A族链球菌胶体金免疫层析试纸条的制备及应用-论文
胶体金试纸条的制备
引言概述：胶体金试纸条是一种常用的分析试剂，广泛应用于生化分析、环境监测等领域。
它以胶体金作为指示剂的主要成分，结合纸条的吸附性能，通过改变颜色来检测目标物质的存在。
本文将详细介绍胶体金试纸条的制备方法和其在分析应用中的优势。
正文内容：一、胶体金试纸条的制备方法1.胶体金的制备1.1还原法制备胶体金1.2化学合成法制备胶体金1.3生物法制备胶体金2.纸条的处理2.1选用合适的纸质材料2.2纸条的预处理2.3纸条的涂覆二、胶体金试纸条的特点和优势1.高灵敏度1.1胶体金的特殊光学性质1.2微米级纳米颗粒的高表面积1.3足够的反应时间2.简单易用2.1操作步骤简单2.2结果直观可见2.3不需要专业设备3.高选择性3.1可调控的颗粒大小和形状3.2可调控的胶体金表面性质3.3可选择性修饰纸条反应区域4.低成本4.1胶体金制备成本低4.2纸条材料成本低4.3适用于大规模生产5.广泛应用5.1生化分析5.2环境监测5.3食品安全检测5.4临床诊断三、胶体金试纸条在生化分析中的应用案例1.蛋白质分析1.1检测蛋白质的存在及浓度1.2快速筛选蛋白质结构1.3监测酶活性变化2.DNA分析2.1单核苷酸多态性检测2.2基因突变检测2.3DNA序列鉴定3.药物检测3.1药物快速筛选3.2药物代谢产物检测3.3药物治疗监测四、胶体金试纸条在环境监测中的应用案例1.水质监测1.1水中重金属离子检测1.2水中有机物污染物检测1.3水中微生物检测2.大气监测2.1空气中有害气体检测2.2空气中颗粒物检测2.3气候变化指示剂监测3.土壤监测3.1土壤中有害物质检测3.2土壤中养分成分检测3.3土壤微生物检测五、结合与总结胶体金试纸条作为一种快速、简便、低成本的分析工具，在生化分析和环境监测等领域具有广泛的应用前景。
它不仅可以满足快速检测的需要，还能提供定量和定性的分析结果。
未来随着技术的不断创新和进步，胶体金试纸条将在更多领域展现其优势和应用价值。
链霉素胶体金免疫层析试纸条的技术报告
链霉素胶体金免疫层析试纸条的技术报告1 胶体金的制备1.1玻璃器皿的准备玻璃器皿表面的少量污染会干扰金颗粒的生成，一切玻璃容器应绝对清洁，用前经过酸洗，硅化。
硅化过程一般是将玻璃容器浸泡于含5％二氯二甲硅烷的氯仿溶液中1min，室温干燥后蒸馏水冲洗，再干燥备用。
专用的玻璃器皿以第一次生成的胶体金稳定其表面，弃去后以双蒸馏水淋洗，可代替硅化处理。
将玻璃器皿用酸液浸泡72小时后，取出，用洗洁精洗涤和大量自来水冲洗，蒸馏水浸泡24h后用去离子水冲洗三次，37℃温箱烘干后备用。
1.2 柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液在胶体金免疫层析试验中，检测信号是由于金颗粒在检测线或质控线上聚集而成，所以如果金颗粒太小就不能产生足够的颜色信号，如果太大又会遇到空间位阻问题。
空间位阻可以阻止小分子蛋白质接近金颗粒的zeta电位，例如IgG 分子(160 000 DaLtons)大约8nm，约有4nm可以与金颗粒的表面结合，其最适的标记金颗粒为40nm，而对小分子抗原来说，可以使用20nm的胶体金颗粒进行标记。
取0.01％氯金酸水溶液100mL用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，持续搅拌的情况下加入1％柠檬酸三钠水溶液3.5mL，继续搅拌加热10min，溶液呈透亮的红色。
室温冷却，用去离子水恢复到原体积，4℃保存。
1.3 胶体金的质量鉴定1.3.1 肉眼观察用肉眼观察制备的胶体金，其颜色为酒红色、均匀度较好无杂质、透明度较高。
1.3.2 紫外扫描鉴定取冷却后的胶体金溶液进行400～600nm紫外扫描，确定最大吸收峰波长，观察最大吸收峰的峰形、峰宽。
