水稻苗期低温诱导表达新基因OsCOI的克隆、过表达载体的构建与转化

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定 了基 础 。
关 键 词 ： 稻 ； 温 诱 导 表 达基 因 ； 水 低 载体 构 建 ； 遗传 转 化
中图 分 类 号 ： ７ ５ Ｑ ８ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章编 号 ：０ ０— ０ １ ２ １ ） １— ０ ８— ５ １０ ７ ９ （ ０ ０ Ｏ ０ １ ０
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农 学 报 ・ ０１ ２ １ １ ． ２ ２ ０， ５（ ）： ２ ８
水 稻 苗期低 温诱 导 表达 建 与转 化
子育 种 的手 段 提 高水 稻 苗 期 耐 冷 性 ， 期 已通 过 Ｎ ｒ ｅ 前 ｏｔ ｒ 达 分 析 ， 已构建 的水 稻 苗 期 低 温 诱 导 表达 正 向抑 制 差 减 ｈ ｎ表 从
ｅＮ Ｄ Ａ文 库 中 ， 现 了 一个 受 低 温 诱 导 上 调 表达 的功 能 未 知 的 Ｃ Ｈ 发 ： 型 锌 指 结构 域 蛋 白新 基 因 （ 命 名 为 ＯＣ １ 。 本 特 ｓＯ） 研究 进 一 步 通 过 Ｒ —Ｃ ＴＰ Ｒ的方 法 从 水 稻 中克 隆 了该 基 因 ， 建 了其 植 物 过 表 达载 体 ， 构 并通 过 农 杆 菌 介 导 转人 水 稻 基 因 组中， 获得 了其 过 表 达 转 基 因水 稻 株 系 ， 进 一 步 研 究 该 基 因 的 功 能 并 探 讨 其 在 水 稻 耐 冷 分 子 育 种 中 的 应 用 价 值 奠 为
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孙 琦 ， 香玲 张 宁 余 柏 胜 刘 ， ，
（ 甘 肃农 业 大 学 生 命 科 学技 术 学 院 ， １ 甘肃 兰 州 ７０ ７ ；． ３０ ０ ２ 中国科 学 院 遗 传与 发 育 生 物 学研 究 所 ， 京 １０ ０ ） 北 ０ １ １
摘 要 ： 稻 苗 期 冷 害 是 导致 水 稻 减 产 的 重 要 因 素 之 一 。为 了 发 掘 新 的耐 冷 基 因 、 释 其 耐 冷 分 子 机 制 并 应 用 分 水 诠
ｄ ｎｉｉｄ ｉ ｕ ｏ ｍｅ ｅ ｅ ｒ ｈ ｔ ｒ ｕ ｈ ｎ ｒｈ ｒ ｌｔａ ａｙ ｉ． ｎ ｔ ｉ ｔ ｄ ｔ ｅ ｇ ｎ ｓｃｏ ｅ ｏ ａｐ ａ ｔｂｎ ｒ — ｅ ｔｆ ｎ ｏ ｒｆｒ ｒｒ ｓ ａｃ ｈ ｏ ｇ ｏ ｅｎ ｂ ｏ ｎ ｌｓｓ Ｉ ｈ ｓｓｕ ｙ，ｈ ｅ ｅｗａ ｌｎ ｄ ｔ ｌｎ ｉａ ｙ Ｏ ｅ ｔ
回收pcr产物经末端加a反应后连接至pgemteasy载体中转化大肠杆菌dh5经蓝白斑筛选酶切鉴定后测序得到克隆载体pgemteasyoscoi15水稻oscoi基因植物过表达载体构建apa和spe分别酶切ahlg载体和克隆载体pgemteasyoscoi回收目的片段后连接并转化大肠杆菌dh5经酶切检测鉴定重组质粒得到植物过表达载体ahlgoscoi16水稻oscoi基因过表达载体转化水稻愈伤及植株再生采用电击法将过表达载体ahlgoscoi导入根癌农杆菌eha105感受态细胞中利用菌落pcr法检测阳性克隆