重组结核分枝杆菌Mr 38 000蛋白的表达、纯化和鉴定

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结核分枝杆菌复活促进因子B的原核表达、鉴定和纯化

【摘ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
要】的：目构建结核分枝杆菌复活促进因子ＢＲｍ）（ｐ的原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达和纯化。方法：聚合酶链反采用
应（Ｃ）ＰＲ方法从结核分枝杆菌Ｈ３Ｒ７ｖ基因组ＤＡ中扩增出Ｒｆ基因（０９ｐ，ＮｐＢ１８ｂ）然后用双内切酶消化后，与同样酶消化的ｐＴ２（）Ｅ３ａ＋载体连接，转入大肠杆菌ＴｐＯ阳性克隆用酶切和ＤＡ测序鉴定。测序正确后，重组质粒转化到的大肠杆菌ＯＩ；Ｎ将Ｂ２Ｌ１中，ＩＴ经ＰＧ诱导，，由Ｉ７启动子调控表达了Ｒｍ蛋白；ｐ利用Ｗｅｔｎｂｔｓｒ— ｌ法对表达蛋白进行鉴定，ｅｏ最后对目的蛋白进行纯化。结果：双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符，测序结果与文献报道一致。ＳＳＰＧ经Ｄ — ＡＥ分析和Ｗｅｔ — ｌ鉴定均发ｓｒｂｏｅｎｔ
ｓｑｅｃｎ，ｅｃｎｔｃｅｒｃｍｂｎｔｐａｍｉｓｒｎｆｒｅｉｔｃｌＬ１ａｄｅｐｅｓｄｔｅｒｃｍｂｎｔｒｔｉｎｅｅｕｎｉｇｔｏｓｒｔｈｕｄｅｏｉａｌｓｄＷａｔｓｍｄｎｏＥ．ｏｉｎａｏＢ２，ｘｒｓｅｅｏｉａｐｏｅｎｕｄｒｎｈｎｈｃｎｒｉｉａｅｙ７ａｔｎｕｔｗｔＰＧ．ｈｔｒｅｒｔｉａｉｅｔｄｂＷｅｔｒ — ｌｔｎｄｕｉｅｂｓｎｔｅｏｔｌｎｔｔｄｂＴｆｒｉｄｃｉｎｉＩＴＴｅａｇｔｐｏｅｎｗｓｄｎｉｅｙｏｉｅｏｈｉｆｓｎｂｏａｐｒｄｅｉｆｙｕｉｇａｆｉｂｆｎｔｃｍｍａｏｒｇｙＲｅｕｔ：ｈｉｅｏｅｉｙｔｇａｈ．ｓｌＴｅｓｚｆｔＲｐＢｅｅｄｇｓｅｂｅｔｃｅｅｚｍｅｃｏｄｄｓｈｆｇｎｉｅｔｄｙｒｓｒｔｄｎｙｓａｃｒｅｗｉｔｅｈｅｒｔａｉｄｉｈｔｈｔｏｅｉｌｓｚａｃｅｎｈＤＮＡｓｑｅｃｔｅｅｏｔｄｏｅｎｉｒｔｒｓＫＤｒｔｉｓｆｕｄｂＤＳＰｔｅｅｕｎｅｗｉｔｒｐｒｎｉｌｅａｕｅ．ｈｈｅｔ６１ａｐｏｅｎｗａｏｎｙＳ — ＡＧＥａｄＷｅｔｒ－ｌｔｎｌｓｏｎｓｅｂｏＣｏｃｕｉｎ：ｎ

蛋白质的表达、纯化及检测-分子实验报告

实验目的1.了解外源基因在大肠杆菌细胞中的诱导表达情况2.学会用SDS-PAGE电泳法分离不同分子量的蛋白质3.学习通过亲和层析法纯化目的蛋白4.学会考马斯亮蓝染色法和蛋白质杂交法检测蛋白质实验原理1.外源基因在大肠杆菌细胞中的诱导表达：将外源基因克隆在特殊的表达载体中，让其在E. coli中表达，该表达载体上含有lac操作子的启动子。

在不加诱导剂的条件下培养宿主菌，lacI基因表达的阻遏蛋白LacI与lac操作子结合，使外源基因不能表达；向培养基中加入诱导物IPTG后，LacI阻遏蛋白变构失活，不能与lac操作子结合，外源基因就表达。

2.蛋白质SDS-PAGE电泳分离：SDS-PAGE是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式，特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。

其分离原理是根据蛋白质分子量的差异，因为SDS-PAGE的样品处理液及缓冲液的加入破坏了蛋白质的二级、三级、四级等结构，并使SDS与蛋白质充分结合形成SDS-蛋白质复合物，稳定地存在于均一的溶液中，SDS与蛋白质结合后使SDS-蛋白质复合物上带有大量的负电荷，远远超过其原来所带的电荷，从而使蛋白质原来所带的电荷可以忽略不计，消除了不同分子之间原有的电荷差别，其电泳迁移率主要取决于亚基分子质量的大小，这样分离出的谱带也为蛋白质的亚基。

3.考马斯亮蓝法检测蛋白质：考马斯亮蓝是一种蛋白质染料，主要有R-250和G-250两种类型。

考马斯亮蓝可以和蛋白肽链中碱性氨基酸残基或芳香族氨基酸残基（Arg，Trp，Tyr，His，Phe）结合。

考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；因为考马斯亮蓝R250中的R代表Red，偏红，红蓝色，与蛋白质结合虽然比较缓慢，但是染料可以穿透凝胶，染胶效果好，染色后为蓝色，且与胶的结合可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

