Aβ1-42诱导HUVEC细胞凋亡最适浓度与时间选择

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细胞凋亡的研究方法实验

细胞凋亡的研究方法实验细胞凋亡同学们好，这一讲开始我们来学习细胞凋亡的检测方法。

细胞死亡的方式有很多种，最常见的有坏死（necrosis），它是细胞受到物理或化学损伤的情况下，以及缺氧时会发生的现象，另一种常见的死亡方式是细胞凋亡（apoptosis），又称细胞程序性死亡，它是细胞主动的有序的死亡过程，用来去除多余的，不需要的或异常的细胞，保障生物体内环境的稳定，是一种基本的生物学现象。

其他死亡方式还有自噬性细胞死亡（autophagic cell death）和细胞焦亡（Pyroptosis）。

随着生命科学的发展，这些死亡方式逐渐进入我们的视野，被关注。

不同的死亡方式有着各自的特征。

比如坏死，从形态学上观察，胞体肿胀、胞质空泡化，胞膜破损、最后崩解，所以坏死又称细胞胀亡（Oncosis）。

而细胞凋亡，胞体缩小，膜表面出芽状形成凋亡小体，最终从细胞表面脱落，膜基本保持完整、。

细胞凋亡研究有着非常重要的生理和病理意义，2002年诺贝尔生理学或医学奖就授予了细胞程序性死亡方面的研究工作。

细胞凋亡参与机体的正常发育与分化、内环境的稳定、免疫系统防御等重要的生理过程，一旦凋亡异常就会导致一些重大疾病的发生与发展，比如肿瘤的发生，肿瘤早期阶段细胞凋亡都是受到抑制的，诱导肿瘤细胞凋亡已成为抗肿瘤药物研发的一个重要方向。

近年来，许多细胞凋亡检测方法得到广泛的应用。

下面介绍四种近年来细胞凋亡的主要检测方法：一、形态学观察细胞发生凋亡时会出现一系列独特的形态学特征，如细胞体积变小;核固缩，染色质高度凝聚，且堆积在核膜内侧缘或聚集于核中央部;接着凋亡小体的产生，细胞膜皱褶、细胞表面产生了许多泡状或芽状突起，形成单个的凋亡小体。

借用光学显微镜、电子显微镜或荧光显微镜可不同程度、不同层次地观测到这些形态学特征。

这种细胞凋亡形态学检测的方法简易、直观和有较好定位，但也有不足之处:缺乏特定标准，主观性大，因人而异;又不能定量，有较大的局限性，因而形态学观察多用于固定组织细胞检测，常作为其他技术的辅助。

细胞凋亡诱导技术的使用教程

细胞凋亡诱导技术的使用教程细胞凋亡是一种广泛应用于生物研究和药物开发领域的重要技术。

它是一种程序性细胞死亡的形式，通常由外界刺激或内源性信号引起。

本文将为您介绍使用细胞凋亡诱导技术的步骤、方法和注意事项。

第一步：选择适当的细胞凋亡诱导剂在进行细胞凋亡实验前，您需要根据实验目的和研究对象选择适当的细胞凋亡诱导剂。

常用的细胞凋亡诱导剂包括化学物质如顺铂和纤维芽细胞生长因子（FGF）等，以及光照、温度、药物等其他外界刺激。

确保所选的诱导剂具有稳定的活性和可重复性。

此外，在选择诱导剂时，还需考虑细胞类型和所需的凋亡研究重点。

第二步：确定适当的细胞系和培养条件选择适当的细胞系对于细胞凋亡实验至关重要。

不同类型的细胞对于细胞凋亡的响应可能不同，因此在开始实验之前，您应首先确认所选细胞系是否容易发生细胞凋亡。

一般来说，肿瘤细胞比正常细胞更容易发生凋亡反应。

此外，确定细胞的培养条件也是非常重要的。

不同的细胞系对培养基组分和培养条件的要求有所不同，在实验前应进行相关的优化。

第三步：优化诱导剂的浓度和处理时间在实验中，您需要确定诱导剂的最佳浓度和处理时间。

这些参数的选择应基于前期的实验数据和文献报道。

一般来说，使用较低剂量的诱导剂和较短的处理时间可以获得更为准确和可靠的实验结果，并减少不必要的细胞损失。

因此，在进行正式实验之前，先进行浓度梯度和时间梯度的预实验是非常重要的。

第四步：检测细胞凋亡的方法选择在细胞凋亡实验中，您需要选择适当的方法来检测细胞凋亡的程度。

常用的方法包括荧光染料染色、流式细胞术和电镜观察等。

荧光染料如荧光素酶染料（如Annexin V-FITC/PI染色）可用于进行早期和晚期凋亡细胞的区分，而流式细胞术则可提供关于凋亡细胞比例和细胞周期的详细信息。

根据实验需要和设备条件，选择适当的检测方法。

第五步：数据分析和实验结果解读在完成细胞凋亡实验后，您需要对结果进行合理的数据分析和解读。

根据实验所用的方法，计算并记录凋亡细胞比例、细胞周期等相关指标。

氧化应激细胞模型建立的研究进展

氧化应激细胞模型建立的研究进展何方婷;陈嘉熠;徐佳伊;董科;冷云;姜春萍;裴晓方【摘要】细胞模型是筛选评价抗氧化物质,研究氧化应激损伤机制的有效方法之一.目前有不少研究采用氧化应激细胞模型探讨植物化学物质的抗氧化效果及机制.根据研究目的,可以选择多种细胞株及应激源,但模型建立缺乏统一标准,系统性的总结少见报道.因此,本文从细胞株和应激源的选择、模型判断指标等方面介绍氧化应激细胞模型的建立方法,并从化学、物理和生物等方面对应激源进行了分类总结,旨在为筛选、评价抗氧化剂效果,探究干预氧化损伤机制等研究提供参考.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2019(040)007【总页数】5页(P341-345)【关键词】氧化应激;活性氧;细胞模型;抗氧化性【作者】何方婷;陈嘉熠;徐佳伊;董科;冷云;姜春萍;裴晓方【作者单位】四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院),四川成都610041;四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院),四川成都610041;四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院),四川成都610041;四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院),四川成都610041;四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院),四川成都610041;四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院),四川成都610041;四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院),四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】TS201.1氧化应激是指在体内外有害因素刺激下,体内自由基增加或机体抗氧化保护能力减弱,导致氧化系统和抗氧化系统失衡[1]。

