生物化学实验指南 (1)
生物化学实验操作指南
生物化学实验操作指南一、实验前的准备工作在进行生物化学实验之前，我们需要做一些准备工作，以确保实验的顺利进行。
首先，我们需要检查实验室的安全设施是否完备，如灭火器、安全眼镜、实验台等。
其次，我们需要准备实验所需的试剂和设备，包括试管、移液器、天平等。
同时，我们还需要检查这些试剂和设备的质量和完整性，以免对实验结果产生干扰。
最后，我们需要阅读实验操作指南，了解实验的目的、步骤和注意事项。
二、实验步骤1. 实验前的样品处理在进行生物化学实验之前，我们通常需要对样品进行处理。
例如，如果我们要提取蛋白质，我们需要将样品细胞破碎，并使用离心机将细胞碎片和细胞核分离。
如果我们要提取核酸，我们需要使用酶来消化细胞壁，并使用离心机将细胞碎片和细胞核分离。
2. 试剂的配制与标定在进行生物化学实验中，我们通常需要配制一些试剂。
例如，我们可以配制缓冲液、酶液等。
在配制试剂之前，我们需要准确称取所需的化学品，并按照实验操作指南中的比例配制。
同时，我们还需要标定试剂的浓度，以确保实验结果的准确性。
3. 实验操作在进行生物化学实验时，我们需要按照实验操作指南中的步骤进行操作。
例如，如果我们要进行酶活性测定实验，我们首先需要将样品和试剂加入试管中，然后在适当的温度和pH下进行反应。
在反应过程中，我们需要定时取样，并使用分光光度计等设备测定反应的吸光度。
最后，我们需要根据实验数据计算出酶的活性。
4. 数据处理与分析在完成实验后，我们需要对实验数据进行处理和分析。
例如，我们可以使用统计学方法对数据进行统计分析，并绘制图表来展示实验结果。
同时，我们还可以使用生物信息学工具对实验数据进行进一步的分析，如序列比对、结构预测等。
三、实验注意事项在进行生物化学实验时，我们需要注意以下几点：1. 实验操作要规范，遵守实验室的安全操作规程，如佩戴实验服和手套，避免接触有害物质等。
2. 试剂的使用要准确，按照实验操作指南中的比例使用，避免使用过量或不足。
生物化学-学习指南 一.填空 1.当溶液中pH值小于蛋白质的pI时,该
生物化学-学习指南一．填空1．当溶液中pH值小于蛋白质的pI时，该蛋白质带电荷，在电场中向极移动。
2．胞质中催化丙酮酸生成乳酸的酶是。
3. 体内ATP生成的最主要的方式是。
4. 核酸对紫外线吸收的最大值在波长 nm。
5.胸腺嘧啶的代谢终产物是；胞嘧啶的代谢终产物是。
6.蛋白质合成过程中，催化氨基酸活化反应的酶是。
7．碱性氨基酸包括有、、。
8．结合酶由和构成。
9. VLDL的功能是转运。
10．真核细胞hnRNA的生成由催化。
11．终止密码的特点有_______、_______、________。
12. RNA合成时与DNA模板中碱基A对应的是_________,与G对应的是。
13．血浆脂蛋白2种分类方法分别是和。
14．氨基酸分解代谢的最主要反应是作用。
15．竞争性抑制时km 、Vmax 。
16．是酶的无活性前体，它没有活性是因为没有形成或暴露酶的。
17．当溶液中pH值大于蛋白质的pI时，该蛋白质带电荷，在电场中向极移动。
18．糖原合成的限速酶是，脂肪动员的限速酶是。
19．糖无氧分解的终产物是。
20．酶的化学修饰调节最常见的方式是。
21．三羧酸循环的亚细胞部位是在。
22．氨的主要来源是，氨的主要去路是合成。
23．翻译的产物是，其合成的模板是。
24.核酸杂交的原理是它可发生和。
25．检测ALT可协助诊断，检测AST可协助诊断。
26．组成蛋白质的基本单位是，主要有种。
27．竞争性抑制剂与结构相似，可与其竞争酶的。
28．是糖、脂和蛋白质最后分解的共同代谢途径，释出的能量主要以形式储存。
29．催化丙酮酸羧化支路的两个酶是、。
30．糖酵解的亚细胞部位在。
31．1分子葡萄糖分解为CO2和H2O净生成ATP分子数为。
32．氰化物阻断呼吸链的机理是其与结合。
33．脂肪酸β－氧化的亚细胞部位是。
34．糖的主要去路是，糖异生的主要脏器是在。
35．DNA转录产物延长方向是。
36．分子在蛋白质合成过程中主要的功能是作为各种氨基酸的载体。
生物化学试验指导书
生物化学实验指导适用专业：农学、植物保护、园艺、农产品质量与安全、中草药栽培与鉴定目录生物化学实验室规则 (1)实验记录及实验报告 (2)实验一植物DNA的提取与测定 (3)实验二蛋白质的两性性质及等电点测定 (7)实验三温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 (9)实验四还原糖和总糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法 (12)实验五糖的颜色反应和定性鉴定 (14)实验六双缩脲法测定蛋白质含量 (19)附录 (21)附录1 生物化学实验基本操作 (21)附录2 实验样品的制备 (25)附录3 常用试剂的配制 (26)附录4 市售常用酸、碱的浓度 (26)附录5 一般化学试剂的分级 (27)附录6 易变质及需特殊方法保存的试剂 (27)附录7 标准缓冲液的配制 (28)附录8 常用缓冲液的配制方法 (29)附录9 干燥剂 (36)附录10 硫酸铵饱和度的常用表 (37)附录11 离心机转数(r/min)与相对离心力(RCF)的换算 (38)生物化学实验室规则1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2．实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3．实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4．实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5．使用仪器、药品、试剂和各物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教师，不得擅自动手检修。
