番茄侧根原基发生相关基因RSI-1在烟草中功能的初步研究
烟草青枯病菌分离株rsxj-1的培养性状及其生物型鉴定
生物灾害科学2012,35(2):153－156Biological Disaster Science,V ol.35,No.2,2012swzhkx@收稿日期：2012-04-22基金项目：江西省烟草专卖局（公司）资助项目（201001021）作者简介：崔朝宇，男，硕士生，研究向为分子植物病理学。
E-mail ：cuichaoyu1991@ ；*通信作者：蒋军喜，男，教授，博士，主要从事植物病害综合治理研究。
E-mail ：jxjiang64115@ 。
DOI ：10.3969/j.issn.2095-3704.2012.02.006烟草青枯病菌分离株RSXJ-1的培养性状及其生物型鉴定崔朝宇1，张超群2，周泽科1，蒋军喜1*（1.江西农业大学农学院，江西南昌330045；2.江西烟叶科学研究所，江西南昌330025）摘要：从江西省峡江县烟区采集呈典型症状的青枯病烟株，采用平板梯度稀释分离法分离获得一株病原菌分离株，命名为RSXJ-1。
在完成致病性测定的基础上，通过分子生物学方法将该菌株鉴定为茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)。
本文研究了该菌株在不同培养基上的培养性状，结果表明该菌株的培养性状与R.solanacearum 的培养性状相一致；对该菌株进一步进行生物型研究，结果显示该菌株能利用乳糖、麦芽糖、纤维二糖、甘露醇和山梨醇氧化产酸并能还原硝酸盐;而不能利用甜醇氧化产酸，据此将该菌株鉴定为生物型Ⅲ-1。
关键词：烟草青枯病菌；培养性状；生物型中图分类号：S435.72文献标志码：A文章编号：2095－3704（2012）02－0153－04Cultural Characteristics and Biotype Identification of Isolate RSXJ -1ofRalstonia solanacearumCUI Chao-yu 1,ZHANG Chao-qun 2,ZHOU Ze-ke 1,JIANG Jun-xi 1*（1.College of Agronomy,Jiangxi Agricultural University ,Nanchang 330045,China;2.Jiangxi T obacco Science Research Institute,Nanchang 330025,China ）Abstra ct ：A tobacco plant with typical symptoms of bacterial wilt was collected from Xiajiang county of Jiangxi province.A bacterial isolate was obtained from the plant using gradient dilution isolation method,ant it was named RSXJ-1.With completion of its pathogenicity test,the isolate was identified molecularly as Ralstonia solana cearum.This paper investigated the cultural characteristics of the bacterial isolate on different media.The results showed that cultural characteristics of the bacterial isolate were consistent with the cultural characteristics of R.solana cearum.Experiment of biotype identification of the isolate was also conducted.The results showed that the isolate had the ability of both oxdizing lactose,maltose,cellobiose,mannitol,and sorbitol to produce acid and reducing nitrate.However,it had no ability of oxdizing dulcitol to produce acid.According to the results,the isolate was identified as biotype Ⅲ-1of R.solanacearum.Key wor ds ：Ralstonia solanacea rum;cultural characteristics;biotype 烟草是江西省峡江县重要的经济作物，在该县广大乡镇有大面积种植，并带来可观的经济效益，然而在烟草种植过程中，各种病害时有发生，其中烟草青枯病就是严重危害烟草种植的病害之一。
与番茄枯萎病抗病基因I-1连锁的AFLP和SSR分子标记
Ｃ Ｓ 。等技 术精 确 作 图 。但 对 ｊ１基 因 的研 究 不 ＡＰ ｕ 一 够深 人 ， ｏ ｎ１ Ｐ ｄ ｏ ｋＨ 把 Ｊ１基 因定 位 到 第 Ｂ ｈ＿ 。， ａ ｄ ｃ Ｅ一 ～