4.基因融合就是将两个或多个开放读码框按一定顺序连接在一起，融合阅读框架的表达产物是一个杂和蛋白。

结核分枝杆菌RpfA蛋白的表达、纯化与鉴定

ｓｏｐｏｅｎｉｃｌｉｎｒｔｉｎＥ．ｏｉＢＩ２１，ｔ０８ｃｇｎｅｗａｍｐｌｉｄｂｈｅＲｖ６７ｅｓａｉｅｙＰＣＲｒｆｆｏｍｎｇｅｏｍｉＮＡｆＭＴＢ３ｃＤｏＨ７Ｒｖｓｒｉｔａｎ，ａｄｃｏｄｉｎｌｎｅｎｔｈｅｖｃｏｒｐＤ１一．Ｔｈｅ０８ｃｗａｕｂｃｏｄｉｏｔｘｐｒｓｉｎｖｅｔＩ３（）ａｔｒｉｎｔｆｉｇｂｙｒｓｒｃｅｎ— ｏｔｅｔＭ８ＴｎＲｖ６７ｓｓｌｎｅｎｔｈｅｅｅｓｏｃｏｒｐＥ＇２ａ＋、ｆｅｄｅｉｙｎｅｔｉｔｄｅｚｍｅｉｅｔｏｎａｙｓｄｇｓｉｎｄＤＮＡｅｅｉｇ．ＴｈｅｃｎｓｒｃｅｅｏｂｉａｌｓｉａｒｎｓｏｒｅｎｏＥｆｌＢＩ２，ａｄｅｐｅｓｄｓｑｕｎｃｎｏｔｕｔｄｒｃｍｎｎｔｐａｍｄｗｓｔａｆｍｄｉｔｏｉ１ｎｘｒｓｅ
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ｏｓｒｃｈｆｅｐｅｓｏｌｓｄｏｙｏａｔｒｕｔｂｒｕｏｉ，ａｄｔｘｒｓｎｕｉｙｔｅｆ — ＴｏｃｎｔｕｔｔｅＲｐＡｘｒｓｉｎｐａｍｉｆＭｃｂｃｅｉｍｕｅｃｌｓｓｎｏｅｐｅｓａｄｐｒｈｕｆ
赵善民，江鹰，赵勇，毛峰峰，张彩勤，晓雅，冰，长宏郭白师
摘要：目的构建结核分枝杆菌（ｃｂｃｒｕｕｅｃｌｓ，ＢｐＡ的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达、ＭｙｏａｔｉｍｔｂｒｕｏｉＭＴ）Ｒｆｅｓ并纯

结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10的表达、纯化和鉴定

１３含ＣＰ０基因重组质粒的构建、．Ｆ１表达、纯化及鉴定１３１ＣＰ０基因的克隆及测序．．Ｆ１
按参考文献＿的方法获得结核分枝杆菌毒株２
Ｈ３Ｒ７ｖ的全基因组ＤＡ，Ｎ以此为模板，据已发表根的ＭＴ全基因组设计引物，Ｆ１Ｆ５’ ＧＢＣＰ０：一Ｃ
一
步研究ＣＰ０蛋白的致病机理提供了实验依据。Ｆ１
关键词
结核分枝杆菌
ＣＰ０Ｆ１
表达
纯化
中图法分类号
Ｒ７．１；３８９１
文献标志码
Ｂ
＿’ ４
。
结核病（ｕｅｕｓ，Ｂ是由结核分枝杆菌ＴｂｒｌｉＴ）ｃｏｓ（ｃｂｃｒｍｔｂｒｕｓ，Ｔ所致以呼吸道系ＭｙｏａｔｉｅｃｌｉＭＢ）ｅｕｕｏｓ
（ｕｆｄｐｏｅｅｖｔｅＰＤ）临床和科研中广ｐｒｅｒｔｎｄｒａｉ，Ｐ时ｉｉｉｉｖ
因此，研究主要通过克隆、达并纯化本表
ＣＰ０蛋白。以便于利用ＣＰ０在结核病特异性Ｆ１Ｆ１抗体的诊断方面积开展更深入的研究。
Ｅｃｌ中进行了表达，Ｄ —ＡＧ．ｏｉＳＳＰＥ及Ｗｅｔｎｂｏ分析表明表达产物正确。通过ＧＴ纯化系统获得３Ｄ纯化蛋白，ｓｒｌｅｔＳ６ｋ与文献报
道相符，该蛋白可与ＣＰ０ｍＦ１Ａｂ特异结合，并且同时与活动期结核病人血清发生反应。成功获得了纯化的ＣＰ０蛋白，Ｆ１为进