紫外扫描的最大吸收峰波长为520nm，根据回归方程Y= 0. 4271X + 514. 56计算得到胶体金颗粒粒径为12.74nm。
由图谱可以看出最大吸收峰的峰宽较小,说明胶体金颗粒分布比较均匀1.3.3 透射电镜鉴定透射电镜下观察胶体金颗粒的大小是否均匀一致，有无椭圆形及多角形。
拍片放大后测量胶体金颗粒直径大小，取多个点计算胶体金颗粒的平均直径。
A族链球菌快速检测条（胶体金法）说明书
★★★★★★★★★★A族链球菌快速检测条（胶体金法）说明书货号：IU-T7【产品名称】通用名称：A族链球菌快速检测条（胶体金法）英文名称：CerTest Strep A Blister Test【包装规格】40人份/盒【预期用途】本检测条应用胶体金免疫层析一步法，用于定性检测咽喉拭子中的A族链球菌抗原或其培养菌落的鉴定。
A族链球菌可引起A族链球菌感染等多种健康问题。
A族链球菌感染既包括轻微的皮肤感染或喉痛，又包括严重危及生命的疾病，例如中毒性休克综合症（多脏器衰竭）和坏死性筋膜炎（软组织病），即俗称的食肉细菌病。
人们所熟知的脓毒性咽喉炎并发轻微皮肤感染，是最常见的发病形式。
健康专家估计，每年此类轻微感染（咽喉与皮肤）者超过1000万人。
从咽喉拭子中鉴别A族链球菌的传统方法包括分离培养及活体鉴定，需要24-48小时甚至更长时间。
本检测条可直接从咽喉拭子中检出活的或死的菌体，5分钟内出结果。
【检验原理】本检测条应用胶体金免疫层析法定性检测A族链球菌抗原。
硝酸纤维素膜上的检测区预先包被了小鼠单克隆抗体。
检测时，样本与预染在检测条中的有色结合物（抗A族链球菌抗体-红色聚苯乙烯微球）混合反应，形成的混合物通过毛细管作用在膜上向前移动，有色微粒亦随着样本流经检测膜而移动。
若样本为阳性，膜上（结果区）的特异性抗体将捕获到有色结合物，从而出现一条红线。
结合物继续向前移动至固定有抗体的质控区时，出现一条蓝线。
蓝色质控线的出现表明：1）加入了足够量的样本；2）流向正确；3）作为试剂的内部质控。
【主要组成成份】1.检测条2.试剂A(2M亚硝酸钠)3.试剂B（0.15M乙酸）4.试管5.拭子6.一次性吸管7.说明书【储存条件及有效期】15-30℃下密封保存，检测条可稳定至包装上标示的有效期。
使用前勿拆开检测条包装。
请勿冰冻。
【适用仪器】适用于手工操作。
【样本要求】用已消毒拭子在扁桃体或咽喉后壁处采集样本，避免触及牙齿、牙龈、舌头及面颊内表面。
一种新冠胶体金抗体检测试纸条及其制备方法
一种新冠胶体金抗体检测试纸条及其制备
方法
以下是一种新冠胶体金抗体检测试纸条及其制备方法的简要介绍：
该测试纸条主要包括纸基、检测线和负对照线，检测线和负对照线上分别固定有新冠病毒抗原和兔抗IgG抗体。
制备方法包括以下步骤：
1.准备纸基，将其涂上样品吸附剂。
2.在纸基上涂布含有新冠病毒抗原的检测线和含有兔抗IgG抗体
的负对照线。
3.干燥并切割纸条，制成测试纸条。
4.将制成的测试纸条包装好，存放于密封袋中。
使用时，将待检测样品滴到样品吸附剂处，样品会被纸基吸附并沿着纸条流动，如果样品中存在新冠病毒抗体，则会与检测线上的新冠病毒抗原结合，形成红色线条，从而显示检测结果为阳性；如果样品中不存在新冠病毒抗体，则只会显示负对照线，检测结果为阴性。
需要注意的是，该测试纸条仅供参考，具体操作时需要根据实际情况进行调整和验证。
胶体金免疫层析试纸条原理
胶体金免疫层析试纸条原理胶体金免疫层析试纸条（Colloidal Gold Immunochromatographic Strip）是一种通过胶体金纳米颗粒与抗体互作用检测特定生物标志物的生物分析方法。
胶体金免疫层析试纸条是一种基于抗体与抗原特异性结合的快速检测试剂，具有简单、快速、灵敏、特异性和便携等优点。