ｍａ ｋ ｒ Ｓ ０ ｎ Ｓ ７ ｒ ７ ５ ３ ８ ９ ｌ ． 、 ． ｃ ｎ ． ｃ ｒ ｍ ｈ ｌ ｒ ｓｓａ ｃ ｅ ｅ Ｉ ｊ， ｅ ｐ ｃ ｒ ｅ ｓＳ Ｒ１ ８ ａ ｄ Ｓ Ｒ２ ６ｗｅ ｅ４． 、 ． 、 ． 、 １ ｊ ６ １ Ｍ ａ ｄ ９ ３ Ｍ ｆ ｏ ｔ ｅ ｗｉ ｅ ｉｔ ｎ ｅ ｇ ｎ － ｒ ｓ ｅ ． ｔ
关键词
番茄 ； 枯萎病 ； Ａ Ｌ Ｆ Ｐ标 记 ； Ｓ Ｒ 标 记 Ｓ
中 图分 类 号 ： Ｓ４ ６ ４ ２ １ ８ ３． １． ；Ｑ ７
文献标识码 ： Ａ
Ｄ Ｉ １． ９ ９ｊｉ ｎ ０ ２ —１４ ． ０ １ ０． ０ Ｏ ： ０ ３ ６／．ｓ ． ５ ９ ５ ２２ １． １ ０ ７ ｓ
主 能 镰 ２１ ３（： — ０ 豇 ； ０１ ７１３ ４ ）７
与 番 茄 枯 萎 病 抗 病 基 因 ／ １连 锁 － 的 ＡＦ Ｐ和 Ｓ Ｒ 分 子 标 记 Ｌ Ｓ
李发 玲 ， 李 景 富 ， 康 立 功 ， 张 贺 ， 许 向 阳
（ 北 农 业 大 学 园艺 系 ，哈 尔 滨 东
ａ ｅ ｇ ｅ ｗｅ ｅ ｉ ｎｔｆｅ ｎｃ ｅＨ ｒ ｄｅ ｉｉ ｄ． Ｆｏｕ ＦＬＰ ａ ｋｅ ｓＥ４１ ６０ Ｄ ，Ｅ４１ ６２ Ｃ ，Ｅ８６ ３６ Ｂ ｎｄ Ｅ３２ ４４ Ｅ ，ａｎ ｔ ｏ Ｓ ｒＡ ｍ ｒ ｒ Ｍ 一 Ｍ 一 Ｍ ． ａ Ｍ 一 ｄ ｗ ＳＲ
ｓ ｓ ｅ ｔｂ ｅ ｔ ｕ ａ ｉ ｍ ｌ．ＡＦＬＰ ａ ｄ Ｓ Ｒ ｎ ｌ ｓ ｓｏ ４ ｚｐ ｏ ｅ ｉ ｓｗｅ ｅ ｐ ｒ ｏ ｍｅ ｓｎ ７ ｕ ｃ ｐ ｉ ｌ ｏ Ｆ ｓ ｒ ｕ ｗｉ ｔ ｎ Ｓ ａ ａ ｙ ｅ ｆ３ ８ Ｆ ｒ ｇ ｎ ｅ ｒ ｅ ｆ ｒ ｄ ｕ ｉ ｇ ８ ０ ＡＦＬＰ ｐ ｉ ｒ ｒｍｅ ｃ ｍｂ ｎ ｔｏ ｓａ ｄ ３ ９ Ｓ Ｒ ｒｍｅ ｏ ｏ ｉ ａ ｉ ｎ ｎ １ Ｓ ｐ ｉ ｒｃ ｍｂ ｎ ｔｏ ｓ ｏ ｒＡＦ ｎ Ｓ ｍａ ｋ ｒ ｎ ｅ ｏ ｔ ｅ Ｆｕ ａ ｉ ｍ ｌ ｅ ｉ ． ｉ ａ ｉ ｎ ．Ｆ ｕ ＬＰ ａ ｄ ２ Ｓ Ｒ ｒ ｅ ｓｌ ｋ ｄ ｔ ｈ ｓ ｒｕ ｗｉ ｒ ｓｓ ｉ ｔ ｔ
超表达OsSsr1基因增强烟草耐盐性
山东农业大学学报（自然科学版），2012，43（1）：12－17Journal of Shandong Agricultural University（Natural Science）超表达OsSsr1基因增强烟草耐盐性封伟，肖姗姗，常闪闪，刘凤权，邵敏*（南京农业大学植物保护学院/农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室，江苏南京210095）摘要：本研究从水稻品种R109中克隆了OsSsr1基因（GenBank Accession No．NM_001065574），并用土壤根癌杆菌介导的方法，把OsSsr1基因转入本氏烟（Nicotiana benthamiana）中，提高了转基因植株的耐盐性。
生理指标测定结果表明：在盐胁迫下，转基因和野生型植株中的丙二醛（MDA）、脯氨酸的含量以及过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性都呈上升趋势，但转基因烟草中MDA含量升高速率明显低于野生型，而脯氨酸的含量以及POD、SOD活性的升高速率明显高于野生型烟草。
因此，OsSsr1转基因烟草耐盐性的增强，可能是脯氨酸含量和活性氧清除能力的提高引起的。
关键词：OsSsr1；转基因烟草；盐胁迫；活性氧；耐盐性中图分类号：S572文献标识码：A文章编号：1000－2324（2012）01－0012－06OVEREXPRESSION OSSSR1GENE ENHANCED TOBACCO SALT TOLERANCE FENG Wei，XIAO Shan－shan，CHANG Shan－shan，LIU Feng－quan，SHAO Min*（College of Plant Protection/Key Laboratory of Integrated Management of Crop Diseases and Pests，Ministry of Education，Nanjing Agricultural University，Nanjing210095，China）Abstract：OsSsr1gene（GenBank Accession No．NM_001065574），isolated from rice R109by RT－PCR，was transferred into tobacco（Nicotiana benthamiana）by Agrobacterium－mediated transformation，and it enhanced salt tolerance of transgenic tobacco plants．The physiological and biochemical experiments showed that the con-tents of MDA and proline，the activities of MDA and POD were increased in the5－week－old tobacco plants treated with sodium chloride solution．