实验一蛋白质变性凝固及沉淀(WT)
蛋白质的沉淀与变性实验报告
蛋白质的沉淀与变性实验报告一、实验目的1、了解蛋白质沉淀和变性的概念及原理。
2、掌握几种使蛋白质沉淀和变性的方法。
3、观察蛋白质沉淀和变性的现象，比较其异同。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物，其分子表面带有许多可解离的基团，如氨基、羧基等，在一定的溶液 pH 条件下，这些基团会解离而使蛋白质带电。
此外，蛋白质分子还具有特定的空间结构，这是其生物活性的基础。
蛋白质的沉淀是指蛋白质从溶液中析出的现象。
蛋白质沉淀的方法有很多种，如盐析、有机溶剂沉淀、重金属盐沉淀等。
盐析是指在蛋白质溶液中加入大量中性盐，如硫酸铵、氯化钠等，使蛋白质的溶解度降低而析出。
有机溶剂沉淀是指在蛋白质溶液中加入能与水互溶的有机溶剂，如乙醇、丙酮等，降低蛋白质分子周围的水化层，从而使其沉淀。
重金属盐沉淀是指在蛋白质溶液中加入重金属离子，如汞离子、铅离子等，与蛋白质分子中的某些基团结合，导致蛋白质沉淀。
蛋白质的变性是指在某些物理或化学因素的作用下，蛋白质的空间结构被破坏，从而导致其生物活性丧失的现象。
引起蛋白质变性的因素有很多，如加热、强酸、强碱、有机溶剂、紫外线等。
变性后的蛋白质溶解度降低，容易发生沉淀，但沉淀的蛋白质不一定都是变性的。
三、实验材料与仪器1、实验材料鸡蛋清溶液牛奶饱和硫酸铵溶液乙醇硫酸铜溶液氢氧化钠溶液盐酸溶液2、实验仪器试管滴管酒精灯水浴锅四、实验步骤1、盐析沉淀蛋白质取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。
静置一段时间，观察沉淀现象。
2、有机溶剂沉淀蛋白质取两支试管，分别加入 2ml 牛奶。
向其中一支试管中逐滴加入乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。
静置一段时间，观察沉淀现象。
3、重金属盐沉淀蛋白质取两支试管，分别加入 2ml 鸡蛋清溶液。
向其中一支试管中滴加几滴硫酸铜溶液，观察沉淀现象。
4、加热变性蛋白质取一支试管，加入 2ml 鸡蛋清溶液。
最新实验一蛋白质的沉淀与凝固
实验一蛋白质的沉淀与凝固Ⅱ实验内容实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液是一稳定的亲水性溶胶液，其稳定的因素有二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥，不易凝集成团；二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融洽相依，又在胶粒之间起了隔离作用。
如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。
促使蛋白质沉淀的因素很多，大致可分为两类：第一类是可逆的沉淀反应。
这时蛋白质的空间构象未受到很大改变，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如盐析和低温乙醇沉淀蛋白。
第二类是不可逆的沉淀反应，重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于水中。
不可逆的蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。
变性的蛋白质在等电点附近加热时，蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实的凝块。
一、蛋白质的盐析[原理]高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又是强电解质，可抑制蛋白质的解离。
因而用高浓度的中性盐，使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。
盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性，故常用于分离各种天然蛋白质。
由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。
例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的硫酸铵则沉出清蛋白。
[操作]1.取一试管，加入3ml 5%蛋白质溶液及3ml饱和硫酸铵溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。
2.将试管内容物过滤，加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱和状态，摇匀后观察现象。
（注意固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。
）3.取上项浑浊液1ml，加水2ml，观察是否复容。
二. 乙醇沉淀蛋白质[原理]乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜；此外，加入乙醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。
故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀。
用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及其生物学活性，但室温中乙醇与蛋白质接触较久后，可使之变性，形成不可逆的沉淀。
[操作]1.取试管4支，标出1、2、3、4号码，按下表操作试剂 1 2 3 45%蛋白质溶液（ml） 1 1 1 -1%乙酸（滴）- 1-2 - -95%乙醇（ml）- - - 22.将3管及4管置冰水中，放置5分钟，然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中（此步最好在冰水中进行），混匀，同时向第1及第2管中各加入未冰浴的乙醇2ml 混匀，观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml，混匀，比较各管变化并解释之。
实验一 蛋白质的沉淀及变性