6．实验室内严禁吸烟！加热用的电炉应随用随关，严格做到：人在炉火在，人走炉火关。
生物化学实验指导
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段，通过实验操作，我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验，提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备（一）了解实验目的在进行每个实验之前，务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注，并理解实验结果的意义。
（二）预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料，熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方，可以向老师或同学请教。
（三）准备实验用品根据实验要求，准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好，试剂是否过期，并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全（一）个人防护在实验过程中，要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品，以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性，遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂，如果不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。
（三）生物安全对于涉及生物样本的实验，要遵循生物安全操作规范，防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时，要在无菌条件下进行，并妥善处理废弃物。
（四）防火防爆实验室中严禁烟火，要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体，要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用（一）移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头，并进行校准。
移液时要保持垂直，缓慢按下和释放按钮，避免产生气泡。
（二）离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品，选择合适的转速和离心时间。
离心结束后，要等离心机完全停止转动后再打开盖子，以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准，选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁，溶液无气泡和杂质。
（四）pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
生物化学实验指导电子版
生物化学实验指导电子版生物化学实验指导一、试剂1. 氯仿：用于芳香族化合物的溶解、清洗；2. 硫酸：用于提取溶液中的某些物质，同时也作为能溶解蛋白质的酸性溶剂；3. 乙酸：用于碱化反应，可能提升蛋白质的溶解性；4. 盐酸：用于常温下蛋白质的溶解；5. 磷酸：用于常温下极酸性物质的溶解；6. 氯化钾：用于静电，渗析，也用于调节溶液酸碱度；7. 硝酸铵：用于碱化反应，可以提高某些物质的溶解度；8. 碳酸二铵：用于碱化反应，也可以帮助提高溶液中某些物质的溶解度；9. 氯化钠：用于溶液稀释，也可以作为是pH调节剂；10. 氢氧化钠：用于调节溶液的酸碱度；二、器材1. 酸性硫酸铜滴定池：用于检测溶液中硫酸盐的浓度；2. 温度控制仪：用于控制反应温度；3. 硅胶色谱柱：用于分离混合液中的物质；4. 浴室：用于沸煮某类蛋白；5. 真空泵：用于将液体抽出；6. 多管共振探头：用于测定比色法中的较高浓度；7. 比色杯：用于比色现象；8. 高效液相色谱仪：用于快速地分离多种物质；9. 微型反应釜：用于芳香族化合物的反应；10. 微量称量管：用于精确称量少量物质；三、步骤1. 准备：将所需试剂和器材准备好；2. 溶解：使用氯仿等溶剂将芳香族化合物溶解；3. 提取：用硫酸和乙酸将混合液中的物质进行提取；4. 能谱检测：采用高效液相色谱仪，对混合液进行谱线检测；5. 碱化反应：利用硝酸铵或其他碱性物质进行溶液的碱化反应；6. 比色：用比色杯分析混合物中物质浓度；7. 极化：利用多管共振探头检测混合液中的蛋白质浓度；8. 冷却：将比色法中高浓度物质稀释后，再加入冰水将温度控制在冰点以下；9. 沸煮：将某类蛋白放入温度控制仪能控制的浴室中，进行沸煮；10. 离心：利用真空泵将液体从比色杯中离心，以便收集蛋白质沉淀。
大四选修实验课生物化学实验教学大纲
大四选修实验课生物化学实验教学大纲一、实验课程简介1.1 实验课程名称：生物化学实验1.2 实验课程性质：选修实验课1.3 实验课程学分：2学分1.4 实验课程学时：36学时二、实验课程目标2.1 培养学生使用生物化学实验仪器和设备的基本技能。
2.2 培养学生进行生物化学实验的观察能力。
2.3 提高学生的实验设计和数据分析能力。
2.4 培养学生的科学研究思维和合作能力。
