大鼠P糖蛋白P-gp酶联免疫分析
酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较
酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较发表时间：2013-05-09T17:14:22.000Z 来源：《中外健康文摘》2013年第8期供稿作者：黄海深陈志通唐光定江伟河[导读] 化学发光免疫法检测结果的稳定性，灵敏度，精密度均优于酶联免疫法黄海深陈志通唐光定江伟河（广东省阳山县人民医院检验科 513100）【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）08-0125-02 【摘要】目的对甲胎蛋白(AFP)试验进行方法学探讨。
方法①对比实验用酶联免疫法和化学发光免疫法同时测定88例临床送检血清标本甲胎蛋白(AFP)的含量。
②线性实验将标准液按不同的浓度稀释后做线性实验。
③精密度实验用两法对低、中、高值质控品分别进行精密度实验。
结果①结果表明，两法无显著差异(P＞0.05)，相关系数r＝0.995，提示两法呈良好相关性。
②线性实验显示酶联免疫法和化学发光免疫法分别在5～400 ng/ml和2～900 ng/ml范围内呈良好的线性关系。
③精密度实验表明化学发光重复性好于酶联免疫法,特别是病理高值化学发光明显优于酶联免疫法。
结论化学发光免疫法的精密度和准确性均优于酶联免疫法。
【关键词】酶联免疫法化学发光免疫法甲胎蛋白比较【Abstract】 Object: The methodology investigate of Alpha-fetoprotein (AFP) test. Methods: ①Comparative experiments: The simultaneous determination of the serum samples of 88 patients censorship alpha-fetoprotein (AFP) levels by ELISA and chemiluminescent immunoassay. ②Linear experiments: the standard solution is diluted at different concentrations,then doing linear experiments.③Precision experiments: Doing precision experiments on low, medium and high-value quality control materials with the two methods. Results: ①The results show that no significant difference in the two methods(P＞0.05). The correlation coefficient of r = 0.995, these two methods showed a good correlation. ②The linear experiments show that the enzyme linked immunosorbent assay and chemiluminescence immunoassay showed a good linear relationship between the range in 5～400ng/ml and 2～900ng/ml.③Precision experiments show that the repeatability of chemiluminescent immunoassay is better than the enzyme-linked immunosorbent assay, specifically at the pathological high value. Conclusion: The precision and accuracy of the chemiluminescent immunoassay are better than enzyme linked immunosorbent assay.【Key words】 ELISA Chemiluminescent immunoassay Alpha-fetoprotein Comparison 甲胎蛋白（AFP）是哺乳动物胚胎期肝脏卵黄囊合成的一种糖蛋白，是辅助诊断原发性肝癌最常用的检测指标。
小鼠P糖蛋白渗透性糖蛋白(P-gp)酶联免疫分析.
小鼠P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12906m检测范围：0.78 ng/ml – 50 ng/ml最低检测限：0.2 ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠P-gp，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中P-gp含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）是ATP结合盒转运载体蛋白中最大的一个亚系。
P-gp 在许多组织有分布，是一种A TP依赖性膜转运体，作为药物转运子，其作用类似于排出泵，可将药物从细胞内外排而使胞内药物浓度降低，从而降低药效。
P-gp是由1280个氨基酸组成的跨膜蛋白，分子量为170kD，由两个相似的部分构成。
其中每一个部分包含六个转运膜区和一个ATP结合利用区。
P-gp在大肠及小肠的黏膜、血脑屏障、睾丸毛细血管上皮细胞、肝细胞、肾上腺及肾近端小管均有分布，因此它对药物的体内过程有显著影响。
