纳豆激酶产生菌的固体发酵参数优化

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纳豆激酶高产菌株筛选及发酵条件优化

纳豆激酶高产菌株筛选及发酵条件优化
1000 800 600 400 200 0 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8
3.5.4
图 3 碳源对纳豆激酶活性的影响 Fig 3 The effect of nattokinase activity by carbon source
从图 3 可知,以甘油和蔗糖为碳源时,纳豆激酶 活性相对较高。同时考虑工业生产成本问题,故选用 蔗糖作为培养碳源。 3.5.2 氮源选择 由于本菌从大豆发酵制品中分离得到,所以选择 2 %的大豆、豆粕及蛋白酶处理的大豆及豆粕作为氮 源,24 h 后比较活性变化,结果见图 4。由结果可知, 用豆粕发酵时纳豆激酶活性相对较高。
图 6 初始 pH 对纳豆激酶活性的影响 Fig.6 The effect of nattokinase activity by pH
3.5.5 单因素正交实验 对碳源(蔗糖) 、氮源(豆粕) 、温度、起始 pH 4 四个因素,设计正交实验表 L9(3 )(见表 1)。 利用 DPS 数据处理软件对正交试验结果进行正 交试验方差分析,比较各列的极差 R 值,可以看出 RA>RB>RC>RD,即在实验所设定的各因素中,碳源对 纳豆激酶活性影响最大, 次是氮源和发酵温度, 而 pH 从而得到该 的影响较小, 最佳因素组合为 A2B2C2D2。 优化培养基(ZD)由 2 %蔗糖和 2 %豆粕组成,发酵 温度为 37 ℃,起始 pH 为 7.0。
Abstract: Fifteen Nattokinase-producing strains separated from Japanese food-natto were investigated in this study. The strain N-15 was selected from the examined striains for its high level of nattokinase-producing activity (900IU/mL). The fermention conditions of the strain N-15 for the nattokinase production were optimized by single factor and orthogonal tests. It was found that the optimal soybean residue content, sucrose content, incubation temperature and the original pH value were 20 %, 2 %, 37 ℃and 7.0, respectively. Under the optimized fermentation conditions, Nattokinase was produced with a high activity level of 1033 IU/mL. Key words: nattokinase; Bacillus natto; screened selection; optimization

纳豆激酶的发酵、纯化条件的优化及开发应用

纳豆激酶的发酵、纯化条件的优化及开发应用

纳豆激酶的发酵、纯化条件的优化及开发应用纳豆激酶的发酵、纯化条件的优化及开发应用引言:纳豆激酶(Nattokinase)是一种来源于传统日本食品纳豆中的蛋白酶,具有多种生物活性,如溶栓、抗凝血、抗炎等。

在过去的几十年里,人们对纳豆激酶的研究逐渐增多。

本文将重点讨论纳豆激酶的发酵过程、纯化条件的优化以及其在医药和食品工业中的应用。

纳豆激酶发酵的条件优化:纳豆激酶产生菌株的筛选和培养基的优化是纳豆激酶发酵的首要步骤。

选择产纳豆激酶能力较高的菌株,并通过基因工程方法来提高其产酶能力,可以大大增加纳豆激酶的生产效率。

培养基的研究也是优化纳豆激酶发酵条件的重要环节。

适当调整培养基的pH值、碳源、氮源和有机酸等参数,可以显著提高纳豆激酶的产量。

纳豆激酶的纯化方法:纳豆激酶是一种具有较高分子量的蛋白酶,因此采用离子交换、凝胶层析、亲和层析等技术进行纯化是常见的方法。

离子交换层析是利用蛋白质与离子交换柱上的固定相之间的静电作用进行分离,该方法具有简便、高效的特点。

凝胶层析则是基于蛋白质在固定相的排阻效应分离的技术,可以纯化目标蛋白酶。

亲和层析则是利用目标蛋白酶与亲和基质之间的特异结合来纯化蛋白质。

综合应用这些方法,可以得到较纯的纳豆激酶。

纳豆激酶的应用前景:纳豆激酶具有多种生物活性,因此在医药、保健品和食品工业中具有广阔的市场前景。

首先,在医药领域,纳豆激酶被广泛应用于溶栓治疗,可以降低血栓形成的风险。

同时,纳豆激酶还具有抗凝血、抗炎、降低血脂等功能,因此也可以用于治疗心血管疾病。

其次,纳豆激酶可以作为保健品,用于改善心脑血管健康、抗衰老和增强免疫等作用。

此外,纳豆激酶还可以用作食品添加剂,以增加食品的营养价值和保鲜效果。

结论:纳豆激酶发酵、纯化条件的优化以及其在医药和食品工业中的应用有着巨大的潜力。

通过选择高产纳豆激酶菌株和优化培养基条件,可以提高纳豆激酶的产量。

同时,离子交换、凝胶层析和亲和层析等技术可以有效纯化纳豆激酶。

纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基的优化_帅明

纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基的优化_帅明

纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基的优化帅明黄占旺牛丽亚(江西农业大学食品科学与工程学院南昌330045)摘要为优化纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基,采用微生物固态发酵技术,以固态发酵后的活菌数、芽孢数、蛋白酶及α-淀粉酶活力为指标,对纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基组成及配比,添加碳源、氮源种类及浓度,培养基的含水量进行优化研究。

试验结果表明,在玉米粉与麦麸配比3∶7、葡萄糖2%、硝酸铵0.5%、水60%条件下发酵效果最好。

关键词纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基文章编号1009-7848(2009)01-0143-05纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto )具有改善宿主肠道微生物菌群平衡的功能[1],近年来被广泛用于食品行业和养殖业。

纳豆芽孢杆菌是从日本的发酵食品———纳豆中发现并分离出来的,属细菌科、芽孢杆菌属,其原始菌株与枯草芽孢杆菌相同,是枯草芽孢杆菌的一个亚种[2]。

纳豆芽孢杆菌具有溶血栓、降血压、抗肿瘤、抗菌、防止骨质疏松、调节肠道内环境等功能[3],是近年来研究的热点。

目前的研究主要集中在纳豆激酶高产菌株的筛选、溶栓作用等方面,对其固态发酵技术的研究较少。

本文对纳豆芽孢杆菌固态发酵培养基进行优化,为工业大规模生产提供理论和技术支持。

1材料与方法1.1材料1.1.1发酵培养基麦麸、玉米粉、豆渣、豆粕,购于农大农贸市场。

1.1.2菌种来源纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto )B1由江西农业大学食品微生物实验室人员分离保存。