实验一蛋白质的沉淀及变性发布时间：2010-12-23 浏览次数：850一、实验目的1．熟悉蛋白质的沉淀反应。
2．进一步掌握蛋白质的有关性质。
二、实验原理蛋白质因受某些物理或化学因素的影响，分子的空间构象被破坏，从而导致其理化性质发生改变并失去原有的生物学活性的现象称为蛋白质的变性作用。
变性作用并不引起蛋白质一级结构的破坏，而是二级结构以上的高级结构的破坏，变性后的蛋白质称为变性蛋白。
引起蛋白质变性的因素很多，物理因素有高温、紫外线、X-射线、超声波、高压、剧烈的搅拌、震荡等。
化学因素有强酸、强碱、尿素、胍盐、去污剂、重金属盐（如Hg2+、Ag+、Pb2+等）三氯乙酸，浓乙醇等。
不同蛋白质对各种因素的敏感程度不同。
用大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的过程称为蛋白质的盐析作用。
蛋白质是亲水胶体，在高浓度的中性盐影响下脱去水化层，同时，蛋白质分子所带的电荷被中和，结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀析出。
经透析或用水稀释时又可溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
盐析不同的蛋白质所需中性盐浓度与蛋白质种类及pH 有关。
分子量大的蛋白质(如球蛋白)比分子量小的(如白蛋白)易于析出。
改变盐浓度，使不同分子量的蛋白质分别析出。
三、实验材料1．新鲜蛋清或血清，蛋白质溶液。
2．固体硫酸铵及饱和硫酸铵溶液。
3．95％乙醇，1％CuSO4，饱和苦味酸，0.1mol/LHAC，NaCl,4．试管，三角漏斗、玻棒，滤纸，试管架酒精灯，移液管。
四、操作方法1．卵清蛋白的分离(1)、取卵清约2 ml于试管中，加等体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌均匀，蛋白质析出，静置，用滤纸过滤致滤液澄清，沉淀为卵球蛋白，将此沉淀用2 ml半饱和硫酸铵洗涤一次。
(2)、将析出卵清球蛋白后的滤液放人试管中，再加人固体硫酸铵使之达饱和，观察有无沉淀产生，若有沉淀，则过滤之，滤出的沉淀却为卵清白蛋白。
2．乙醇沉淀蛋白质（乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质的水化层而使其沉淀析出）。
蛋白质的变性-沉淀-凝固
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蛋白质的变性/沉淀/凝固
蛋白质的变性/沉淀/凝固：
蛋白质的二级结构以氢键维系局部主链构象稳定，三、四级结构主要依赖于氨基酸残基侧链之间的相互作用，从而保持蛋白质的天然构象。
1.变性：在某些物理和化学因素作用下，蛋白质特定的空间构象被破坏，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失的现象称为蛋白质的变性。
蛋白质变性后溶解度下降、容易消化生物活性丧失。
2.沉淀：蛋白质从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀。
蛋白质变性后，疏水侧链暴露在外，肽链融汇相互缠绕继而聚集容易沉淀。
3.凝固：蛋白质经强酸、强碱作用发生变性后，仍能溶解于强酸或强碱溶液中，若将pH调至等电点，则变性蛋白质立即结成絮状的不溶解物，此絮状物仍可医`学教育网搜集整理溶解于强酸和强碱中医|学教育网搜集整理。
如再加热则絮状物可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中，这种现象称为蛋白质的凝固作用。
4.复性：若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，有些蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性。
实验一-蛋白质的沉淀与凝固
Ⅱ实验内容实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液是一稳定的亲水性溶胶液，其稳定的因素有二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥，不易凝集成团；二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融洽相依，又在胶粒之间起了隔离作用。
如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。
促使蛋白质沉淀的因素很多，大致可分为两类：第一类是可逆的沉淀反应。
这时蛋白质的空间构象未受到很大改变，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如盐析和低温乙醇沉淀蛋白。
第二类是不可逆的沉淀反应，重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于水中。
不可逆的蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。
变性的蛋白质在等电点附近加热时，蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实的凝块。
一、蛋白质的盐析[原理]高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又是强电解质，可抑制蛋白质的解离。
因而用高浓度的中性盐，使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。
盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性，故常用于分离各种天然蛋白质。
由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。
例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的硫酸铵则沉出清蛋白。
[操作]1.取一试管，加入3ml 5%蛋白质溶液及3ml饱和硫酸铵溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。