三、实验课程内容3.1 生物化学实验原理和基本操作3.1.1 生物化学实验室安全操作规范3.1.2 常用生物化学实验仪器和设备的使用方法3.2 常见生物分子的提取与纯化实验3.2.1 蛋白质提取和纯化实验3.2.2 DNA提取和纯化实验3.2.3 RNA提取和纯化实验3.3 酶动力学实验3.3.1 酶的浓度对反应速率的影响实验 3.3.2 酶的温度对反应速率的影响实验 3.3.3 酶的pH值对反应速率的影响实验 3.4 生物化学分析实验3.4.1 蛋白质浓度测定实验3.4.2 DNA含量测定实验3.4.3 RNA浓度测定实验3.4.4 酶活性测定实验3.5 生物分子特性分析实验3.5.1 蛋白质电泳实验3.5.2 DNA电泳实验3.5.3 RNA电泳实验3.6 细胞生物化学实验3.6.1 细胞色素氧化实验3.6.2 细胞代谢实验四、实验教学方法4.1 理论教学与实践相结合4.1.1 理论知识讲授4.1.2 实验操作演示4.2 实验课前准备4.2.1 实验课程大纲的讲解4.2.2 实验操作流程的演示4.3 实验课程实践操作4.3.1 学生实验操作指导4.3.2 学生自主探究实验4.4 实验数据收集与分析4.4.1 学生实验数据的记录和整理 4.4.2 实验数据的统计和分析4.5 实验总结与讨论4.5.1 学生实验报告撰写4.5.2 学生实验结果的讨论和总结五、实验教学评价方法5.1 实验报告的评分5.1.1 实验报告的内容完整性和准确性5.1.2 实验数据的整理和分析能力5.2 实验操作的评分5.2.1 实验过程的规范性和安全性5.2.2 实验结果的准确性和可重复性5.3 实验讨论的评分5.3.1 学生对实验结果的讨论和结论5.3.2 学生对实验中存在问题的思考和解决方案六、教材及参考资料6.1 教材：《生物化学实验原理与技术》6.2 参考资料：1. Berg, Jeremy M., Tymoczko, John L., & Gatto, Gregory J. S. (2012). Biochemistry (7th ed.).2. Nelson, David L., Cox, Michael M. (2017). Lehninger Principles of Biochemistry (7th ed.).七、实验教学大纲修订和调整7.1 实验教学大纲的修订和调整需根据教学实际需求进行。
生物化学实验设备使用指南
生物化学实验设备使用指南实验室是生物化学研究的重要场所，而实验设备的正确使用对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
本指南旨在帮助初学者正确、安全地使用生物化学实验设备，以提高实验效率和保障个人安全。
一、常用实验设备1. 水浴锅：用于固定温度恒温加热。
2. 离心机：用于离心沉淀、离心分离。
3. 分光光度计：用于测量吸光度，常用于测量DNA/RNA浓度。
4. PCR仪：用于核酸扩增实验。
5. 培养箱：用于培养微生物、细胞。
6. pH计：用于测量溶液的酸碱度。
7. 电泳仪：用于核酸、蛋白电泳分析。
8. 冷冻机：用于保存试剂和样品。
二、实验设备的正确使用方法1. 在使用水浴锅前，确保水的加热速度和温度符合实验要求，不要使用过高的温度。
2. 使用离心机时，不可超过其最大承载限制，避免出现不平衡导致的震动。
3. 分光光度计使用时，先校准仪器，避免背景干扰对测量结果产生影响。
4. PCR仪使用前检查反应管是否密封，避免反应出现泄漏。
5. 培养箱中应定期清洁和消毒，避免细菌感染交叉污染。
6. 在使用pH计时，避免电极受到损坏，使用后应清洁干净并进行存放。
7. 电泳仪使用时，注意电解液浓度和电压设置，确保实验安全进行。
8. 冷冻机设置恰当的温度，避免温度过高导致样品变质。
三、实验设备的安全使用注意事项1. 实验过程中需穿戴实验服、手套、护目镜等防护用具，严格遵守实验室安全规定。
2. 注意不可在设备工作状态下对设备进行维修保养，避免发生意外事故。
3. 严禁未经许可私自调节实验设备参数或操作，避免损坏设备或影响实验结果。
4. 实验结束后，及时清理和归还实验设备，维护设备的整洁和长期可靠使用。
通过本实验设备使用指南，希望广大生物化学实验室工作者能够更加熟练和安全地操作实验设备，提高实验效率和数据可靠性，确保实验室工作的顺利进行。
祝实验顺利！。
生物化学实验操作标准流程
生物化学实验操作标准流程实验目的：本实验旨在通过一系列生物化学实验，掌握生物化学实验的基本操作技能，培养实验操作能力，进一步巩固和增强生物化学知识。
实验原理：生物化学实验是利用生物体内某些特定化学反应的原理和方法，在实验室中进行的活动，旨在研究生物体内的生化过程、生化成分及其相互作用。
需要通过实验仪器的使用、试剂的配制、实验步骤的操作等一系列过程来确保实验顺利进行。
实验材料：试管、坩埚、实验动物、试剂、生物化学仪器等。
实验步骤：1. 实验前准备：清洗实验仪器，准备所需试剂，并检查实验动物的状态。
2. 实验操作：a. 锁定实验目标和方法；b. 配制试剂：根据实验要求，精确称量所需试剂，配制标准溶液；c. 进行实验：按照实验操作流程，逐步进行各项实验操作；d. 记录数据：准确记录实验数据，包括实验结果、出现异常情况等；e. 处理实验废物：将实验废物妥善处理，避免对环境造成污染。
实验注意事项：1. 实验操作时要戴好实验手套、口罩等防护用具，确保人员安全；2. 注意实验仪器的使用方法，避免损坏实验设备；3. 严格按照实验流程操作，不得擅自修改实验步骤；4. 学会分析实验结果，及时发现问题并采取措施解决；5. 实验结束后，保持实验室的整洁，及时清理实验废物。
实验总结：通过本次生物化学实验，我掌握了生物化学实验的操作标准流程，充分锻炼了实验技能，增强了对生物化学知识的理解和掌握。
生物化学实验是培养科学素养和实践能力的重要途径，希望通过不断实验实践，提高实验技能，为将来的科研工作做好准备。
以上便是生物化学实验操作标准流程，通过认真学习和实践，相信你会逐渐掌握生物化学实验的操作技能，取得更好的实验成果。