1.1.3菌种培养基[4]牛肉膏蛋白胨固体培养基、牛肉膏蛋白胨液体培养基。

1.1.4试剂葡萄糖、乳糖、蔗糖、棉子糖、尿素、硫酸铵、硝酸铵,均为分析纯试剂。

1.2仪器与设备754紫外-可见分光光度计,上海精密科学仪器有限公司;SPX-150B 生化培养箱,上海跃进医疗器械厂;HZQ-F160全温振荡培养箱,哈尔滨东联电子技术公司;101A-4B 电热鼓风干燥箱,上海实验仪器总厂;LDZX-40B 自动立式电热压力蒸汽灭菌器,上海申安医疗器械厂;HH -2数显恒温水浴锅,国华电器有限公司。

2008 纳豆菌的分离及其发酵条件的优化

2008 纳豆菌的分离及其发酵条件的优化
由于在发酵过程中产生的液体相当粘稠 ,这使发 酵后去除菌体提取 γ2P GA 非常困难 。通过调低 p H 值 ,使γ2P GA 发生一定程度的降解 ,可明显降低发酵 液的粘度[10] ,从而减少能量消耗 。但如果溶液中离子 强度不够 ,即使是乙醇过量 ,γ2 P GA 也不能从溶液中 析出 ,需要有机溶剂和盐来共沉淀 。这可能与γ2 P GA 自身的结构有关 。 21 4 γ2PGA 的测定
将培养液稀释 25 倍后 ,以接种前培养基同样方法 稀释后为空白对照 ,用分光光度计读取 660 nm 处的 吸光值 OD660 。 11 51 2 样品成分分析
样品成分采用紫外扫描光谱法和高效液相色谱法 ( H PL C) [9 ] 分析测定 。 11 51 3 发酵液中样品含量的测定
用氨基酸分析仪分别测定发酵液水解前后谷氨酸 的含量 ,其差值即为γ2P GA 的含量 。水解条件为 :离 心除菌的上清液与 6 mol ·L - 1 HCl 按 1 ∶1 (体积比) 加入水解管中密封后于 110 ℃水解 12 h 。
增大 ,当蛋白胨浓度达到 40 g ·L - 1 后 ,γ2P GA 产量增 幅渐趋平缓 。从经济角度考虑 ,选择适宜蛋白胨浓度 为 40 g ·L - 1 。
mai丽等 :纳豆菌的分离及其发酵条件的优化/ 2008 年第 10 期
6 9
液体发酵培养基 ( g ·L - 1 ) :大豆蛋白胨 30 ,葡萄 糖 40 ,谷氨酸钠 30 , NaCl 15 , K2 H PO4 21 0 , KH2 PO4 41 0 ,MgSO4 01 5 ,CaCl2 01 25 及少量生物素[8 ] 。
(1) 葡萄糖浓度的影响 其它条件相同 ,添加不同浓度的葡萄糖以考察其 对γ2P GA 产量的影响 。结果见图 2 。

纳豆激酶固态发酵工艺及纳豆冻干粉制备的研究

纳豆激酶固态发酵工艺及纳豆冻干粉制备的研究
by Tian Zhibin

Supervisor: Researcher Shi Yanmao Senior Engineer Dong Chao
May 2013
This work is supported by Science and Technology Research and Development Program of Hebei Province. NO.11275508D.
分类号: UD C :
密级: 编号:
河北工业大学硕士学位论文
纳豆激酶固态发酵工艺及纳豆 冻干粉制备的研究
论 文 作 者: 学 科 门 类: 指 导 教 师:
田智斌 工 学
学 生 类 别: 全 日 制 学 科 专 业: 生物化工 职 称: 研 究 员 高级工程师
史延茂 董 超
资助基金项目:河北省科技支撑计划资助项目(NO.11275508D)
关键词:纳豆激酶,固态发酵,工艺优化,纳豆冻干粉,储存稳定性
I
纳豆激酶固态发酵工艺及纳豆冻干粉制备的研究
ABSTRACT
Nattokinase is a fibrinolytic serine enzyme that is produced by Bacillus subtillis natto. It has safe and effective, long half- life in the body, no bleeding tendency and so on. So nattokinase can be developed as a new fibrinolytic medicine. However, the liquid fermentation mode and the downstream separation technology for production of nattokinase by most factories at present, and lower production capacity at the laboratory level. In recent years, the solid-state fermentation production mode in the development of enzyme preparation that make production of nattokinase has a realistic significance. Screening of high nattokinase yield for the solid-state fermentation strain. On the basis of single factor experiment, response surface methodology and artificial neural network coupling genetic algorithm were used for optimizing solid-state fermentation process parameters of nattokinase, and the optimization effects of the two methods were estimated. The results showed the best conditions were as following: inoculum size 4%, initial water amount 55%, soybean content 90g/250mL, fermentation temperature 36.09 ℃, sucrose concentration 1.5%, MgSO 4 · 7H2 O concentration 0.21%, CaCl2 concentration 0.27%, fermentation time 24h. Under these conditions, the maximum nattokinase activity was up to 7 631.28 U/g, which was 29.02% higher than that in single factor test. Adopt vacuum freeze drying technology for producing natto power, against natto power producing in the production of freeze drying and crushing methods. The influence of the research work was for optimizing producing natto power production process and development to provide the choice of dosage form technical support. At the same time, the changes of nattokinase were determined in simulated gastrointestinal environment, and its main components and bioactive substances were determined. It found that the two aspects of nutrition and bioactive substances content higher than soybean powder raw materials through the analysis, so the freeze-dried natto power producing can be used as a potential health care products for development. Freeze-dried natto power in pharmaceutical producing active substances of the storage stability was studied which used accelerated storage stability determination method. The results showed that the international degree of predicted value and experimental value was higher at 4℃ and room temperature, so the method had certain practicability and accuracy , at the same experimental time was shortened.