重组蛋白质的表达纯化和结构鉴定

重组蛋白质的表达纯化和结构鉴定在生物医学领域中，重组蛋白质凭借其广泛的应用前景成为了研究热点。

然而，要想获得高纯度的重组蛋白质，并对其结构进行准确的鉴定，需要经历一系列复杂而细致的实验步骤。

本文将从表达、纯化和结构鉴定三个方面介绍重组蛋白质的研究过程。

一、表达重组蛋白质的表达是研究重组蛋白质最初的关键步骤之一。

通常采用大肠杆菌（Escherichia coli）作为表达宿主。

首先，需要将目标基因克隆至表达载体中，确保其与启动子、转录因子等相互配合，并携带一定的标签，如His 标签、GST 标签等。

接着，将修饰好的表达载体转化至大肠杆菌中，采用选择性培养基筛选出目标菌株。

最后，将筛选得到的菌株进行大规模培养，促使目标基因在细胞内表达。

二、纯化获得表达目标蛋白的菌株后，需要将蛋白从细胞中纯化出来。

首先，采用超声波或高压颠破细胞壁，释放出蛋白质。

接着，通过离心等手段将蛋白质与其他细胞组分分离。

此时，可以利用目标蛋白质特异性的亲和层析柱，如镍柱、葡聚糖柱等，吸附目标蛋白质，并通过逆向洗脱等方法，得到高纯度的目标蛋白质。

三、结构鉴定获得纯度较高的重组蛋白质后，需要对其结构进行进一步的鉴定。

常用的结构鉴定方法包括X射线晶体学、核磁共振（NMR）、电子显微镜等。

X射线晶体学是目前应用最广泛的方法，通过将蛋白质结晶并进行X射线衍射实验，得到蛋白质的高分辨率结构。

NMR则通过测量蛋白质中核自旋的相对位置和相互作用关系，获取蛋白质的三维结构信息。

电子显微镜是一种能够获得蛋白质高分辨率结构的技术，主要应用于研究大分子复合物和纤维形态的蛋白质。

除了上述常用技术外，近年来还涌现出一些新的结构鉴定方法，如质谱联用技术、光学显微镜成像、负染电镜等。

这些方法的出现，为蛋白质结构鉴定提供了更多的选择和便利。

由于篇幅所限，本文仅对重组蛋白质的表达、纯化和结构鉴定进行了简要介绍。

事实上，研究重组蛋白质的过程还包括目标基因的设计与合成、蛋白质的功能分析等环节。

重组蛋白质的表达与纯化技术

重组蛋白质的表达与纯化技术蛋白质是生命体活动的重要组成部分，对于生命体的生长、繁殖和免疫功能起着至关重要的作用。

而重组蛋白质则是利用基因工程技术，将人工合成的外源基因导入到特定的宿主细胞中，通过细胞表达和纯化技术得到的转录翻译产物。

这种技术不仅可以生产天然蛋白质，还可以生产人工合成的新型蛋白质，对于疾病的治疗和新药的研发有着重要的意义。

一、蛋白质表达技术蛋白质表达是获得大量重组蛋白质的重要方法。

选择适当的宿主细胞和表达载体是获得高水平表达的关键。

常用的宿主细胞包括大肠杆菌、酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞等。

1.大肠杆菌表达系统大肠杆菌表达系统具有生长快、表达量高等优点，广泛应用于重组蛋白质的表达和纯化。

其表达载体主要有pET和pBAD两种，pET系统一般用于产生可以形成包涵体的重组蛋白，pBAD系统用于在分泌表达中产生滞留蛋白。

2.昆虫细胞表达系统昆虫细胞表达系统包括SF9、Sf21、HighFive等细胞系，常用的表达载体为pIB/V5-His、pFastBac等。

昆虫细胞表达系统通常用于表达大分子蛋白质，如糖蛋白、膜蛋白等。

3.哺乳动物细胞表达系统哺乳动物细胞表达系统是目前表达规模最大、表达产物最接近人体蛋白质的一种表达系统。

其表达载体主要有pCDNA3.1、pCI 等，常用于表达与人体有关的蛋白质，如抗体、生长因子等。

二、蛋白质纯化技术蛋白纯化是重组蛋白质生产的重要环节，其目的是得到高质量的、纯度较高的蛋白质样品。

常见的纯化方法包括亲和层析法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法、逆流式层析法等。

1.亲和层析法亲和层析法是指因与载体中固定的亲和剂相互结合而纯化目标蛋白质的一种方法。

亲和剂通常是与目标蛋白质有特异性结合作用的化合物，如亲和标签、酶底物、抗体等。

常见的亲和层析方法有亲和柱层析、亲和膜层析等。

2.离子交换层析法离子交换层析法是根据蛋白质带有正或负电荷的差异性进行分离的一种方法。

离子交换层析的柱填充物常为离子交换树脂，其一般分为阴离子交换树脂和阳离子交换树脂两种。

结核分枝杆菌RpfA蛋白的原核表达、鉴定和纯化

【摘
要】目的：构建结核分枝杆菌（ｙｏａｅｕｂｒｌｉＭＢ复活促进因子ＡＲｓｓｔｏ— ｒｏｎｃｒＡｐ）Ｍｃｂｃｒｍｔｅｕｓ，Ｔ）ｔｉｕｃｏｓ（ｅｃａｎｐｍｔｇｆｔ，Ｒｆ的ｕｉｔｉｏｉａｏＡ
原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达和纯化。方法：采用聚合酶链反应（Ｃ方法从结核分枝杆菌Ｈ７ｖ基因组ＤＡ中扩增ＰＲ）３ＲＮ出Ｒｆ基因（２ｂ）然后用双内切酶消化后，ｐＡ１２４ｐ，与同样酶消化的ｐＴ２ｄ（）载体连接，Ｅ３ａ＋转入大肠杆菌ＴｐＯ阳性克隆用ｏｌ；酶切和ＤＡ测序鉴定。测序正确后，Ｎ将重组质粒转化到的大肠杆菌Ｂ２Ｌ１中，ＩＴ经ＰＧ诱导，Ｔ由７启动子调控表达了ＲｆｐＡ蛋白；利用ＨｓｔｎｇｌＳｉ对表达蛋白进行鉴定，ｉａｉ～ｅｔｎ —ｇａ最后对目的蛋白进行纯化。结果：双酶切鉴定所切下的片段大小与理论值相符，测序结果与文献报道一致。ＳＳＰＧ经Ｄ — ＡＥ分析和ＨｓｔｎｇｌＳｉ鉴定均发现６ｋｉａｉ— ｅｔｎ —ｇａ６ｕ处有特异性蛋白条带。结论：成功克隆并构建了ＲｆｐＡ基因的重组表达质粒ｐＴ２＋一ｐＡ，Ｅ３ｄ（）Ｒｆ并获得了高纯度的重组蛋白，为以后的深入研究奠定了基础。
维普资讯
一
５０一６