祝愿你在科学领域不断前行，成为优秀的生物化学研究者！。
生物化学实验指导手册
实验一、考马斯亮蓝G-250法测定可溶性蛋白质含量【实验目的】学习、掌握考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理和方法。
【实验原理】考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合则呈现蓝色。
染料的最大吸收从465nm变为595nm，蛋白质－染料复合物在595nm具有很大的光吸收值，蛋白质测定的灵敏度较高，最低检出量为1ug蛋白质。
本方法操作简便快捷，灵敏度高，测定范围1-1000ug。
【实验材料、仪器及试剂】1．材料：新鲜的植物材料2．仪器：722分光光度计，天平，离心机，研钵，容量瓶，试管，移液管，漏斗（1）标准牛血清蛋白质溶液：0.1mg/ml（2）考马斯亮蓝G-250溶液：【实验步骤】1．样品的提取：准确称取鲜样2克，用2ml蒸馏水在冰浴中研成匀浆，转移到25ml容量瓶中并定容。
在8000rpm冷冻离心10min，取上清液待测。
2．标准曲线的绘制：取8支具塞试管，按表1加入试剂。
将上面8支试管摇匀，放置5分钟后，用1cm光径比色杯在595nm下比色，记录吸光值，以蛋白质浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
根据样品吸光值在标准曲线查得蛋白质含量。
【结果计算】C × V T样品中蛋白质含量（ug/g.FW）＝V S×W F×1000式中：C为查标准曲线值（ug）；V T为提取液总体积（ml）；V S 为测定时加样量（ml）；W F为样品鲜重（g）。
实验二植物组织中游离氨基酸总量的测定【实验目的】学习掌握鲜材料中游离氨基酸含量测定的原理和方法。
【实验原理】当氨基酸与水合茚三酮共热时，能定量地生成酮茚胺。
该产物显示蓝紫色，称为Ruhemans紫。
其最大吸收值在570nm ，并在一定范围内与氨基酸含量成正比。
氨基酸与茚三酮的反应分为两步进行，第一步：氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步：所形成的还原型茚三酮与另一个茚三酮分子和氨缩合生成Ruhemans紫。
《生物化学》实验指导书
《生物化学》实验指导书适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程生物与食品工程学院生物科学系生物化学实验细那么为了保证生物化学实验的顺利进展，培养同学们掌握良好、规X 的生物化学根本实验技能，特制定以下实验细那么，请同学们严格遵守。
1.实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2.严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3.进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。
4.实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5.实验中要注意节约药品与试剂，保护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。
否那么，因非实验性损坏，由损坏者赔还。
6.使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。
7.做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。
8.实验后，要与时完成实验报告。
2006年1月目录生物化学实验细那么··1目录··2实验1 蛋白质的沉淀、变性反响··3实验2 醋酸纤维素薄膜电泳别离血清蛋白··6实验3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量··11实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量··16实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳··20实验6 唾液淀粉酶的性质和活力测定··24实验7生物氧化与电子传递··25实验8 植物体内的转氨基作用··27实验1 蛋白质的沉淀、变性反响〔3学时〕目的要求1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2. 了解沉淀蛋白质的几种方法与其实用意义。
生物化学实验指导书.docx
生物化学实验指导书生命科学与工程学院2007. 09实验一总糖的测定 (2)实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应 (5)实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应 (9)实验四氨基酸的分离鉴定一纸层析法 (13)实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (15)实验六酪蛋白的制备 (18)实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (20)实验八肝细胞核中核酸（RNA和DNA）的分离与测定 (22)实验九紫外吸收法测定DNA含量 (25)实验十维生素C的定量测定 (26)实验-一酶的特性 (29)实验十三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 (37)实验十四植物体内的转氨基作用 (40)实验十五SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (44)实验十六葡聚糖凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (50)实验十七质粒DNA的提取 (55)实验十八质粒DNA的酶切 (57)实验十九PCR基因扩增 (59)实验二十琼脂糖凝胶电泳检测DNA (61)实验二十一真核生物基因组DNA制备 (63)附录 (65)实验一总糖的测定一、目的掌握肓接测定法测定总糖的原理和方法。