纳豆激酶液态发酵条件的优化及基因工程菌的制备

纳豆激酶液态发酵条件的优化及基因工程菌的制备

OptimizationofConditionsinLiquidFermentationtoProduceNattokinaseandPreparationoftheGeneticEngineeringBacteriumofNattokinaseDissertationSubmittedtoNanjingUniversityofTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementsforthedegreeofMasterofFoodScienceByFeifeiZHANGSupervisor:Prof.QiangXIONGMay2012摘要摘要纳豆(Natto)是大豆经纳豆枯草芽孢杆菌(BacillussubtilisNatto)发酵而成的日本传统食品。

在纳豆的发酵过程中,发现一种具有高溶纤维活性的丝氨酸蛋白酶,须见洋行博士将其命名为纳豆激酶(Nattokinase,NK)。

纳豆激酶以直接及间接的方式作用于纤维蛋白,从而达到溶栓目的。

另外,纳豆激酶在自然条件下酶活性质比较稳定,安全性高,无毒副作用,半衰期长,分子量小,易被人体吸收,可作口服,作用直接迅速,且药效发挥持续时间长,可由微生物发酵生产,或基因工程技术制备,是一种很有潜力的新型溶血栓药物。

本课题对纳豆激酶的液态发酵条件做了进一步的优化研究,在此基础上,又进行了基因工程制备的研究,为改变纳豆激酶的传统发酵工艺做一定的基础。

首先,研究了摇瓶培养和发酵罐培养时培养基组分和培养条件对纳豆枯草芽孢杆菌产酶的影响。

采用摇瓶液体发酵时,利用单因素实验对碳源、氮源、金属离子、起始pH、温度、时间、接种量进行研究,运用standard.designs设计实验获得显著影响因子,以及采用响应面分析实验确定关键因素的最佳水平;之后应用7.5L发酵罐对搅拌转速、发酵过程的温度、pH、补料的添加、发酵时间等进行了实验研究。

结果表明:最佳发酵培养基为可溶性淀粉19g/L、CaCl:0.24g/L、豆粕粉13.5g/L、酵母膏13.5g/L、K2HP0。

响应面法优化纳豆激酶固态发酵培养基

响应面法优化纳豆激酶固态发酵培养基
1 0
粮 食 与 油 脂
2 0 1 3年 第 2 6卷 第 l 0期
响 应 面 法 优 化 纳 豆 激 酶 固 态 发 酵 培 养 基
廖 杰琼 , 陈 力力 - 一 , 青 文哲 ( 1 . 湖 南农 业 大 学食 品科 学技 术 学 院食 品科 学与 生物技 术湖 南省 重 点 实验 室 , 湖 南长 沙 2 . 湖 南省 发 酵食 品 工程技 术研 究 中心 , 湖 南长 沙 4 1 0 1 2 8)
4 1 0 1 2 8 ;
பைடு நூலகம்
摘 要: 为优 化 以菜籽 粕 与麸 皮 为基 质 产纳 豆激 酶培 养 基 组成 , 在 单 因素 实验基 础 上 , 选择 不 同速 效氮源、 速 效碳 源 、 无机 盐的种 类及 其 添加 量 为 自变量 , 纳 豆激 酶 酶 活为响 应值 , 利 用 Bo x — B e h n k e n 中心 组 成设 计 原理 , 设 计 三 因素 三 水平 响 应 面试验 , 建 立 回 归模 型。 经响 应 面分 析 , 回归模 型 具有 较 高拟合度。结果显示优化后培养基组成为 : 菜籽粕 : 麸皮( w) = 1 : 4基础培养基 中, 尿素添 加量 O . 6 1 g / 1 0 0 g , 葡 萄糖 添加 量 1 . 2 8 g / l O O g , 氯 化镁 添加 量 0 . 6 4 g / 1 0 0 g , 在初始 p H 7 . 0 , 温度 3 7℃ 条 件 下发 酵 4 8 h , 纳 豆激 酶酶 活达 到 7 3 2 9 . 7 6 I U/ g , 较 基 础发 酵培 养基 提 高 1 . 7 3倍 。 关 键词 : 响 应 面法 ; 纳豆 激 酶 ;固态发 酵 ;菜籽 粕
f a c t o r a n d t h r e e - l e v e l a n d d o i n g r e s p o n s e s r Nc u e a n a l y s i s . Ac c o r d i n g t o a n a l y s i s , r e g r e s s i o n e q u a t i o n

《毕赤酵母(Pichiapastoris)LNF013产纳豆激酶发酵优化及发酵动力学研究》

《毕赤酵母(Pichiapastoris)LNF013产纳豆激酶发酵优化及发酵动力学研究》

《毕赤酵母(Pichia pastoris)LNF013产纳豆激酶发酵优化及发酵动力学研究》一、引言毕赤酵母(Pichia pastoris)作为一种重要的工业生产微生物,近年来在生产纳豆激酶方面展现出了良好的应用前景。

纳豆激酶是一种能够促进血液凝固和溶栓的酶,在医药和生物工程领域具有广泛的应用价值。

本文以毕赤酵母LNF013为研究对象,针对其产纳豆激酶的发酵过程进行优化研究,并深入探讨其发酵动力学特征,旨在提高纳豆激酶的产量及生产效率。

二、材料与方法2.1 材料实验所用毕赤酵母LNF013菌株、培养基及其他试剂均符合实验要求。

2.2 方法(1)发酵过程优化:通过调整发酵温度、pH值、接种量、培养时间等参数,探究各因素对纳豆激酶产量的影响。

(2)发酵动力学研究:通过实验数据,分析毕赤酵母LNF013在生长和产酶过程中的动态变化,建立发酵动力学模型。

三、结果与分析3.1 发酵过程优化结果通过调整发酵条件,我们发现以下因素对纳豆激酶的产量具有显著影响:(1)温度:在XX-XX℃的范围内,随着温度的升高,纳豆激酶的产量先增加后降低,存在一个最佳温度。

(2)pH值:pH值对纳豆激酶的产量也有较大影响,在pH 值为XX-XX的范围内,纳豆激酶产量较高。

(3)接种量:适当的接种量有利于提高纳豆激酶的产量,但过高的接种量可能导致竞争生长,降低产量。

(4)培养时间:随着培养时间的延长,纳豆激酶的产量逐渐增加,但达到一定时间后,产量增长速度减缓。

3.2 发酵动力学分析根据实验数据,我们绘制了毕赤酵母LNF013的生长曲线和纳豆激酶产量曲线。

通过分析这些曲线,我们发现毕赤酵母LNF013在生长过程中存在一个对数生长期和稳定生长期,而纳豆激酶的产量主要在稳定生长期达到高峰。

此外,我们还建立了发酵动力学模型,分析了各因素对毕赤酵母LNF013生长和产酶的影响。

四、讨论通过本文的研究,我们发现在一定的范围内调整发酵条件可以显著提高毕赤酵母LNF013产纳豆激酶的产量。

发酵与纳豆激酶的论文1500字

发酵与纳豆激酶的论文1500字

发酵与纳豆激酶的论文1500字篇一:纳豆激酶发酵培养基的优化纳豆激酶发酵培养基的优化姓名: 黄江坤班级:制药132学号: 202104040225纳豆激酶发酵培养基的优化一、菌种选择选用纳豆枯草杆菌为发酵菌种二、纳豆菌的特性纳豆菌,通常为(0.7-0.8)um×(2.0-3.0)um,革兰氏阳性。

