生物技术---免疫学技术

瘦肉精介绍
“瘦肉精”学名为盐酸克伦特罗，医学上又称克喘素，常用于治疗哮喘。 由于盐酸克伦特罗添加于饲料饲喂动物后可明显促进动物生长,提高
瘦肉率, 所以养殖户称其为“瘦肉精”，曾在国内外广泛用于动物饲养 生猪食用瘦肉精后皮毛光亮，呼吸急促，个别会出现腿抽搐，站不
稳，爬坡困难；宰后猪的肌肉特别鲜红，后臀肌肉饱满，肥肉非常薄
和酶标记的已知抗原液 4、温育后清洗 5、加入酶作用底物 6、测定颜色反应深浅
酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）
生物素-亲和素系统（biotin-avidin system）
基本概念 生物素：是一种维生素H，经活化后，可与抗体、抗原、酶以多 配一的方式共价结合，且不影响它们的活性 亲和素：从卵蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，可与酶偶合，以1 配多的方式对生物素有很强的亲和力
《动物尿液中盐酸克伦特罗的测定——气相色谱/质谱法》 （NY/XQ 421－2003），检出限：1.0ppb
《尿液中盐酸克仑特罗的测定胶体金免疫层析法 （NY/T933-2005），检出限：3.0ppb
猪肉全程监控中瘦肉精检测方法的选择
生猪饲养
屠宰场
大型批发市场
零售市场
餐饮业
饲料检测 猪尿检测
踏实肯干，努力奋斗。2020年10月1 9日下 午9时3 8分20. 10.19 20.10 .19
追求至善凭技术开拓市场，凭管理增 创效益 ，凭服 务树立 形象。 2020年 10月1 9日星 期一下 午9时3 8分44 秒21:3 8:442 0.10. 19
严格把控质量关，让生产更加有保障 。2020 年10 月下午9 时38 分20.10 .1921 :38Oc tober 19, 2020
法律规定
《食品卫生法》 《食品添加剂卫生管理办法》（GB2760） 《动物性食品中兽药残留最高限量》（农业部公告第235号，
2002年12月24日）规定：禁用药物，动物性食品中不得检出： 瘦肉精、沙丁胺醇、西马特罗等31种 违法者的法律责任：民事赔偿、行政处罚、刑事处罚
盐酸克伦特罗残留检测方法
瘦肉精介绍
“瘦肉精”化学性质特别稳定，加热到170℃时才能被分解，故一 般家庭厨房加热不能将其分解破坏
食用后在胃肠道吸收快，作用维持时间持久。中毒后主要症状表 现为头疼、头晕、心悸、心慌、面色潮红、四肢发抖等症状
违法者使用该物质以提高猪的瘦肉率和颜色鲜艳程度，不知情的 市民 错误地认为这样的肉才是“好肉”而特别喜欢选购
某些新进展
酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）
间接法
1、将已知可溶性抗原吸附于载体 2、温育后清洗 3、加入可能含特异性抗体的待检液 4、温育后清洗 5、加入酶标记的二抗 6、温育后清洗 7、加入酶作用底物 8、测定反应颜色深浅
酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）
盐酸克伦特罗快速检测试剂板的中央膜面上固定有两条隐形线，克 伦特罗抗原固定在测试区作为检测线（T线），二抗固定在质控区 作为对照线（C线）。
当待检样品溶液滴入试剂板加样孔后，样品溶液因层析作用往上扩 散。如果样品溶液含有相应药物的残留，药物将和胶体金颗粒上的 抗体先行反应，因此当胶体金颗粒随样品溶液扩散至T线时，胶体 金颗粒上抗体活性位点将因被样品溶液中的药物占据而无法与T线 上药物抗原结合；所以当样品中盐酸克伦特罗含量1ppb(检测限) 以上时，试剂板上的T线将较C线显色淡或甚至无显色，判定为阳 性。反之，当样品中盐酸克伦特罗含量在1ppb以下或无残留时， 试剂板上的T线显色与C线相近或偏深，判定为阴性
作业标准记得牢，驾轻就熟除烦恼。 2020年 10月1 9日星 期一9 时38分4 4秒21 :38:4 419 October 2020
好的事情马上就会到来，一切都是最 好的安 排。下 午9时3 8分44 秒下午 9时38 分21:3 8:442 0.10. 19
一马当先，全员举绩，梅开二度，业 绩保底 。20.1 0.192 0.10.1 921:3 821:3 8:442 1:38: 44Oct -20
安全象只弓，不拉它就松，要想保安 全，常 把弓弦 绷。20 .10.19 21:38 :4421 :38Oc t-201 9-Oct- 20
加强交通建设管理，确保工程建设质 量。21 :38:4 421:3 8:442 1:38M onday , October 19, 2020
安全在于心细，事故出在麻痹。20.1 0.192 0.10.1 921:3 8:442 1:38: 44Oct ober 19, 2020
第三章
生物技术---免疫学技术
基本概念
抗原（antigen）： 进入动物体内能刺激动物的免疫系统发生免疫应答，从 而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞，并能和抗 体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质 分完全抗原和半抗原
