL蛋白质溶液 ②3-4滴2%硝酸银溶液 ③过量的硝酸银
试管 2
①1mL蛋白质溶液 ②1-3滴0.5%乙酸铅 ③过量的乙酸铅
现象
操作
现象
观察有无蛋 弃去上清液，取出 观 察 沉 淀 白质的沉淀 部 分 蛋白 沉 淀 ， 加 的再溶解
少量蒸馏水
观察有无蛋 弃去上清液，取出 观 察 沉 淀 白质的沉淀 部 分 蛋白 沉 淀 ， 加 的再溶解
✓ 哪些反应使蛋白可逆沉淀？ ✓ 哪些反应使蛋白不可逆沉淀？
七、思考题
✓ 教材p199思考题？ ✓ 举例说明蛋白质变性和沉淀之间的关系？
（2）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去 原来的天然性质，不再溶于原溶剂。例如：加热、有机酸反应。
蛋白质分子 表面
水化膜 同种电荷
稳定的亲水胶 脱水，失去电荷
沉淀反应
可逆沉淀反应 （不变性沉淀反应）
如：盐析作用…
不可逆沉淀反应 （变性沉淀反应） 如：重金属盐沉淀作用…
三、实源自文库仪器和试剂