胶体金免疫层析试纸条的原理是利用胶体金纳米颗粒的特性与生物分子相互作用，完成快速检测分析。
试剂条通常由三个部分组成：采样孔、检测膜和吸收纸。
其中检测膜是由贴在聚丙烯酸纤维膜上的抗体分子组成。
检测过程中，样品通常在采样孔处进入试剂条，并沿着检测膜滤过。
样品中的目标分子与膜上的抗体分子结合，并形成膜上的免疫复合物。
在此过程中，胶体金纳米颗粒被添加进样品中。
这些胶体金纳米颗粒上载有反向包被（reverse electrophoretic coating），使胶体金纳米颗粒呈负电荷状态，防止颗粒之间发生不可逆聚集作用。
在测试区和控制区之间的吸收纸层包括了大量的胶体金纳米颗粒。
当测试完成时，样品和胶体金纳米颗粒将被移动到吸收纸层，并进一步与该层的各种化学试剂和物质反应。
控制区内的抗体分子能够与胶体金纳米颗粒发生特异性结合，从而产生红色的线条。
胶体金免疫层析试纸条是一种快速、可视化的生物分析方法，通过免疫反应，通过控制区和测试区之间可见免疫反应条带的形成，快速检测并定性或半定量特定生物标志物。
胶体金免疫层析试纸条的应用范围较广，主要应用于临床检测、环境监测和食品安全等领域。
在临床检测方面，胶体金免疫层析试纸条被广泛应用于诊断感染性疾病，如肺炎、流行性感冒、艾滋病和病毒性肝炎等。
胶体金免疫层析试纸条还可被用于检测肿瘤标志物。
在环境监测方面，胶体金免疫层析试纸条可被用于检测重金属、农药残留、水质监测和气体污染等。
在食品安全方面，胶体金免疫层析试纸条可被应用于检测食品中的防腐剂、色素、激素和有毒污染物等。
胶体金免疫层析试纸条具有多种优势。
胶体金免疫层析间接法测抗体
胶体金免疫层析间接法测抗体胶体金免疫层析间接法是一种常用的抗体检测方法，其原理是利用胶体金颗粒与特定抗原或抗体结合后形成可见性颜色反应，从而判断样品中是否存在目标抗体。
下面将从原理、步骤、优缺点等方面详细介绍胶体金免疫层析间接法测抗体。
一、原理胶体金免疫层析间接法是一种基于免疫学原理的检测方法，其基本原理是将待检样品中的目标抗体与已知抗原结合，然后再加入与该抗原结合的胶体金标记二抗，形成复合物。
复合物沿着试纸条或膜片移动时，在离子力场作用下，形成可见性颜色反应。
该方法通过直观的颜色变化来判断样品中是否存在目标抗体。
二、步骤1.制备试纸条或膜片：将含有特定抗原或抗体的试剂涂覆在试纸条或膜片上，并干燥。
2.制备胶体金标记二抗：将特异性与已知抗原结合的二级抗体与胶体金颗粒结合，形成胶体金标记二抗。
3.加样：将待测样品加入到试纸条或膜片的样品孔中。
4.孵育：将试纸条或膜片放置在湿润的条件下，使复合物形成。
5.观察结果：根据试纸条或膜片上的颜色变化来判断样品中是否存在目标抗体。
三、优缺点1.优点：（1）该方法操作简单，无需显微镜等专业设备，易于使用和操作；（2）检测结果直观明了，通过颜色变化即可判断是否存在目标抗体；（3）该方法对于大多数生物学分子（如蛋白质、DNA、RNA等）都适用；（4）胶体金标记二抗具有良好的稳定性和灵敏度，能够检测到非常低浓度的目标抗体。
2.缺点：（1）该方法对于某些特殊类型的分子可能不适用；（2）由于胶体金颗粒本身就具有一定的自发聚集性，在制备胶体金标记二抗时需要严格控制反应条件，否则可能导致聚集现象影响检测结果；（3）该方法的灵敏度有限，对于某些低浓度的目标抗体可能无法检测出来。
四、应用领域胶体金免疫层析间接法广泛应用于医学、生物学、环境监测等领域。
在医学领域，该方法可用于检测各种疾病的诊断和治疗效果评估。
在生物学领域，该方法可用于检测蛋白质、抗体等分子的存在及其定量分析。
在环境监测领域，该方法可用于检测水质、土壤等中有害物质的存在及其含量。
一种胶体金免疫层析试纸、制备方法及应用[发明专利]