重庆医科大学学报２００８年第３３卷第５期（ｏｒａｆｏｇｉｇＭｅｉａＵｎｅｓｔＯ８Ｖ１３Ｎｏ５Ｊｕｎｌｎｑｎｄｃｌｉｒｉ２０．ｏ．．）ｏＣｈｖｙ３

结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3的表达、纯化和鉴定

结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3的表达、纯化和鉴定杨巍;师长宏;赵佐庆;赵勇;江鹰【摘要】目的将结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B与Hsp16.3在大肠杆菌中融合表达并对其进行纯化和鉴定.方法采用PCR方法从质粒pProEX HTb-Hsp16.3扩增Hsp16.3基因,引入48bp的柔性linker结构以确保两蛋白的正确折叠.将目的片段克隆至pMD18-T载体中进行测序.将测序正确的基因片段双酶切后,替换质粒pProEX HTa-Ag85B-ESAT6中的ESAT6基因,从而获得重组质粒pProEX HTa-Ag85B-Hsp16.3,并转化入大肠杆菌DH5α.经IPTG诱导后进行融合表达,并分别用抗Ag85B多抗和抗Hsp16.3单抗以及活动期结核病人血清进行Western blot分析鉴定,采用镍柱亲合色谱法对融合蛋白进行纯化.结果 PCR扩增获得的目的基因与GenBank报道的一致.SDS-PAGE分析显示构建的融合蛋白在大肠杆菌中表达,且该融合蛋白能够分别与抗Ag85B多抗和抗Hsp16.3单抗以及结核病人血清反应.该融合蛋白主要以包涵体的形式存在,镍柱亲和层析可获得纯化的Ag85B-Hsp16.3融合蛋白.结论结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3在大肠杆菌中高效表达,为进一步研究其生物学功能提供了基础.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2010(026)010【总页数】4页(P953-956)【关键词】Ag85B;Hsp16.3;融合蛋白;原核表达;纯化【作者】杨巍;师长宏;赵佐庆;赵勇;江鹰【作者单位】第四军医大学实验动物中心,西安,710032;第四军医大学唐都医院实验外科;第四军医大学实验动物中心,西安,710032;第四军医大学唐都医院实验外科;第四军医大学实验动物中心,西安,710032;第四军医大学实验动物中心,西安,710032【正文语种】中文【中图分类】R卡介苗(BCG)是目前唯一用于结核病(TB)预防的疫苗,但其保护效果不稳定。

结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10的表达、纯化和鉴定

结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10的表达、纯化和鉴定江鹰;尚淑琴;赵勇;毛峰峰;赵善民;张彩勤;师长宏【摘要】克隆结核分枝杆菌培养滤液蛋白CFP10基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化.用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出CFP10基因片段,克隆至pMD18-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pGEX-4T-1并在大肠杆菌BL21中表达.表达蛋白经SDS-PAG及Western-blot分析后,亲和层析法纯化蛋白.成功克隆了CFP10基因,并对其在E.coli中进行了表达,SDS-PAGE及Western blot分析表明表达产物正确.通过GST纯化系统获得36 kD纯化蛋白,与文献报道相符,该蛋白可与CFP10 mAb特异结合,并且同时与活动期结核病人血清发生反应.成功获得了纯化的CFP10蛋白,为进一步研究CFP10蛋白的致病机理提供了实验依据.%In order to clone the gene of Mycobacterium Tuberculosis fosters filtrate protein CFPlO.then express the culture filter protein of CFP10 in Escherichia. Coli BL21(E. Coli) and purify the expressed protein, the CFP10 gene was amplified from the genome of M. Tuberculosis H37RV by PCR and cloned into plasmid pMD18-T. The fragment sequenced correctly was subcloned into the expression vector pGEX-4T-l and expressed in E. Coli BL21. The expressed protein was identified by SDS-PAGE analysis and Western blot method, and subsequently purified it by GST-tag purification system. The gene of CFP10 was successfully cloned and expressed in E. Coli, and the expressed protein was identified correctly by SDS-PAGE analysis and Western blot analysis. The expressed protein had both the binding site of anti-CFPIO mAb and TB patient' serum. TheCFP10 was successfully expressed and purified, which provided material foundation for its pathogenic mechanism study.【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2012(012)005【总页数】4页(P1017-1019,1029)【关键词】结核分枝杆菌;CFP10;表达;纯化【作者】江鹰;尚淑琴;赵勇;毛峰峰;赵善民;张彩勤;师长宏【作者单位】第四军医大学实验动物中心,西安710032;西安市疾病预防与控制中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032;第四军医大学实验动物中心,西安710032【正文语种】中文【中图分类】R378.911结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)所致以呼吸道系统感染为主的慢性传染病，在我国结核感染人群或感染高危人群的流动性增加，以及人们对于结核杆菌感染认识的不足，致使结核杆菌感染有日益上升的趋势［1］。

重组蛋白IFNGA在大肠杆菌中的表达与纯化

高中组11年级生物化学3人项目重组蛋白IFNGA在大肠杆菌中的表达与纯化重组蛋白IFNGA在大肠杆菌中的表达与纯化摘要：干扰素γ（Interferon gamma，IFN-γ）是体内重要的细胞因子，能够通过调控免疫相关基因的转录协调机体的免疫反应，具有抗病毒、抗肿瘤、增强免疫力能功能。

目前对于IFN-α、IFN-β重组表达的较多，而关于IFN-γ 蛋白的纯化表达较少.因此,本研究使用PCR方法扩增IFN-γ基因，将IFN-γ基因分别插入原核表达载体pET-30构建重组表达质粒pET-30--IFN-γ，转化大肠杆菌BL21和Rosetta菌株，在IPTG诱导下表达IFN-γ，SDS-PAGE分析重组表达蛋白。

结果表明：成功构建重组表达质粒pET-30-IFN-γ；表达产物主要以包涵体形式存在；经Ni2+-NTA亲和层析纯化，获得高纯度重组蛋白。

本实验纯化的蛋白有望在今后用于医学和生物学研究中。

关键词：干扰素；IFN-γ 蛋白；大肠杆菌表达系统；重组表达；蛋白纯化；一、研究背景干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒（比如：乙肝病毒）的复制。

其类型分为三类，α-（白细胞）型、β-（成纤维细胞）型，γ-（淋巴细胞）型；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。