二、原理样品经处理除去蛋白质等杂志后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糊水解为还原性单旃, 以直接滴定法测定水解后样品屮的还原糖总量。
三、器材1•电炉2.滴定管3.锥形瓶4.容量瓶四、试剂1.6moI/L盐酸溶液2.0. 1%甲基红乙醇溶液:称取0. lg甲基红,用60%乙醇溶解并定容至100mlo3.20%氧氧化钠溶液。
4.0. 1%转化糖标准溶液：称取105°C烘干至恒重的纯蔗糖1.9000g,用水溶解并移入1000ml容量瓶中,定容，混匀。
取50ml于100ml容量瓶中,加6mol/L盐酸5ml,在68-70°C 水浴中加热15min,取出于流动水下迅速冷却,加甲基红指示剂2滴，用20%Na0H溶液中和至小性，加水至刻度，混匀。
此溶液每毫升含转化糖lmg。
5•费林氏A液:称取15g (CuS04 ・5H20)及0.05g次甲基蓝,溶于水并稀释到1L。
生物化学实验-实验的基本操作及要求
实验器材的干燥
实验前确保所有实验器材都已彻底干 燥，以防止实验过程中出现意外。
实验试剂的准备
01
02
03
试剂的储存
根据试剂的特性选择合适 的储存方式，确保试剂稳 定且有效。
试剂的配制
按照实验要求准确配制试 剂，并记录详细的配制过 程和结果。
试剂的纯度与质量
确保所使用的试剂纯度高、 质量好，以获得准确的实 验结果。
实验环境的准备
实验室安全
确保实验室具备必要的安全设施，如灭火器、急救箱等。
实验室清洁
保持实验室整洁，定期清理和消毒实验台面和地面。
实验室温度和湿度的调节
根据实验需求，调节实验室温度和湿度，以确实验条件的一致性。
02
实验操作
实验操作流程
实验前准备
明确实验目的、原理和步 骤，准备好所需的仪器、 试剂和材料。
实验结果交流与讨论
小组讨论
在实验结束后，组织小 组讨论，分享实验结果 和心得体会，促进相互 学习。
学术交流会议
参加学术交流会议，向 同行展示自己的实验结 果，听取他人的意见和 建议。
论文发表
将实验结果整理成学术 论文，发表在学术期刊 上，供同行参考和评价。
实验结果的应用与推广
实际应用
将具有实际应用价值的实验结果应用于生产 实践或解决实际问题。
03
实验要求
实验结果的要求
准确性
实验结果应准确反映实验过程和 现象，数据应真实可靠，误差在
可接受范围内。
重复性
实验结果应可重复，即相同条件 下，其他人或团队应能得出相同
的结果。
可比性
不同实验之间的结果应具有可比 性，以便进行比较和分析。
实验报告的要求
生物化学课程实验指导书
《生物化学》实验指导书适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程生物与食品工程学院生物科学系生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。
1.实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2.严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3.进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。
4.实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5.实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。
否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。
6.使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。
7.做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。
8.实验后，要及时完成实验报告。
2006年1月目录生物化学实验细则 (1)目录 (2)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应 (3)实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6)实验3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (11)实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (16)实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (20)实验6 唾液淀粉酶的性质和活力测定 (24)实验7生物氧化与电子传递 (25)实验8 植物体内的转氨基作用 (27)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应（3学时）目的要求1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3. 了解蛋白质变性与沉淀的关系。
4.了解蛋白质两性性质原理在水溶液中，蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
生化实验指南.
