实验二、蛋白质沉淀、变性反应ppt课件
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实验五蛋白质的颜色反应和沉淀反应ppt课件
（四）生物碱试剂沉淀蛋白质
原理：植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物称为 生物碱。能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱 试剂，如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等。当溶液PH小于等电点时， 蛋白质颗粒带正电荷，容易与生物碱试剂发生反应生成不溶性 盐而沉淀。
（五）有机酸沉淀蛋白质
原理：当溶液PH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，容 易与某些有机酸如三氯乙酸和磺基水杨酸等的酸根负离子发生 反应生成不溶性盐而沉淀。这个反应可将生物体液中的蛋白质 完全清除。
加热变性引起蛋白质凝固沉淀的原理可能是由于热变性使蛋 白质天然结构解体，疏水基外露，因而破坏了水化层，同时由于 蛋白质处于等电点也破坏了带电状态。
实验注意事项
1. 实验中使用的试剂种类繁多，注意防止 所使用试剂的交叉污染。
2. 注意滴管的正确使用，防止酸、碱或有 机试剂污染滴头。
3. 在实验中，特别是酒精灯加热过程中要 注意操作规范，注意实验安全.双缩脲反 应时试管口对着墙。
4.除取蛋清液外，其他都用滴管取液,大致 估算体积.
5.实验报告中注意解释各种现象和讲义中提 出的问题。
思考题
• 请说出在上述蛋白质沉淀反应中，哪些为 可逆沉淀，哪些为不可逆沉淀？
注意事项：反应必 须在pH 5-7进行。
（五）乙醛酸反应
含色氨酸的蛋白质在浓硫酸中与一些醛类反应能形成 有色物质。此反应可作为色氨酸的定性定量反应。
实验步骤
１、在蛋白质溶液中加入 HCOCOOH，将浓硫酸沿管壁 缓慢加入，不使相混，在液 面交界处，即有紫色环形成 ２、色氨酸的反应（吲哚环 的反应） ３、鉴定蛋白质中是否含有 色氨酸
原理：酒精为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质点的水化层而 使其沉淀析出。
（三）重金属盐沉淀蛋白质
原理：植物体内具有显著生理作用的含氮碱性化合物称为 生物碱。能沉淀生物碱或与其产生颜色反应的物质称为生物碱 试剂，如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等。当溶液PH小于等电点时， 蛋白质颗粒带正电荷，容易与生物碱试剂发生反应生成不溶性 盐而沉淀。
（五）有机酸沉淀蛋白质
原理：当溶液PH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，容 易与某些有机酸如三氯乙酸和磺基水杨酸等的酸根负离子发生 反应生成不溶性盐而沉淀。这个反应可将生物体液中的蛋白质 完全清除。
加热变性引起蛋白质凝固沉淀的原理可能是由于热变性使蛋 白质天然结构解体，疏水基外露，因而破坏了水化层，同时由于 蛋白质处于等电点也破坏了带电状态。
实验注意事项
1. 实验中使用的试剂种类繁多，注意防止 所使用试剂的交叉污染。
2. 注意滴管的正确使用，防止酸、碱或有 机试剂污染滴头。
3. 在实验中，特别是酒精灯加热过程中要 注意操作规范，注意实验安全.双缩脲反 应时试管口对着墙。
4.除取蛋清液外，其他都用滴管取液,大致 估算体积.