P-gp与正常细胞的分泌功能密切相关，在所有正常人类组织中均可检测到P-gp基因的mRNA，不同器官中Pgp基因mRNA的水平相差很大，在肾脏、肝、消化道、肺等器官P-gp mRNA的水平较高，而在睾丸、卵巢、子宫、皮肤等器官处于较低水平。
越来越多的研究表明P-gp是人体保护正常细胞免受毒物损害的机制之一。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗P-gp抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗P-gp抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
自身免疫性肝病抗体谱检测在自身免疫性肝病诊断中的价值及准确性分析
自身免疫性肝病抗体谱检测在自身免疫性肝病诊断中的价值及准确性分析苑波黑河市疾病预防控制中心黑龙江黑河市 164300摘要：目的：本文主要探讨了在自身免疫性肝病诊断中运用自身免疫性肝病抗体谱检测方法的价值与准确度。
方法：选取80例自身免疫性肝病患者作为研究对象，这些研究对象的就诊时间为2018年6月至2019年6月，将25例原发性胆汁性胆管炎设为对照组，将24例慢性病毒性肝炎设为研究组，将31例自身免疫性肝病患者设为试验组，通过酶联免疫法对各组的抗肝肾微粒体抗体Ⅰ型、抗肝细胞溶质抗原Ⅰ型、抗多核点抗体、抗可溶性肝抗原/抗肝胰原抗体、抗线粒体抗体和跨膜糖蛋白210kd抗体进行检测，并进行比较分析。
结果：试验组患者的各项性检出率显著高于对照组与研究组，组间对比存在显著性差异，值得进行统计（P<0.05）；经过血清检测得知，AIH-Ⅰ型患者LC-1阳性检出率明显高于AIH-Ⅱ和AIH-Ⅲ型患者（P＜0.01），AIH-Ⅱ型患者LKM-1检出率明显高于AIH-Ⅰ和AIH-Ⅲ型患者（P＜0.01），而AIH-Ⅲ型患者SLA/LP阳性检出率明显高于AIH-Ⅰ和AIH-Ⅱ型患者（P＜0.01）。
结论：自身免疫性肝病抗体谱有助于提高自身免疫性肝病的早期诊断，对该病的分型鉴别具有重要价值。
关键词：自身免疫性肝病；诊断价值；精准性The value and accuracy of antibody spectrum detection in the diagnosis of autoimmune liver diseaseAbstract: Objective: This paper mainly discussed the value and accuracy of antibody spectrum detection in the diagnosis of autoimmune liver disease.Methods: choose 80 cases of patients with autoimmuneliver disease as the research object, the object of study of clinical time for June 2018 to June 2019, 25 patients of primary bile cholangitis set as control group, set for the team of 24 cases of chronic viral hepatitis, 31 patients with autoimmune liver disease were set as experimental group, by enzyme-linked immunoassay for each group of liver and kidney microsomal antibody Ⅰ resistant, anti liver cytosol antigen Ⅰ type, multi-core point antibody resistance, resistance to soluble liver antigen/anti liver pancreas original antibody, antimitochondrial antibodies and transmembrane glycoprotein 210 kd antibody testing, and comparative analysis.Results: The detection rate of each sex in the experimental group was significantly higher than that of the control group and the study group.0.05);After serum that AIH LC - 1 - Ⅰ patients with positive detection rate is significantly higher than AIH Ⅱ and AIH type Ⅲ patients (P < 0.01), AIH - Ⅱ LKM 1 detection rate was significantly higher in patients with AIH Ⅰ and AIH - Ⅲ patients (P < 0.01), while patients with AIH - Ⅲ SLA/LP positive detection rate is significantly higher than AIH Ⅰ and AIH type Ⅱ patients (P < 0.01).Conclusion: The antibody spectrum of autoimmune liver disease can improve the early diagnosis of autoimmune liver disease and is of great value in theclassification and differentiation of the disease.Key words: autoimmune liver disease;Diagnostic value;precision1资料与方法1.1一般资料选取80例自身免疫性肝病患者作为研究对象，这些研究对象的就诊时间为2018年6月至2019年6月，将25例原发性胆汁性胆管炎设为对照组，将24例慢性病毒性肝炎设为研究组，将31例自身免疫性肝病患者设为试验组，其中对照组：男12例，女13例，年龄37～75岁，平均（46.8±2.9）岁。