干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。

它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。

其中，IFN-γ是体内重要的免疫调节因子，能通过与细胞表面受体结合，诱导病毒感染细胞产生多种抗病毒蛋白，使细胞内产生抗病毒状态而发挥抗病毒作用。

在诱导效应因子表达的同时，由于IFN-γ能够提高细胞表面MHC分子的表达，增强免疫活性细胞对病原体的杀伤作用，从而协同促进了机体对病毒感染细胞的杀灭，而使机体处于抗病毒状态。

结核分枝杆菌的微生物学检查程序 -回复

结核分枝杆菌的微生物学检查程序-回复结核分枝杆菌是一种引起结核病的病原菌，它具有潜伏感染和活动性感染两种状态。

为了准确诊断结核病，需要进行微生物学检查。

以下将详细介绍结核分枝杆菌的微生物学检查程序。

第一步：标本采集结核分枝杆菌的标本可以采集自患者的呼吸道、淋巴结、组织等部位。

常见的标本包括痰、胸腔积液、脑脊液等。

标本采集应严格遵循无菌操作原则，避免污染和细菌的死亡。

第二步：标本处理采集到的标本需要进行适当的处理，以提高分枝杆菌的检出率。

对于痰标本，应先进行离心，将上清液（上清液中含有较高浓度的分枝杆菌）分装入多个收集器中。

对于其他标本，如胸腔积液、脑脊液等，可以进行直接涂片或离心浓缩处理。

第三步：分枝杆菌培养分枝杆菌培养是诊断结核病的关键步骤。

常用的培养基有Lowenstein-Jensen（LJ）固体培养基、麦康奈尔（Middlebrook）液体培养基等。

将经过标本处理的标本接种到培养基上，并在适宜的温度（通常为35-37摄氏度）下培养2-8周。

培养期间需要定期观察菌落的形态，并进行常规的结核分枝杆菌鉴定。

第四步：分枝杆菌鉴定通过观察分枝杆菌的形态特征，如形状、颜色等，可以初步鉴定分枝杆菌。

进一步的鉴定需要进行生化试验，如尼氏染色、热酸洗脱法、硝酸盐还原试验等。

这些试验可以确定菌株是否为结核分枝杆菌。

第五步：药敏试验药敏试验用于检测结核分枝杆菌对抗结核药物的敏感性。

常用的药敏试验包括比值法（MIC测定）、比例法、临界浓度法等。

通过药敏试验可以确定分枝杆菌对抗结核药物的敏感性，以指导临床治疗。

第六步：核酸检测核酸检测是近年来发展起来的一种快速、准确的检测方法。

常用的核酸检测技术有PCR（聚合酶链反应）、LAMP（环介导等温扩增法）等。

通过检测结核分枝杆菌特定的基因序列，可以快速准确地诊断结核病。

综上所述，结核分枝杆菌的微生物学检查程序包括标本采集、标本处理、分枝杆菌培养、分枝杆菌鉴定、药敏试验和核酸检测。

结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3的表达、纯化和鉴定

ｐｒｔｉ８Ｂ— ｓ．ｆＭｙｏａｔｒｕｔｂｒｕｏｉｏｅｎＡｇ５Ｈｐｌ３ｏ６ｃｂｃｅｉｍｕｅｃｌｓｓ
ＹＡＮＧＷｅ，ｉＳＨＩＣｈｎ — ｏｇ，ＨＡＯｕ — ｉｇ，ａｇｈｎＺＺｏｑｎＺＨＡＯｎＪＡＮＧｎＹｏｇ，ＩＹｉｇ
目的片段克隆至ｐＭＤ１一载体中进行测序。将测序正确的基因片段双酶切后，换质粒ｐｒＥａＡ８ＢＥＡＴ６中的８Ｔ替ＰｏＸＨＴ — ｇ５－Ｓ
ＥＡＴＳ６基因，而获得重组质粒ｐｒＥａＡｇ５ — ｐ６３并转化入大肠杆菌ＤＨ５。经ＩＴ诱导后进行融合表达，从ＰｏＸＨＴ — ８ＢＨｓｌ．，ＱＰＧ并分别用抗Ａｇ５多抗和抗Ｈｓｌ．８Ｂｐ６３单抗以及活动期结核病人血清进行Ｗｅｔｒｌｔ析鉴定，用镍柱亲合色谱法对融合ｓｅｎｂｏ分采蛋白进行纯化。结果ＰＲ扩增获得的目的基因与Ｇｎａｋ报道的一致。Ｓ－ＡＧ分析显示构建的融合蛋白在大肠杆菌ＣｅＢｎＤＳＰＥ
（ｐｒｍｅｔｆＥｅｉｎａｕｇｒＤｅａｔｎｘｐｒｍｅｔｌＳｒｅｙ，ＴｎｄｓｔｌｈｏｒｈＭｉｉｒｄｉｌＵｎｖｒｉｏａｇｕＨｏｐｉ，ｔｅＦｕｔｌａｙＭｅｃｉｅｓｔａｔａｙ，Ｘｉａ１０８ ’ｎ７０３，Ｃｈｎ）ｉａ

结核分枝杆菌的分子生物学鉴定

结核分枝杆菌的分子生物学鉴定结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是引起人类结核病的主要病原体，具有很高的传染性和致死率。

目前，结核病仍然是全球公共卫生问题，尽管已经有了许多有效的治疗方案，但是由于结核分枝杆菌的进化和抗药性的出现，人类与结核病之间的斗争仍然在进行。

结核分枝杆菌的种类很多，据估计约有150种，但其中只有少数能够感染人类。

因此，在进行结核病诊断和治疗时，需要对病原体进行准确鉴定。

传统鉴定方法主要基于形态学、生理化学和生物学特征等方面，但是这些方法往往需要很长时间，且存在误判的风险。

近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，结核分枝杆菌的分子生物学鉴定技术逐渐成为一种快速、准确、可靠的鉴定方法。