5.实验报告中注意解释各种现象和讲义中提 出的问题。
思考题
• 请说出在上述蛋白质沉淀反应中，哪些为 可逆沉淀，哪些为不可逆沉淀？
注意事项：反应必 须在pH 5-7进行。
（五）乙醛酸反应
含色氨酸的蛋白质在浓硫酸中与一些醛类反应能形成 有色物质。此反应可作为色氨酸的定性定量反应。
实验步骤
１、在蛋白质溶液中加入 HCOCOOH，将浓硫酸沿管壁 缓慢加入，不使相混，在液 面交界处，即有紫色环形成 ２、色氨酸的反应（吲哚环 的反应） ３、鉴定蛋白质中是否含有 色氨酸
原理：酒精为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质点的水化层而 使其沉淀析出。
（三）重金属盐沉淀蛋白质
蛋白质的性质实验二-蛋白质的等电点测定和沉淀反应
蛋白质沉淀反应结果分析
要点一
蛋白质沉淀反应原理
当溶液的pH值低于或高于蛋白质的 等电点时，蛋白质带负电荷或正电荷 ，容易与其他带相反电荷的物质发生 静电吸引而产生沉淀。沉淀反应可用 于分离纯化和测定蛋白质含量。
要点二
实验结果
实验观察到在pH值低于或高于等电 点时，蛋白质出现沉淀现象。通过离 心分离和称重，测定了沉淀物中蛋白 质的质量和含量。实验结果表明，该 蛋白质在不同pH值下的沉淀效果显 著，可用于蛋白质的分离纯化和含量 测定。
实验试剂
盐酸、氢氧化钠、醋酸、醋酸钠、磷酸盐缓冲液等。
配置不同pH值的缓冲液
选择适当的缓冲液，如醋酸-醋酸钠缓 冲液、磷酸盐缓冲液等。
根据需要配置不同pH值的缓冲液，确 保缓冲液的准确性和稳定性。
蛋白质溶液的等电点测定
将蛋白质溶液与不同pH值的缓冲液混合，观察蛋白质的溶解度变化。
当蛋白质溶解度最低时，记录对应的pH值，即为该蛋白质的等电点。
了解蛋白质的沉淀反应及原理
沉淀反应
蛋白质在某些条件下，失去溶解性从 溶液中析出的现象。
原理
蛋白质的沉淀反应通常与溶液的pH值 、离子强度、温度等因素有关，当这 些因素发生变化时，蛋白质的溶解度 可能会降低，导致沉淀的产生。
02
实验原理
蛋白质等电点的概念及影响因素
蛋白质等电点
蛋白质分子在溶液中处于净电中性状态时的pH值，此时蛋白质的溶解度最低。
通过测定不同pH值下的蛋白质电导率，确定了蛋 白质的等电点。
在实验过程中，观察到了蛋白质的溶解度变化和 电荷性质的变化。
分析实验结果与理论预期的差异
实验结果与理论预期基本一致，没有出现明显的偏差。
实验结果支持了蛋白质等电点沉淀的理论，即当溶液pH值等于蛋白质等电点时，蛋白质溶解度最低， 容易发生沉淀。
蛋白质沉淀反应ppt课件
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6
（三）重金属盐类沉淀蛋白质
❖ 溶液pH在蛋白质等电点以上时，重金属盐类 (如 Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易与蛋白 质结合成不 溶性盐而沉淀。
❖ 重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全，故常 用重金 属盐除去液体中的蛋白质。但应注意， 在使用某些 重金属盐(如硫酸铜或醋酸铅)沉 淀蛋白质时，不可 过量，否则将引起沉淀再 溶解。此时的溶解为生成 憎水胶体的缘故。
❖ 溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀，其中以三氯醋酸 的作用最为灵敏而且特异。因此被用于蛋白质的首 选沉淀剂，只能沉淀蛋白质，不能沉淀其水解产物， 加热可除去。
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8
三、实验材料
❖ 实验材料： 鸡卵清蛋白液，吸管（1mlx4， 2mlx4，0.5mlx1， 5mlx2），试管 （1.5x15cmx14），水浴锅，滴管，电炉
❖ 实验试剂： 苯酚（0.5%），硫酸铜（1%）， 硫酸铵固体，95%乙 醇，NaCl，醋酸铅，鞣 酸，苦味酸，冰醋酸
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9
四、操作步骤
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10
五、问题与讨论
❖ 1、本次实验结果如何？ ❖ 2、蛋白质可逆沉淀和不可逆沉淀有什么区别？
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11
?蛋白质的变性与沉淀之间没有必然联系蛋白质沉淀反应蛋白质沉淀反应一蛋白质的盐析作用二乙醇沉淀蛋白质三重金属盐类沉淀蛋白质四生物碱试剂沉淀蛋白质蛋白质沉淀反应一蛋白质的盐析作用?加盐类如硫酸铵硫酸钠氯化钠等可以破坏蛋白质胶体周围的水膜同时又中和了蛋白质分子的电荷因此使蛋白质产生沉淀这种加盐使蛋白质沉淀析出的现象称盐析
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实验二蛋白质沉淀变性反应 ppt课件
的病人
有机酸沉 淀
生成不溶性盐
苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、 磺基水杨酸等生物碱试剂
沉淀蛋白滤液等
蛋白质沉淀分类
（1）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生 显著变化，基本保持原有的性质，沉淀因素除去后， 能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短时作 用，可用于蛋白质提纯。 （2）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空 间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，不再溶于 原溶剂。例如：加热、有机酸反应。
步骤
现象
取试管1，加入1mL蛋白质氯化 观察有无蛋白质的沉
钠溶液和21mL95%乙醇
淀
静置，弃去上清液，取出部分 蛋白沉淀，加少量蒸馏水
观察沉淀的再溶解
解释结论
3. 蛋白质的不可逆反应——重金属盐（3支试管）
试管 操作
现象
操作
现象
试管 1 ①1mL蛋白质溶液
观 察 有 无 弃去上清液，取 观察沉淀
蛋白质分 子表面
水化膜 同种电荷
稳定的亲水胶 脱水，失去电荷
沉淀反应
可逆沉淀反应 （不变性沉淀反应）
如：盐析作用…
不可逆沉淀反应 （变性沉淀反应） 如：重金属盐沉淀作用…
三、实验仪器和试剂
1. 试剂
• 蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至 200ml，搅拌后用2-3层纱布过滤，新鲜配制。加 入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。
（1）盐析 （2）有机试剂 （3）重金属盐 （4）有机酸 （5）加热
…………
蛋白质沉淀变性的常见方法
常用方法 盐析
有机试剂 盐析
原理 破坏蛋白质胶体溶液的水化
层和电荷层 脱水作用；降低水的介电常 数和蛋白质溶解度；蛋白质
析出
有机酸沉 淀
生成不溶性盐
苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、 磺基水杨酸等生物碱试剂
沉淀蛋白滤液等
蛋白质沉淀分类
（1）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生 显著变化，基本保持原有的性质，沉淀因素除去后， 能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短时作 用，可用于蛋白质提纯。 （2）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空 间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，不再溶于 原溶剂。例如：加热、有机酸反应。
步骤
现象
取试管1，加入1mL蛋白质氯化 观察有无蛋白质的沉
钠溶液和21mL95%乙醇
淀
静置，弃去上清液，取出部分 蛋白沉淀，加少量蒸馏水
观察沉淀的再溶解
解释结论
3. 蛋白质的不可逆反应——重金属盐（3支试管）
试管 操作
现象
操作
现象
试管 1 ①1mL蛋白质溶液
观 察 有 无 弃去上清液，取 观察沉淀
蛋白质分 子表面
水化膜 同种电荷
稳定的亲水胶 脱水，失去电荷
沉淀反应
可逆沉淀反应 （不变性沉淀反应）
如：盐析作用…
不可逆沉淀反应 （变性沉淀反应） 如：重金属盐沉淀作用…
三、实验仪器和试剂
1. 试剂
• 蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至 200ml，搅拌后用2-3层纱布过滤，新鲜配制。加 入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。
（1）盐析 （2）有机试剂 （3）重金属盐 （4）有机酸 （5）加热
…………
蛋白质沉淀变性的常见方法
常用方法 盐析
有机试剂 盐析
原理 破坏蛋白质胶体溶液的水化
层和电荷层 脱水作用；降低水的介电常 数和蛋白质溶解度；蛋白质
析出
蛋白质的沉淀和变性实验
蛋白质的沉淀与变性反应目的(1)了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。
(2)学习盐析和透析等生物化学的操作技术。
原理在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
在一定的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应。
这种反应可分为以下两种类型:一、可逆淀汲反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于原来的溶剂中。
这种作用称为可逆沉淀反应，又叫作不变性沉淀反应。
属于这一类的反应有盐析作用; 在低温下，乙醇、丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉淀等。
二、不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。
