胰岛素ELISA试剂盒
人胰岛素定量检测试剂盒(酶联免疫法)说明书V9.0
酶结合物缓冲液 1瓶 7.0 mL 3.5 mL
稀释后储存:2-8℃一个月
试剂 10╳96
各 Mercodia 胰岛素 ELISA 检测试剂盒(10-1113-10)都包含 96 孔的试剂,足够用于双份测 试的 42 个样本、1 个校准曲线。对于更大量的试验,用标有相同批号的试剂混池使用。失 效日期见外包装盒,建议储存温度为 2-8℃。
终止溶液
1瓶
7mL
准备好使用
0.5M 硫酸
酶结合物 1×溶液的制备
按下表,用酶结合物缓冲液稀释酶结合物 11×(1+10),来制备所需体积的酶结合物 1×溶 液。当为整个平板制备酶结合物 1×溶液时,将所有酶结合物缓冲液倒入酶结合物 11×瓶中, 轻柔混合。
条数量 12 条 8条 4条
酶结合物 11× 1瓶 700 μL 350 μL
5 mL
准备好使用
酶结合物 11×
1瓶
过氧化物酶结合的鼠抗 apoB 单克隆抗体
酶结合物缓冲液
1瓶
蓝色
1.2mL 12mL
制备,见下文 准备好使用
洗涤缓冲液 21×
1瓶
稀释后储存:2-8℃,8 周Baidu Nhomakorabea
底物 TMB
1瓶
无色溶液
注意!光敏!
50 mL 22mL
制备 1×的洗涤缓冲 液需加入 1000mL 重 蒸水稀释 准备好使用
人胰岛素样生长因子1(IGF-1)定量检测试剂盒(ELISA)
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断。
人胰岛素样生长因子1(IGF-1)定量检测试剂盒(ELISA)
使用说明书
【试剂盒名称】
人胰岛素样生长因子1(IGF-1)定量检测试剂盒(ELISA)
【试剂盒用途】
定量检测人血清、血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子1(IGF-1)的含量。
【检测原理】
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被人胰岛素样生长因子1(IGF-1)单克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中人胰岛素样生长因子1(IGF-1)浓度呈正相关,450nm 波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中人胰岛素样生长因子1(IGF-1)含量。
【试剂盒组成】
1酶标包被板12孔×8条7显色剂A液6mL
2标准品0.3mL×6管8显色剂B液6mL
320倍浓缩洗涤液25mL9终止液6mL
4样本稀释液6mL10说明书1份
5特殊稀释液6mL11封板膜2张
6酶标试剂6mL12密封袋1个
备注:标准品(1号→6号)浓度依次为:160、80、40、20、10、5μg/L.
【需要而未提供的试剂和器材】
1、37℃恒温箱
2、标准规格酶标仪
3、精密移液器及一次性吸头
4、蒸馏水
5、一次性试管
6、吸水纸
【操作步骤】
1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。
人(Human)胰岛素自身抗体(IAA)-NEWA
⼈(Human)胰岛素⾃⾝抗体(IAA)-NEWA
本试剂盒只能⽤于科学研究,不得⽤于医学诊断
⼈(Human)胰岛素⾃⾝抗体(IAA)
ELISA检测试剂盒
使⽤说明书
检测原理
试剂盒采⽤双抗⼀步夹⼼法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被胰岛素⾃⾝抗原的包被微孔中,依次加⼊标本、标准品、HRP 标记的检测抗原,经过温育并彻底洗涤。⽤底物TMB显⾊,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝⾊,并在酸的作⽤下转化成最终的黄⾊。颜⾊的深浅和样品中的胰岛素⾃⾝抗体(IAA)呈正相关。⽤酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存⽅法
1.⾎清:使⽤不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集⾎液后,3000转离⼼10分钟将⾎清和红细胞迅速⼩⼼地分离。
2.⾎浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离⼼30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离⼼10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加⼊适量⽣理盐⽔捣碎。3000转离⼼10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按⼀次⽤量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。⾃备物品