2.将试管内容物过滤，加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱和状态，摇匀后观察现象。
（注意固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。
）3.取上项浑浊液1ml，加水2ml，观察是否复容。
二. 乙醇沉淀蛋白质[原理]乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜；此外，加入乙醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。
故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀。
用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及其生物学活性，但室温中乙醇与蛋白质接触较久后，可使之变性，形成不可逆的沉淀。
[操作]1.取试管4支，标出1、2、3、4号码，按下表操作试剂 1 2 3 45%蛋白质溶液（ml） 1 1 1 -1%乙酸（滴）- 1-2 - -95%乙醇（ml）- - - 22.将3管及4管置冰水中，放置5分钟，然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中（此步最好在冰水中进行），混匀，同时向第1及第2管中各加入未冰浴的乙醇2ml混匀，观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml，混匀，比较各管变化并解释之。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告
实验目的，通过对蛋白质的沉淀反应进行实验，掌握蛋白质的沉淀方法和技巧，了解蛋白质的性质和特点。
实验原理，蛋白质的沉淀反应是利用蛋白质与醋酸和酒精混合后在酸性条件下
沉淀出来的特性进行实验。
醋酸和酒精可以使蛋白质变性并沉淀出来，酸性条件有利于蛋白质的沉淀。
实验步骤：
1. 取少量蛋白质溶液放入试管中；
2. 加入少量醋酸，并充分混合；
3. 加入适量酒精，再次充分混合；
4. 观察蛋白质的沉淀情况。
实验结果，经过以上步骤，观察到蛋白质在酸性条件下与醋酸和酒精混合后发
生了沉淀反应，沉淀物呈现白色。
实验分析，蛋白质的沉淀反应是由于醋酸和酒精的作用下，蛋白质发生变性并
沉淀出来。
酸性条件有利于蛋白质的沉淀，而酒精可以加速蛋白质的沉淀过程。
因此，通过本实验可以初步了解蛋白质的性质和特点。
实验结论，蛋白质的沉淀反应是一种常见的实验方法，通过本实验可以掌握蛋
白质的沉淀技巧，并了解蛋白质的性质和特点。
在实际应用中，蛋白质的沉淀反应可以用于蛋白质的提取和分离，具有一定的应用价值。
实验注意事项：
1. 实验操作要注意安全，避免醋酸和酒精的接触；
2. 实验过程中要注意观察蛋白质的沉淀情况，及时记录实验结果；
3. 实验结束后要及时清理实验器材，保持实验环境整洁。
通过本实验，我对蛋白质的沉淀反应有了更深入的了解，掌握了蛋白质的沉淀
方法和技巧，对蛋白质的性质和特点有了更清晰的认识。
希望通过今后的实验实践，能够进一步提高自己的实验技能，为科学研究和实际应用做出更多的贡献。
蛋白质的沉淀与凝固实验报告
蛋白质的沉淀与凝固实验报告一、实验目的1、掌握蛋白质沉淀和凝固的基本原理和方法。
2、熟悉不同沉淀剂对蛋白质沉淀的作用。
3、观察蛋白质凝固的现象及其条件。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物，其分子表面带有许多可解离的基团，如氨基、羧基等，在一定的溶液 pH 值条件下，这些基团会解离而使蛋白质带电。
由于蛋白质分子表面所带电荷的种类和数量不同，以及分子大小、形状等差异，使得蛋白质在溶液中形成了稳定的胶体分散体系。
当向蛋白质溶液中加入某些试剂时，可破坏其稳定因素，使蛋白质分子从溶液中沉淀出来。
根据沉淀剂的不同，蛋白质沉淀可分为以下几种类型：1、盐析：向蛋白质溶液中加入大量中性盐（如硫酸铵、氯化钠等），可使蛋白质的溶解度降低而从溶液中沉淀出来。
这是因为盐离子与蛋白质分子表面的电荷中和，同时破坏了蛋白质分子表面的水化膜，从而使蛋白质沉淀。
盐析沉淀的蛋白质一般不变性，经透析或超滤除去盐后，蛋白质仍能溶解并恢复其原有的生物学活性。
2、有机溶剂沉淀：向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂（如乙醇、丙酮等），可使蛋白质沉淀。
这是因为有机溶剂能降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子表面电荷之间的静电引力，同时破坏了蛋白质分子表面的水化膜。
有机溶剂沉淀的蛋白质一般会部分变性，其溶解度降低。
3、重金属盐沉淀：向蛋白质溶液中加入重金属盐（如汞盐、铅盐等），可使蛋白质沉淀。
这是因为重金属离子与蛋白质分子中的某些基团（如巯基等）结合，从而使蛋白质变性沉淀。
4、生物碱试剂沉淀：向蛋白质溶液中加入某些生物碱试剂（如苦味酸、鞣酸等），可使蛋白质沉淀。
这是因为生物碱试剂与蛋白质分子中的某些基团结合，形成不溶性盐类而沉淀。
蛋白质的凝固是指蛋白质在一定条件下（如加热、强酸、强碱等），其空间结构发生剧烈变化，从溶液中析出并形成不溶性固体的现象。
凝固后的蛋白质一般完全变性，失去其原有的生物学活性。
三、实验材料和仪器1、实验材料鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与蛋黄分离，用蒸馏水稀释至一定体积，搅拌均匀备用。
蛋白质的沉淀与变性实验报告
蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质的沉淀与变性实验报告蛋白质是生物体内非常重要的一类有机化合物，它们在细胞的结构、功能和代谢中发挥着关键的作用。
为了研究蛋白质的性质和功能，科学家们经常进行各种实验。
本实验旨在探究蛋白质的沉淀与变性过程。
实验首先进行的是蛋白质的沉淀实验。
我们选取了鸡蛋清作为实验样品，因为鸡蛋清中含有丰富的蛋白质。
我们将鸡蛋清倒入试管中，并加入适量的乙醇。
乙醇可以与蛋白质发生相互作用，使其沉淀下来。