这种变性蛋白质的沉淀不能再溶解于原来溶剂中的作用叫作不可逆沉淀反应。
重金属盐、植物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超声波，有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
试剂和器材一、试剂1．蛋白质溶液取5m1鸡蛋蛋白蛋清，用蒸馏水稀释至100ml，搅拌均匀后用4-8层纱布过滤，新鲜配制。
2．蛋白质氯化钠溶液取20ml蛋清，加蒸馏水200ml和饱和氯化钠溶液100ml，充分搅匀后，以纱布滤去不溶物(加入氯化钠的目的是溶解球蛋白)。
硫酸铵粉末，饱和硫酸铵溶液，3%硝酸银，0.5% 醋酸铅，10% 三氯醋酸，浓盐酸，浓硫酸，浓硝酸，5% 磺基水杨酸(sulfosalicyclic acid)，0.1% 硫酸铜，饱和硫酸铜溶液，0.1% 醋酸，10% 醋酸，饱和氯化钠溶液，10%氢氧化钠溶液。
二、器材试管，试管架，小玻璃漏斗，滤纸，玻璃纸，玻璃棒，500ml烧杯，10 ml量筒。
实验一蛋白质变性凝固及沉淀(WT)ppt课件
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3
蛋白质的变性 (denaturation)
在某些理化因素的作用下，蛋白质严格的空间结构 被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性质 和生物学性质改变的现象。
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4
变性后的蛋白质称变性蛋白,能使蛋白质变性 的物质叫蛋白质变性剂。
高温、高压
物理因素
紫外线、X射线、
变性因素
电离辐射和超声波等 强酸、强碱
在等电点的蛋白质 （亲水胶体）
脱水
脱水
++ +
+
+
+
+
+
带正电荷的蛋白质
（疏水胶体）
碱
酸
不稳定的蛋白质颗粒 （沉淀）
蛋白质胶精选体课颗件 粒的沉淀
-
-
-
-
-
-
-
-
带负电荷的蛋白质 （亲水胶体）
脱水
-
-
-
---
带负电荷的蛋白质
（疏水胶体）
8
蛋白质的沉淀
可逆沉淀
结构和性质都不变 适当条件下可重新溶解 是分离和纯化的基本方法
实验一
蛋白质的变性、凝固及沉淀
生物化学与分子生物学教研室
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1
实验目的
能够说出蛋白质变性、凝固反应的原理及实验方法 能够说出蛋白质沉淀反应的原理及实验方法 能够运用盐析法及重金属沉淀法
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2
主要实验内容
蛋白质的加热变性凝固 蛋白质沉淀反应
蛋白质盐析 重金属盐沉淀蛋白质 生物碱试剂沉淀蛋白质
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6
蛋白质的胶体性质及沉淀:
蛋白质分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗 粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体。
生化实验 绪论及蛋白质沉淀变性反应(共38张PPT)
步骤
现象
取一支试管，加入3mL蛋白质氯 化钠溶液和等量的饱和硫酸铵溶 液，混匀，静置10分钟
过滤后，向滤液中加入硫酸铵粉 末，边加边用玻璃棒搅拌，直至 粉末不再溶解，直至饱和
静置，弃去上清液，取出部分清 蛋白，加少量蒸馏水
观察有无蛋白质 （球蛋白）的沉淀
观察有无沉淀（清 蛋白）析出
观察沉淀的再溶解
解释结论
• 实验报告分为以下几局部：
• 原理
• 实验步骤 • 结果与讨论 • 问答 • 实验成绩的评定： • 实验报告
• 平时操作、表现
姓名，班级，学号，课 室，实验时间、
实验教师
实验内容及安排 ( 72学时 )
1、绪论、蛋白质沉淀、变性反响
9月26-27
2、蛋白质浓度测定—考马斯亮蓝法
10月10-11
3、 阳离子交换树脂层析别离氨基酸
生物化学实验室规那么〔1〕
1、遵守纪律，不得无故迟到、早退、大声谈笑。 2、预习，熟悉实验目的、原理、步骤。 3、严格听从教师的指导，及时记录实验原始数据。 4、实验场所整洁、公用试剂用后放回原位，实验完毕，清洗实
验器皿、收拾台面，方可离开。 5、注意节约试剂，防止损坏仪器。使用贵重仪器时，严格遵守操
作规程，发现故障，立即报告教师，不得擅自检修。
生物化学实验室规那么〔2〕
6、乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，远离火源操作及放置。 7、所有废液、废弃物等，均收集在指定容器内，不得倒在水槽内或
到处乱仍。强酸和强碱不能直接倒在水槽中，应先稀释，然后倒入 水槽，再用大量自来水冲洗水槽及下水道。 8、室内严禁吸烟！煤气、水管用完即关。
强碱：先用大量自来水冲洗，再用5%硼酸溶液或
的潜在危害，处理生物材料必需小心谨 1%硫酸铜，饱和硫酸铜溶液，0.