1.酶标仪(450nm)
2.⾼精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1.试剂盒保存在2-8℃,使⽤前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,⽔浴加热使结晶完全溶解后再使⽤。
2.实验中不⽤的板条应⽴即放回⾃封袋中,密封(低温⼲燥)保存。
glp-1试剂盒说明书
人胰高血糖素样肽1(GLP-1)ELISA 定量检测试剂盒
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产品型号: 48T/96T
产品报价:
产品特点: 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法
(ELISA ),定量检测人血清、血浆及相关液体样本中
胰高血糖素样肽1(GLP-1)的含量
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断。
人胰高血糖素样肽1(GLP --1)定量检测试剂盒(ELISA )
使用说明书
【试剂盒名称】
人胰高血糖素样肽1(GLP-1)定量检测试剂盒(ELISA )
【试剂盒用途】
定量检测人血清、血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1(GLP-1)的含量。
【检测原理】
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA )。将标准品、待测样本加入到预 先包被人胰高血糖素样肽1(GLP-1)单克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤 除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加 入底物A 、B ,底物(TMB )在辣根过氧化物酶(HRP )催化下转化为蓝色产物,在酸的作 用下变成黄色,颜色的深浅与样品中人胰高血糖素样肽1(GLP-1)浓度呈正相关,450nm 波 长下测定OD 值,根据标准品和样品的OD 值,计算样本中人胰高血糖素样肽1(GLP-1)含
量。
【试剂盒组成】
1 酶标包被板12孔×8条7 显色剂A液6mL
2 标准品0.3mL×6管8 显色剂B液6mL
3 20倍浓缩洗涤液25mL 9 终止液6mL
4 样本稀释液6mL 10 说明书1份
5 特殊稀释液6mL 11 封板膜2张
CrystalChem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒
CrystalChem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒
小鼠胰岛素ELISA(超灵敏)用于仅使用5µL样本量来量化血清、血浆、细胞培养物和液体中的小鼠胰岛素水平。
Crystal Chem超灵敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒参数:
样本类型:血清、血浆、细胞培养或液体
规格:96 wells (12 x 8 well strips)
液态试剂(标准试剂除外)
灵敏度:0.05纳克/毫升
分析范围:低范围分析:0.1-6.4 ng/mL
宽范围分析:0.1-12.8纳克/毫升
高量程分析:1-64纳克/毫升
精密批内精密变异系数≤ 10.0%
批间精密度≤ 10.0%
储存温度2-8°C
Crystal Chem 试剂盒特色:
小样本量:只需要5µL样品,非常适合小批量的小鼠样品。
高度灵敏和较精确:使用5µL的样品和CV,该分析的灵敏度为0.05 ng/mL≤ 10.0%.
动态范围:范围为0.1-64.0 ng/mL,仅使用5µL样品。使用同一试剂盒进行低胰岛素和高胰岛素分析。
高特异性:这是一个易于使用的试剂盒,对小鼠胰岛素具有高度特异性,结果不到3.5小时。
标准曲线:
雷生物小鼠胰岛素ELISA试剂盒使用手册说明书
RayBio® Mouse Insulin ELISA Kit
Catalog #: ELM-Insulin
User Manual
Last revised June 14, 2021
Caution:
Extraordinarily useful information enclosed
ISO 13485 Certified
3607 Parkway Lane, Suite 100
Norcross, GA 30092 Tel: 1-888-494-8555 (Toll Free) or 770-729-2992, Fax:770-206-2393
Web: , Email: *******************
RayBiotech, Inc.