生长在葡萄糖琼脂的细胞原生质染色均匀。

芽孢椭圆形或柱状,中生或偏中生,即使孢囊膨大,也不显著,有鞭毛,能运动。

生长温度最高为45-55℃,最低为5-20℃。

孢子耐热性强。

三、纳豆激酶基因的表达NK基因起始密码子为GTG,其上游1b7p处为核糖体结合位点AAAGGAG,SD序列上游为刀T含量高达2%的转录调控区域,1143bp的阅读框架编码29个氨基酸的信号肚,77个氨基酸的前导肽及275个氨基酸的成熟肽。

结构基因的3末端为连续3个终止密码子TAA、TAG、TAA,终止密码子之后一段序列可形成茎环结构,即因子非依赖性终止顺序。

NK的最初产物是381氨基酸的蛋白前体。

其中N端的1一23氨基酸残基是信号肽,24一106氨基酸残基是前导肽。

蛋白前体切除N端的106个氨基酸残基成为275氨基酸残基的成熟纳豆激酶;而去掉信号肽的产物(含前导肽和成熟肽)称为纳豆激酶酶原。

信号肽包含一个带3个正电荷的亲水氮端以及一段不带电荷的疏水残基序列,其功能是使NK正常分泌出胞外,其切割位点位于Ala一Glu一Aal保守序列之后。

信号肽与成熟肽之间具有的前导肽具有帮助NK正常折叠形成活性构象的功能,目前己发现一些与NK基因同源的枯草杆菌素蛋白及链激酶有与此相似的前肽区域。

四、纳豆激酶的蛋白质结构及生化性质:纳豆激酶(NK)是一种丝氨酸蛋白酶,由275个氨基酸组成的单链多肽结构。

NK肽链无二硫键,活性中心在Asp32,His64和Ser221,与底物结合部位在Serl25,Lenl26和Glyl27处。

NK与大多数枯草杆菌蛋白酶在核苷酸序列上和肽链链氨基酸组成上具有高度同源性,它与B.subtilis1168产生的枯草杆菌蛋白酶E仅有13个核苷酸不同,在肽链组成上仅有2个氨基酸不同,它们成熟肽链一级结构的相同性为99.5%;纳豆激酶等电点为pH8.6,纳豆激酶在pH6.0一12.0范围内稳定,pH低于5.0则不稳定。

以豆粕为原料固态发酵产纳豆激酶工艺的优化

以豆粕为原料固态发酵产纳豆激酶工艺的优化

液 态 种 子液 培养 基 (/) 食 品级 豆 粕 1 , gL : 0 葡萄
糖 2, 0 磷酸氢二钾 1硫酸镁 0 ,H 7 ~ . , . p 0 7 . 5 . 2 发酵 培养 基 : 一定 p 的常温 蒸馏 水 浸泡 食 品 用 H
级 豆 粕 或 大 豆 至 充 分 吸 水 , 泡 大 豆 需 要 沥 干 水 浸 分. 浸泡 好 的培 养基 经 15℃高压蒸 汽 灭菌 2 n 1 5mi, 备用 .
12 培 养方 法 .
维蛋 白时 , 伴随肽键 的分解而增加的酸溶性低分子产 物 含量 , 算 出纤 维蛋 白溶解 酶 活力 .该方 法 测 定 的 计
酶 活力 定义 为 : 1 n 内使 除去 酸不 溶性 物质 的反 在 mi
应 液在 2 5 m 的 吸光度 增加 O0 7 n .1所 需 的酶量 为 1 个 酶活 力单 位 , 即为 1 U. F 18 发酵产 酶 条件 的优 化 . 1 . 装 量 的确定 .1 8
斜面培养 : 将接种好的斜面放置于 3 7℃恒温培 养箱培养 l h 8.
液态 种子 培养 : 50mL 三 角瓶 中 10mL 液 在 0 0 态种 子 培养 基 , 1环斜 面 菌种 , 3 接 于 7℃恒 温 摇床
10r n培养 2 h 5 mi / 0.
分别在 20 L三角瓶 中加 固体培养基 2 、0 5 m O3、
f r e tto t e e z me a tv t n i i g b ce i m u b r o t i e r m o d g a e s y e n me l r 0 h g e e m n ai n,h n y ci i a d l n a t r y v u n m e b an d fo f o — r d o b a a we e 5 % i h r

一种固态发酵法制备纳豆激酶的方法[发明专利]

一种固态发酵法制备纳豆激酶的方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710397584.4(22)申请日 2017.05.31(71)申请人 河南工业大学地址 450001 河南省郑州市高新区莲花街100号申请人 郑州金百合生物工程有限公司(72)发明人 赵永亮 王卫国 杜灵广 古亚楠 管景帅 苑旺 王丽洁 王卫 张仟伟 陶宜辰 林强 胡晓伟 (51)Int.Cl.C12N 9/54(2006.01)C12R 1/07(2006.01)(54)发明名称一种固态发酵法制备纳豆激酶的方法(57)摘要本发明公开了一种固态发酵法制备纳豆激酶的方法,包括:大豆预处理、培养基制备、种子制备、接种、变温发酵、干燥、粉碎等单元操作。

该方法是集原料预处理、培养基与种子制备、接种、发酵、干燥和粉碎等技术为一体,整个过程是在洁净或无菌环境中进行,不会产生跑、冒、滴、漏等不良现象,易于达到GMP要求。

与传统法相比,本发明具有如下特点:巧妙的原料预处理和多组分培养基的组方设计,为纳豆激酶产生菌的生长提供了良好的物质基础;表面活性剂的采用,使纳豆激酶的产生与分泌明显提高;变温发酵方法及工艺的应用,使纳豆激酶的产率提高10-45%;方法科学,工艺合理先进,利于环保。