酶联免疫吸附测定法
酶联免疫吸附测定法（ELISA）1.定义 (3)2.原理 (3)2.1抗原抗体反应 (3)2.2免疫测定在临床检验中的应用 (5)3.ELISA的类型 (5)3.1双抗体夹心法测抗原： (6)3.2双抗原夹心法测抗体 (6)3.3间接法测抗体 (6)3.4竞争法测抗体 (7)3.5竞争性测抗原 (7)3.6捕获包被法测抗体 (7)3.7ABS-ELISA法 (8)4.ELISA试剂的组成 (9)4.1固相载体： (9)4.2包被的方式 (9)4.3包被用抗原：天然抗原、重组抗原、合成多肽抗原。
(10)4.4包被的条件： (10)4.5洗涤液： (10)4.7酶的催化性； (11)4.8结合物的制备 (11)4.9结合物的保存 (12)4.10酶的底物 (12)4.11酶反应终止液 (12)4.12参考标准品 (13)4.13加样： (13)4.14保温 (13)4.15保温方式： (13)4.16室温温育的反应 (13)4.17洗涤 (14)4.18显色 (14)4.19比色 (14)4.20酶标比色仪 (15)4.21结果判定 (15)4.22定量测定 (16)4.23ELISA的操作要点 (16)1.定义酶联免疫吸附测定法（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简称ELISA，采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法。
2.原理采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，可对受检物质的定性或定量分析。
2.1抗原抗体反应2.1.1可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab抗体的亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]，Ag·Ab 的解离程度与K值有关。
大鼠磷酸化IKBa(P-IKBa)酶联免疫分析
大鼠磷酸化IKBa（P-IKBa）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中磷酸化IKBa（P-IKBa）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠磷酸化IKBa（P-IKBa）水平。
用纯化的大鼠磷酸化IKBa（P-IKBa）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入磷酸化IKBa（P-IKBa），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的磷酸化IKBa（P-IKBa）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠磷酸化IKBa（P-IKBa）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
elisa酶联免疫吸附实验报告
e l i s a酶联免疫吸附实验报告一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。
借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。
常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。
由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。
酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。
氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（ＲeinheitZahl）值越大说明酶内所含杂质越少。
高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。
用于ELISA检测的HRP的RZ 值要求在3.0以上。
E L I S A的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
P-糖蛋白在神经元中的表达及氧化应激对P-糖蛋白的影响
P-糖蛋白在神经元中的表达及氧化应激对P-糖蛋白的影响白如冰;张忠泉;岑娟【摘要】P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)由多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因编码,是三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)结合盒转运蛋白家族的成员之一.作为血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的重要组成部分,P-gp是一种能量依赖性转运蛋白,可以阻止外源性物质进入细胞,还可以将体内有害的毒性物质排出,是机体的保护屏障.神经元是构成神经系统结构和功能的基本单位,癫痫、脑缺血及神经退行性疾病等许多神经系统疾病最明显的病理变化就是神经元细胞的损伤与凋亡.