________________________________________
RayBio® Mouse Insulin ELISA Kit Protocol
Table of Contents
Section Page # I.Introduction3
II.Storage4
III.Reagents4
IV.Additional Materials Required4
V.Reagent Preparation5
VI.Assay Procedure6
VII.Assay Procedure Summary7
VIII.Calculation of Results
A. Typical Data
B. Sensitivity
C. Spiking & Recovery
ALPCO公司试剂盒之胰岛素
ALPCO公司试剂盒(一)----胰岛素
ALPCO(American Laboratory Products Company)成立于1990年,ALPCO公司总部位于美国,公司从成立初期就致力于为生物医药领域提供高质量的免疫检测产品。经过20年的发展,美国ALPCO公司已经从初期的进出口贸易商和代理分销商转变为专业的免疫学检测产品研发、生产和销售为一体的高科技生物公司。特别是在Diabetes and Obesity糖尿病和肥胖研究领域,美国ALPCO公司提供human insulin ELISA Kit、mouse insulin ELISA Kit、
rat insulin ELISA Kit、GLP-1(Active 7-36)ELISA Kit、GLP-1(7-36 and 9-36)ELISA Kit、Glucagon (Human, Mouse, Rat) ELISA Kit、C-peptide ELISA Kit等免疫检测试剂盒产品。
全国指定代理上海优宁维生物科技有限公司。
部分ALPCO公司胰岛素现货如下:
Insulin (Mouse) Ultrasensitive ELISA Kit(For Research Use Only)
产品货号:80-INSMSU-E01
Format: ELISA / EIA
Sample Type:serum, plasma
Sample Size: 5 µl or 25 µl
Size: 96 wells
Range: 0.025 - 6.9 ng/ml
胰岛素样生长因子结合蛋白3 定量测定试剂盒(酶联免疫法)使用说明书
200 ng/mL”来报告。
样本数据分析:
这些数据仅用于作为例子介绍,不能用于任何样本结果的计算。
孔 A1, A2 B1, B2 C1, C2 D1, D2 E1, E2 F1, F2 G1, G2 H1, H2
ELISA检测胰岛素
ELISA检测胰岛素
ELISA法检测人胰岛素
1,将所有的试剂和样本平衡至室温;
2,在微孔板中加入25ul校准品、标本,均为2复孔;
3,每孔加入酶结合液100ul;
4,室温避光震荡孵育1h;
5,手工洗板:每孔加200ul洗液,将微孔板内液体甩出,倒扣于吸水纸上使孔内液体完全流出,如此反复5次;
6,每孔加入200ul的TMB;
7,室温避光孵育15min;
8,在微孔板中每孔加入50ul终止液,震荡5S确保溶液充分混合;
9,读取450nm处吸光度,根据标准品绘制标准曲线,代入曲线计算胰岛素浓度,取平均浓度;
10,GSI = HG:胰岛素的量[IV]/ LG:胰岛素的量[IV]
小鼠胰岛素(Insulin)说明书
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。
试剂盒组成:
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上
清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程
中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/
分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞
牛胰岛素样生长因子1IGF1酶联免疫分析ELISA
牛胰岛素样生长因子-1(IGF-1)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T
3μg/L -240μg/L
使用目的:
本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量。实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平。用纯化的牛胰岛素样生长因子-1(IGF-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素样生长因子-1(IGF-1),再与HRP标记的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中牛胰岛素样生长因子-1(IGF-1)浓度。
试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶
2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品(480μg/L)0.5ml×1瓶
3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份
5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张
6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
小鼠胰岛素(Insulin)说明书
小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。
试剂盒组成:
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份
封板膜2片(48)2片(96)
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存
标准品:18mIU/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存
样本处理及要求:
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上
ELISA检测胰岛素
ELISA法检测人胰岛素
1,将所有的试剂和样本平衡至室温;
2,在微孔板中加入25ul校准品、标本,均为2复孔;
3,每孔加入酶结合液100ul;
4,室温避光震荡孵育1h;
5,手工洗板:每孔加200ul洗液,将微孔板内液体甩出,倒扣于吸水纸上使孔内液体完全流出,如此反复5次;
6,每孔加入200ul的TMB;
7,室温避光孵育15min;
8,在微孔板中每孔加入50ul终止液,震荡5S确保溶液充分混合;
9,读取450nm处吸光度,根据标准品绘制标准曲线,代入曲线计算胰岛素浓度,取平均浓度;
10,GSI = HG:胰岛素的量[IV]/ LG:胰岛素的量[IV]
人胰岛素(INS)定量检测试剂盒(ELISA)
仅供科研使用,不得用于临床检验。
人胰岛素(INS)定量检测试剂盒(ELISA)说明书
【产品名称】
通用名称:人胰岛素(INS)定量检测试剂盒(ELISA)
英文名称:Human Insulin (INS) ELISA KIT
【包装规格】
48人份/盒,96人份/盒
【预期用途】
仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人胰岛素(INS)的浓度。
【检验原理】
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗人胰岛素(INS)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入人胰岛素(INS)校准品和待测样本,再加入另一株HRP标记的抗人人胰岛素(INS)抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中人人胰岛素(INS)的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中人人胰岛素(INS)的浓度。
主要成分
mU/mL
明HBs抗原阴性,HIV1、HIV2和HCV抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶标仪
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
7、无粉一次性乳胶手套
8、质控品(可从蓝图生物科技产品研发系统中选择)
ELISA 检测试剂盒 说明书
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
人(Human Human))17-17-羟皮质类固醇(羟皮质类固醇(羟皮质类固醇(17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS)
)ELISA 检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被17-羟皮质类固醇(17-OHCS)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇(17-OHCS)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1.