在此状态下,过多积累的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)会造成核酸、蛋白质和脂质等生物分子的损伤,进而可能导致心血管疾病、阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)、帕金森氏症(Parkinson’s disease,PD)等慢性退行性疾病的发生和发展[2]。

人脐静脉血管内皮细胞HUVEC

第三：铺板加样方法错误。
• 6孔、12孔、24孔、48孔与96孔的细胞接种铺板过程中，你的加样方式是哪种？你觉得加样方式对后期的接种均匀度影响大吗？例如你是否有过垂直加入96孔板的经历？是不是有的孔就比较均匀，而有的孔就聚集在了一起？六孔板怎么摇晃也不均匀？其实也许你离铺好板就差一种适合你的方法。
• 2、不是所有细胞消化后都会变成圆形
• 有些细胞(比如U87，U251)消化好了也不会变成圆形，只是呈半沙状。
• 3、有些细胞即使变圆，也有脱落的细胞，但还是没消化好 • 比如7860，要等到大部分细胞脱落培养皿底部才可以停
止消化，否则很难吹打下来，这种情况一般发生于难以消化的细胞。
• 4、对于一些特殊的细胞需要消化过一点 • 有些细胞吹成单个细胞反而对细胞的状态会好一点，一
6孔板、12孔板或24孔板
• 为防止表面张力导致的中间液面太低细胞聚集的现象。通常每孔首先滴加少量培基，轻轻晃动浸润整个孔底以保证板子的孔底都是湿润的，这样加液后细胞悬液会平铺在整个孔底，可以避免加在中间位置和加在周边晃匀后周边细胞局部太多的现象，细胞分散会较均匀。注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下（5-10分钟）。镜下观察细胞均匀度，如不均匀可采用以下8字法、十字法及震荡法等方法进行细胞均匀度处理
• HUVEC细胞培养难度较高，建议使用内皮细胞专用培养基，选用优质胎牛血清。细胞推荐传代比例为1:2-1:3，胰酶消化室温1-2分钟，传代周期通常为3-4天。需要注意的是，如 HUVEC出现聚团生长，可能由于培养板亲水性差或者血清中促贴壁因子不足，可考虑用人纤维粘连蛋白包被培养板，能有效预防细胞聚团。
第二：细胞吹打次数不够，细胞悬
液密度不均匀。