本发明可广泛用于纳豆激酶及其它相关产品的研发和生产。

权利要求书2页 说明书6页CN 106995810 A 2017.08.01C N 106995810A1.一种固态发酵法制备纳豆激酶的方法,其特征在于包括以下工艺步骤:⑴预处理大豆的制备;⑵发酵及种子培养基的制备;⑶纳豆芽孢杆菌种子的制备;⑷接种;⑸变温发酵;(6)干燥;(7)粉碎;具体方法步骤包括:⑴预处理大豆的制备预处理大豆的制备是指在定时消毒的洁净环境中按照如下工艺步骤进行:a.称量根据生产所需,称取所用量的无病虫害的干大豆;b.雾水润豆将上述大豆原料置于容器中,然后用喷雾水雾化大豆,翻拌均匀;c.适度破碎将上述润湿的大豆采用一定的破碎工具对大豆进行适度破碎,使破碎度达到每个大豆碎裂为6-10片或米粒大小即可;d.加水浸泡将上述适度破碎的大豆置于消过毒的密闭浸泡罐中,按质量比加入3-8倍的无菌水搅拌均匀后静置12-24h;e.捞豆备用将上述适度破碎的浸泡好的大豆去水留(或取)豆,将大豆吸水膨胀用不完的多余水放出,导入它罐以备重复利用;⑵发酵及种子培养基的制备发酵培养基组成:包括如下质量的成分(g/L):预处理大豆800-980、葡萄糖2-40、蔗糖3-45、豆粕5-100、多胨3-65、胰蛋白胨2-58、甘氨酸2-76、丙氨酸1-49、丝氨酸5-56、赖氨酸3-58、天门冬氨酸5-50、组氨酸2-46、亮氨酸1-38、胶原蛋白肽0.05-6.0、生物素0.01-1.8、Vc 0.05-4.0、Ve 0.04-4.0、Vb5 0.05-6.0、烟酸0.03-4.0、烟酰胺0.05-4.0、牛磺酸0.05-4.0、L-半胱氨酸或其盐酸盐0.05-4.0、L-胱氨酸0.04-4.0、肝素钠0.02-3.0、精氨酸0.03-4.0、谷氨酸0.02-4.0、吐温-80 0.05-4.0、酪蛋白酸钠0.8-18.0、烷基糖苷APG 0.6-16.0、辅酶Q10 0.02-4.0、 MgSO4·7H2O 0.3-6、CaCl2 0.2-4,pH值=6.8-7.4;种子培养基组成:上述培养基组分中去掉吐温-80和烷基糖苷APG,其余组分及含量不变但要再加入10-50倍去离子水;培养基的制备方法:包含以下工艺步骤:.按本专利所述的配方和配方量分别称取或量取各组分并将其按对温度的敏感性分为3组:A组(耐高温——包括配方中的大豆全粉、大豆蛋白肽、氨基酸和无机盐),B组(较耐高温——包括配方中的2种糖、吐温-80 和酪蛋白酸钠)和C组(敏感组分——包括配方中的全部维生素),备用;.将称取或量取的A组各组分在无菌条件下混合在一起,混合均匀后在121℃灭菌20-40min;.将称取或量取的B组各组分在无菌条件下混合在一起,混合均匀后在115℃灭菌15-30min;.将称取或量取的C组各组分在无菌条件下根据其溶解性用适量的溶剂溶解后无菌过滤,将所得滤液收集在一起,备用;.在无菌条件下,将C组滤液加入到灭过菌的A+B组组分中,搅拌混合均匀即得所述生产纳豆激酶的培养基,备用;⑶纳豆芽孢杆菌种子的制备在无菌环境下,将保藏的纯种纳豆芽孢杆菌菌种用接种环挑取1环在常规试管斜面培养基上划线接种,于36-38℃培养箱中培养24-32h后,挑取生长良好的单菌落涂布到新的试管斜面上,36-38℃培养箱中培养24-32h后得到活化的纳豆芽孢杆菌菌种,在无菌条件下,向活化后的纳豆芽孢杆菌斜面试管里加入2-5ml无菌水制备菌悬液,然后,分装到1~2个装有灭过菌的种子培养基的三角瓶中,在38℃、180r/min条件下振荡培养10-20h作为发酵种子,备用;此后,根据生产规模的大小,按10-20倍的放大系数进行发酵用种子的1、2、3级扩培;⑷接种将上述制备好的种子与制备好的发酵培养基在无菌条件下按质量比为1:5-15的比例均匀拌入发酵培养基中;⑸变温发酵将接过种的培养基置于固态发酵罐中,装料系数为0.2-0.5,然后在相对湿度为80-95%条件下于42-45℃发酵2-4h,36-38℃培养20-30h,20-28℃培养18-26h即可,整个发酵过程中均伴随有间歇搅拌;(6)干燥将上述发酵产物在一定条件下进行真空冷冻干燥或真空干燥或低温干燥后,即可;(7)粉碎将上述干燥后的原料采用万能粉碎法或超微破碎法进行粉碎即得不同级别的产品,该类产品还可用作进一步的深加工。

(提高纳豆激酶的方法)自制纳豆,游刃有余

(提高纳豆激酶的方法)自制纳豆,游刃有余

(提高纳豆激酶的方法)自制纳豆,游刃有余三、提高纳豆激酶的方法材料一:纳豆激酶的生产提供一种得率高,酶活高,成本低,可进行产业化生产的纳豆激酶的生产方法。

依次包括下述两个步骤:(一)、发酵;所述第的发酵是固体发酵,该发酵过程依次有如下工序:①用特制浸泡液浸泡优质黄豆,所述的特制浸泡液的配方为:牛肉浸膏5~l0g,蛋白胨4~12g,酵母浸出汁3—8g,NaCl 5~l0g,葡萄糖l5~20g,自来水l000ml,PH值为6.8~7,浸泡到黄豆吸足水份,豆无硬心,表面无皱纹为止;②装瓶灭菌接种:采用常规灭菌方法,等瓶温自然冷却至40℃以下,在无菌条件下接种,接种所用的菌种是枯草芽孢杆菌;③培育:采用常规培养条件;采用高低温培养方法,先在37℃下培养22—32小时后马上转入3~10℃条件下保温,l2~24小时获得发酵物。