许多研究和报道显示,在一些脑部病理状态下,P-gp在内皮细胞上的表达会有所改变,但是在神经元细胞上P-gp的变化研究较少.由于氧化应激是许多疾病发生和发展的关键因素之一,该文主要对病理状态下神经元细胞上P-gp的表达的及氧化应激对P-gp的影响做一综述.【期刊名称】《神经药理学报》【年(卷),期】2018(008)003【总页数】6页(P9-14)【关键词】P-糖蛋白;神经元;氧化应激;癫痫;脑缺血;神经退行性疾病【作者】白如冰;张忠泉;岑娟【作者单位】河南大学天然药物与免疫工程重点实验室,河南大学药学院,开封,475004,中国;河南大学天然药物与免疫工程重点实验室,河南大学药学院,开封,475004,中国;河南大学天然药物与免疫工程重点实验室,河南大学药学院,开封,475004,中国【正文语种】中文【中图分类】R9711 P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）的简介P-gp是一种由1 280个氨基酸组成，分子量为170 KD的跨膜糖蛋白，属于三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）依赖型（ATP-binding-cassette，ABC）转运蛋白家族一员［1］。
化学发光免疫分析法和酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的结果比较
化学发光免疫分析法和酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的结果比较摘要】目的对化学发光免疫分析法和酶联免疫法检测血清甲胎蛋白进行结果比较，探讨化学发光免疫分析法的优势与利用发展前景。
方法通过罗氏cobase411分析仪用化学发光免疫分析法对血清甲胎蛋白进行测定，对比组采用酶联免疫吸附法进行血清甲胎蛋白的测定。
结果两种方法呈正相关，都有很好的重复性。
但罗氏cobas e411分析仪用化学发光免疫分析法测定甲胎蛋白的灵敏度较高，为1.5ng/ml，且CV值明显小于酶联免疫吸附法，而在检测范围上看，化学发光免疫分析法也要优于酶联免疫吸附法。
结论利用化学发光免疫分析法进行血清甲胎蛋白的检测具有操作简单、灵敏度较高，重复性较好、稳定性很强等诸多优点，是现今检测血清甲胎蛋白较好的方法，这些优点使其未来有着良好的发展前景，值得临床广泛推广。
【关键词】化学发光免疫分析法血清甲胎蛋白临床应用评价【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）33-0133-02甲胎蛋白是一种糖蛋白，主要来自胚胎的肝细胞，在胎儿在母体30周的时候达到最高峰，随后逐渐下降，在婴儿周岁时与成人水平接近。
经过完实验和案例证明，甲胎蛋白在大约8成以上的肝癌患者的血清中持升高状态，而当肝细胞产生癌变后，却又恢复为蛋白质功能，因此甲胎蛋白成为了对原发性肝癌诊断的一个特异性临床指标，但肝癌的确诊一定要结合其他的医学方式，如影像学检查等[1]。
临床上能对甲胎蛋白进行检测的方法有酶联免疫吸附法、放射免疫法、化学发光免疫分析法和荧光免疫法[2]等。
本文通过罗氏cobas e411分析仪用化学发光免疫分析法对血清甲胎蛋白进行测定，对比组采用酶联免疫吸附法（ELISA）进行血清甲胎蛋白的测定。
现报告如下。
1.材料与方法1.1基本资料选取2012年1月至2013年6月在我院住院治疗的肝癌患者42例，其中男患者30例，女患者12例。
肿瘤标志物检测原理
肿瘤标志物检测原理 Prepared on 22 November 2020肿瘤标志物检测原理根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。
10种常见肿瘤：胃癌、肝癌、食管癌、结直肠肛门癌、白血病、子宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌和膀胱癌。
肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。
以肝癌为例，肿瘤直径＜2cm，5年生存率几乎100%；直径每增加1cm，5年生存率下降20%。
肿瘤诊断三大支柱是图像诊断（包括B超、CT、核磁共振）、化学诊断（血清学和免疫学）及细胞学和组织学诊断，而后两者均以肿瘤标志为主要或辅助观察指标。
当前，肿瘤标志物的检测已从细胞水平深入到分子基因水平，在检测技术上，它将生物化学、核医学、免疫学、细胞学、病理学、分子生物学等诸多学科融合在一起，不仅使检测的项目有了大幅度的增加，而且检测的特异性和灵敏度也有很大的提高。
肿瘤标志物在肿瘤诊断，检测肿瘤复发与转移，判断疗效和预后以及人群普查等方面都有较大的实用价值，而且在肿瘤发生和发展机理研究中也具有重要作用。
肿瘤标志物除用于肿瘤诊断外，可为临床肿瘤治疗提供依据及以其为靶，进行肿瘤的靶向治疗及免疫治疗。
肿瘤标志学已成为肿瘤学中一个重要的新学科、新领域。
肿瘤标志（Tumour Markers）是1978年Herberman在美国国立癌症研究所（NCI）召开的“人类免疫及肿瘤免疫诊断”会上提出的，次年在英国第七届“肿瘤发生生物学和医学”会议被大家确认，并开始引用。
肿瘤标志物是指由肿瘤细胞由肿瘤组织和细胞产生的与肿瘤的形成、发生相关的物质，这些物质存在于肿瘤细胞的胞核、胞质、胞膜上或体液中，进入到血液或其他体液或组织中，或是宿主对体内新生物反应而产生并进入到血液或体液或组织中而含量明显高于正常参考值的一类生物活性物质。
不存在于正常成人组织而见于胚胎组织,或在肿瘤组织中含量超过正常含量。
elisa酶联免疫吸附实验报告
elisa酶联免疫吸附实验报告一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。