细胞凋亡的信号通路及调控机制

细胞凋亡的信号通路及调控机制细胞凋亡是一种细胞程序性死亡的过程，是细胞自我毁灭的方式。

在多种细胞生命活动中，细胞凋亡不仅与正常组织的维持、裂变和修复密切相关，还参与了一系列脱落和细胞的抗肿瘤反应，因此其调节机制一直备受关注。

本文将介绍细胞凋亡的信号通路及调控机制。

一、细胞凋亡的一般过程细胞凋亡的通路复杂，核心是激活一系列蛋白酶称为Caspase，导致失去细胞组分、膜增墨及均匀的细胞体积缩小。

细胞凋亡还包括三个主要步骤：①特异性DNA断裂；②细胞核本身的形态与结构的改变；③因而引出细胞内和组织内细胞外信号通路上的多向交叉反应。

此外，细胞凋亡还通常分为两大类：胸腺型和酵母型。

胸腺型凋亡通常指依赖caspase活化以及成簇地整体的胞体细胞内和细胞外反应，酵母型凋亡由另一种非Caspase活化的机制控制。

二、细胞凋亡的信号通路1、Caspase信号通路Caspase是一种特异的半胱氨酸蛋白酶家族，它能在凋亡细胞中分解多种细胞因子等重要蛋白质，并诱导细胞凋亡。

Caspase有两个主要类型：前体酶和活化酶。

在毛细血管管壁中，破烈性和压力可能促使细胞内微信的Caspase活化。

受損壁细胞将产生膜钩，使Caspase自由起来，进入到胞内反应过程中，破坏胞的正常生理活动。

2、异位激酶受体信号通路异位激酶受体（TNFR）被活化后与FADD结合，形成死亡诱导信号复合体（DISC）。

FADD也促进了Caspase8和Caspase10的活化，从而归纳出了细胞凋亡。

TNFR启动的还有细胞程序性死亡依赖NF-KB（RELD）途径，可以抑制细胞凋亡和调节免疫功能。

3、钙离子信号通路哺乳动物几乎所有的细胞都能依赖钙离子浓度的动态变化来实现细胞生长、分化、分裂、细胞死亡和细胞骨架的重建。

钙离子信号通路不仅促进了游离钙离子的产生，还操纵了Ca2+进入内质网和细胞质，通过多种量子层面的调节实现了细胞生存与死亡的转换。

三、调控细胞凋亡的机制1、Bcl-2家族——调节细胞凋亡的一些重要蛋白Bcl-2家族成员共同参与细胞凋亡的调节。

细胞自噬和凋亡的调控和机制

细胞自噬和凋亡的调控和机制细胞是生命的基本单位，生命的活动过程中，细胞需要对自身进行严格的调控。

细胞自噬和凋亡都是细胞内部调控机制的一部分，可以有效地对细胞进行维护和更新。

在这篇文章中，我们将深入探讨细胞自噬和凋亡的调控和机制。

1. 细胞自噬的调控和机制细胞自噬是指细胞通过溶酶体将受损或老化的细胞器、蛋白质等“消化”掉的一种细胞调控方式。

自噬过程分为自噬体的形成、自噬体与溶酶体的融合、降解的三个步骤。

自噬体的形成是细胞自噬的第一步，这个过程既需要细胞内的自噬相关基因(ATG)的调控，也涉及到蛋白质合成、转运和翻译后修饰等复杂的生物化学过程。

ATG基因编码的多种自噬相关蛋白与其他蛋白质一同作用，形成一个复杂的自噬体，这个体主要是由自噬小體，自噬泡包围而成的。

随后，细胞需要让自噬体与溶酶体融合，将自噬小體等物质通过溶酶体酶的降解而完成相应的消除作用。

自噬过程的调控是异常复杂的，由多种信号传导通路和蛋白相互作用调节。

蛋白磷酸酶1(PP1)和磷酸酶二(PP2A)则需要与Atg13，FKBP38，mTOR等这些关键的蛋白质结合，并实现差异性的蛋白翻译后修饰来进行负调控。

2. 细胞凋亡的调控和机制细胞凋亡是细胞内容物逐渐分解或释放，最终导致细胞死亡。

这个过程也需要多个复杂的信号传导通路相互作用进行调控匯整。

凋亡过程主要由Bcl-2蛋白家族，半胱氨酸蛋白酶，线粒体内膜通道等组分协同完成。

Bcl-2蛋白家族是一个非常重要的因子，该家族成员包括抗凋亡成员和促凋亡成员。

凋亡信号通路会通过半胱氨酸蛋白酶的影响，诱导Bcl-2抗凋亡成员产生生物学的影响，即Bcl-2系家族和线粒体跨膜通道等的作用。

半胱氨酸蛋白酶粘附于线粒体内膜的外侧，可以通过其本身的蛋白酶活性，诱导内膜蛋白质的裂解，释放出cytochrome c等线粒体成分。

这些成分可以进入细胞质，激活一系列相关的细胞凋亡信号通路，最终归结于将细胞的基本构成部分(如DNA等)逐步分解或释放。

LPS诱导HUVEC细胞凋亡最适浓度与时间选择

摘要目的：探讨脂多糖诱导ＨＵＶＥＣ细胞凋亡的最适浓度和时间。方法：体外培养人脐静脉血管内皮细胞株（ＨＵ—
ＶＥＣ），将脂多糖（ＬＰＳ）分为１００、１０、１、１Ｏ一、１Ｏ＿。、１Ｏ～、１Ｏ～、１Ｏ一ｇ・ｍｌ８个浓度，分别刺激０．５、１、２、６、１２、２４ｈ后，采用ＣＣＫ＿８法观察细胞活力，荧光显微镜观察Ｈｏｃｈｅｓｔ３３３４２／ＰＩ双染后细胞形态。结果：同阴性对照组比较，药物浓度 ≥ １Ｏ～ｇ・玎１ｌ刺激２４ｈ均可引起细胞活力明显下降（Ｐ＜Ｏ．０５）。１００ｇ・ｍｌ－１刺激１ｈ，１０
细胞凋亡的差异，为深入研究脓毒血症、心血管疾病、肿瘤所致
超净工作台（苏州净化设备有限公司，ＳＷ－ＣＪ－１Ｆ型）；倒置
相差显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司，ＣＫＸ４１型）；ＣＯｚ培养箱（日本Ｓａｎｙｏ公司，ＭＣＯ－１５ＡＣ型）；离心机（北京医用离心机厂，
模型。．
关键词：脂多糖；ＨＵＶＥＣ细胞；细胞凋亡
脂多糖（Ｌｉｐｏｐｏ］ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）为革兰阴性菌细胞壁的８试剂盒（碧云天生物技术研究所）。
１．１．２仪器
Ｈｏｃｈｅｓｔ３３３４２／ＰＩ双染可见明显核浓缩和凋亡小体的产生，甚至出现死亡现象。结论：ＬＰＳ刺激后引起ＨＵＶＥＣ细胞活力下降呈时

积雪草苷的药理作用及机制研究进展

积雪草苷的药理作用及机制研究进展作者：秦慧真林思邓玲玉朱华来源：《中国药房》2021年第21期中图分类号 R285.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）21-2683-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.21.21摘要目的：综述积雪草苷（AS）的药理作用及机制，为AS新药开发和临床应用提供参考。

方法：以“积雪草苷”“抗肿瘤”“抗炎”“asiaticoside” “anti-tumor” “anti-inflammation” “pharmacological action”等为关键词，在中国知网、万方数据、维普网、PubMed等数据库中组合查询2010年1月-2021年6月发表的相关文献，对AS的药理作用及机制进行总结归纳。