蛋白质的等电点测定与沉淀反应
❖ 由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再 溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
❖ 加5%卵清蛋白溶液5 ml于试管中，再加等量的饱和硫酸 铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少 量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管中 内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止， 此时析出的沉淀为清蛋白。
－
－
1
2 8.7 －0.3 －1来自3 8.0 －1.0 －
1
4 7.4 －
－ 1.6 1
最浑浊的一管的p可H编辑为ppt 酪蛋白的等电点。 7
六.等电点测定实验结果
几号管最混浊,溶液pH为?由于等电点 时蛋白质溶解度最小,所以酪蛋白的等电点 为?
可编辑ppt
8
Ⅱ．蛋白质的沉淀反应
一、目的： 1．加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2．了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3．了解蛋白质变性与沉淀的关系。
❖ 3．某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋 白质溶液2 ml，再加1 ml 5%三氯乙酸溶液，振荡
试管，观察沉淀的生成。放置片刻，倾出上清液， 向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。
❖ 4．有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入2 ml蛋
白质溶液，再加入2 ml 95%乙醇。混匀，观察沉
淀的生成。
❖ 取出部分清蛋白，加少量可蒸编馏辑p水pt ，观察沉淀的再溶解。 12
❖ 2．重金属离子沉淀蛋白质 重金属离子与蛋白质 结合成不溶于水的复合物。
❖ 取1支试管，加入蛋白质溶液2 ml，再加3%硝酸 银溶液1~2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片
刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀 是否溶解？为什么？
+ OH+ H+
❖ 加5%卵清蛋白溶液5 ml于试管中，再加等量的饱和硫酸 铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少 量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管中 内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止， 此时析出的沉淀为清蛋白。
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最浑浊的一管的p可H编辑为ppt 酪蛋白的等电点。 7
六.等电点测定实验结果
几号管最混浊,溶液pH为?由于等电点 时蛋白质溶解度最小,所以酪蛋白的等电点 为?
可编辑ppt
8
Ⅱ．蛋白质的沉淀反应
一、目的： 1．加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2．了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3．了解蛋白质变性与沉淀的关系。
❖ 3．某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋 白质溶液2 ml，再加1 ml 5%三氯乙酸溶液，振荡
试管，观察沉淀的生成。放置片刻，倾出上清液， 向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。
❖ 4．有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入2 ml蛋
白质溶液，再加入2 ml 95%乙醇。混匀，观察沉
淀的生成。
❖ 取出部分清蛋白，加少量可蒸编馏辑p水pt ，观察沉淀的再溶解。 12
❖ 2．重金属离子沉淀蛋白质 重金属离子与蛋白质 结合成不溶于水的复合物。