抗体(antibody)： 抗原刺激动物免疫系统，由免疫系统产生分泌的能和相 应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白
牢记安全之责，善谋安全之策，力务 安全之 实。20 20年1 0月19 日星期 一9时3 8分44 秒Mon day, October 19, 2020
相信相信得力量。20.10.192020年 10月19 日星期 一9时 38分4 4秒20. 10.19
谢谢大家！
浆过的猪肉组织样，盖紧管盖
2
1
加热完成后取出冷却至室温；可以明显看 到底部有溶液渗出
将装有样品的离心管在90℃以上水浴锅中 加热10 分钟
4
3
吸取3滴（约100ul）煮出的样品渗出液到 1.5ml的离心管中
操作步骤
吸取3滴（约100ul）盐酸克伦特罗组织样 专用稀释液到1.5ml离心管中。充分混合均匀
从包装铝箔袋中取出检测卡平放。吸取3滴 （约100ul）混匀溶液加入到试剂板加样孔中
5
6
样液滴入加样孔后开始计时，5～10分钟左右判定结果
7
树立质量法制观念、提高全员质量意 识。20 .10.19 20.10 .19Mo nday, October 19, 2020
人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。 21:38: 4421: 38:44 21:38 10/19 /2020 9:38:44 PM
《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》 （GB5009.192-2003） 第一法：气相色谱——质谱法，检出限：0.5ppb 第二法：高效液相色谱法，检出限：0.5ppb 第三法：酶联免疫法（ELISA筛选法） ，检出限：0.5ppb
《动物组织中盐酸克伦特罗的测定——气相色谱/质谱法》 （NY/T 468－2006），检出限：2.0ppb
胶体金免疫层析法检测瘦肉精的技术指标
灵敏度 肉样或组织样：1ppb(标准前处理)或5ppb（简单前处理） 尿样： 1ppb(标准前处理)
特异性：与沙丁胺醇等苯乙胺类药物没有交叉反应； 准确性：与瘦肉精ELISA试剂盒的检测结果符合率>90％ 有效期：半年（冷藏闭光保存）
操作步骤
于5ml离心管中加入5g左右剪碎或是高速匀
BAS用于检测的基本方法： BAB法或BRAB法 BA法 ABC法
酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）
酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）
均相酶免疫测定法 无需“固定在载体 上”；无需“温育后 清洗”
斑点免疫结合试验 以微孔薄膜为载体，
酶免疫反应阳性结果 在膜上出现色斑点 胶体金标记较酶标记 更为简便
猪肉和尿液盐酸克伦特罗的 免疫胶体金法快速检测
瘦肉精中毒事件
2000年以来，内地相继发生18起瘦肉精中毒事件，中毒人数 达1700多人，死亡1人（不包括上海2006年集体中毒事件）
瘦肉精残留及危害不容忽视，瘦肉精替代品暗潮涌动 上海9.13瘦肉精食物中毒事件（2006年）
政府部门 监督抽检 GC-MS
猪尿检测 猪肉检测
酶联免疫法 免疫胶体金
GC-MS确认 大型仪器确认
wenku.baidu.com阳性
猪肉 检测
猪肉 检测
猪肉 检测
免疫胶体金 酶联免疫法
免疫胶体金
免疫胶体金
筛检阳性
销毁和溯源
GC-MS确认 大型仪器确认
阳性
免疫胶体金快速检测板的外观图
免疫胶体金快速检测板(试剂)的结构图
检测原理
第三章
免疫学技术
基本概念 抗原的制备：颗粒抗原、半抗原、人工抗原 抗体的制备：多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体
免疫学技术--抗原抗体反应
可对抗原或抗体进 行定性、定量、定 位的检测
抗体抗原以非共价 键结合
不可见反应：几秒几分钟 可见反应：数分钟 （小时、日）
影响因素 电解质 温度 酸碱度
双抗体夹心法
1、将已知抗体吸附于载体上 2、温育后清洗 3、加入可能含特异性抗原的待检液 4、温育后清洗 5、加入酶标记特异性抗体 6、温育后清洗 7、加入酶作用底物 8、测定颜色反应深浅
酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay）
竞争法
1、将已知抗体吸附于载体上 2、温育后清洗 3、加入可能含特异性抗原的待检液
第三章
第三章
免疫学技术
酶联免疫法 放射免疫法 荧光免疫法 其他
酶联免疫法（enzyme immunoassay)
以酶标记抗体或抗原进行的抗体抗原反应
酶结合物应具有双功能： 高度特异的免疫反应、生物催化放大作用
基本方法 间接法 双抗体夹心法 竞争法
生物素-亲和素系统（biotin-avidin system，BAS）