结果与结论：AS具有抗肿瘤、抗纤维化、抗炎、抗阿尔茨海默病、改善学习记忆能力、抗抑郁、抑制瘢痕增生和修复皮肤损伤等多种药理作用。

其抗肿瘤作用与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡有关;抗纤维化作用与下调转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、羟脯氨酸（Hyp）的表达有关;抗炎作用与下调核转录因子κB（NF-κB）信号通路中白细胞介素6（IL-6）、IL-1β、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达，抑制氧化应激等有关;抗阿尔茨海默病作用与抑制血管内皮细胞凋亡、Toll样受体4（TLR4）/NF-κB信号通路活性以及炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的表达有关;抑制瘢痕增生及修复皮肤损伤的作用与抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原和TNF-α、IL-6、IL-1β的表达以及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路活性，上调TGF-β1、血管内皮生长因子（VEGF）、一氧化氮合酶（iNOS）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的表达有关;改善肝、肾、肺损伤的作用与介导MAPK/NF-κB信号通路，抑制丙二醛（MDA）、iNOS、TNF-α、IL-6的表达以及提高抗氧化能力有关。

erastin处理小鼠的方法

erastin处理小鼠的方法Erastin是一种通过靶向谷胱甘肽代谢通路中的系统原动力FSP1来发挥抗肿瘤活性的化合物。

Erastin的抗肿瘤机制是通过抑制了谷胱甘肽还原酶（GSH Reductase）来诱导Ferroptosis，从而导致细胞死亡。

关于Erastin处理小鼠的方法，以下是一个详细描述：1.小鼠动物模型的建立：- 选择合适的小鼠品系，如Balb/c小鼠或NOD/SCID小鼠等。

-根据实验设计，选择合适的小鼠年龄和性别。

-为了减小结果的偏差，将小鼠随机分组，每组小鼠数量要足够，以保证实验的统计学有效性。

2. Erastin溶液的准备：- Erastin可以溶解在适当溶剂中（如纯化水、DMSO等）制备为所需浓度的溶液。

- 确定Erastin的试验浓度，并根据小鼠的体重计算所需用药剂量。

-应该注意不同小鼠品系和年龄段耐受不同，药物剂量需依据文献参考进行优化。

3. Erastin治疗的时间和方式：- 按照实验设计，将小鼠分为治疗组和对照组，并确定Erastin的治疗剂量和时间。

- 设置多个治疗组，以便验证Erastin的剂量依赖效应。

-可以选择多种给药方式，如经口给药、经腹腔注射等。

给药方式需根据药物的性质和研究目的选择合适的方法。

4.小鼠体重的监测：- 在Erastin治疗期间，每天记录小鼠的体重变化。

-如果观察到小鼠体重下降达到规定的标准（如15%）则需要调整药物剂量或结束实验。

5.细胞学和生物学分析：-在给药结束后收集小鼠组织和血液样本。

-利用组织学和免疫组化方法，对组织样本进行形态学和生物标志物的分析。

- 利用Western blot、PCR等技术方法，对生物样本中的分子和基因水平的变化进行检测。

6.统计学分析：-根据实验设计和小鼠的生物学特性，选择合适的统计学方法进行数据分析。

- 评估Erastin对小鼠瘤体生长抑制的效果和小鼠的生存率。

- 通过统计学方法判断Erastin对小鼠体重和生物标志物的影响。

肿瘤坏死因子α致HUVECs内皮型一氧化氮合酶降解

肿瘤坏死因子α致HUVECs内皮型一氧化氮合酶降解徐秀丹;夏勇;阎江洪;何岸;龙洋;罗素新【摘要】目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否可以通过细胞内蛋白质降解途径引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白量减少.方法建立原代HUVECs培养,选取TNF-α不同浓度(0.01、0.1、1和10 ng/mL)、不同时间(24、48和72 h)处理HUVECs;溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)、caspase 抑制剂(caspase inhibitor)和泛素-蛋白酶体抑制剂(MG-132)预处理HUVECs 1.5 h后加入TNF-α(1 ng/mL)共处理 24 h,Western blot方法检测HUVECs中eNOS蛋白表达.结果与对照组比较,1 ng/mL TNF-α处理细胞24 h,eNOS蛋白量明显减少(P<0.01);MG-132与TNF-α共处理组,eNOS蛋白量明显增加(P<0.01).结论TNF-α可以通过泛素-蛋白酶体途径引起eNOS蛋白降解.%Objective To investigate does intracellular protein degradation pathway play an important role in decrease of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs).MethodsTo establish a primary HUVECs culture methods,the HUVECs were incubated with concentration gradient group of TNF-α(0.01,0.1,1 and 10 ng/mL) in different time periods (24,48 and 72 h).The HUVECs were pretreated with NH4Cl or treated with caspase inhibitor or MG-132 1.5 h prior to incubation for an additional 24 h with TNF-α.The expres sion of eNOS was detected via Western blot assay.Results Treatment of the HUVECs with TNF-α(0.01-10 ng/mL) led to a dose-dependent reduction of eNOS expression.And treatment with TNF-α(1 ng/mL) reduced the eNOS expression in a time-depended pared with the TNF-αgroup,the protein expression level of eNOS was obviously increased in the co-working group of MG-123 and TNF-α.Conclusions TNF-α induces degradation of eNOS through a ubiquitin-proteasome pathway.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2017(037)008【总页数】5页(P1067-1071)【关键词】HUVECs;肿瘤坏死因子-α;内皮型一氧化氮合酶;蛋白质降解途径;MG-132【作者】徐秀丹;夏勇;阎江洪;何岸;龙洋;罗素新【作者单位】重庆医科大学附属第一医院心血管内科,重庆 400016;重庆医科大学附属第一医院心血管内科,重庆 400016;美国俄亥俄州立大学心肺研究所,美国哥伦布 43210;重庆医科大学生命科学研究院,重庆 400016;重庆医科大学附属第一医院心血管内科,重庆 400016;重庆医科大学附属第一医院心血管内科,重庆400016;重庆医科大学附属第一医院心血管内科,重庆 400016【正文语种】中文【中图分类】R541.4心血管疾病是全球致死、致残的主要原因，血管内皮位于循环血和血管平滑肌之间，因而成为心血管疾病的一个重要的靶点和调节点，血管内皮损伤或功能障碍是许多心血管疾病的始动或促进因素[1]。