借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。
常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。
由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。
酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。
氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml 含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。
高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。
用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
大鼠肝组织中P-糖蛋白的免疫印迹检测方法
大鼠肝组织中P-糖蛋白的免疫印迹检测方法吴琼;杨友辉;杨健;薛维娜;李勇军;何彬;兰燕宇;刘亭【摘要】Objective To determine the optimum experiment condition of detecting P-glycoprotein with western blotting (WB). Methods 6 male SD rats were selected randomly and fed the Polygonumorientale Flower Extract with the dosage of 0. 4g/(kg·d). The livers of 6 SD male rats were taken out and homogenated. Themicrosome was isolated by calcium ion precipitating and detected by BCA method. It was compared the effects of different protein treatments and different electrotransfer conditions. Results Only solubilizing at room temperature did obtained the destined protein compared with solubilizing at high temperature. It was more efficiency to use wet electroblotting which at constant voltage density of 120V for 2h. Conclusion Choosing samples denatured at room temperature, choosing wet electroblotting could be more repetitive and sensitive in the detection of P-glycoprotein by using the western blot (WB) assay. The expression of P-glycoprotein in liver of these six rats given Polygonumorientale FlowerExtract shows certain difference.%目的探讨Western Blot检测P-糖蛋白表达的实验优化条件.方法随机选择6只雄性SD大鼠,给予荭草花提取物0. 4g/(kg·d)灌胃,连续灌胃6d.采用钙盐沉淀法提取6只大鼠肝微粒体,利用BCA法进行蛋白定量后,制备蛋白上样样品.比较不同样品处理方法、转膜方法的检测效果.结果与高温变性相比,样品经室温变性上样可检测到目的条带.湿法电转法较半干法电转法转膜效果好,且湿转条件选择120V,2h较为好.结论样品室温变性处理、120V,2h的湿转转膜条件,是检测P-糖蛋白较优的Western Blot方法.并且在经荭草花提取物给药后的6只SD大鼠肝组织内P-糖蛋白的表达呈现一定的差异.【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2018(042)001【总页数】3页(P9-10,封3)【关键词】蛋白免疫印迹法;P-糖蛋白【作者】吴琼;杨友辉;杨健;薛维娜;李勇军;何彬;兰燕宇;刘亭【作者单位】贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心, 贵州贵阳 550004;贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室, 贵州贵阳 550004【正文语种】中文【中图分类】R392-33△通信作者,E-mail:*************P-糖蛋白(P-glyco protein,P-gp)是一种分子量为170 kD，由1 280个氨基酸组成的跨膜糖蛋白，P-gp既能与药物结合，又能与ATP结合。
酶联免疫实验(竞争法)
检测甲胎蛋白AFP
实验原理
试剂盒 采用针对不同抗原决簇的双克隆抗体分
别制备成包被板和酶结合物，利用ELISA 双抗体夹心法原理检测人血清中的AFP含 量。
ELISA双抗体夹心法
属于非竞争结合测定，是检测抗原最常用 的方法，适用于检测含有至少两个抗原 决定簇的多价抗原。
4、加终止液50 μl 终止反应。 5、以空白调零，450nm波长处用酶标仪测各孔OD值。
结果判定
计算：用双对数线性回归或其他适宜的 曲线拟合方式绘制标准曲线，利用该标 准曲线计算待测样品的AFP的含量。
正常参考值：
1.建议实验室建立自己的正常AFP范围。 2.参考值：健康成人≤20ng／ml.