(二)、将经发酵步骤后得到的干燥物粉碎;①干燥:采用常规方法。

干燥工序中采用的是将发酵物进行低温真空冷冻干燥,发酵物水分小于l5%时干燥结束。

②粉碎是采用细胞破壁技术。

上述生产方法培养的纳豆激酶制备的纳豆激酶溶栓药物,其特殊之处在于:制备片剂、冲剂、硬胶囊、软胶囊或口服液时,在所得产物中直接添加可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糊精(等)配料调整至每克内有200~680的酶活单位。

上述生产方法培养的纳豆激酶制备的纳豆激酶溶栓药物每克内有200~380的酶活单位,具有预防心血管疾病的作用。

上述生产方法培养的纳豆激酶制备的纳豆激酶溶栓药物每克内有300~680的酶活单位,具有治疗心血管疾病的作用。

上述生产方法培养的纳豆激酶制备的冻干粉每克内含大于800的酶活单位,制备的针剂纯度达95%以上。

下面将通过实施例对方案作详细叙述:第一部分:纳豆激酶的生产方法1、使用特制浸泡液的实施例及其与使用常规浸泡液的产物酶活比较实验条件:300ml三角瓶加入特制浸泡液浸泡过的大豆l0g,调PH7,121℃灭菌15min,接入枯草芽孢杆菌斜面菌种,在37℃条件下培养24小时,常规干燥、常规粉碎后测定酶活。

纳豆激酶生产菌的筛选及发酵纳豆特性研究

纳豆激酶生产菌的筛选及发酵纳豆特性研究

纳豆激酶生产菌的筛选及发酵纳豆特性研究赵仲麟;李淑英;聂莹;李燕;袁超;唐选明【摘要】为开发具有特定生理活性的新型纳豆保健品,从发酵豆制品中分离筛选得到一株纳豆激酶高产菌株。

利用该菌株以及市售的3种纳豆中的纳豆菌进行纳豆发酵,比较了4株纳豆菌发酵纳豆的特性,并对纳豆激酶活性进行分析。

结果表明5号菌株发酵生产纳豆周期短,颜色金黄,具有酱香味,拉丝长度最佳。

同时,对产纳豆激酶的最佳发酵时间进行研究,结果表明发酵至17 h纳豆激酶活性达到最大值。

%To develop new kinds of natto health care products with specific physiological activity, a nattokinase high-yield strain was isolated and used for natto production. The characteristics and nattokinase activities of the isolated strain were compared with other 3 kinds of natto strains. Results showed that the natto products of munber 5 strain have golden color and soy sauce flavor, and have the best length of natto wire drawing. The result of fermentation time showed that nattokinase content reached the maximum value at 17 h.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P161-164)【关键词】纳豆激酶;筛选;酶活;特性【作者】赵仲麟;李淑英;聂莹;李燕;袁超;唐选明【作者单位】河南农业大学理学院,郑州 450002;中国农业科学院农产品加工研究所,北京 100193;中国农业科学院农产品加工研究所,北京 100193;郑州轻工业学院食品与生物工程学院,郑州 450002;河南农业大学理学院,郑州 450002;中国农业科学院农产品加工研究所,北京 100193【正文语种】中文纳豆作为一种日本传统食物已有上千年的历史,是大豆经枯草芽孢杆菌发酵而来。

高活性纳豆激酶工艺改进研究

高活性纳豆激酶工艺改进研究

高活性纳豆激酶工艺改进研究张浩;王家林【摘要】[目的]优化高活性纳豆激酶的纳豆生产工艺条件.[方法]从市售纳豆产品中分离筛选出高活性的菌株作为试验菌株,采用固态发酵的方法制备纳豆,对影响纳豆激酶产量的主要因素浸泡时间、接种量、发酵时间等进行考察,研究高活性纳豆激酶的工艺条件.[结果]利用对甲基苯磺酰L精氨酸甲酯(TAME)法测定纳豆激酶活性,确定最佳纳豆激酶酶活的纳豆生产工艺条件为浸泡时间8 h、接种量10%、发酵时间48 h.[结论]该研究可为高活性纳豆激酶的生产提供参考.%[Objective] To optimize the process conditions of high activity nattokinase.[Method]Natto was isolated from commercial natto products and used as the experimental strain.Natto was prepared by solid-state fermentation.The process conditions of high activity natto kinase were studied.The main factors affecting the yield of natto kinase were as follows:immersion time,inoculation amount and fermentationtime.[Result]The activity of natto kinase was determined by TAME method.The optimum natto kinase production process conditions were determined as 8 h soaking time,10% inoculation amount,48 h fermentation time.[Conclusion] The study can provide reference for production of high activity natto kinase.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2017(045)010【总页数】2页(P93-94)【关键词】纳豆;纳豆激酶;活性测定;工艺优化【作者】张浩;王家林【作者单位】青岛科技大学生物工程实验室,山东青岛 266042;青岛科技大学生物工程实验室,山东青岛 266042【正文语种】中文【中图分类】TQ925纳豆是经过蒸煮的大豆在纳豆芽孢杆菌的发酵作用下产生的发酵食品[1]。

纳豆激酶摇床发酵条件的优化_鲍艳霞

纳豆激酶摇床发酵条件的优化_鲍艳霞

药 物 生 物 技 术Phar maceutical Biotechnolog y 2005,12(1):19~21纳豆激酶摇床发酵条件的优化*鲍艳霞1,倪孟祥2,钱之玉2,陈 钧3,王 萍3(1.中国药科大学高职学院,江苏镇江212003;2.中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009;3.江苏大学生命与环境工程学院,江苏镇江2120131)摘 要 采用单因素和正交试验对纳豆菌摇瓶发酵生产纳豆激酶的工艺条件进行了优化,确定了摇瓶发酵培养基最佳配方:玉米粉0.5%,豆渣2%,麸皮0.5%,接种量为4%,初始pH值自然,培养温度35 。

采用最适培养基和优化工艺,在250ml锥形瓶中进行验证实验,纳豆激酶的酶活可达到714.2IU/ml。

关键词 纳豆菌;纳豆激酶;液体发酵中图分类号:Q55 文献标识码:A 文章编号:1005 8915(2005)01 0019 03目前血栓形成是引起心肌梗死、脑卒中等心脑血管疾病死亡的重要因素,严重危害人类健康,因此抑制血栓形成和增强纤溶活性对心脑血管疾病防治具有重要意义。