![一种胶体金免疫层析试纸、制备方法及应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/f3c3bb410a1c59eef8c75fbfc77da26924c59640.png)
专利名称：一种胶体金免疫层析试纸、制备方法及应用专利类型：发明专利
发明人：陈海兰,文海燕,江明生,潘艳,严昊,何家康,韦英明申请号：CN202111394440.6
申请日：20211123
公开号：CN114137212A
公开日：
20220304
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于免疫层析检测技术领域，公开了一种胶体金免疫层析试纸、制备方法及应用，所述胶体金免疫层析试纸的制备方法包括：胶体金的制备；胶体金最适标记pH浓度的确定；胶体金最适标记蛋白浓度的确定；胶体金标记抗体制备；胶体金层析免疫试纸条的组装；胶体金免疫层析试纸条的性能考察。
本发明通过改良标记胶体金的制备方法，采用Tris辅助法制备优质的胶体金，制备猪轮状病毒胶体金免疫层析试纸条，适合于临床粪便样品中轮状病毒的快速检测。
本发明基于胶体金的猪轮状病毒胶体金免疫层析快速检测方法，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、简单快捷等特点，可以实现对临床样品的快速检测，适用于轮状病毒性腹泻疾病的快速诊断和流行病学。
申请人：广西大学
地址：530004 广西壮族自治区南宁市大学东路100号
国籍：CN
代理机构：重庆信必达知识产权代理有限公司
代理人：刘会锋
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免疫胶体金试纸条的开发及应用
（2）提取
----称取1.0±0.05g均质物，加入1ml去离子水，加入 100μl提取剂1，加入100μl提取剂2，再加入4ml乙腈，涡 动2min，再加入4g无水硫酸钠，立即拧紧盖子，倒置轻 轻敲打，上下振荡1min，3000g以上，室温离心5min；
免疫胶体金试纸条的 开发及应用
目录：
1. 免疫胶体金试纸条原理及开发流程 2. 免疫胶体金试纸条的应用 3. 胶体金读数仪的发展及应用
一、免疫胶体金试纸条原理及开发流程
• 简单/现场/快速
特点
1.打开包装取出试纸条
2.滴加样品
3.结果判读（3-10min）
1、试纸条结构图
样品垫
胶体金垫
控制线（C线）
二、免疫胶体金试纸条的应用
应用领域 • 人医方面
如早孕检测，急性心肌梗塞的诊断……
• 非法添加物检测
如尿液中“瘦肉精”检测……
• 抗生素残留检测：
如牛奶中β-内酰胺类药物检测……
• 毒素类检测
如饲料中黄曲霉毒素检测……
• 毒品检测
如吗啡、病毒等检测
1. 以尿液中检测莱克多巴胺残留为例
1) 尿液的收集
----取1ml上清液至10ml新聚苯乙烯离心管中，加入100μl 孔雀石绿氧化剂（现加现配）。涡动5s，于50~60℃水浴 氮气或空气流下吹干； ----加入0.5ml样品稀释液涡动溶解2min，取70l用于分析。
2) 检测步骤
（1）从原包装中取出试剂桶，打开后取出所需数目的微孔试剂和 试纸条，并做好标记。 （2）用微量移液器吸取70l待检水产样本溶液于微孔中，缓慢抽 吸且充分与微孔中试剂混匀。 （3）室温孵育5min后，将标记好的试纸条插入微孔中——印有 “MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中。 （4）室温孵育5-10min后，取出试纸条并根据示意图判定结果， 其他时间判定无效。
免疫胶体金的制备与应用
免疫胶体金的制备及其在医学检验中的应用胶体金是一种常用的标记技术，有其独特的优点。
近年已在各种生物学研究中广泛使用。
在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。