分子生物学鉴定技术主要包括PCR、脱氧核糖核酸（DNA）序列分析和病原菌基因芯片技术等。

其中，PCR技术是最常用的方法之一。

PCR技术利用特异引物扩增病原体基因（一般选择16S rRNA和IS6110基因），然后通过凝胶电泳分离和检测，可实现对结核分枝杆菌的快速鉴定。

另外，PCR技术也可用于检测结核分枝杆菌的耐药性基因以及特定毒力因子等。

DNA序列分析是一种更加准确的结核分枝杆菌鉴定方法。

它利用PCR技术扩增目标基因，然后将扩增产物纯化、测序，并与基因序列数据库比对，确定结核分枝杆菌的种类和亚型等。

由于M. tuberculosis的基因组序列已经被测定，DNA序列分析对于对结核分枝杆菌的鉴定更为准确和可靠。

病原菌基因芯片技术是一种较新的结核分枝杆菌鉴定方法，它利用在晶片上固定的检测探针，可同时检测数以千计的病原菌基因（包括结核分枝杆菌和其他病原体），并通过计算机软件分析得出结果。

这种技术不仅可用于结核病诊断，还可以用于监测传染病病原体在不同地区的分布、病原体进化、抗药性的形成等方面的研究。

总之，分子生物学鉴定技术为结核病的诊断和治疗提供了更加快速、准确、可靠的解决方案。

结核分枝杆菌38kDa蛋白结构与功能的生物信息学分析

结核分枝杆菌38kDa蛋白结构与功能的生物信息学分析目的应用生物信息学分析软件预测结核分枝杆菌38kDa蛋白氨基酸序列的结构与功能。

方法应用NCBI、Expasy等在线生物信息学网站及DNAstar、Rasmol 等软件包分析38kDa蛋白与其他物种的同源序列，进行多序列同源比对；预测二级结构、三级结构；预测主要抗原表位等。

结果同源性比对结果表明结核分枝杆菌38kDa蛋白结核分枝杆菌磷酸盐转运蛋白同源性达87%；预测该蛋白的分子质量单位为39113.47 Da，理论等电点为11.779；该蛋白跨膜区有2个，分别为7-23，7-105，其结构域5个分别位于8-22、35-47、48-79、214-232、233-286。

结论生物信息学技术在结核分支杆菌38kDa蛋白研究中有一定的理论和应用价值。

Abstract：Objective To predict the structure and function of recombinant 38kDa of Mycobacterium tuberculosis using bioinformatics method . Methods By online analysis at bioinformatics websites such as NCBI and Expasy ，employing software packages such as DNAstar and Rasmolto do multi-sequence homological alignment，secondary structure and tertiary structure，antigenic epitope analysis，etc. Results Similarity of 38kDa of Mycobacterium tuberculos compared to phosphate-binding protein of Mycobacterium tuberculosis was 87% . Analysis of the predicted protein indicated a molecular mass of 39113.47 Da，PI was 11.779 ，two transmembrane region，function sites and eight antigen epitope were found . Conclusion Bioinformatic is valuable to the study 38kDa 6 ofMycobacterium tuberculosis.Key words：Mycobacterium tuberculosis ；38kDa ；Bioinformatics；Structure and fuction结核病是全球卫生问题之一。