血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞
刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地
分离。2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4.
组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟
取上清。5.
保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于
-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱操作注意事项1.
试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的
胰岛素样生长因子I测定试剂盒
I C S11.100
C44
中华人民共和国医药行业标准
Y Y/T1674 2019
胰岛素样生长因子Ⅰ测定试剂盒
I n s u l i n-l i k e g r o w t h g a c t o rⅠt e s t i n g k i t
2019-10-23发布2020-10-01实施
目 次
前言Ⅲ
1 范围1
2 规范性引用文件1
3 分类1
4 要求1
5 试验方法2
6 标签和使用说明书4
7 包装㊁
运输㊁贮存4 参考文献5
前言
本标准按照G B/T1.1 2009给出的规则起草㊂
请注意本文件的某些内容可能涉及专利㊂本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任㊂
本标准由国家药品监督管理局提出㊂
本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会(S A C/T C136)归口㊂本标准起草单位:中国食品药品检定研究院㊁河南省医疗器械检验所㊁郑州安图生物工程股份有限公司㊁深圳市新产业生物医学工程股份有限公司㊁西门子医学诊断产品(上海)有限公司㊂本标准主要起草人:于婷㊁曲守方㊁孙楠㊁黄杰㊁张娟丽㊁李晓霞㊁卫文峰㊁袁锦云㊁汪少颖㊁南钢㊂
胰岛素样生长因子Ⅰ测定试剂盒
1 范围
本标准规定了胰岛素样生长因子Ⅰ测定试剂盒的分类㊁要求㊁试验方法㊁标签和使用说明书㊁包装㊁
运输㊁贮存㊂本标准适用于以双抗体夹心法为原理定量测定胰岛素样生长因子Ⅰ的试剂盒,包括以酶标记㊁(电)
化学发光标记㊁(时间分辨)荧光标记等标记方法的免疫分析试剂盒㊂本标准不适用于:用胶体金或其他方法标记的半定量测定胰岛素样生长因子Ⅰ的试剂(如:试纸条等);用125Ⅰ等放射性同位素标记的各类胰岛素样生长因子Ⅰ放射免疫或免疫放射试剂盒㊂
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胰岛素ELISA试剂盒
(德国DRG:EIA2935)
1、前言说明
DRG公司的胰岛素酶免试剂盒可用于人血清和血浆中(加入了肝素或柠檬酸的血浆)胰岛素的定量检测。此检测试剂盒仅供体外诊断用。
胰岛素是调节葡萄糖代谢的主要激素,它由朗格汉氏小岛的β细胞合成分泌,并以前胰岛素的前体形式存在,前胰岛素可加工形成C肽和胰岛素。这两种激素都以等量形式分泌到门脉循环中。成熟的胰岛素分子由两条多肽链组成,A链和B链(分别21个和30个氨基酸)。这两条链通过键内二硫键而连接到一起。胰岛素的分泌主要受血浆葡萄糖浓度的影响,这种激素有一系列重要的代谢功能。它的主要功能是通过葡萄糖的运送来控制外周组织中葡萄糖的摄取和利用。胰岛素和其它低血糖激素的作用(如抑制肝糖原的异生和糖原分解)可被高血糖激素(胰高血糖素,肾上腺素,生长激素和皮质醇)的作用中和掉。在胰岛素依赖性的糖尿病(IDDM)和其它疾病例如垂体机能减退疾病中,胰岛素的浓度会明显降低。在非胰岛素依赖性的糖尿病患者、肥胖患者、胰岛素瘤患者和一些内分泌功能紊乱(如库欣综合症和支端肥大症)患者的体内,其胰岛素的水平会上升。
2、实验原理
DRG公司的胰岛素酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶联免吸附实验(ELISA),反应板上的微检测孔包被有能结合胰岛素分子上独特抗原位点的单克隆抗体。一份含有内源性胰岛素的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育,该酶联物是一种生物素标记的抗胰岛素抗体。孵育后,用洗涤液洗去未结合的酶联物。在第二次温育时,链亲和素过氧酶复合物结合到生物素化抗胰岛素抗体上,过氧酶复合物的结合量与样品中胰岛素的浓度成正比。加入底物液后,所显示的颜色强度与病人样品中胰岛素的浓度成正比。3、试剂盒成分