实验中我们使用了不同浓度的乙醇溶液，观察其对蛋白质沉淀的影响。
实验结果显示，随着乙醇浓度的增加，蛋白质的沉淀量逐渐增加。
这是因为乙醇能够与蛋白质中的水分子发生氢键作用，导致蛋白质分子间的相互作用力增强，从而使蛋白质变得不溶于水而沉淀下来。
当乙醇浓度达到一定程度时，蛋白质的沉淀量达到最大值，此后再增加乙醇浓度并不会引起更多的蛋白质沉淀。
这是因为乙醇的浓度过高会导致蛋白质分子间的相互作用力过强，使其聚集成大块而不是沉淀下来。
在进行蛋白质的变性实验时，我们选取了鸡蛋清中的卵清蛋白作为实验样品。
卵清蛋白是一种具有稳定的三维结构的蛋白质，通过变性处理可以使其失去原有的结构和功能。
我们采用了两种方法对卵清蛋白进行变性处理：热变性和酸变性。
首先进行的是热变性实验。
我们将卵清蛋白溶液加热至80摄氏度，并保持一段时间。
实验结果显示，随着加热时间的增加，卵清蛋白的结构逐渐破坏，失去了原有的透明度，变得浑浊。
这是因为高温可以破坏蛋白质分子内部的氢键、疏水作用力和范德华力等相互作用，使蛋白质分子失去稳定的三维结构。
接下来进行的是酸变性实验。
我们将卵清蛋白溶液加入适量的盐酸，使其呈酸性。
实验结果显示，随着酸性溶液的加入，卵清蛋白的结构发生了明显的改变，透明的溶液变得浑浊。
这是因为酸性条件下，蛋白质分子中的氨基酸残基带正电荷，导致蛋白质分子间的相互排斥增强，结构发生变化。
通过这两个实验，我们可以看到蛋白质在不同条件下的沉淀和变性过程。
实验一 蛋白质的沉淀与凝固
Ⅱ实验内容实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液是一稳定的亲水性溶胶液，其稳定的因素有二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥，不易凝集成团；二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融洽相依，又在胶粒之间起了隔离作用。
如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。
促使蛋白质沉淀的因素很多，大致可分为两类：第一类是可逆的沉淀反应。
这时蛋白质的空间构象未受到很大改变，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如盐析和低温乙醇沉淀蛋白。
第二类是不可逆的沉淀反应，重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于水中。
不可逆的蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。
变性的蛋白质在等电点附近加热时，蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实的凝块。
一、蛋白质的盐析[原理]高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又是强电解质，可抑制蛋白质的解离。
因而用高浓度的中性盐，使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。
盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性，故常用于分离各种天然蛋白质。
由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。
例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的硫酸铵则沉出清蛋白。
[操作]1.取一试管，加入3ml 5%蛋白质溶液及3ml饱和硫酸铵溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。
2.将试管内容物过滤，加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱和状态，摇匀后观察现象。
（注意固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。
）3.取上项浑浊液1ml，加水2ml，观察是否复容。
二. 乙醇沉淀蛋白质[原理]乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜；此外，加入乙醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。
故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀。
用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及其生物学活性，但室温中乙醇与蛋白质接触较久后，可使之变性，形成不可逆的沉淀。
[操作]1.取试管4支，标出1、2、3、4号码，按下表操作试剂 1 2 3 45%蛋白质溶液（ml） 1 1 1 -1%乙酸（滴）- 1-2 - -95%乙醇（ml）- - - 22.将3管及4管置冰水中，放置5分钟，然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中（此步最好在冰水中进行），混匀，同时向第1及第2管中各加入未冰浴的乙醇2ml混匀，观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml，混匀，比较各管变化并解释之。
实验一 蛋白质的变性、凝固及沉淀反应
理是什么？
变性、沉淀与凝固的关系
变性：蛋白质特定的空间构象被破坏而导致其
理化性质的改变和生物活性的丧失。一定条件 下可复性。
沉淀：蛋白质颗粒失去电荷、脱水，以固态的
形式从溶液中析出。
凝固：
操作步骤
1.蛋白质热变性：
2. 蛋白质的盐析作用
0.3g
3、重金属离子沉淀蛋白质：
取试管一只，加入: 蛋白液1mL+0.1mol/L NaOH 2滴+CuSO4溶液， 随加随摇匀，至出现沉淀为止。
1.蛋白质胶体分子的稳定因素。
掌握:
1.蛋白质变性的原理。
重 点: 蛋白质两性反应和等电点。 难 点: 蛋白质沉淀反应的原理和意义。
蛋白质的理化性质
▪ 蛋白质的两性电离性质 ▪ 蛋白质的变性 ▪ 蛋白质的胶体性质 ▪ 蛋白质的紫外吸收特性 ▪ 蛋白质的呈色反应