同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。
1971年Faulk 和Taytor将胶体金引人免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。
目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法( immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA)，用于检测HBsAg、HCG 和抗双链ＤＮＡ抗体等，具有简单、快速、准确和无污染等优点。
免疫胶体金技术的基本原理氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。
由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。
胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。
这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌Ａ蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。
胶体金的制备方法胶体金的制备一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。
下面介绍最常用的制备方法及注意事项。
链霉素胶体金免疫层析法检测试纸条的研制的开题报告
链霉素胶体金免疫层析法检测试纸条的研制的开题报告一、选题背景及意义链霉素是一种广谱抗生素，对多种细菌感染都具有治疗作用。
因其疗效显著，现代临床医学中被广泛应用。
目前，常规的链霉素检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、液相质谱等，这些方法需要使用昂贵的仪器设备，操作技能要求较高，且需要复杂的前处理步骤，不能满足快速、便捷、迅速检测链霉素的需求。
近年来，免疫层析法广泛应用于生物分析领域，该方法采用抗体(Ab)-抗原(Ag)的特异性反应来检测样品中特定的成份，具有简便、快速、灵敏等优点。
在链霉素的检测中，免疫层析法已被应用，但其检测效果不够理想，检测灵敏度还需进一步提高。
因此，本项目将开展链霉素胶体金免疫层析法检测试纸条的研制，旨在开发一种简便、快速、灵敏的链霉素检测方法，以便于实际使用。
二、研究内容及方法（一）研究内容1. 选育链霉素特异性单克隆抗体2. 合成链霉素与载体蛋白的偶联物，制备链霉素-载体蛋白复合抗原3. 构建链霉素胶体金免疫层析试纸条4. 优化试纸条的反应条件，并建立检测体系5. 对试纸条的性能进行评价，包括灵敏度、特异性、稳定性等方面的测试（二）研究方法1. 单克隆抗体的制备：通过多次筛选，从免疫后的小鼠脾细胞中筛选出链霉素特异性的单克隆抗体2. 合成链霉素-载体蛋白复合物：采用化学交联的方法，将链霉素与载体蛋白偶联3. 制备试纸条：将链霉素单克隆抗体和链霉素-载体蛋白复合抗原同时固定在膜上，然后将膜制成试纸条4. 建立检测体系：将试纸条加入含有不同浓度链霉素的样品中进行反应，并用显色剂呈色，通过观察颜色变化来判断样品中是否存在链霉素5. 评价试纸条的性能：通过测定灵敏度、特异性、稳定性等参数，评价试纸条的性能三、预期成果与意义本研究预计可以成功制备出链霉素胶体金免疫层析法检测试纸条，同时可以评价其在检测链霉素中的灵敏度、特异性、稳定性等性能。
这种试纸条具有操作简单、快速、灵敏、可视化等优点，适用于现场快速检测链霉素的需求，可以为链霉素监测提供一种有效、快捷、准确的检测方法。