铁皮石斛多糖的药理学研究进展

铁皮石斛多糖的药理学研究进展柳颖;常国炜;刘桂云;蚁细苗【摘要】As an excellent nourishing yin results of precious Chinese medicine,Dendrobium officinale has broad application prospects.Dendrobii officinalis polysaccharides (DOP), which is the main component ofDendrobii officinalis, draws attention of large numbers of researchers. The authors summarized the literature on DOP home and abroad in recent decade, and systemically reviewed the research advances in its pharmacological effects and mechanism. Results showed that DOP had many pharmacological effects, such as antioxidation, hypoglycemic, prevention and treatment of diabetic complications, anti-tumor, enhancing immunity, and so on. The pharmacological effects may be based on the regulation of NF-κB, PI3K/Akt, MAPK pathway. This pa per intended to provide reference for further research, reasonable exploitation and utilization ofDendrobii officinalis.%铁皮石斛为滋阴效果极佳的名贵中药材,具有广阔的发展应用前景.铁皮石斛多糖(DOP)是其主要成分,也是研究热点.作者查阅近10年国内外文献报道,对DOP的药理作用及机理相关文献进行归纳,DOP具有抗氧化、降血糖及防治糖尿病并发症、抗肿瘤、提高免疫力等多种药理作用,其作用机理可能与NF-κB、PI3K/Akt、MAPK等信号通路有关,为铁皮石斛进一步研究与开发提供参考.【期刊名称】《甘蔗糖业》【年(卷),期】2017(000)006【总页数】5页(P44-48)【关键词】铁皮石斛;多糖;药理学【作者】柳颖;常国炜;刘桂云;蚁细苗【作者单位】广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所) 广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室,广东广州510316;广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所)广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室,广东广州510316;广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所) 广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室,广东广州510316;广东省生物工程研究所(广州甘蔗糖业研究所) 广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室,广东广州510316【正文语种】中文【中图分类】TS245.9铁皮石斛[1-2]为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生草本植物，别名“黑节草”，是《中国药典》2010版收录的名贵中草药之一，位于“九大仙草”之首，具有滋阴清热、益胃生津等功效。

X-99诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡

Ｉｃ．●青岛海洋大学硕士学位论文ｘ一９９诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡摘要Ｉ化学治疗是治疗恶性肿瘤的重要手段之一。

探讨抗肿瘤药物的作用特点及作用机制，可以为药物的临床应用及充分发挥疗效奠定基础ｉ≯我们课题组以宫颈癌细胞株（Ｈｅｌａ细胞）为实验对象，研究了ｘ．９９（一种天然抗癌活性提取物）诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡，（得到以下、结果。

１．用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定ｘ．９９对细胞生长的影响。

结果表明，ｘ．９９对Ｈｅｌａ细胞的生长具有明显的抑制作用，而且该效果与ｘ．９９的作用时间与剂量之间有显著的依赖关系。

２．用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定不同ＤＮＡ含量细胞所占比例，分析ｘ．９９对Ｈｅｌａ细胞周期的影响。

结果表明，ｘ．９９可阻断Ｈｅｌａ细胞在Ｇ２／Ｍ期，呈一定的时间和剂量依赖关系：不同的作用方式，ｘ一９９对Ｈｅｌａ细胞周期的影响也不同，可阻断Ｈｅｌａ细胞在Ｇｏ／Ｇ．期。