But，the MDA content in transgenic tobacco was lower than wild type to-bacco and the proline content，SOD and POD activity were higher than wild type tobacco．Therefore，it could be proposted that the enhanced salt tolerance in OsSsr1－expressing tobacco is due to the increased proline content and the reactive oxygen species－scavenging ability．Key words：OsSsr1；transgenic tobacco；salt stress；reactive oxygen species；salt tolerance土壤盐渍化是影响农业生产的一个全球性问题。
番茄Trihelix家族SIP1亚家族基因(SlGT-33)克隆表达分析及功能研究
农杆菌介导的ICE1基因转化番茄的研究
供试番茄 品种为 组培 大黄 ， 由东 北 农 业 大 学
３株 阳性植株 ， 转化 率 为 ６ ％ ， 步 表 明ＩＥ 基 ０ 初 Ｃ１
因 已导入 到 番 茄 中 。
关 键 词 Ｉ Ｅ１基 因 ； 杆 菌介 导 ； 茄 ； 传 Ｃ 农 番 遗
转 化
园艺 学 院蒋 欣 梅 副 研 究 员 提 供 。
作物 杂 志
Ｃｏ ｓ ｒｐ
２ １ ． ００５
农 杆 菌 介 导 的 Ｉ Ｅ 基 因转 化 番 茄 的 研 究 Ｃ １
张 玉 蒋 欣梅 于锡 宏
（ 东北农业大学园艺学院蔬菜生理与设施园艺研究室 ， ０ ３ ， １ ０ ０ 黑龙江哈尔滨 ） ５
摘
要 以番 茄 品种 组 培 大黄 为 试 验 材 料 ，
ｐ ３ １ＩＥ 约 １ｋ ） 有 来 自于 拟 南 芥 ＩＥ ３ ０ ．Ｃ １（ ｂ 含 １ Ｃ １基 因 约 １５ ０ ｐ的 片 段 ， Ｃ ＭＶ ５ ０ｂ 以 ａ ３ Ｓ为 启 动 子 。筛
选 标 记 基 因为 Ｎ ｓ 动 子 驱 动 的 ⅣＰ Ｙ 基 因 。该 ｏ启 ７， 质 粒 通 过 冻 融 法 转 入 农 杆 菌 Ｅ Ａ１ ５中 ， 于 番 Ｈ ０ 用
预培养 ２ ， 杆 菌茵液 浓度 Ｏ ｄ农 Ｄ。 。：０ ４， 染 ． 侵
１ ｒｉ 共 培 养 ３ ｈ 抑 菌抗 生 素 ３ ０ ／ 。 获 得 ０ ｎ， ａ ６ ， ０ ｍｇ Ｌ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
抗 性 植 株 ５株 ， Ｃ 扩 增 和 Ｒ —Ｃ ＰＲ ＴＰ Ｒ检 测 表 明 有
蒋 欣 梅 ， 锡 宏 为联 合 通 讯 作 者 于
ｃａ Ｖ３ Ｓ Ｍ ５
ｐ ＣＡＭＢＩ ３ － ＣＥ１ Ａ３ ０１ Ｉ
番茄与烟草PPR基因家族分析及育性相关基因功能研究
结论
结论
本次演示通过对植物OPR基因家族的系统发育分析及水稻OPR家族基因的分子 生物学功能研究，揭示了植物OPR基因家族在进化上的多样性和特异性。结果表 明，植物OPR基因家族成员在不同物种中经历了不同的扩张和收缩过程，且这些 成员在水稻生长和胁迫响应中发挥重要作用。本研究为深入理解植物OPR基因家 族的进化和功能提供了有益参考，同时也为水稻抗逆性改良提供了潜在的基因资 源。
二、基因家族鉴定
二、基因家族鉴定
鉴定普通烟草WRKY基因家族成员，首先通过同源比对分析获得候选WRKY基因， 再利用保守WRKY结构域进行进一步筛选。同时，利用表达谱数据分析，确定不同 组织中WRKY基因的表达情况。此外，还可以利用转录组数据挖掘受胁迫诱导表达 的WRKY基因。
三、基因表达分析
五、结论与展望
五、结论与展望
本次演示通过对棉花细胞质雄性不育恢复基因的图位克隆及PPR基因家族的分 析，初步揭示了恢复基因在棉花繁殖过程中的重要性。然而，关于恢复基因的具 体作用机制及其与其他基因的相互作用仍需进一步研究。未来，我们将利用 CRISPR-Cas9等基因编辑技术，对恢复基因进行更深入的分子机制研究，以期为 提高棉花杂交育种效率提供更多理论依据和技术支撑。
参考内容
基本内容
基本内容
棉花是全球重要的经济作物之一，其产量和品质对于保障纺织工业的稳定发 展具有重要意义。在棉花育种过程中，细胞质雄性不育现象经常出现，导致棉花 杂交不亲和，对生产造成很大困扰。为了解决这一问题，开展棉花细胞质雄性不 育恢复基因的研究具有重要意义。本次演示将重点棉花细胞质雄性不育恢复基因 的图位克隆及PPR基因家族的分析。
番茄与烟草PPR基因家族分析及 育性相关基因功能研究
基本内容
番茄抗性相关基因SlHin1的克隆、表达与抗病毒功能
瞬时过表 达该基 因并接种标 记有绿色荧光 的烟草花叶病毒侵 染性克隆 ， 以检测植株对病毒 的抗性 变化， 间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ
法检 测病毒的含量 ，探究该基 因的抗病毒功能。Ｗ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 验证 ｓ １ Ｈ Ｉ Ｎ １蛋 白在本 氏烟 内的表达情况。【 结果 】 利用 Ｒ Ｔ － Ｐ Ｃ Ｒ方法从番茄材料 （ Ｓ ｏ ｌ ａ ｎ ｕ ｍ ｌ ｙ ｃ ｏ ｐ ｅ ｒ ｓ ｉ ｃ ｏ ｎ Ｃ Ｖ ．Ａ ｉ １ Ｓ ａ Ｃ ｒ ａ ｉ ｇ）的叶片组织 中克隆得到全长为 ６ ７ ５ ｂ ｐ
（ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｐ ｌ ａ ｎ ｔ Ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ ｗ ｅ ｓ ｔ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｃ ｈ ｏ ｎ ｇ ｑ ｉ ｎ ｇ ４ ０ ０ ７ １
织特异性 ， 表达量在根 、叶、茎间依次降低 ；在本 氏烟 中瞬时过表达 ｓ １ Ｈ Ｉ Ｎ Ｉ 并在表达部位接种标 记有绿色荧光的 烟草花 叶病毒侵染性克 隆，处理组本 氏烟在接种病毒 ４ ｄ后没有任何 荧光 出现，而对照组 出现绿色荧光。随着接
种 时间推移 ，接种 ７ ｄ后处理组叶片上零星荧光有略微 的扩大 ，而对照组的绿色荧光 已经扩散 至心 叶。间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ
Ｐ Ｅ ＮＧ Ｈａ ｏ Ｒ ａ ｎ ， Ｐ ＡＮ Ｑ ｉ ， ＷＥ Ｉ Ｚ ｈ ｏ ｕ Ｌ ｉ ｎ ｇ ， Ｐ Ｕ Ｙ ｕ ｎ Ｄａ ｎ ， Ｚ ＨＡ ＮＧ Ｙｏ ｎ ｇ Ｚ ｈ ｉ ， ｗＵ Ｇ ｅ ｎ Ｔ ｕ ， ＱＩ ＮＧ Ｌ ｉ ｎ ｇ ， Ｓ ＵＮ Ｘｉ ａ ｎ Ｃ ｈ ａ ｏ
西红柿、烟草青枯病最新研究发现“靶向疗法”
专业视角Perspective/关注/ 青枯病是西红柿、辣椒、烟草等数百种常见经济作物主要的土传病害之一，严重时可能会导致绝收。
一直以来，传统的农药喷施、熏蒸等手段在阻控病害中发挥重要作用，但这样容易使病原菌产生耐药性，并且广谱杀菌手段在杀灭病原菌的同时，也杀灭了其他微生物，破坏了土壤生态，使再生的有害菌更难被抑制。
近日，南京农业大学资源与环境科学学院教授沈其荣带领的土壤微生物与有机肥团队、微生态与根际健康实验室，在利用噬菌体定向调控土壤菌群、防控土传青枯病领域取得重要进展。
该成果揭示了噬菌体不仅可以“专性猎杀”和“精准靶向”病原菌，降低其生存竞争能力，同时还能够重新调整根际土壤菌群的结构，恢复群落多样性，增加群落中拮抗有益菌的丰度。
土壤环境恶化，土传病害频频发生 近年来，一些地区因为集约化农业的不合理措施，如化肥农药的持续过量投入以及经济作物的单一连作，导致土壤微生物群落结构严重失衡，生态功能急剧削弱。
论文共同第一作者韦中博士表示，土壤中绝大部分微生物对农作物是无害的，它们起着周转养分、西红柿、烟草青枯病最新研究发现“靶向疗法”口/周怀宗1819专业视角Perspective分解进入土壤中有害物质等作用。
但也有一部分微生物是有害的，可能导致农作物生病、死亡等。
正常情况下，微生物之间也有相互制约的作用，在一定程度上维系着微生物群落的平衡，客观上能有效降低有害菌对农作物的危害，保护作物。
土壤养分周转不畅、污染难以消解、土传病害频发是土壤微生态失衡的重要证据，这些也是农业资源与环境领域亟待解决的难题。
沈其荣教授表示，一旦土壤不健康，给作物供应再多养分也没用。
由青枯菌引起的土传青枯病，是团队中徐阳春教授和韦中博士负责的微生态与根际健康实验室重点关注对象。
韦中博士介绍，青枯菌在土壤中存活时间长，能够侵染番茄、茄子、辣椒、烟草、生姜、花生等400多种作物。
青枯病是一种全球广泛流行的土传疾病，有调查显示，在我国只有三四个省份没有报道过相关疾病，其他地方都有相关病例，使100多种作物受影响。
中草药杀菌剂LS-1对番茄叶霉病的防治效果
中草药杀菌剂LS-1对番茄叶霉病的防治效果李樱梅;祖英治;李永刚;文景芝【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2010(041)006【摘要】测定了未加助剂的LS-1对番茄叶霉病的田间防效及诱导抗病作用,并进行了助剂筛选,测定了助LS-1对番茄叶霉病的施药适期及接种防治效果.结果表明,LS-1对番茄叶霉病的田间防效达到62.46%,显著好于植物源药剂邻烯丙基苯酚、生物药剂宁南霉素和常用化学药剂甲基托布津.LS-1可提高番茄叶片内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)的活性,具有诱导番茄产生抗叶霉病的能力.以适当的比例加入大豆油和生化黄腐酸后对番茄叶霉病的接种防治效果提高到79.36%,最佳施药时期为病菌侵入前7 d至侵入后7 d,防效在54.09%～86.90%之间,施药间隔期5～7 d.40.00和20.00 g·L-1的助LS-1对番茄叶霉病的接种防效分别为89.80%和86.35%,显著优于常用化学药剂甲基托布津、生物药剂宁南霉素和植物源药剂邻烯丙基苯酚.【总页数】6页(P49-54)【作者】李樱梅;祖英治;李永刚;文景芝【作者单位】东北农业大学农学院,哈尔滨,150030;东北农业大学农学院,哈尔滨,150030;东北农业大学农学院,哈尔滨,150030;东北农业大学农学院,哈尔滨,150030【正文语种】中文【中图分类】S481+9;S436.412.1+9【相关文献】1.