其基本原理：先将特异性抗体连接在固相 载体上，形成固相抗体；加入待测标本 并温育，使标本中的抗原与固相抗体充 分反应，形成固相抗体抗原复合物，洗 涤除去其他未结和物；然后加入酶标抗 体并温育。
使固相抗原抗体复合物与酶标抗体结 合，形成固相抗体-待测抗原-酶标记 抗体复合物（双抗体夹心），洗涤 除去未结合酶标记抗体；加底物显 色，固相上的酶催化底物成为有色 产物，根据颜色反应的程度进行该 抗原的定性或定量检测。
实验步骤
1、加样；取出包被板，做好标记。留一孔做空白对照， 其余孔用微量加样器依次加入50μl标准品及待测样品， 随即加酶结合物50 μl 。轻轻振荡混匀后，置37度温 箱中温育30min。
2、洗涤：将各孔液体甩掉，用稀释的洗涤液注满各孔， 静置20秒，甩掉，重复5次后在吸水纸上拍干。
3、显色：每空加入底物50 μl ，再加入显色剂50 μl ，充分混匀，室温避光反应5min。
3.对AFP含量在20~400 ng／ml之间者， 建议动态观察。
elisa酶联免疫吸附实验报告
elisa酶联免疫吸附实验报告一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。
借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。
常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。
由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。
酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。
氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以 mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。
高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。
用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
糖类抗原检测方法
糖类抗原检测方法糖类抗原是一种存在于细胞表面的糖蛋白，它在许多疾病的发生和发展中发挥着重要的作用。
因此，糖类抗原的检测成为了临床诊断和治疗中的重要手段之一。
本文将介绍几种常见的糖类抗原检测方法。
一、ELISA法ELISA法是一种常用的糖类抗原检测方法，它基于酶联免疫吸附实验原理。
该方法通过将待测样品中的糖类抗原与固定在试板上的抗体结合，再加入酶标记的二抗，通过酶的催化作用产生颜色反应来定量检测糖类抗原的含量。
ELISA法操作简便、准确性高，被广泛应用于临床检验和科研领域。
二、免疫组织化学染色法免疫组织化学染色法是一种通过使用特异性抗体来检测糖类抗原的方法。
该方法通过将组织切片固定后，使用特异性抗体与糖类抗原结合，再加入酶标记的二抗进行染色。
染色结果可以通过显微镜观察，从而确定糖类抗原的存在与否以及分布情况。
免疫组织化学染色法可以提供组织水平的信息，对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
三、免疫荧光法免疫荧光法是一种利用特异性抗体和荧光染料来检测糖类抗原的方法。
该方法通过将待测样品与特异性抗体结合，再加入荧光标记的二抗，通过荧光显微镜观察荧光信号来确定糖类抗原的存在与否。
免疫荧光法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以在细胞和组织水平上进行糖类抗原的检测。
四、质谱分析法质谱分析法是一种通过质谱仪检测糖类抗原的方法。
该方法通过将待测样品进行离子化，然后通过质谱仪进行分析，得到糖类抗原的质谱图谱。
通过对质谱图谱的解析，可以确定糖类抗原的结构和含量。
质谱分析法具有高分辨率和高灵敏度的特点，可以用于研究糖类抗原的结构和功能。
总结：糖类抗原检测方法的选择应根据具体的实验目的和样品性质进行评估。
不同的方法有各自的优缺点，适用于不同的实验需求。
ELISA 法是一种常用的检测方法，操作简便，适用于大规模样品的检测。
免疫组织化学染色法和免疫荧光法可以提供组织水平的信息，对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
质谱分析法可以提供糖类抗原的结构和含量信息，对于研究糖类抗原的功能具有重要意义。
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大鼠P糖蛋白(P-gp)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T15pg/ml-400pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中P 糖蛋白(P-gp)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠P 糖蛋白(P-gp)水平。
用纯化的大鼠P 糖蛋白(P-gp)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入P 糖蛋白(P-gp)，再与HRP 标记的P 糖蛋白(P-gp)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的P 糖蛋白(P-gp)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠P 糖蛋白(P-gp)浓度。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（800pg/ml） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
400pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液200pg/ml 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液100pg/ml 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液50pg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液25pg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月大鼠I型原胶原N端前肽（PINP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.6μg/L -16μg/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中I 型原胶原N 端前肽（PINP）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠I 型原胶原N 端前肽（PINP）水平。
用纯化的大鼠I 型原胶原N 端前肽（PINP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入I 型原胶原N 端前肽（PINP），再与HRP 标记的I 型原胶原N 端前肽（PINP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的I型原胶原N 端前肽（PINP）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠I 型原胶原N 端前肽（PINP）浓度。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（32μg/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液8μg/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液4μg/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液2μg/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液1μg/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月__大鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T6μg/L -200μg/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中B 细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠B 细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)水平。
用纯化的大鼠B 细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入B 细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)，再与HRP 标记的B 细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的B 细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠B 细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)浓度。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（400μg/L） 0.5ml×1 瓶3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。