蛋白质的两性解离：
pH < pI 阳离子
4、生物碱试剂沉淀蛋白质：
取试管一只，加入: 蛋白液1mL，滴加饱和苦味酸6滴，观察并 解释所见。
注意事项:
1. 严格操作，逐滴加入，边加边摇晃。 2. 酒精灯加热，务必正确操作，严防液体 喷出伤
人。 3. 苦味酸属危险试剂，注意安全。
思考题
▪ 请简述蛋白质热变性的基本原理，日常生活中你 观察到那些热变性现象。
属离子（Cu2+、Ag+、Hg2+等）结合形成不溶性蛋白 盐类而沉淀。
特点：重金属沉淀蛋白质的反应通常很完全，属于不可 逆的沉淀反应。 应用：生活中；科研分析；临床上
点豆腐：蛋白质（胶体）颗粒的沉淀。
实验一蛋白质变性凝固及沉淀
蛋白质胶体颗粒的沉淀
-
-
-
-
-
-
-
-
带负电荷的蛋白质 （亲水胶体）
脱水
-
-
-
---
带负电荷的蛋白质
（疏水胶体）
蛋白质的沉淀
可逆沉淀
结构和性质都不变 适当条件下可重新溶解 是分离和纯化的基本方法
不可逆沉淀
结构和性质都发生变化 沉淀不再溶解于水
蛋白质的凝固
蛋白质变性沉淀并凝聚成块状称为凝固。 不可逆变性状态
蛋白质沉淀反应
生物碱试剂沉淀蛋白质
在酸性条件下，蛋白质可与生物碱试剂(如苦味酸、 钨酸、鞣酸)以及某些酸(如三氯醋酸、过氯酸、硝 酸)结合成不溶性的盐沉淀，此时蛋白质带正电荷 易于与酸根负离子结合成盐。
实验内容
① 取一只小玻璃试管，加入1mL蛋白质溶液； ② 加入饱和苦味酸 6d，观察现象（ ）；
实验一
蛋白质的变性、凝固及沉淀
实验目的
能够说出蛋白质变性、凝固反应的原理及实验方法 能够说出蛋白质沉淀反应的原理及实验方法 能够运用盐析法及重金属沉淀法
主要实验内容
蛋白质的加热变性凝固 蛋白质沉淀反应
蛋白质盐析 重金属盐沉淀蛋白质 生物碱试剂沉淀蛋白质
蛋白质的变性 (denaturation)
在某些理化因素的作用下，蛋白质严格的空间结构 被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性质 和生物学性质改变的现象。
变性后的蛋白质称变性蛋白,能使蛋白质变性 的物质叫蛋白质变性剂。
高温、高压
物理因素 变性因素
化学因素
紫外线、X射线、 电离辐射和超声波等 强酸、强碱 有机溶剂、重金属盐
变性实质：
）；
高温下，蛋白质发生不可逆的变性并凝固。
实验一 蛋白质的沉淀与凝固
Ⅱ实验内容实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液就是一稳定的亲水性溶胶液,其稳定的因素有二:一就是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥,不易凝集成团;二就是胶粒表面的水化膜,它使胶粒与水融洽相依,又在胶粒之间起了隔离作用。
如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被破坏,蛋白质将于溶液中沉淀析出。
促使蛋白质沉淀的因素很多,大致可分为两类:第一类就是可逆的沉淀反应。
这时蛋白质的空间构象未受到很大改变,除去沉淀因素后,可以重新溶解,例如盐析与低温乙醇沉淀蛋白。
第二类就是不可逆的沉淀反应,重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后,由于蛋白质结构发生重大改变,所以不再溶于水中。
不可逆的蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。
变性的蛋白质在等电点附近加热时,蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实的凝块。
一、蛋白质的盐析[原理]高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜,同时盐又就是强电解质,可抑制蛋白质的解离。
因而用高浓度的中性盐,使蛋白质带电量减少,水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。
盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性,故常用于分离各种天然蛋白质。
由于蛋白质的组成及性质不同,所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。
例如半饱与的硫酸铵沉出球蛋白,饱与的硫酸铵则沉出清蛋白。
[操作]1、取一试管,加入3ml 5%蛋白质溶液及3ml饱与硫酸铵溶液,摇匀静止数分钟后观察现象。
2、将试管内容物过滤,加硫酸铵粉末于滤液中,使达饱与状态,摇匀后观察现象。
(注意固体硫酸铵若加到过饱与则有结晶析出,勿与蛋白质沉淀混淆。
)3、取上项浑浊液1ml,加水2ml,观察就是否复容。
二、乙醇沉淀蛋白质[原理]乙醇就是脱水剂,可与蛋白质争夺水化膜;此外,加入乙醇可使水的介电常数变小,蛋白质解离度降低,带电量减少。
故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀。
用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及其生物学活性,但室温中乙醇与蛋白质接触较久后,可使之变性,形成不可逆的沉淀。
[操作]1.取试管4支,标出1、2、3、4号码,按下表操作试剂 1 2 3 45%蛋白质溶液(ml) 1 1 1 -1%乙酸(滴) - 1-2 - -95%乙醇(ml) - - - 22、将3管及4管置冰水中,放置5分钟,然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中(此步最好在冰水中进行),混匀,同时向第1及第2管中各加入未冰浴的乙醇2ml混匀,观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml,混匀,比较各管变化并解释之。
实验一 蛋白质的沉淀与凝固(DOC)
Ⅱ实验内容实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液是一稳定的亲水性溶胶液，其稳定的因素有二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥，不易凝集成团；二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融洽相依，又在胶粒之间起了隔离作用。