无公害生产中几种杀菌剂对番茄叶霉病田间防效的测定 [J], 杨蕊芝;燕孝民;李建玲;郝小燕2.不同杀菌剂对防番茄叶霉病木霉菌叶片定殖效率的影响 [J], 周勇;于海霞;贾丽慧;李克梅;刘利群3.杀菌剂啶菌恶唑对番茄灰霉病和叶霉病田间防效试验 [J], 刘春艳;王勇;郝永娟;王万立4.矿物源杀菌剂M1对三种蔬菜的影响及其对番茄叶霉病防效的测定 [J], 李永刚;李樱梅;温盛岩;奚启新5.复配型杀菌剂对番茄叶霉病和晚疫病的防治研究 [J], 杜玉宁;邵鹏梅;邢敏;张丽荣;白小军;张治科;康萍芝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
dsRNA介导的烟草和番茄抗病毒基因工程研究的开题报告
dsRNA介导的烟草和番茄抗病毒基因工程研究的开题报告摘要：随着分子生物学和基因工程技术的不断发展，RNA干扰技术也随之出现并得到广泛的应用。
RNA干扰技术是利用小分子RNA介导的靶向外源或内源RNA的降解的技术。
其中，双链RNA（dsRNA）介导的RNA干扰技术已成为研究外源基因靶向调控和抗病毒应答的有力工具。
本文将介绍dsRNA介导的烟草和番茄抗病毒基因工程研究背景、目的、方法、预期结果及可能的应用价值等方面的内容。
一、研究背景烟草和番茄是重要的农业作物，但受到各种病毒的威胁，例如烟草花叶病毒、番茄黄化曲叶病毒等，这些病毒会造成严重的经济损失。
目前，传统的防治手段主要包括化学药剂和病毒抗性品种种植，但存在着环境污染和病毒的变异等问题。
因此，通过基因工程手段构建植物的抵抗性已成为一种新的解决病毒病害问题的途径。
而dsRNA介导的RNA干扰技术是植物基因工程中一种有前途的抗病毒策略。
二、研究目的本研究旨在通过dsRNA介导的RNA干扰技术，提高烟草和番茄对病毒的抗性并探究其分子机制。
三、研究方法1. 构建dsRNA表达载体。
设计并合成靶向烟草花叶病毒和番茄黄化曲叶病毒的dsRNA，将其克隆入RNA干扰载体中，得到dsRNA表达载体。
2. 制备dsRNA。
将dsRNA表达载体转化至大肠杆菌中，进行大规模培养。
然后采用离心、超声破裂等方法，制备dsRNA。
3. 转化烟草和番茄。
将制备好的dsRNA以农杆菌载体介导的方式转化烟草和番茄中。
4. 验证dsRNA的抗病毒效果。
将转化后的烟草和番茄用病毒进行挑战，通过实时荧光PCR等方法检测病毒复制水平和植株的生长状态。
四、预期结果本研究预计通过dsRNA介导的RNA干扰技术，提高烟草和番茄对病毒的抗性，并发现其分子机制。
同时，本研究还有可能为其他作物的dsRNA介导的RNA干扰技术的研究提供借鉴。
五、应用价值本研究的应用价值主要体现在以下几个方面：1. 通过基因工程手段提高烟草和番茄对病毒的抗性，为作物病毒病防治提供新的思路和途径。
番茄突变体jai1-1高效筛选—再生体系的建立
番茄突变体jai1-1高效筛选—再生体系的建立范锡麟;王少岭;肖应辉;王志龙【摘要】Tomato(Lycopersicon esculentum Mill.)wild type JAIl and mutant jail-1 screened by different concentrations of MeJA were used as the materials in the study.The cotyledon and hypocotyl of wild type JAI1 and mutant jai1-1 were cultured in vitro to research the effects of genetype and different hormone combinations on tomato callusinduction,adventition bud differentiation and rooting,and then identified the results with PCR reaction.The results show that 1/2 MS + MeJA 50μM/L was the proper media to screen the mutant jai1-1,and that MS + ZT 1.0 mg/L + IAA 0.1 mg/L and MS + ZT 2.0 mg/L + IAA 0.2 mg/L were the best media for adventition bud differentiation for JAI1 and jai1-1 respectively.MS + 6-BA 2.0 mg/L + IAA 0.2 mg/L and 1/2MS + NAA 0.1 mg/L were the best media for callus induction and root induction for both JAI1 and jai1-1,respectively.%利用番茄野生型JAI1和通过不同浓度茉莉酸甲酯(MeJA)处理筛选得到的突变体jai1-1的子叶和下胚轴为材料进行离体组织培养,以探究不同激素组合对愈伤组织的诱导、不定芽分化及生根的影响,最后利用PCR反应验证筛选得到的材料的准确性.