生物化学检验技术课程学习指南（适用于医学检验专业专科使用）生物化学及检验教研室编一、课程简介《生物化学检验》(临床生物化学检验、临床生化检验、生化检验、生化检验学、临床生物化学和生物化学检验、临床生物化学及生物化学检验、临床生物化学、临床化学等)是对人体健康和患病时化学状态的研究以及用于诊断、治疗和预防疾病的化学试验方法的应用。
它的主要任务是研究人体器官、组织、体液的化学组成和进行着的生化过程，以及疾病、药物对这些过程的影响，为疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供信息和理论依据。
因此，《生物化学检验》既是一门研究人体健康和疾病时生理生化过程的医学基础理论学科，又是一门应用各种技术和方法分析机体健康和疾病时体液或组织样品中各种化学成分的医学应用技术学科，它在医学理论和医学实践中均具有相当重要的地位，是高等医学检验专业的一门主干学科和必修课程。
（一）课程目标通过本课程的学习，要求学生掌握生物化学检验的基础理论、基本知识和基本技能，能够从事检验医学的生化实验诊断操作、评价和应用，培养成为医学检验技术专业高级专门人才。
具体归纳为：1、掌握生物化学检验的基本理论、基本知识；2、具有娴熟的生物化学检验的操作技能；3、能够从事医学检验的生物化学实验诊断操作、评价和应用，具有独立的工作能力和解决实际问题的能力及创新意识；4、树立和培养学生良好的职业道德和从业素质。
根据《生物化学检验》课程在检验医学中的作用和地位，为便于学生对《生物化学检验》课程的学习，该该课程分为三个不同程度的要求：“掌握、熟悉和了解”。
“掌握”的内容，在授课时需要重点讲解，要求学生能全面理解，必须牢记并能融会贯通；“熟悉”的内容，要求学生能理解和记住概念与特点；“了解”的内容只扼要介绍有关知识概念或通过学生自学来认识和理解，有些则属于学科进展以及扩展知识面的内容。
在考试内容中，掌握的部分约占60％～70％，熟悉的部分约占20％～30％，了解的部分约占10％。
生物化学实验指南
实验一糖的呈色反应和定性鉴定目的要求(1) 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。
(2) 了解鉴定还原糖的方法及其原理。
Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应实验原理糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。
自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。
此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈颜色近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。
试剂Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入各待测糖溶液1 mL，然后加两滴Molish试剂，摇匀。
倾斜试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。
用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果。
Ⅱ. 蒽酮反应实验原理糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）作用生成蓝绿色复合物。
试剂蒽酮试剂：取0.2g 蒽酮溶于100mL 浓硫酸中，当日配制。
待测糖溶液，同Molish试验。
操作方法取试管，编号，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 ~ 3滴待测糖溶液，充分混匀，观察各管颜色变化并记录。
Ⅲ. 酮糖的Seliwanoff反应实验原理该反应是鉴定酮糖的特殊反应。
酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛。
后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物，反应仅需20-30秒。
醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应。
试剂Sediwanoff试剂：0.5g 间苯二酚溶于1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配制。
1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。
操作方法取试管，编号，各加入Sediwanoff试剂1mL，再依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀，同时放入沸水浴中，比较各管颜色的变化过程。
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实验一糖的呈色反应和定性鉴定目的要求(1) 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。
(2) 了解鉴定还原糖的方法及其原理。
Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应实验原理糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。
自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。
此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈颜色近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。