从膳食成分中发现和开发抗栓和溶栓物质,具有广泛的临床实用价值。

1987年须见洋行从日本食品纳豆中发现了具有溶解血栓的一种枯草杆菌蛋白激酶[1],该酶在体内除可溶解血栓外,还可明显缩短优球蛋白的溶解时间,并具口服吸收溶栓的优点,是一种非常具有开发潜力的食源性溶栓药物[2]。

在国内相关纳豆菌液体发酵条件报道的基础上[3,4],作者研究了以豆渣为氮源纳豆菌摇瓶发酵产纳豆激酶的工艺优化,为开发新型溶栓酶产品、药物的产业化提供了试验依据和技术支持。

1 材料与方法1.1 菌种纳豆菌(B acillus N atto) 江苏大学生命与环境工程学院筛选并保存。

1.2 主要试剂凝血酶,纤维蛋白原,标准尿激酶均购自中国生物制品检定所,其它试剂为国产分析纯。

1.3 培养基斜面培养基(%):蛋白胨0.5,牛肉膏0.5, NaCl0.5,琼脂2.0,pH值7.2~7.4。

2008 纳豆菌高产培养基的成分优化

2008 纳豆菌高产培养基的成分优化

3.0
2.5
2.0
1%大 豆 蛋 白 胨
1.5
3%大 豆 蛋 白 胨
1.0
5%大 豆 蛋 白 胨
7%大 豆 蛋 白 胨 0.5
0 0 6 12 18 24 30 36 培 养 时 间/h
图 4 氮源浓度对菌种生长的影响 Fig.4 Effect of nitrogen source concentration
一般来说, G+对镁离子的需要量比 G- 大。本试 验菌株为革兰氏阳性菌( G+) , 因此, MgSO4 浓度是 影响菌种生长的因素之一。 2.5.2 K2HPO4 和 KH2PO4 浓度 将基础种子培养 基 中 的 0.5% NaCl 用 不 同 浓 度 比 的 K2HPO4 和 KH2PO4 代替, 其它 成 分 不 变 , 接 种 培 养 , 每 隔 2 h 测定其生物量并绘制生长曲线 ( 见图 6) 。由图 6 可 知 , K2HPO4 与 KH2PO4 的 适 宜 浓 度 比 为 1∶1, 在 培 养 12 h 时 达 到 最 大 生 长 量 , 其 OD600 值 为 2.222, 明显优于其它浓度比的, 且提前 2 h 达到最 大生长量。
豆粕粉
硝酸铵 0.5
0 0 4 8 12 16 20 24 培 养 时 间/h
图 2 氮源种类对菌种生长的影响 Fig.2 Effect of nitrogen source on bacterium growth
生物量( OD600) 生物量( OD600)
2.3 碳源浓度对菌种生长的影响 培 养 基 中 大 豆 蛋 白 胨 质 量 分 数 固 定 为 1%,
分不变, 接种培养, 每隔 2 h 测定生物量并绘制生 长曲线。由图 2 可知, 大豆蛋白胨作为种子培养基 的氮源优于其它种类的氮源。菌种对无机氮源利 用 速 度 较 慢 , 对 豆 粕 粉 的 利 用 速 度 更 慢 , 其 OD600 一直处于较低的水平。

超滤法提取纳豆激酶的技术参数优化解析

超滤法提取纳豆激酶的技术参数优化解析

食品科技2010年第35卷第5期FOODSCIENCEANDTECHNOLOGY提取物与应用超滤法提取纳豆激酶的技术参数优化陈景鑫,刘妍妍,沙维,张丽萍*(黑龙江八一农垦大学食品学院,大庆163319)摘要:目的:研究超滤系统中超滤压力、超滤温度、料液pH值主要参数对膜通量的影响,确定超滤分离纳豆激酶的最佳工艺条件。

方法:以实验室制备的纳豆激酶粗酶液为原料,经超滤分离,层析分离确定纳豆激酶的比活力、纯化倍数及回收率。

结果:最佳超滤压力为0.25MPa、料液温度为37℃、料液pH为7;可得到比活力为9610.46IU/mg、纯化倍数为2.36、回收率为92.3%的酶液,酶液经HPD-400树脂洗脱得到单一蛋白峰,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,表现为单一蛋白条带,相对分子质量约为28000u。

结论:采用超滤技术对纳豆激酶进行分离提纯,可提高酶活性及回收率,技术参数可行。

关键词:纳豆激酶;超滤;比活力;纯化倍数;回收率中图分类号:TQ925文献标志码:A文章编号:1005-9989(2010)05-0225-05 StudyontechnologyforextractingnattokinasebyultrafiltrationCHENJing-xin,LIUYan-yan,SHAWei,ZHANGLi-ping* (TheFoodScienceofHeilongjiangBayiAgriculturalUniversitiy,Daqing163319) Abstract:Objective:Studyedtheimpactofmembranefluxonutrafiltrationsystempressure,ultrafiltrationtemperat ureandpH,determinedtheoptimumconditionsofnattokinaseseparation.Methods:therawma terialswaspreparedfromcrudenattokinaseliquid,byultrafiltrationandchromatographydeter minedthespecificactivity,purificationmultiplesandrecoveryrate.Results:Theoptimizedco nditionswereasfollowing:reactionpressure0.25MPa,liquidtemperature37℃,liquidpH7,th especificactivity9610.46IU/mg,thepurificationmultiple2.36andtherecoveryrate92.3%,the purifiedenzymewasdemonstratedbySDS-PAGEtobeahomogeneousprotein,molecularmasswasabout28000u.Conclusion:Itisfeasibl etoseparateandpurifynattokinasebyusingultrafiltrationtechnology,anditcanelevateactivity andtherecoveryrate.Keywords:nattokinase;ultrafiltration;enzymeactivity;purificationmultiple;recovery纳豆激酶(NK)是纳豆在发酵过程中由纳豆菌产增的具有潜在药用价值的物质。

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作者简介:周伏忠 (9 5 ) 男 , 16 一 , 河南浚 县人 , 研究员 , 硕士 , 究方向为微生物发酵工程 . 研
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9 2— 3 —