３．分别从细胞形态，ＤＮＡ电泳，细胞周期变化三个指标证实ｘ．９９在一定剂量范围内可诱导Ｈｅｌａ细胞凋亡。

经ｘ一９９作用的细胞呈典型的凋亡细胞形态；琼脂糖凝胶电泳图谱显示ＤＮＡ梯状图谱；在ＤＮＡ直方图上出现亚二倍体峰。

由上述结果可得饴论如下：１．Ｘ一９９对Ｈｅｌａ细胞的生长具有强烈的抑制作用。

２．ｘ．９９对Ｈｅｌａ细胞的作用具有周期时相特异性。

３．作用方式不同，ｘ．９９对Ｈｅｌａ细胞周期影响也不同。

４．细胞周期阻滞并不直接诱导细胞凋亡。

５．～定浓度范围内，ｘ．９９作用不同时间均可诱导Ｈｅｌａ细胞凋亡。

关键词：Ｘ．９９细胞周期阻滞细胞凋亡Ｈｅｌａ细胞童璺塑堂查堂堡圭堂堡堡苎；ＣｅｌｌｃｙｃｌｅａｒｒｅｓｔａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＸ－９９ｉｎＨｅｌａＣｅｌｌｓＡｂｓｔｒａｃｔＤｒｕｇｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｍｅｔｈｏｄｓｏｎｔｕｍｏｒ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｎｔｉｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｎｄｉｎｃｒｅａｓｉｎｇａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｍｃａｙ．ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅａｎｔｉｔｕｍｏｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＸ．９９．ｗｅｅｘａｍｉｎｅｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＸ．９９ｏｎＨｅｌａｃｅｌｌｃｙｃｌｅｋｉｎｅｔｉｃｓａｎｄｔｈｅｐａｔｔｅｒｎｏｆｃｅｌｌｄｅａｔｈ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓａｒｅｓｈｏｗｅｄａｓｆｏｗｌｌｏｗｓ．ｊＣｙｔｏｔｏｘｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｓｓａｙｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｂｙｔｈｅＭＴＴｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｘ·９９ｅｘｈｉｂｉｔｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙａｇａｉｎｓｔＨｅｌａｃｅｌｌｓｉｎａｄｏｓｅ—ａｎｄ’ｔｉｍｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．Ｔｈｅｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）ｄａｔａｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＨｅｌａｃｅｌｌＳａｍｏｎｇｐｈａｓｅｓｏｆｔｈｅｃｅｌｌｃｙｃｌｅｗａｓｄｉｓｔｕｒｂｅｄｗｈｅｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＸ一９９．ＴｈｅｒａｔｅｏｆＧ２／Ｍｐｈａｓｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎａｄｏｓｅａｎｄｔｉｍｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．ＣｅｌｌｓｗｅｒｅｍａｉｎｌｙｂｌｏｃｋｅｄａｔＧ２／Ｍｐｈａｓｅ．ＡｐｏｐｔｏｓｉＳｏｆＨｅｌａｃｅｌｌｓｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｘ．９９．Ｔｈｅｘ．９９．ｔｒｅａｔｅｄＨｅｌａｃｅｌｌｓｅｘｈｉｂｉｔｅｄｄｒａｍａｔｉｃｍｏｒｐｈ０１０９ｉｃａｌａｌｔｅｒａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｔｏａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｉｎ，ｍｅｎｂｒａｎｅ．ｅｎｃｌｏｓｅｄｎｕｃｌｅａｒｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ．ＡｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈｅｌａｄｄｅｒｐａｔｔｅｒｎｏｆＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙＸ一９９．Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｘ－９９一ｔｒｅａｔｅｄＨｅｌａｃｅｌｌｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈｅｈｙｐｏｄｉｐｌｏｉｄＤＮＡｐｅａｋ（ａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｅａｋ）．Ｐｏｓｓｉｂｌｅｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｃｏｕｌｄｂｅｄｒａｗｎａｓｆｏｌｌｏｗｓ．１．Ｘ一９９ｓｈｏｗｅｄｓｔｒｏｎｇｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙａｇａｉｎｓｔＨｅｌａｃｅｌｌｓ．２．Ｘ－９９ｂｅｌｏｎｇｓｔｏｃｅｌｌｃｙｃｌｅｓｐｅｃｉｆｉｃｏｎｅ．：３．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＸ－９９ｏｎｃｅｌｌｃｙｃｌｅｏｆＨｅｌａｃｅｌｌｓｖａｒｉｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ．’４．Ｔｈｅｂｌｏｃｋｏｆｃｅｌｌｃｙｃｌｅｄｉｄｎｏｔｄｉｒｅｃｔｌｙｉｎｄｕｃｅａｐｏｐｔｏｓｉｓ．５ＡｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＨｅｌａｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｎｄｕｃｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｏｆＸ一９９ｉｎｄｊｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅ．ＫｅｙＷｏｒｄ：Ｘ一９９，ＣｅｌｌＣｙｃｌｅＢｌｏｃｋ，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ＨｅｌａＣｅｌｌｓ２－，青岛海洋大学硕士学位论文缩略语ＭＴＴ（５－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ）噻唑蓝ＦＣＭ（Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｌ流式细胞光度术ＰＣＤ（ＰｒｏｇｒａｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ）程序性细胞死亡ＥＢ（ＥｔｈｉｄｉｕｍＢｒｏｍｉｄｅｌ溴化乙啶ＰＩ（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ）碘化丙啶ＳＤＳｒＳｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ）十二烷基硫酸钠青岛海洋太学硕士学位论文前言１９５３年Ｈｏｗａｒｄ和Ｐｅｌｃ首先提出细胞周期的概念，增殖细胞的细胞周期是指处于母细胞分裂后形成的细胞到下一次再分裂形成两个子细胞之间的时期１１１。