试剂Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入各待测糖溶液1 mL，然后加两滴Molish试剂，摇匀。
倾斜试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。
用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果。
Ⅱ. 蒽酮反应实验原理糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）作用生成蓝绿色复合物。
试剂蒽酮试剂：取0.2g 蒽酮溶于100mL 浓硫酸中，当日配制。
待测糖溶液，同Molish试验。
操作方法取试管，编号，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 ~ 3滴待测糖溶液，充分混匀，观察各管颜色变化并记录。
Ⅲ. 酮糖的Seliwanoff反应实验原理该反应是鉴定酮糖的特殊反应。
酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛。
后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物，反应仅需20-30秒。
醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应。
试剂Sediwanoff试剂：0.5g 间苯二酚溶于1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配制。
1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。
操作方法取试管，编号，各加入Sediwanoff试剂1mL，再依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀，同时放入沸水浴中，比较各管颜色的变化过程。
Ⅳ. Fehling试验实验原理费林试剂是含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。
硫酸铜与碱溶液混合加热，则生成黑色的氧化铜沉淀。
若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。
为防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehlin试剂中加入酒石酸钾钠，它与Cu2＋形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子，该反应是可逆的。
平衡后溶液内保持一定浓度的氢氧化铜。
费林试剂是一种弱的氧化剂，它不与酮和芳香醛发生反应。
试剂试剂甲：称取34.5g硫酸铜溶于500mL蒸馏水中。
试剂乙：称取125g NaOH 137g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
临用前，将试剂甲和试剂乙等量混合。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，各加入Fehling试剂甲和乙1mL。
摇匀后，分别加入4滴待测糖溶液，置沸水浴中加热2 ~ 3min，取出冷却，观察沉淀和颜色变化。
Ⅴ. Benedict试验实验原理Benedict试剂是Fehling试剂的改良。
Benedict试剂利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性较Fehling试剂弱，灵敏度高，干扰因素少。
试剂Benedict试剂：将170g 柠檬酸钠和100g 无水碳酸钠溶于800mL水中；另将17g 硫酸铜溶于100mL热水中。
将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅，最后定容至1000mL。
该试剂可长期使用。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入2mL Benedict试剂和4滴待测糖溶液，沸水浴中加热5分钟，取出后冷却，观察各管中的颜色变化。
Ⅵ. Barfoed试验实验原理在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度有明显差异。
Barfoed试剂为弱酸性。
单糖在Barfoed试剂的作用下能将Cu2+还原成砖红色的氧化亚铜，时间约为3分钟，而还原二糖则需20分钟左右。
所以，该反应可用于区别单糖和还原二糖。
当加热时间过长，非还原性二糖经水解后也能呈现阳性反应。
试剂Barfoed试剂：16.7g 乙酸铜溶于近200mL水中，加1.5mL冰醋酸，定容至250mL 即可。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入2mL Barfoed试剂和2 ~ 3滴待测糖溶液，煮沸2-3分钟，放置20分钟以上，比较各管的颜色变化。
注意事项（1）Molish反应非常灵敏，0.001％葡萄糖和0.0001％蔗糖即能呈现阳性反应。
因此，不可在样品中混入纸屑等杂物。
当果糖浓度过高时，由于浓硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈紫色，需稀释后再做。
（2）果糖与Seliwanoff试剂反应非常迅速，呈鲜红色，而葡萄糖所需时间较长，且只能产生黄色至淡黄色。
戊糖亦与Seliwanoff试剂反应，戊糖经酸脱水生成糠醛，与间苯二酚缩合，生成绿色至蓝色产物。
（3）酮基本身没有还原性，只有在变成烯醇式后，才显示还原作用。
（4）糖的还原作用生成氧化亚铜沉淀的颜色决定于颗粒的大小，Cu2O颗粒的大小又决定于反应速度。