南 科

第发酵 结束 后 , 每 克 固体发 酵成 熟 物加 入质 量 分数 为 09%生 理盐 水 5mL4℃浸 提 4h450r i 在 . , , 0 mn离 / 心 2 i, 0mn 上清 液 即为 固体 发酵粗 酶溶 液 .参照 文献 [] 3 的方 法 制备 血纤 维 蛋 白平板 和尿 激 酶标 准 曲线 . 用 微量 加样 器移 取 适量 (~ 0 ) 酶 液 点种 于纤 维 蛋 白平板 上 , 好标 记 ,7℃保温 1 , 5 1 L 粗 做 3 8h 测量 透 明 圈直 径 , 计算 溶解 圈面 积 , 与标 准 曲线 比对 , 算酶 活 力 . 计
13培养基质量分数131种子培养基lb胰蛋白胨1酵母浸出物05nacl1ph70132固体发酵培养基根据本实验室液体发酵研究的结果007mgso实验方法21斜面培养将接种好的斜面于37恒温培养箱培养24h22种子培养在250ml三角瓶中装20ml种子培养基接种一环斜面菌种于37恒温摇床150rmin培养14h23固体发酵每250ml三角瓶固体发酵培养基中加入固体培养基20g其他组分的变化见各个实验组
Mg O,. KHP 02% KH O .其他 组 分见 各实验 组 . S 404% 2 O 和 . 2P
2 实验方法
21 斜 面培 养 . 将 接种 好 的斜 面于 3 恒 温培 养箱 培养 2 . 7q C 4h 22 种 子培 养 .
在 20 L 5 三角瓶中装 2 L种子培养基, m 0 m 接种一环斜面菌种, 3 恒温摇床 10 / i 培养 1 . 于 7C q 5 mn r 4 h 23 固体 发酵 .
定 所 .其 他试 剂均 为 国产 分析 纯 .豆 粕和 麸皮 为 市售 .
13 培 养基 ( 量分 数 , . 质 %)
1 . 种子培养基 ( ) 胰蛋 白胨 1 酵母浸 出物 0 %, a l %,H 7 . .1 3 L B %, . N c 1 p . 5 0 1 . 固体发酵培 养基 .2 3 根据本实验室液体发酵研究 的结果『 当培养基含有 0 6% C C . % M S 3 J , . 0 a10 7 ,0 gO , 0 . KH O,. K 2O 时, 体发酵产酶最高 , 4% 2P 2% H P 液 0 因此固体发酵培养基 中也 添加 0 6% c c ,. % . 0 a l0 7 0
优化发酵条件下, 两个菌株单位发酵物中纤溶酶平均酶活力可分别达到 1 0 . /( 72 g 菌株 1和 9 3 /( 4 5U ) 5 U g菌株 2 . )
关键词 :纳豆激酶; 固体发酵 ; 参数优化
中图分类号 :Q 9 99 3 . 文献标 识码 :A
许 多溶 栓药 物存 在 着药 效 短 、 副作 用大 ( 易 出血 ) 口服 无效 等缺 点 .研 究表 明 , 生物 是新 型溶 栓药 如 、 微 物 的一个 重要 来源 [] 实验室 从豆类 发 酵制 品 中分 离到 两株产 酶 活性 高、 栓效 果好 的纳 豆激 酶产 生菌 , 1.本 - 2 溶 对 菌 株进 行 了液体 发 酵参数 优 化和 分子 鉴 定[ 究 .并进 行 了 固体发 酵参 数 优化 实验 .现 将 两株 菌 的固 体 3 1 研 发 酵 产酶参 数 优化 实验 结果 报道 如下 :
12 试 剂 .
胰 蛋 白胨 1 酵母 浸 出物是 O O D产 品 .牛纤 维蛋 白原 ( 号 :4 67 20 3 ,2T / 、 血酶 ( 和 X I 批 10 0— 0 557 Ig瓶) 凝 I 批 号 :46 5 20 2 ,9 B / 和尿 激酶 标 准 品 ( 号 :4 6 4 20 3 ,20U支 ) 于 中 国药 品生物 制 品检 10 0 —0 44 10 P支) 批 100 — 0 62 18 I/ 购
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第2 6卷 第 8 期
20 0 8年 8月




Vo .6 o 8 1 N . 2 Au . 0 g 2 08
HENAN S EN CE CI
文章编号:0 4 3 1 (0 8 0 — 9 10 10 — 9 82 0 ) 8 0 3— 3
每 20 L三角瓶固体发酵培养基 中加入固体培养基 2 , 5 m 0 其他组分的变化见各个实验组: g 接种 2 L种 m
子 培养液 ( 量 分数 00 质 .5%) 3 恒温 培养 箱培 养 7 , ,7 C q 2h 间时 拍打 , 其均 匀生 长 . 使
收稿 日期 :2 0 — 2 2 080—8 基金 项 目:河 南 省 省属 科 研 单 位 社 会 公 益 项 目 (6 18 2 3 0 4 0 0 ) 1
纳 豆激酶产生 菌 的固体 发酵参数优 化
周伏忠 L, 贾蕴莉 L, 陈国参 L, 陈晓飞 , 赵艳玲 z z
(. 南省微生物工程重点实验室 , 1河 郑州 4 00 ; 2 河南省科学院 生物研 究所 有限责任 公司,郑州 50 8 . 400) 50 8
摘 要 :对影响纳豆激酶产生菌 固体发 酵时产酶影响 因 子如碳源, 、 水量 、 、H和培养时 间等进行 了 氮源 含 温度 p 优化 .
1 实验 材料
11 菌 种 .
菌种 1 白4 、 ( )菌种 2 肽 园) ( 均为本实验室从豆类发酵制品中分离、 筛选和保存 的菌株 .经 1SR A分 6 rN 子 鉴 定1 定 为枯草 芽 孢杆 菌 (aiu.u tu s) L 4 1 确 B cls sbi s ,B斜 面保存 . l l p s
实验结果表明 , 菌株 1 宜的固体发酵产酶培养基 豆粕: 适 麸皮比为 31 菌株 2适 宜的固体发酵产酶培养基豆粕: :; 麸皮 比为 11 : 时产酶活性最高; 菌株 1 宜的培养基含水以 5 适 0%最好 , 菌株 2以 7 0%最好 : 培养基初始 p H均在 7 . 0时酶 活最 高: 发酵温度 均以 2 c 5。最好 , 不易超过 3 ℃; 0 两个 菌株的适 宜发酵时 间分别为 3 ( 6h 菌株 1和 7 ( ) 2h 菌株 2 .在 )
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