结果表明,1/2 MS+ 50 μM/L MeJA是突变体jai1-1筛选的有效培养基.野生型JAI1和突变体jai1-1在MS+ 6-BA 2.0 mg/L+ IAA 0.2 mg/L诱导愈伤组织的效果最好；JAI1在MS+ ZT 1.0mg/L+ IAA0.1mg/L诱导分化不定芽的效率最高,而jai1-1则以MS+ ZT 2.0 mg/L+ IAA 0.2 mg/L为佳；1/2 MS+ NAA 0.1 mg/L是两者诱导生根的理想培养基.【期刊名称】《作物研究》【年(卷),期】2013(027)003【总页数】5页(P224-228)【关键词】番茄;组织培养;愈伤组织;再生体系【作者】范锡麟;王少岭;肖应辉;王志龙【作者单位】湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室/湖南农业大学农学院,长沙410128;湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室/湖南农业大学农学院,长沙410128;湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室/湖南农业大学农学院,长沙410128;湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室/湖南农业大学农学院,长沙410128【正文语种】中文【中图分类】Q813.1+2;S641.2番茄是茄科(Solanaceae)番茄属(Lycopersicon)植物，其分布广泛，营养丰富，是一种重要的经济作物。
本氏烟与番茄AtTOM类基因克隆与功能初步分析的开题报告
本氏烟与番茄AtTOM类基因克隆与功能初步分析的开题报告一、选题背景烟草是我国农业经济中的重要作物之一，而其所含尼古丁成分会对人体造成不良影响。
研究烟草中尼古丁的生物合成机制，不仅能够减少其成分量，还可以为开发新型烟草和尼古丁替代品提供科学依据。
番茄是一个重要的生物模型，其拥有完整的基因组信息和丰富的遗传变异资源，能够作为人们研究其他问题的良好研究对象。
因此，将番茄作为模型生物来研究烟草中尼古丁的生物合成机制，具有很大的研究意义和应用前景。
二、研究内容本研究旨在从番茄（Solanum lycopersicum）中克隆与烟草生物合成尼古丁相关的AtTOM基因，通过组织学定位等方法验证其在番茄中的表达情况，同时利用烟草作为外源表达系统，进一步分析其具体的生物学功能。
三、研究方法1.文献调研法：收集和阅读有关烟草中尼古丁生物合成机制以及AtTOM基因的相关文献，基于前人的研究成果进行深入分析。
2.基因克隆法：经过PCR扩增，将番茄中与AtTOM基因序列高度相似的片段克隆下来，并进行序列化鉴定。
3.基因表达谱鉴定法：利用RT-PCR等方法，进行不同组织、不同开花期番茄中AtTOM基因的基因表达谱鉴定，研究其在番茄中的表达情况。
4.系统生物学法：利用酵母正反向杂交、CS-CL分析等方法，对AtTOM基因的功能进行分析。
四、研究意义本研究将通过研究烟草中尼古丁的生物合成机制，为减少烟草中尼古丁的含量以及开发新型烟草和尼古丁替代品提供科学依据。
同时，基于番茄的外源表达系统，能够更全面深入地分析AtTOM基因的功能，从而揭示烟草中尼古丁合成的分子机制。
此外，本研究对于开展植物次生代谢相关的深入研究，具备一定的理论和实践的推广应用价值。
番茄LeEIL1基因的克隆分析及表达载体构建
番茄LeEIL1基因的克隆分析及表达载体构建李季;李正国;罗安才;杨迎伍;邓伟【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2008(000)004【摘要】采用RT-PCR方法从番茄果实cDNA中成功克隆了番茄LeEIL1基因,并测序验证序列正确;经数据库检索等生物信息学分析方法,对番茄LeEIL1蛋白质与拟南芥、烟草、水稻、香石竹等的EIN3/EILs蛋白质序列进行了同源性分析,初步确定了番茄LeEIL1上的DNA结合功能域及其结合激活位点.并构建了LeEIL1的酵母表达工程茵pPIC9k-EIL1/KM71,为该基因的功能研究奠定了基础.【总页数】4页(P114-117)【作者】李季;李正国;罗安才;杨迎伍;邓伟【作者单位】重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室,重庆,400044;重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室,重庆,400044;重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室,重庆,400044;重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室,重庆,400044;重庆大学生物工程学院基因工程研究中心,重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室,重庆,400044【正文语种】中文【中图分类】S6【相关文献】1.番茄ACC氧化酶基因cDNA的克隆及三种植物表达载体构建 [J], 符秀梅;朱红林;周秀;李小靖;陈银华2.番茄ACC氧化酶基因cDNA的克隆及三种植物表达载体构建 [J], 符秀梅;朱红林;周秀;李小靖;陈银华3.番茄八氢番茄红素合成酶基因的克隆及超量表达载体构建 [J], 邹礼平;高和平;钟亚琴;陈锦华4.番茄乙烯形成酶基因的克隆及其反义基因的表达载体构建 [J], 李广存;毕玉平5.2个不同番茄品系fasciated基因克隆及表达载体构建 [J], 刘爽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2006,14(6):905~910*基金项目：国家自然科学基金项目（No.30200169）和高校博士点基金项目（No.20010019008）资助。