如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。
促使蛋白质沉淀的因素很多，大致可分为两类：第一类是可逆的沉淀反应。
这时蛋白质的空间构象未受到很大改变，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如盐析和低温乙醇沉淀蛋白。
第二类是不可逆的沉淀反应，重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于水中。
不可逆的蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。
变性的蛋白质在等电点附近加热时，蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实的凝块。
一、蛋白质的盐析[原理]高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又是强电解质，可抑制蛋白质的解离。
因而用高浓度的中性盐，使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。
盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性，故常用于分离各种天然蛋白质。
由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。
例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的硫酸铵则沉出清蛋白。
[操作]1.取一试管，加入3ml 5%蛋白质溶液及3ml饱和硫酸铵溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。
2.将试管内容物过滤，加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱和状态，摇匀后观察现象。
（注意固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。
）3.取上项浑浊液1ml，加水2ml，观察是否复容。
二. 乙醇沉淀蛋白质[原理]乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜；此外，加入乙醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。
故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀。
用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及其生物学活性，但室温中乙醇与蛋白质接触较久后，可使之变性，形成不可逆的沉淀。
[操作]1.取试管4支，标出1、2、3、4号码，按下表操作试剂 1 2 3 45%蛋白质溶液（ml） 1 1 1 -1%乙酸（滴）- 1-2 - -95%乙醇（ml）- - - 22.将3管及4管置冰水中，放置5分钟，然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中（此步最好在冰水中进行），混匀，同时向第1及第2管中各加入未冰浴的乙醇2ml混匀，观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml，混匀，比较各管变化并解释之。
实验一_蛋白质的沉淀与凝固
Ⅱ实验内容实验一蛋白质的沉淀与凝固蛋白质溶液是一稳定的亲水性溶胶液，其稳定的因素有二：一是蛋白质胶粒上的电荷使之相互排斥，不易凝集成团；二是胶粒表面的水化膜，它使胶粒与水融洽相依，又在胶粒之间起了隔离作用。
如果上述两种稳定蛋白质溶液的因素被破坏，蛋白质将于溶液中沉淀析出。
促使蛋白质沉淀的因素很多，大致可分为两类：第一类是可逆的沉淀反应。
这时蛋白质的空间构象未受到很大改变，除去沉淀因素后，可以重新溶解，例如盐析和低温乙醇沉淀蛋白。
第二类是不可逆的沉淀反应，重金属盐类或生物碱试剂沉淀蛋白后，由于蛋白质结构发生重大改变，所以不再溶于水中。
不可逆的蛋白质沉淀多表示蛋白质已经变性。
变性的蛋白质在等电点附近加热时，蛋白质分子间相互盘绕而变成坚实的凝块。
一、蛋白质的盐析[原理]高浓度的盐离子可与蛋白质胶粒争夺水化膜，同时盐又是强电解质，可抑制蛋白质的解离。
因而用高浓度的中性盐，使蛋白质带电量减少，水化膜破坏而从溶液中沉淀出来。
盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白变性，故常用于分离各种天然蛋白质。
由于蛋白质的组成及性质不同，所以盐析时所需中性盐的浓度也不相同。
例如半饱和的硫酸铵沉出球蛋白，饱和的硫酸铵则沉出清蛋白。
[操作]1.取一试管，加入3ml 5%蛋白质溶液及3ml饱和硫酸铵溶液，摇匀静止数分钟后观察现象。
2.将试管内容物过滤，加硫酸铵粉末于滤液中，使达饱和状态，摇匀后观察现象。
（注意固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混淆。
）3.取上项浑浊液1ml，加水2ml，观察是否复容。
二. 乙醇沉淀蛋白质[原理]乙醇是脱水剂，可与蛋白质争夺水化膜；此外，加入乙醇可使水的介电常数变小，蛋白质解离度降低，带电量减少。
故加入乙醇能破坏蛋白质的胶体性质而使蛋白质沉淀。
用此法在低温下操作可使沉出的蛋白质保持其理化特性及其生物学活性，但室温中乙醇与蛋白质接触较久后，可使之变性，形成不可逆的沉淀。
[操作]1.取试管4支，标出1、2、3、4号码，按下表操作试剂 1 2 3 45%蛋白质溶液（ml） 1 1 1 -1%乙酸（滴）- 1-2 - -95%乙醇（ml）- - - 22.将3管及4管置冰水中，放置5分钟，然后将第4管的冰乙醇倒入第3管中（此步最好在冰水中进行），混匀，同时向第1及第2管中各加入未冰浴的乙醇2ml混匀，观察各管的沉淀情况并立即向第1、2及3管中各加入蒸馏水10ml，混匀，比较各管变化并解释之。
蛋白质的沉淀和变性实验.