❖ 取1支试管，加入蛋白质溶液2 ml，再加3%硝酸 银溶液1~2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片
刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀 是否溶解？为什么？
+ OH+ H+
实验三蛋白质的性质实验(二)-沉淀反应
常用盐类
硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。
有机溶剂沉淀蛋白质
有机溶剂沉淀法
在蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂，使蛋白 质沉淀析出的方法。
有机溶剂的作用
降低水的介电常数，消除或减少电荷间的相互作 用，使蛋白质失去水化层而聚集沉淀。
常用有机溶剂
乙醇、丙酮、甲醇等。
重金属盐沉淀蛋白质
01
02
03
重金属盐沉淀法
淀。
操作步骤
在蛋白质溶液中加入适量的盐溶 液（如硫酸铵、氯化钠等），搅 拌均匀后静置，待蛋白质沉淀后
将上清液与沉淀分开。
结果分析
通过离心或过滤的方法收集沉淀， 测定沉淀的质量和蛋白质含量，
计算沉淀收率。
有机溶剂沉淀蛋白质
原理
有机溶剂能够降低水的介电常数， 使蛋白质分子间的静电荷作用减 弱，导致蛋白质凝聚成沉淀。
实验结果
在实验中，我们观察到加入有机溶剂后，蛋白质溶液逐渐浑浊，最 终形成白色沉淀。
结果分析
有机溶剂沉淀实验结果表明，有机溶剂能够有效降低蛋白质的溶解 度，促使其从溶液中沉淀出来。
重金属盐沉淀蛋白质结果分析
1 2
实验原理
重金属盐能够与蛋白质结合形成不溶于水的复合 物，从而降低蛋白质的溶解度，使其沉淀。
实验的应用与拓展
应用
本实验方法可用于初步分离和纯 化蛋白质，为后续蛋白质的结构 和功能研究提供基础。
拓展
本实验方法还可以应用于生物制 品、食品、药品等领域中的蛋白 质分离纯化，为相关产品的研发 和质量控制提供技术支持。
感谢您的观看
THANKS
操作步骤
在蛋白质溶液中加入适量的有机溶 剂（如甲醇、乙醇等），搅拌均匀 后静置，待蛋白质沉淀后将上清液 与沉淀分开。
硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。
有机溶剂沉淀蛋白质
有机溶剂沉淀法
在蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂，使蛋白 质沉淀析出的方法。
有机溶剂的作用
降低水的介电常数，消除或减少电荷间的相互作 用，使蛋白质失去水化层而聚集沉淀。
常用有机溶剂
乙醇、丙酮、甲醇等。
重金属盐沉淀蛋白质
01
02
03
重金属盐沉淀法
淀。
操作步骤
在蛋白质溶液中加入适量的盐溶 液（如硫酸铵、氯化钠等），搅 拌均匀后静置，待蛋白质沉淀后
将上清液与沉淀分开。
结果分析
通过离心或过滤的方法收集沉淀， 测定沉淀的质量和蛋白质含量，
计算沉淀收率。
有机溶剂沉淀蛋白质
原理
有机溶剂能够降低水的介电常数， 使蛋白质分子间的静电荷作用减 弱，导致蛋白质凝聚成沉淀。
实验结果
在实验中，我们观察到加入有机溶剂后，蛋白质溶液逐渐浑浊，最 终形成白色沉淀。
结果分析
有机溶剂沉淀实验结果表明，有机溶剂能够有效降低蛋白质的溶解 度，促使其从溶液中沉淀出来。
重金属盐沉淀蛋白质结果分析
1 2
实验原理
重金属盐能够与蛋白质结合形成不溶于水的复合 物，从而降低蛋白质的溶解度，使其沉淀。
实验的应用与拓展
应用
本实验方法可用于初步分离和纯 化蛋白质，为后续蛋白质的结构 和功能研究提供基础。
拓展
本实验方法还可以应用于生物制 品、食品、药品等领域中的蛋白 质分离纯化，为相关产品的研发 和质量控制提供技术支持。
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THANKS
操作步骤
在蛋白质溶液中加入适量的有机溶 剂（如甲醇、乙醇等），搅拌均匀 后静置，待蛋白质沉淀后将上清液 与沉淀分开。
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临床上常用蛋清或 牛乳解救误服重金
属盐的病人
有机酸沉 淀
生成不溶性盐
苦味酸、鞣酸、三氯醋 酸、磺基水杨酸等生物
碱试剂
沉淀蛋白滤液等
蛋白质沉淀分类 （1）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生显著变化，基本保持原有 的性质，沉淀因素除去后，能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短 时作用，可用于蛋白质提纯。