重组结核杆菌融合蛋白说明书

重组结核杆菌融合蛋白说明书
重组结核杆菌融合蛋白是一种用于结核病疫苗研究领域的新型蛋
白质。

这种蛋白质是通过将多个结核杆菌特有的抗原蛋白合成一个大
分子蛋白质而构成的。

它具有多功能、多抗原性、免疫原性强等特点，可以在疫苗开发方面具有广泛的应用前景。

重组结核杆菌融合蛋白的研究利用基因工程技术，通过细胞克隆
和表达得到。

然后通过纯化和检测技术，得到高纯度的蛋白质用于研究。

这种蛋白在诊断、治疗与预防结核病方面都具有很高的应用价值。

现已在动物实验中显示出了良好的免疫效果，是一种潜在的疫苗药物。

重组结核杆菌融合蛋白根据其不同的抗原重组模式可分为多种类型，如BCG、ESAT-6、CFP-10等。

它们可以单独或联合接种，目的是
提高疫苗的免疫效果。

这些类型的蛋白质针对的是不同的结核杆菌抗原，可以满足不同患者的需求。

重组结核杆菌融合蛋白的应用范围非常广泛，可以用于诊断、治
疗甚至预防结核病。

在疫苗项目中，该蛋白质的重要性得到了广泛认可。

通过与其他形式的结核菌疫苗进行比较，重组结核杆菌融合蛋白
显示出了更好的免疫效果和更广泛的应用前景。

总之，重组结核杆菌融合蛋白是一种非常有前途的蛋白质，它的
研究对于结核病的控制和治疗有着重要的意义。

我们相信在不久的将来，这种蛋白质会有更广泛的应用，并在疫苗开发、诊断和治疗方面
发挥重要的作用。

重组结核杆菌融合蛋白的使用方法

重组结核杆菌融合蛋白的使用方法一、引言重组蛋白技术是现代生物技术领域的重要研究方向之一。

其中，重组结核杆菌融合蛋白作为一种新型的免疫原，具有广泛的应用前景。

本文旨在介绍重组结核杆菌融合蛋白的制备方法以及其在临床和实验室中的应用。

二、制备重组结核杆菌融合蛋白1. 基因克隆首先，需要将目标基因克隆到表达载体中。

常用的表达载体有pET等。

将目标基因PCR扩增后与表达载体进行连接，并经过酶切和连接等步骤构建成完整的表达载体。

2. 转染细胞将构建好的表达载体转染到宿主细胞（如大肠杆菌）中，使其能够产生目标蛋白。

3. 蛋白纯化通过离心、超滤等步骤，将含有目标蛋白的细胞裂解液进行初步分离。

接下来，可采用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对目标蛋白进行纯化。

4. 鉴定通过SDS-PAGE、Western blot等方法对目标蛋白进行鉴定，确保其纯度和活性。

三、重组结核杆菌融合蛋白的应用1. 临床应用重组结核杆菌融合蛋白可作为一种新型的免疫原，用于结核病的诊断和预防。

例如，在结核病的血清学检测中，可采用重组结核杆菌抗原作为诊断试剂。

此外，重组结核杆菌抗原还可用于疫苗开发。

2. 实验室应用在实验室中，重组结核杆菌抗原可作为一种重要的实验工具。

例如，在免疫学研究中，可采用重组结核杆菌抗原来激活T细胞，并进一步探究T细胞的功能。

此外，在药物筛选方面，还可以利用重组结核杆菌抗原来筛选可能的药物靶点。

四、使用注意事项1. 在制备过程中，应注意操作规范，避免交叉污染。

2. 在使用前应对制备的重组结核杆菌融合蛋白进行鉴定，确保其纯度和活性。

3. 在应用过程中，应注意实验条件的控制，避免影响结果的准确性。

五、总结重组结核杆菌融合蛋白是一种新型的免疫原，在临床和实验室中具有广泛的应用前景。

通过基因克隆、转染细胞、蛋白纯化等步骤，可以制备出高纯度的重组结核杆菌抗原。

在使用过程中，应注意操作规范和实验条件控制，以保证结果的准确性。

重组结核杆菌融合蛋白工艺流程

重组结核杆菌融合蛋白工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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重组结核杆菌融合蛋白说明书

重组结核杆菌融合蛋白说明书1. 产品概述重组结核杆菌融合蛋白是一种通过基因工程技术合成的蛋白质，由结核杆菌相关蛋白的不同区段融合而成。

该融合蛋白能够在实验室中被用于研究结核杆菌感染的机制、免疫诊断以及药物研发等领域。

2. 产品特点•重组结核杆菌融合蛋白具有高纯度和稳定性，可满足科研人员的各种需要。

•融合蛋白的序列设计经过优化，使其具有更好的表达和抗原性能。

•可以作为结核杆菌相关抗原的理想替代品，用于免疫学研究和临床检测。

3. 产品应用•免疫学研究：重组结核杆菌融合蛋白可用于免疫学实验，如免疫印迹、免疫组化和流式细胞术等。

它可以作为标准控制抗原，研究免疫应答机制和体外细胞免疫反应。

•结核杆菌感染诊断：重组结核杆菌融合蛋白可以作为临床中结核杆菌感染的诊断工具，如酶联免疫吸附试验（ELISA）等，通过检测患者体液中对融合蛋白的免疫反应，判断是否感染结核杆菌。

•药物研发：重组结核杆菌融合蛋白可以用于筛选和评估抗结核药物的活性和效果。

通过与药物作用的结构域相互作用，评估药物的疗效，加速结核病治疗研究的进展。

4. 实验流程1.融合蛋白表达：将重组结核杆菌融合蛋白的DNA序列导入表达宿主细胞中，经过适当的培养条件，使其大量表达蛋白。

2.细胞裂解和纯化：采用合适的方法将细胞裂解，并通过柱层析等技术，纯化出融合蛋白。

3.蛋白质浓度测定：使用比色法、Bradford法等方法，测定融合蛋白的浓度，以确保实验的准确性。

4.免疫学实验或临床检测：根据实验需要，将重组结核杆菌融合蛋白应用于免疫学实验或临床检测中。

根据具体实验目的，选择合适的仪器和试剂，进行定量和定性分析。

5. 产品存储和稳定性•重组结核杆菌融合蛋白应存放于-20°C以下的低温环境中，避免蛋白质变性和降解。

•在正确存储条件下，产品的稳定性可达12个月。

•开封后，建议分装存储，避免多次冻融对蛋白质的损害。

6. 注意事项•在使用重组结核杆菌融合蛋白进行免疫学实验时，需要采取必要的防护措施，如佩戴手套、实验罩等，确保实验人员安全。

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重组结核分枝杆菌Mr 38 000蛋白的表达、纯化和鉴定摘要从H37Rv基因组中扩增Mr38000蛋白基因并高效表达和纯化。

用PCR技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Mr38000蛋白序列，将其与pGEM-T-Easy载体连接转化E.coliDH5α，构建重组克隆载体pGEM-T-Easy/Mr38000，测序正确后将目的基因片断克隆入pQE-80L原核表达载体并转化E.coliDH5α，IPTG诱导目的蛋白表达。

经Western-blot鉴定目的基因与(His)6融合表达，将已表达的蛋白质通过Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化。

PCR得到结核分枝杆菌Mr38000蛋白基因，测序结果与GeBank中报道的完全一致。

SDS-PAGE显示，在Mr为38.5×103处有相应的蛋白质表达条带，Wesernblot鉴定为(His)6融合表达蛋白。

经Ni-NTA亲和色谱柱进行纯化后可得到纯化的蛋白。

成功克隆了铁调节蛋白基因Mr38000蛋白序列，并在E.coliDH5α高效表达，亲和层析后获得了纯化目的蛋白。

关键词Mr38000蛋白;表达;纯化;结核分枝杆菌；Cloning,ExpressionandPurificationofMr38000proteinfromMycobacteriumtuberculosisZHANGMing，LIJin-cheng，LINHang(Departmentofinternalneurology,2.emergencydepartment,theFuZhougeneralhospital,FuZhou,350 025,P.R.China)Abstract]ToobtainMycobacteriumtuberculosisMr38000proteinfromH37Rv-DNA,expressefficientlyi nE.coliandpurifytheMr38000proteins.Mr38000proteingenewasamplifiedbyPCRfromthegenomeof H37RvandclonedintopGEM-T-Easyvector.Aftersequenced,Mr38000proteingenewasrecombinated expressionvectorpQE-80Lbyrestrictionenzymedigestion,namedpQE-80L-Mr38000.TheplasmidpQE -80L-Mr38000wastransformedintoE.coliDH5αandinducedbyIPTG.Mr38000proteinexpressionwasa nalyzedbySDS-PAGEandconfirmedbywesternblotwithmice-specificmAbagainst(His)6.Mr38000prot eingenewasidenticalwithGeBankreported.ThepQE-80L-Mr38000vectorexpressedproteinwithrelati vemoleculeweightabout38.5kD,whichcouldbecaughtby(His)6mAb.Theexpressedproteincouldbepu rifiedbyNi-NTAsystemkitwithdenativecondition.Mr38000proteingenehadbeensuccessfullycloneda ndefficientlyexpressedinE.coli,TheresultsestablishedthebasisforfurtherstudyofthefunctionofMr38 000protein.Keywords]Mr38000protein;expression;purification;Mycobacteriumtuberculosis(MTB)结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,MTB）是结核病(tuberculosis,TB)的病原体。