hoechst染色检测凋亡细胞原理

hoechst染色检测凋亡细胞原理染色检测凋亡细胞是通过特定的染色方法来检测细胞凋亡的过程和结果。

染色方法允许科学家观察细胞核的变化、DNA断裂和其他凋亡特征。

其中，Hoechst染色是一种常用的染色方法之一。

Hoechst染色是一种荧光染色方法，最早由德国药厂Hoechst AG开发，主要用于核酸染色。

该染料可以结合DNA的碱基，从而在显微镜下使细胞核呈现出蓝紫色的荧光。

Hoechst染料通常与其他染料如荧光素化细胞质染料相结合，以区分细胞核和胞质。

当细胞发生凋亡时，其核酸会发生断裂和降解，导致DNA的碱基暴露在细胞核中。

Hoechst染料能够结合这些裸露的碱基，从而使细胞核染色。

由于凋亡细胞的DNA碎片化，Hoechst染色下不同于正常细胞。

一般来说，使用Hoechst染色检测细胞凋亡需要以下步骤：1.培养细胞：首先，需要培养细胞，使其达到适当的生长状态。

细胞可以来源于不同的组织或细胞系，如肿瘤细胞系或原代细胞。

2.染色处理：将Hoechst染料加入培养基中，让细胞与染料接触。

通常情况下，需根据实验要求和细胞类型确定染料的浓度和处理时间。

3.孵育和洗涤：将含有Hoechst染料的培养基孵育在适当的条件下，如37°C的恒温培养箱中。

经过染色后，需要洗涤细胞以去除未结合的染料。

4.显微镜观察：最后，将细胞放在玻片上，用显微镜观察细胞核的染色情况。

Hoechst染料在显微镜下通常呈现出蓝紫色荧光，而正常细胞核呈现规则的形状和结构。

而凋亡细胞的染色较弥散，且核内会观察到碎片化的DNA。

Hoechst染色法可以将正常细胞和凋亡细胞区分开来，并且可以观察到凋亡细胞的具体形态变化。

凋亡细胞的观察有助于研究细胞凋亡的机制以及其在生物学中的重要角色。

凋亡是一种由众多信号分子和通路调节的主动性细胞死亡过程。

它在多种生理和病理情况下发挥重要作用，如细胞发育、免疫应答和肿瘤发生。

凋亡细胞的特征包括细胞核的形态改变、DNA断裂和核酸降解。

高一生物细胞凋亡知识点

高一生物细胞凋亡知识点细胞凋亡是生物学中一个重要的概念，指细胞在一定条件下主动死亡的过程。

它在生物体的发育、组织维持以及免疫防御等方面起着至关重要的作用。

本文将从定义、机制、调控和应用等方面介绍高一生物学中的细胞凋亡知识点。

一、定义与发现细胞凋亡是一种有序的细胞死亡过程，它与坏死不同，坏死是因为外界刺激导致的细胞死亡，而细胞凋亡是细胞自身程序性分解为封闭小囊泡的过程。

细胞凋亡最早由美国科学家杰米斯·韦特所发现，他观察到在显微镜下细胞出现了膨胀、聚集和最终溶解的现象。

二、机制细胞凋亡的过程主要包括细胞凋亡信号传导途径和细胞内部的特定调节。

在细胞凋亡信号传导途径中，有三个核心的蛋白家族：半胱氨酸蛋白酶（caspases）、Bcl-2家族和TNF受体家族。

半胱氨酸蛋白酶是细胞凋亡过程中最关键的调控因子，它可以启动细胞死亡信号级联反应。

Bcl-2家族是一类调节细胞凋亡的蛋白，它可以通过调节线粒体膜通透性来控制细胞凋亡的进程。

TNF受体家族主要通过激活下游信号途径来介导细胞凋亡。

三、调控细胞凋亡的过程受到多种调控因素的影响，包括外界环境因素和内部因素。

外界环境因素如缺氧、放射线、化学物质、病毒感染等可以诱导细胞凋亡。

内部因素包括基因突变、DNA损伤等可以导致细胞凋亡。

此外，细胞凋亡还受到一系列信号通路的调节，如细胞凋亡抑制蛋白（IAPs）、细胞周期因子等。

四、应用细胞凋亡在生物体的发展和疾病治疗中具有广泛的应用前景。

在生物体的发育过程中，细胞凋亡促进了器官形成和组织发育。

在人类疾病治疗中，细胞凋亡可用于治疗肿瘤。

通过引导肿瘤细胞进行凋亡，可以达到抑制肿瘤生长的效果。

此外，细胞凋亡在免疫系统中也有重要作用，可以调节免疫细胞的数量和功能。

综上所述，细胞凋亡是生物学中一个重要的概念，它在生物体发育、组织维持以及疾病治疗等方面具有重要作用。

了解细胞凋亡的机制和调控有助于深入理解生命的本质，同时也为未来的生物医学研究和治疗提供了新的思路和方法。

细胞凋亡低氧响应的分子机制

细胞凋亡低氧响应的分子机制人体细胞在生长与分化过程中需要依靠各种生物分子进行调控，同时，在面对不同外界环境刺激时，人体细胞也有自我调节的反应。

细胞凋亡作为一种常见的减数分裂方式，是人体自身保持组织健康的必要手段之一。

而在低氧条件下，细胞凋亡的机制也会发生变化，这种细胞凋亡低氧响应不仅会影响到人体细胞生长和分化，也可能带来一些相关疾病，因此我们有必要深入挖掘这种现象背后的分子机制。

细胞凋亡可以被划分为内部和外部两种机制，内部机制是与细胞自身生长发育有关的，外部机制是受到外来环境刺激而引起的反应。

低氧条件下的细胞凋亡响应，属于外部机制引起的变化，其发生的过程一般分为三个阶段：感应、传导和执行。

在感应阶段，人体细胞会受到低氧条件下的刺激，通过一些基因激活，开始进入凋亡的准备阶段。

在这个阶段中，针对特定mRNA的翻译因子HIF-1便会发挥重要作用，HIF-1能够促进DNA和RNA的合成，同时还能通过调控ATP增加细胞内能量储备。

而在传导阶段，受到HIF-1和一些低氧受体的作用，一部分蛋白激酶的合成被抑制，同时还有几种细胞凋亡同源体(CED-4)开始发挥作用，促进细胞内酶的激活。

最后，在执行阶段，形成了一些氧化损伤和凋亡相关的分子信号通道，进一步导致细胞内蛋白质的降解、DNA裂解以及细胞壁破裂等现象，最终实现了细胞的凋亡。

再具体一些来看，HIF-1在低氧表达时，会启动一系列若干细胞适应能力的基因，能够调节细胞内环境平衡，防止细胞因缺乏氧气而引起的按照长期缺氧、产生自由基、调节和控制免疫细胞作用等多种适应性反应，这在一定程度上保护了细胞的正常生命活动，同时为细胞凋亡响应的发生奠定了基础。

与此同时，低氧条件下还有一些低氧受体得以发挥作用，其中最为重要的是独特的成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族分子。

低氧的刺激可以启动FGFR受体的一些下游的反应，进而参与细胞凋亡的响应。

此外，在细胞内产生过程中常会产生一些致密的蛋白质聚集物，形成部分内质网蛋白，在断氧环境下，这些蛋白质聚集的能力会得到明显提高，这也是低氧环境下细胞凋亡响应的另一个重要机制。

加味益气聪明汤对Aβ1-42诱导HBMEC细胞凋亡的保护作用及机制研究

加味益气聪明汤对Aβ1-42诱导HBMEC细胞凋亡的保护作用及机制研究摘要】目的:研究加味益气聪明汤对β-淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）诱导人脑微血管内皮细胞株（HBMEC）细胞凋亡的保护作用及其机制。

方法:将HBMEC分为阴性对照组、对照组和加味益气聪明汤组（0.1、1、10g·ml-1），除阴性对照组外，其余各组均加入50μmol?L-1Aβ1-42培养24h，同时加味益气聪明汤组加入相应浓度的中药提取液作用30min，每个浓度设置3个复孔。