中和电荷
聚集体的直径＞100nm即为不 稳定的粗分散系
使蛋白质沉淀的方法
（1）盐析 （2）有机试剂 （3）重金属盐 （4）有机酸 （5）加热
…………
蛋白质沉淀变性的常见方法
常用方法
原理
常用试剂
实用
盐析
破坏蛋白质胶体溶液的 水化层和电荷层
脱水作用；降低水的介 有机试剂
电常数和蛋白质溶解度； 盐析
蛋白质析出
(NH4)2S04、Na2S04、 Na3P04、NaCl、MgS04
乙醇、丙酮、甲醇
常用此法来分离和 纯化蛋白质。
低温乙醇提取血液 中的蛋白质组分
强酸、强 破坏蛋白质分子结构发 盐酸, 硫酸, 硝酸、氢
碱沉淀
生蛋白质变性
氧化钠
灭活病毒
加热
变性
鸡蛋、肉类等加工
重金属盐 沉淀
变性；生成不溶性盐
Ag+，Hg2+，Cu2+和 Pb2+
一、实验目的
1、了解使蛋白质胶体溶液稳定的因素。 2、了解蛋白质的可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应。 3、掌握蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及
它们的相互关系。
二、实验原理
维持蛋白质胶体溶液稳定的因素：
水化膜 同种电荷 同种蛋白质表面 带有相同电荷
外面的亲水基团结合一层 水，形成水化膜
使蛋白质沉淀的原理 破坏水化膜
1
液
质的沉淀
取出部分蛋白沉 解
② 3 滴 10% 三 氯
淀，加少量蒸馏
乙酸溶液
水
试 管 ①1mL蛋白质溶 观 察 有 无 蛋 白 弃去上清液，取 观察沉淀的再溶
2
液
质的沉淀
出部分蛋白沉淀，解
②3滴5%磺基水
加少量蒸馏水
杨酸
五、结果与分析 ✓ 列出表格，记录相应的实验现象并对实验现象进行分析！
六、实验结论
✓ 哪些反应使蛋白可逆沉淀？ ✓ 哪些反应使蛋白不可逆沉淀？
七、思考题
✓ 教材p199思考题？ ✓ 举例说明蛋白质变性和沉淀之间的关系？
试管 试管 1
操作
①பைடு நூலகம்mL蛋白质溶液 ②3-4滴2%硝酸银溶液 ③过量的硝酸银
试管 2
①1mL蛋白质溶液 ②1-3滴0.5%乙酸铅 ③过量的乙酸铅
现象
操作
现象
观察有无蛋 弃去上清液，取出 观 察 沉 淀 白质的沉淀 部 分 蛋白 沉 淀 ， 加 的再溶解
少量蒸馏水
观察有无蛋 弃去上清液，取出 观 察 沉 淀 白质的沉淀 部 分 蛋白 沉 淀 ， 加 的再溶解
（2）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去 原来的天然性质，不再溶于原溶剂。例如：加热、有机酸反应。
蛋白质分子 表面
水化膜 同种电荷
稳定的亲水胶 脱水，失去电荷
沉淀反应
可逆沉淀反应 （不变性沉淀反应）
如：盐析作用…
不可逆沉淀反应 （变性沉淀反应） 如：重金属盐沉淀作用…
三、实验仪器和试剂
观察有无沉淀（清蛋白） 析出
静置，弃去上清液，取出部分清 蛋白沉淀，加少量蒸馏水
观察沉淀的再溶解
解释结论
2. 蛋白质的可逆反应——乙醇
步骤
现象
取试管1，加入1mL蛋白质氯化钠 溶液和21mL95%乙醇
观察有无蛋白质的沉淀
静置，弃去上清液，取出部分蛋 白沉淀，加少量蒸馏水
观察沉淀的再溶解
解释结论
3. 蛋白质的不可逆反应——重金属盐（3支试管）
四、实验操作
1. 蛋白质的可逆反应——盐析
步骤
现象
取试管1，加入3mL蛋白质氯化钠 溶液和等量的饱和硫酸铵溶液， 混匀，静置10分钟
倒出上清液于试管2，取试管1中 沉淀，加少量蒸馏水
观察有无蛋白质（球蛋 白）的沉淀
观察沉淀的再溶解
往试管2中，加入硫酸铵粉末，边 加边用玻璃棒搅拌，直至粉末不 再溶解，直至饱和
少量蒸馏水
试管 3
①1mL蛋白质溶液 ②3-4滴1%硫酸铜 ③过量的硫酸铜
观察有无蛋 弃 去 上清 液 ，取 出 观察沉淀 白质的沉淀 部 分 蛋白 沉 淀 ， 加 的再溶解
少量蒸馏水
4. 蛋白质的不可逆反应——有机酸（2支试管）
试管 操作
现象
操作
现象
试 管 ①1mL蛋白质溶 观 察 有 无 蛋 白 弃 去 上 清 液 ， 观察沉淀的再溶
1. 试剂 • 蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至200ml，搅拌后用2-3层纱布过
滤，新鲜配制。加入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。 • 试剂：饱和硫酸铵溶液，硫酸铵粉，95%乙醇，2%硝酸银，0.5%乙酸铅，1%硫
酸铜，10%三氯乙酸溶液，5%磺基水杨酸。
2. 仪器 漏斗,滤纸,吸管,试管及试管架,量筒、离心机等。