1) 微孔板:12×8,96孔,包被抗胰岛素的单克隆抗体。
2) 零标准品:1支,3ml,即用,0μIU/ml。
3) 标准品1-5:5支,1ml,即用,;;25;50;100μlU/ml。
4) 酶联物:1支,5ml,即用,生物素化的鼠单克隆抗体。
5) 酶复合物:1支,7ml,即用,辣根过氧化物-链亲和素复合物。
6) TMB底物液:1支14ml 即用。
7) 终止液:1支14ml 即用包含硫酸,请勿接触终止液,以免刺激或着烧皮肤。
8) 洗涤液:1瓶,30ml,40倍浓缩,见试剂准备。
注意:用样品稀释的零标准品视需要而定。
4、实验所需材料(但试剂盒不提供)
1)酶标仪
2)标准移液器
3)吸水纸
4)蒸馏水
5、试剂的储存与稳定性
所有的未开启的试剂在2-8℃下储存至保质期,不要使用过期的试剂。所有开启的试剂应在2-8℃下储存。一旦打开微孔板的包装,需将其重新密封。
6、样品的准备
将所有的试剂和所需要的板条在使用前平衡至室温。
洗涤液:用1170ml的蒸馏水稀释30ml浓缩的洗涤液,最终得到的容积为1200ml,稀释好的洗涤液在室温下可稳定存放两个星期。
7、样品的收集
此ELISA试剂盒可使用血清也可使用(只有肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆)血浆作为样品。不能使用明显溶血﹑黄疸和脂血的样品。
血清:静脉穿刺采集全血,待其凝血,在室温下离心分离血清。
血浆:将全血采集到含有抗凝剂的离心管,采集后立即离心分离。
8、样品的储存:
样品盖好盖子后,可在实验前2-8℃下储存5天,要更长时间储存,应在-20℃下冻存。在开始实验前应避免反复冻融样品。
9、样品的稀释:
在第一次实验中,要是样品的浓度高于最高标准品,则样品应用按实验步骤所描述的10倍或100倍稀释。在计算浓度时需乘以此稀释度。
例子:
a)按1:10稀释:10μL的血清+90μL的零标准品(充分摇匀)。
b)按1:100释稀:10μL按a)稀释的血清+90μL的零标准品(充分摇匀)
10、实验步骤
所有的标准品、质控品和样品都必须做双份检测以确保所有微孔的检测条件都一样。1)将所需数目的板条置于板架上。。
2)用一次性吸嘴将标准品﹑质控品和样品分别25μL加入相应的检测孔中。
3)每孔加入25μL的酶联物。
4)充分混合10秒,在此步骤中充分混合非常重要。
5)室温下温育30分钟。
6)快速弃去检测孔中的内含物,每孔加入400μL的洗涤液洗板三次,在吸水纸上拍干以除去残余液体。注意:洗板步骤是否正确操作会明显影响实验的灵敏度和精确度。7)每孔加入50μL的酶复合物。
8)在室温下温育30分钟。
9)快速弃去检测孔中的内含物,每孔加入400μL的洗涤液洗板三次,在吸水纸上拍干以除去残余液体。
10)每孔加入50μL的底物液。
11)在室温下温育15分钟。
12)每孔加入50μL的终止液终止反应。
13)在加终止液后10分钟内于450±10nm处读取OD值。
11、计算结果:
1) 计算标准品﹑质控品和病人样品的平均吸光度。
2) 以吸光率为Y轴,浓度为X轴,按照从标准品中获得的平均吸光率和其相对应的浓
度值,绘制一条标准曲线。
3) 利用样品的平均吸光率,在标准曲线上得出其相应的浓度值,
4) 自动方法:使用计算机三次方模式﹑四参数模式或双对数函数的计算机程序可得到
结果。
5) 样品的浓度可从标准曲线上直接获取。样品的浓度高于最高标准品的浓度则需进一
步稀释。在计算浓度的时候,要乘以样品的稀释倍数。
标准品吸光率(450nm)
零标准品(0 μIU/ml)
标准品1(μIU/ml)
标准品2(μIU/ml)
标准品3(25 μIU/ml)
标准品4(50 μIU/ml)
标准品5(100 μIU/ml)
参考值:
建议各实验室建立自己的正常值与非正常值。
在一明显正常成年人的研究中,用DRG公司的胰岛素ELISA试剂盒进行检测得到如下数值:2-25μIU/ml
本译文仅供参考,详情请以原文为准。
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