作者简介：王友华（1977~）,男，博士。
E-mail ：<w_youhua126@>.**通讯作者。
Author for correspondence.教授，博士生导师，主要研究方向：作物分子生理。
E-mail:<duanlsh@>.收稿日期：2006-02-23接受日期：2006-04-18·研究论文·番茄侧根原基发生相关基因在烟草中功能的初步研究*王友华1，3,卢孟柱2,李召虎1,王敏杰2,田晓莉1,翟志席1,段留生1**（1.中国农业大学农业与生物技术学院，植物生理与生物化学国家重点实验室，北京100094；2.中国林业科学院林业研究所，北京100091；3.南京农业大学农学院，南京210095）摘要：为探讨番茄（var.cerasiforme ）侧根原基发生相关基因在形态发育过程中的作用及其在获得具超量侧根的转基因作物的应用前景，研究分析了基因在烟草中超量、反义抑制和RNA 干扰表达后植株形态及转基因植株内侧根发生相关植物激素含量的变化特征。
结果显示，超量表达后，植株株高下降，叶片数和分支数有明显增加，而反义抑制和RNA 干扰表达后植株形态及赤霉素、生长素、脱落酸和玉米素及核苷的含量均没有发生显著变化。
推测的表达可以促进植物分枝的发生，但其在高等植物中的同源性可能较低，利用该基因定向改造弱根系作物时还需结合根特异启动子的应用。
关键词：；侧根原基；烟草；激素；功能中图分类号：S188文献标识码：A 文章编号：1006-1304-(2006)06-0905-06Function of the Lateral Root Development Relating Gene from Tomato in Tobacco MorphogenesisWANG You-hua 1,3,LU Meng-zhu 2,LI Zhao-hu 1,WANG Ming-jie 2,TIAN Xiao-li 1,ZHAI Zhi-xi 1,DUAN Liu-sheng 1**investigate the function of the lateral root primordium development relating geneand the application possibili-ty in super-root crops breeding,plasmids pBI-and pBI-that would lead to constitutive transcription of senseand an-ti-sensein plant cells and theRNAi interfere vector p1008--RNAi were constructed and transferred to tobacco ()respectively.The transformants with the target chiermic gene constitutively transcribed were screened out by antibi-otics medium selecting and Sourthern blotting.Then the morphological variations of the aboveground tissues were analyzed ，and the change of the phytohormones involving in rooting was also studied.It was shown that divarication and lateral root formation was en-hanced in the transgenic tobacco plants withover-expressed,while the morphology and the contents of gibberellic acid,in-dole-3-acetic acid,abscisic acid,zeatin and its ribosides were not altered significantly in the tobaccos with the antisense inhibit-ed and RNA interfered.Based on the working mechanism of the function gene over-expressing,antisense inhibiting and RNA inter-fering,the evidences further conformed that is a gene involved in divaricating and it may be lowly conservative in evaluation.Thus,the root-specific promoters are needed whenis used to modify root-deficientcrops.lateral root primordium;;phytohormone;function侧根是根系构成的主体，侧根原基的发生则是侧根形成的前提，与侧根原基发生相关的研究已成为植物发育生物学研究的热点之一(Condon ,2004;Uozumi,2004)。