实验五蛋白质的沉淀和变性实验一、实验目的1.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。
二、实验原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
1.可逆的沉淀反应。
此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解在原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。
如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。
提纯蛋白质时，常利用此类反应。
2.不可逆沉淀反应。
此时蛋白质分子内部结构发生大改变，蛋白质常因变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中。
如加热引起的蛋白质沉淀于凝固，蛋白质于重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类反应。
蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷）并不析出。
因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
三、实验材料、器材与试剂1.材料鸡蛋清的水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1：9）。
2.器材（1）试管及试管架；（2）吸量管；（3）滴灌；（4）小烧杯；（5）容量瓶。
3.试剂（1）3%硝酸银溶液；（2）5%三氯乙酸溶液（3）95%乙醇；（4）饱和硫酸铵溶液；（5）硫酸铵结晶粉末。
四、实验方法1. 蛋白质的盐析中性无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。
盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。
如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。
由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析是可逆的过程。
加蛋清溶液5mL于试管中，再加入等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。
倒出少量浑浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。
蛋白质变性与沉淀
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2）操作步骤
试剂（mL） 2.5%蛋白质
溶液 结晶NaCl 无水乙醇
现象
试管1 0.5 mL
— 1mL
试管2 0.5 mL 数粒（适量） 1mL
3）观察、记录实验现象，并解释之。
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五、注意事项
1.试剂瓶滴管不能交叉使用，否则污 染试剂。
2.刻度吸量管不能交叉使用，否则污 染试剂，影响反应现象。
4.蛋白液中加入三氯醋酸 ，为 什么会产生沉淀？
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下次实验： P74页
激活剂及抑制剂对酶活性的影响
实验报告明天交，请组长负起责 任。谢谢同学们配合！
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下次实验： P70页
酶的特异性
实验报告可以下课交，
最晚明天交，请组长负起 责任。谢谢同学们配合！
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5%蛋白质溶 液
0.1mol/L NaOH
10% ZnSO4 1%三氯醋酸
试管1 2D
2D 20D —
试管2 2D
— — 20D
试管3 2D
— 20D —
现象
3）观察、记录实验现象，并解释之。
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2. 乙醇沉淀蛋白质 1）实验原理 乙醇溶解于水，破坏蛋白 质分子的水化膜，加入少量中 性盐抑制蛋白质的解离，使电 荷减少，沉淀更完全。
（二）操作步骤
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1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质
1）实验原理
负电荷
OHCOO-
COOP
重金属离子M+
pH > pI NH2
P
H+ NH3+
COOH P
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蛋白质的变性、凝固及沉淀
生物化学与分子生物学教研室
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实验目的
能够说出蛋白质变性、凝固反应的原理及实验方法 能够说出蛋白质沉淀反应的原理及实验方法 能够运用盐析法及重金属沉淀法
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主要实验内容
蛋白质的加热变性凝固 蛋白质沉淀反应
蛋白质盐析 重金属盐沉淀蛋白质 生物碱试剂沉淀蛋白质
变性实质：
高浓度尿素、盐酸胍等
破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、
分子量不变）。
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变性的可逆性
可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构可 以恢复原状。
不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构 不能恢复原状。
利的保存 保护体内蛋白质
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蛋白质的胶体性质及沉淀:
不同蛋白质盐析时所需的盐浓度不同，可以通过 不同浓度盐溶液分离不同蛋白质，就是分段盐析。
大部分蛋白质都可用饱和(NH4)2SO4溶液盐析出来。 某些蛋白质在半饱和(NH4)2SO4溶液中析出。 盐析是一个可逆沉淀反应。