CCK-8法检测细胞活力，Hochest 33342/PI双染法观察细胞凋亡情况，流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blot法检测细胞中果蝇样受体4（TLR4）、环氧合酶2（COX-2）蛋白的表达。

结果:与阴性对照组比较，对照组细胞活力降低、凋亡率增加，TLR4、COX-2蛋白表达增加；与对照组比较加味益气聪明汤组细胞活力增强、凋亡率降低，TLR4、COX-2蛋白表达减少，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。

结论:加味益气聪明汤可改善Aβ1-42所致的HBMEC凋亡，其机制可能与抑制TLR4/COX-2信号通路有关。

【关键词】加味益气聪明汤；HBMEC；细胞凋亡；TLR4/COX-2【中图分类号】R243 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2019）19-0220-02阿尔茨海默病(AD)是一种神经退行性疾病，发病机制复杂，患者生存率低，目前尚无有效的药物能够治愈该疾病[1]，给社会和家庭带来了极大的负担。

Aβ的沉积导致脑血管内皮损伤可能是AD发病机制之一，可能与Aβ致血管内皮细胞细胞凋亡，产生炎症反应有关[2]。

TLR4是机体参与炎症信号的重要受体之一[3]，特异性配体可以激活TLR4与COX-2信号通路，释放炎症因子IL-1、TNF-α[4]。

加味益气聪明汤主要含黄芪、人参、葛根、石菖蒲、远志等中药，现代研究表明其具有神经功能保护作用[5]，对阿尔茨海默病具有一定的改善作用。

细胞凋亡实验步骤及注意事项

细胞凋亡实验步骤及注意事项一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。

凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。

它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。

细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。

在生物化学上，多数细胞凋亡的过程中，内源性核酸内切酶活化，活性增加。

核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断，降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。

如果对核DNA进行琼脂糖电泳，可显示以180-200bp为基数的DNA ladder（梯状带纹）的特征。

相比之下，坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。

细胞在坏死早期即丧失质膜完整性，各种细胞器膨胀，进而质膜崩解释放出其中的内容物，引起炎症反应，坏死过程中细胞核DNA虽也降解，但由于存在各种长度不等的DNA片断，不能形成梯状带纹，而呈弥散状。

细胞膜是一选择性的生物膜，一般的生物染料如PI等不能穿过质膜。

当细胞坏死时，质膜不完整，PI就进入细胞内部，它可嵌入到DNA或RNA中，使坏死细胞着色，凋亡细胞和活细胞不着色。

而一些活细胞染料由于为亲脂性物质，可跨膜进入活细胞，因而可进行活细胞染色。

Hoechst33342是一种活性荧光染料且毒性较弱，它是双苯并咪唑的一种衍生物。

与DNA特异结合（主要结合于A-T）碱基区），显示凋亡细胞和活细胞。

凡是看到有凋亡小体的细胞都是凋亡细胞。

三、实验用品1、试剂：三尖杉酯碱（HT），300μg/ml，100mmol/L Tris-HCl（pH7.5），5mol/L EDTA缓冲液、碱性裂解液：0.2mol/L NaOH, 1%SDS、醋酸钠：3mol/L KAc （pH4.8）；异丙醇；70%乙醇；溴酚蓝，蔗糖指示剂。

京尼平苷调节胰腺β细胞GLUT2糖基化的分子机制分析

京尼平苷调节胰腺β细胞GLUT2糖基化的分子机制分析发布时间：2021-07-02T02:19:58.726Z 来源：《中国科技人才》2021年第10期作者：朱建文朱梅韦东洋朱潜荣黄湖燕邓飞飞[导读] GLUT2作为一种糖基化膜蛋白，是胰岛细胞中主要的葡萄糖转运蛋白，是激发葡萄糖反应的前提。

以往研究指出京尼平苷能迅速调节原代大鼠胰岛和 INS-1细胞的葡萄糖吸收、代谢和胰岛素分泌，但其作用机制尚不清楚。

广西山云生化科技股份有限公司广西柳州市 545600摘要：2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）是一种常见的慢性代谢疾病，可导致持续性高血糖和胰岛素抵抗。

葡萄糖刺激的胰岛素分泌（glucose- stimulated insulin secretion，GSIS）在维持血糖平衡中起着重要作用。

研究小组之前的工作发现京尼平苷在低浓度和中等浓度葡萄糖存在时激活胰高血糖素样肽-1受体（glucagon- like peptide-1 receptor，GLP-1R来调节GSIS，京尼平苷能迅速增强胰腺β细胞对葡萄糖的吸收和代谢，并促进胰岛素分泌。

然而，在高糖条件下，京尼平苷具有相反的作用，降低胰腺β细胞的葡萄糖摄取、代谢和胰岛素分泌。

然而，目前还不清楚京尼平苷是如何在短时间内调节细胞的胰岛素分泌的，因此有待于进一步研究。

关键词：京尼平苷；胰腺β细胞；GLUT2糖基化；分子机制GLUT2作为一种糖基化膜蛋白，是胰岛细胞中主要的葡萄糖转运蛋白，是激发葡萄糖反应的前提。

以往研究指出京尼平苷能迅速调节原代大鼠胰岛和 INS-1细胞的葡萄糖吸收、代谢和胰岛素分泌，但其作用机制尚不清楚。

刘东星[1]构建了m-Cherry标记的人GLUT2融合蛋白表达载体，并结合活细胞成像技术研究了GLUT2在每个细胞中的分布和定位。

结果表明，在细胞饥饿和葡萄糖刺激条件下，谷氨酰胺转运蛋白可以通过空洞内陷依赖性内吞作用改变细胞膜和细胞质的分布和定位。