反应速度快时，生成的Cu2O颗粒较小，呈黄绿色；反应速度慢时，生成的Cu2O颗粒较大，呈红色。
溶液中还原糖的浓度可以从生成沉淀的多少来估计，而不能依据沉淀的颜色来判断。
（5）Barfoed 反应产生的Cu2O沉淀聚集在试管底部，溶液仍为深蓝色。
应注意观察试管底部红色的出现。
思考题1. 列表总结和比较本实验六种颜色反应的原理和应用。
2. 运用本实验的方法，设计一个鉴定未知糖的方案。
实验二氨基酸的纸层析目的要求（1）学习纸层析的原理。
（2）掌握纸层析法分离混合氨基酸的操作方法。
实验原理纸层析是以滤纸作支持物，用一定的溶剂系统展开，使混合样品达到分离分析的层析方法。
其一般操作是将样品溶解在适当溶剂中，点样在滤纸的一端；再选用适当的溶剂系统，从点样的一端通过毛细现象向另一端展开，展开完毕，取出滤纸晾干或烘干，再以适当的显色剂或紫外灯、荧光灯下观察其图谱。
样品经展开后某一物质在纸层析谱上的位置常用比移值Rf来表示。
Rf=纸层析可看作是溶质（样品）在固定相与流动相之间的连续抽提，由于溶质在两相之间的分配系数不同而达到分离。
一定的物质在两相间有固定的分配系数，因而在恒定条件（液剂、PH、温度）下，各物质有固定的Rf值，据此可达到分析鉴定的目的。
由于滤纸纤维可吸收20～25%的水分；且其中6～7%以氢键形式与纤维素上羟基结合，一般条件下难脱去；所以纸层析实际上是以水相作固定相，展开的溶剂作流动相。
纸层析操作按溶剂展开方向可分为上行、下行和径向三种。
氨基酸分离一般用上行法。
上行法又分单向（成分较为简单的样品）和双向（单向时斑点重叠分离不开，于是在其垂直方向用另一种溶剂系统展层）。
双相层析谱可分辨十几种以上的样品。
层析溶剂要求：（1）被分离物质在该溶剂系统中Rf在0.05～0.8之间，各组分之Rf值相差最好能大于0.05，以免斑点重叠。
（2）溶剂系统中任一组分与被分离物之间不能起化学反应。
（3）被分离物质在溶剂系统中的分配较恒定，不随温度而变化，且易迅速达到平衡，这样所得斑点较圆整。
试剂和器材一、试剂0.1%（W/V）茚三酮丙酮液。
溶剂系统：正丁醇∶甲酸∶水＝15∶3∶2（V/V）；二、测试样品缬氨酸、组氨酸、谷氨酸、亮氨酸、甘氨酸、（组氨酸、谷氨酸、亮氨酸）混合物、（缬氨酸、甘氨酸）混合物。
三、器材层析缸25×40cm（×2）；培养皿15cm（×2）；喷雾器；毛细管内径0.1cm；电吹风；烘箱。
层析滤纸12×12cm；铅笔，尺。
操作方法一、点样取层析滤纸一张（12×12cm），在距纸边2cm处用铅笔划一基线，在此线上标出七个点，每个点相距2cm，标上顺序。
以毛细管吸取七种氨基酸样品溶液，（注意次序不能混淆），样品量约10-20uml，点的直径控制在2mm左右，不可过大。
用电吹风将斑点吹干，待样品干燥后再点一次。
滤纸上点样斑点干燥后，把滤纸卷成圆筒形，纸的两边以铬丝相连，但不可重叠相碰。
二、展层在层析缸中平稳的放入装有层析溶剂的培养皿。
将圆筒形滤纸放入，点样一端接触溶剂，以点样处不浸入溶剂为准。
待溶剂自下而上均匀展开，约2小时后溶剂到达距纸边0.5cm处取出滤纸，悬挂于室温中，用电吹风充分吹尽溶剂。
三、显色用喷雾器将茚三酮均匀地喷在滤纸上，然后悬滤纸于65℃烘箱内，烘30分钟，即可看到紫红色氨基酸斑点，将图谱上的斑点用铅笔圈出。
用直尺量出各斑点中心与原点的距离以及溶剂前沿与原点的距离，求出各氨基酸的Rf值。
将各显色斑点的Rf值与标准氨基酸的Rf值比较，可得知该斑点的准确成分。
注意事项（1）烘箱加热温度不可过高，且不可有氨的干扰，否则图谱背景会泛红。
（2）第一相溶剂最好在使用前再按比例混合，否则会引起酯化，影响层析效果。
（3）整个实验操作应戴手套进行。
思考题1．纸层析和柱层析、薄层层析、高效液相层析各有什么特点？实验三醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白目的要求（1）学习醋酸纤维素薄膜电泳原理；（2）掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白的操作技术。
实验原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。
它具有简便、快速、样品用量少，应用范围广，分离清晰，没有吸附现象等优点。
目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、多肽、核酸、同工酶及其他生物大分子的分析检测，是医学和临床检验的常规技术。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。
血清中含有白蛋白、α－球蛋白、β－球蛋白、γ－球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。
以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。
其中白蛋白的泳动速度最快，其余依次为α1－、α2－、β－及γ－球蛋白。
这些区带经洗脱后可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
试剂和器材一、试剂巴比妥缓冲液（pH 8.6，离子强度0.07）：巴比妥1.66g, 巴比妥钠12.76g，加水至1000ml。
置4℃冰箱保存，备用。
染色液：氨基黑10B 0.5g, 甲醇50ml, 冰醋酸10ml，蒸馏水40ml，混匀。
漂洗液：含95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，混匀。
透明液：冰醋酸25ml，无水乙醇75ml，混匀。
二、材料新鲜血清（未溶血）三、器材醋酸纤维薄膜（2×8cm），培养皿，点样器，电泳仪，玻璃板，粗滤纸，铅笔和直尺，竹镊子操作方法1. 浸泡：用镊子取醋酸纤维薄膜1张（识别光泽面和无光泽面，并在角上用笔做上记号），小心平放在盛有缓冲液的平皿中，浸泡30min左右。