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实验内容
① 取一只小玻璃试管，加入2mL蛋白质溶液；
② 加入等体积饱和(NH4)2SO4溶液，混匀后静置3min。
观察现象（
）
③ 对该溶液进行过滤，将滤液收集于一只干净试管中， 取部分转入另一只试管中；
④ 向一只试管中加入结晶(NH4)2SO4粉末，直到粉末不 再溶解（成为饱和(NH4)2SO4溶液）；
⑤ 比较两只试管现象（
）
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蛋白质沉淀反应
重金属盐沉淀蛋白质
在碱性条件下，重金属离子与蛋白质结合成不溶 性蛋白盐而沉淀。
1. 向1号管中加入：pH4.8缓冲液10d 。混匀，于酒精灯
上缓慢加热至沸点，观察变化（
）；
高温下，蛋白质发生不可逆的变性并凝固。
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2. 向2号管中加入：H2O 8d, 0.1mol/L HCl 2d。混匀， 于酒精灯上缓慢加热至沸点，观察变化
（
）
① 停止加热，向2号管中逐滴加入：0.1mol/L NaCO3 。 摇匀后继续滴加，一旦出现絮状物即停止。
实验内容
① 取一只小玻璃试管，加入1mL蛋白质溶液； ② 加入0.1mol/mL NaOH 2d，混匀； ③ 逐滴加入CuSO4，摇匀，直至出现沉淀为止。
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蛋白质沉淀反应
生物碱试剂沉淀蛋白质
在酸性条件下，蛋白质可与生物碱试剂(如苦味酸、 钨酸、鞣酸)以及某些酸(如三氯醋酸、过氯酸、硝 酸)结合成不溶性的盐沉淀，此时蛋白质带正电荷 易于与酸根负离子结合成盐。
）
⑥ 冷却后，再加入： 0.1mol/L NaOH 2d。观察现象
（
蛋白质）变性不一定出现沉淀；
蛋白质变性后在特定精条品件课件下发生沉淀，并可逆；
蛋白质沉淀反应
蛋白质的盐析
一定浓度中性盐 （ (NH4)2SO4、Na2SO4等）可去除 蛋白质分子所带电荷及其表面的水化层，从而使蛋 白质从溶液中聚集沉淀出来。利用这个原理使蛋白 质从溶液中沉淀出来的方法为盐析。
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蛋白质的变性 (denaturation)
在某些理化因素的作用下，蛋白质严格的空间结 构被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性 质和生物学性质改变的现象。
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变性后的蛋白质称变性蛋白,能使蛋白质 变性的物质叫蛋白质变性剂。
高温、高压
物理因素
紫外线、X射线、
变性因素 化学因素
电离辐射和超声波等 强酸、强碱 有机溶剂、重金属盐
（
）；
① 停止加热，向3号管中逐滴加入：0.1mol/L HAC。一旦 出现絮状物即停止。
② 继续滴加：0.1mol/L HAC 1d。观察现象
（
）
③ 将3号管于酒精灯上加热，观察现象（
）
④ 向3号管中加入： 0.1mol/L NaOH 。一旦出现絮状物 即停止。
⑤ 将3号管于酒精灯上加热，观察现象（
脱水
脱水
++ +
+
+
+
+
+
带正电荷的蛋白质
（疏水胶体）
碱
酸
不稳定的蛋白质颗粒 （沉淀）
蛋白质胶精品体课颗件 粒的沉淀
-- -
-
-
-
-
-
带负电荷的蛋白质 （亲水胶体）
脱水
-
-
---
带负电荷的蛋白质
（疏水胶体）
蛋白质的沉淀
可逆沉淀
结构和性质都不变 适当条件下可重新溶解 是分离和纯化的基本方法
不可逆沉淀
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蛋白质的加热变性凝固
蛋白质分子受热作用，分子空间结构变化，疏 水基团暴露于分子表面，溶解度降低。
当蛋白质分子不带电荷（处于等电点条件下）， 则蛋白质发生聚集出现沉淀；
当蛋白质分子带电（处于非等电点条件下）， 则蛋白质因静电排斥作用而不出现沉淀；
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实验内容
取三只小玻璃试管，各加入10%蛋白质溶液 10d，分别标记为1、2和3号管；
② 将2号管于酒精灯上加热，观察现象（
）
③ 冷却后，再加入： 0.1mol/L HCl 2d。观察现象
（
）
蛋白质变性不一定出现沉淀； 蛋白质变性后在特定条件下发生沉淀；
沉淀加热后发生不可逆变性并凝固。
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3. 向3号管中加入：H2O 8d, 0.1mol/L NaOH 2d。混匀， 于酒精灯上缓慢加热至沸点，观察变化
实验内容
① 取一只小玻璃试管，加入1mL蛋白质溶液；
② 加入饱和苦味酸 6d，观察现象（
）；
注意：苦味酸属危险试剂，操作时勿接触皮肤
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实验记录与实验报告
⑴ 实验目的； ⑵ 实验原理； ⑶ 仪器、材料和试剂； ⑷ 实验步骤； ⑸ 结果讨论（含数据处理）；
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结构和性质都发生变化 沉淀不再溶解于水
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蛋白质的凝固
蛋白质变性沉淀并凝聚成块状称为凝固。 不可逆变性状态
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蛋白质变性、沉淀与凝固的关系
变性属于蛋白质本质的变化，沉淀和凝固属于 一种现象
变性不一定沉淀，变性蛋白质只在等电点附近 才沉淀
变性蛋白易于沉淀， 沉淀蛋白不一定变性 沉淀的变性蛋白质也不一定凝固
蛋白质分子颗粒大小1-100nm之间,属胶 体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体。
表面形成水化层 原因
表面同种电荷的斥力
+++
+
+
+
+
+
除去这两个因素，就会发生沉淀。蛋白 质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为沉淀。
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++ +
酸
碱
+
+
+
+
+
碱
酸
带正电荷的蛋白质 （亲水胶体）
在等电点的蛋白质 （亲水胶体）