目前已有若干与侧根原基发生相关基因的报道(Malamy and Benfey,1997;Casimiro and Beekman,2003;Aida and Tasaka,农业生物技术学报2006年2006)，但尚未发现特异性控制侧根发生的“开关基因(Switch gene)”。
一些转录因子基因(Rogg, 2001;Fukaki,2002)、细胞周期因子相关基因(Doerner,1996;de Veylder,1999)在侧根发育过程中优势表达，但往往在其它旺盛生长的组织中也有较强表达，人为改变该类基因的表达可导致个体形态的系统性变化，因此很难在促进作物根系发生的研究中加以利用。
因此，特异性启动侧根原基发生的“开关基因”是通过转基因方法改造弱根系作物的关键(Toniaatti,2004)。
Taylor和Scheuring(1994)在番茄中发现的可特异性调控侧根的发生,该基因在侧根原基细胞中的特异性表达先于侧根原基发生，特别是在侧根原基与不定根原基发生初始期的“基础（founder）”细胞中高量表达，与侧根原基量正相关，且受生长素的诱导。
其5′端侧翼1kb序列所驱动的基因在侧根原基及不定根原基细胞中高量表达，所编码的氨基酸与转录因子没有显著的同源性，其N端具有信号肽特征，并与番茄中调控其地上部分枝能力的基因编码序列有79%的同源性。
因此该基因具备控制侧根发生开关基因的初步特征，其功能上的进一步的深入探讨在发育生物学理论研究和根系改良基因工程应用中都具有重要意义。
但迄今为止，对基因详细功能的研究并无深入的后续报道。
超量表达、反义抑制、RNA干扰（RNAi）等基因功能研究新手段的出现为从表型入手，全面、直接地探讨该基因的功能提供了必要的手段。
因此，本实验构建了基因的超量表达、反义抑制及RNAi的表达载体并对烟草进行了转化、鉴定及表型变化分析，拟从表型上直接研究在个体发育中的功能并探讨其在转基因改造弱根作物中的应用前景。
1材料和方法1.1材料樱桃番茄(var.)种子由中国农业科学院蔬菜中心提供，烟草()品系SR1种子、大肠杆菌()DH5α，TOP10和根癌农杆菌（）GV3101、质粒pBI121由中国林业科学研究院林业研究所生物技术研究室提供，pGEM-T载体购自美国Promega公司。
RNAi载体构建中使用的质粒pFGC1008由中国农业大学植物生理与生物化学国家重点实验室巩志忠教授惠赠。
实验中所使用的各种限制性内切酶、DNA聚合酶等工具酶均购自美国Promega公司，IPTG、X-gal、氨苄青霉素、卡那霉素、羧苄青霉素及相关试剂购自北京双翔达化学试剂公司。
1.2方法1.2.1番茄中基因的克隆用Qiagen RNeasy Plant Mini Kit试剂盒（美国Qiagen公司）提取番茄无菌苗根样总RNA，以反转录的cDNA为模板，用报道的番茄基因序列设计的1对引物：RSI-F：5-AATGGCAAAGAGTAATTACAATGC-3′；RSI-R：5-TTAATTAAGGGCATTTAGGTTTTCC-3′。
进行PCR扩增，PCR产物经回收、纯化，连入pGEM-T载体，经酶切鉴定后交上海联合基因公司测序鉴定。
1.2.2超量表达、反义抑制表达和RNAi载体的构建超量表达载体构建：设计5′端加酶切位点的引物：RSI-SF：5-GCGTCTAGAAATGGCAAAGAGTGGTTA-3′; RSI-SR：5-GACGAGCTCTTAATTAAGGGCATTTAG-3′。
以pGEM-为模板通过PCR得到在片段两端分别加入Ⅰ和Ⅰ位点的RSI-MS 片段，片段RSI-MS经Ⅰ/Ⅰ双酶切后，连入经Ⅰ/Ⅰ双酶切的pBI121大片段得到超量表达载体pBI-。
反义抑制表达载体构建：设计5'端加酶切位点的引物：RSI-AF：5'-TCAGAGCTCAATGGCAAAGAGTGGTTA-3′; RSI-AR：5'-ACGTCTAGATTAATTAAGGGCATTTAG-3′.以pGEM-RSI为模板通过PCR得到在片段两端分别加入Ⅰ和Ⅰ位点的片段，经Ⅰ/Ⅰ双酶切后，连入经Ⅰ/Ⅰ双酶切的pBI121大片段得反义抑制表达载体pBI-。
RNAi表达载体构建：设计5'端加酶切位点的引物：RNAi-RF：5'-GGACTAGTGGCGCGCCAATGGCAAAGAGT-GGTTA-3';RNAi-RR：5'-CGGGATCCATTTAAATTTAATTAAGGGCA-TTTAG-3'。
以pGEM-为模板通过PCR得到在片段两端分别加入Ⅰ-Ⅰ和HⅠ-Ⅰ位点的-MRNAi片段，-MRNAi片段分别经Ⅰ/HⅠ、Ⅰ/双酶切后依次连入pFGC1008质粒得RNAi表达载体p1008--RN-Ai。