其在患者体内主要为细胞内生长。

诊断方法的欠缺是结核病流行的重要原因。

目前常用的PPD 试验，常使BCG疫苗接种者被误检为阳性1]，且对后期结核患者敏感性较低，存在明显不足。

近年来，有研究发现Mr38000蛋白具有强的免疫原性，而成为结核分枝杆菌抗原的研究热点2,3]，可能成为结核病血清学诊断试剂和疫苗研究的候选抗原之一。

为此，我们在原核表达载体中表达结核分枝杆菌Mr38000蛋白并对其进行了纯化，为进一步研究其抗原性和主要功能提供方便。

１材料和方法1.1材料MTB毒株H37Rv、DH5α由本室保存;pGEM-T-Easy及WizardPlusPurificationsystem购自Promega公司；X-gal，限制性内切酶BamHⅠ,EcoRⅠ及T4-DNA连接酶，TaqDNA聚合酶均为TaKaRa公司产品；IPTG,DTT,DTE,小量质粒提取试剂盒均为Sigma公司产品，胶回收试剂盒为Vitagene公司产品。

1.2方法1.2.1引物的设计与合成根据已发表的MTBH37Rv全基因组Mr38000蛋白基因序列设计引物。

上游引物P1:5’-AGGGGATCCGCGAAAATTCGTTTGCATACGCT-3’，含BamHⅠ酶切位点和起始密码子，下游引物P2:5’-GATGAATTCACGGAGGTTGCTGTCGCGTGGTG-3’中加入EcoRⅠ酶切位点。

引物由上海生工生物技术有限公司合成。

1.2.2Mr38000片段的扩增取保存于改良罗氏培养基的MTBH37Rv接种于7H9液体培养基，37℃间或振荡培养2~3wk。

取5mL液体培养物的菌体沉淀重悬于50μL裂解液（10╳PCR绶冲液5μL,45g/L吐温，5μL,45g/L,NP-405μL，20g/L蛋白酶K0.5μL及水34.5μL）中。

于55℃水浴1h，沸水浴10min灭活蛋白酶K，离心取上清，用酚/氯仿抽提，无水乙醇沉淀，溶于50μLTE 中，作为DNA模板。

PCR反应体系为：10╳buffer5μL,dNTPs5μL(2.5mm oL/L)、DNA模板为1μL，P1，P2引物各1μL(25μmoL/L)及Taq酶1μL，加水至50μL。

PCR条件：94℃变性40s，60℃复性30s，72℃延伸1.5min，30个循环。

1.2.3PCR产物的克隆与鉴定PCR产物用琼脂糖凝胶电泳回收DNA条带。

取纯化的PCR产物与质粒pGEM-T-Easy进行连接反应，转化感受态DH5α，均匀涂布于含有x-gal(33μL)和异丙基β-D硫代半乳糖苷IPTG(20μL)的LB培养皿中，37℃培养16h，挑取白色菌落进行酶切鉴定，所获阳性克隆命名为pGEM-T-Easy-Mr38000，送至上海生工生物工程有限公司进行序列测定。

1.2.4目的蛋白的诱导表达经BamHI和EcoRⅠ双酶切后与经同样酶切的pQE-80L载体进行连接反应，转化感受态DH5α，挑取的阳性克隆命名为pQE-80L-Mr38000。

在含有氨苄青霉素（100mg/L）的LB培养基中过夜培养pQE-80L-Mr38000。

按10%的接种量进行转接，37℃摇菌3h，加入异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为0.5mmoL/L，37℃继续培养4~5h。

取1.5mL细菌培养物，8000g离心30s收集菌体，加入2╳样品缓冲液剧烈振荡混匀，100℃,5min；8000g离心5min；取上清进行SDS-PAGE电泳检测。

1.2.5目的蛋白的Westernblot分析将经诱导的pQE-80L-Mr38000和E.coliDH5α分别制样，进行12%SDS-PAGE后以0.15mA恒流电转2h至硝酸纤维素膜上，用50g/L脱脂奶封闭2h，PBS 洗涤后加抗His的单克隆抗体(1:5000稀释)4℃过夜，PBS洗涤后加入HRP标记的羊抗鼠IgG 抗体，37℃孵育1h。

PBS洗涤后DAB显色观察结果。

1.2.6目的蛋白的可溶性分析大规模培养细菌，诱导表达目的蛋白，收集细菌，超声破菌。

离心后将上清和沉淀分别制样，进行SDS-PAGE分析。

1.2.7目的蛋白的纯化根据Ni-NTA试剂盒的说明书，将融合蛋白与NI-NTA结合，用不同pH 值咪唑溶液进行洗脱，得到纯化产物。

2结果2.1Mr38000蛋白片段的扩增及序列测定经30个循环PCR扩增，可得与预计长度相等的片断（图1）。

将DNA回收后插入pGEM-T-Easy载体，经测序证实所扩增的Mr38000序列与GeBank 数据库所收录的Mr38000序列完全一致。

M:DNAmarkerDL2000;1:Mr38000基因PCR产物;图1PCR扩增Mr38000蛋白基因产物琼脂糖凝胶电泳（10g/L）结果2.2表达载体的构建pQE-80L经BamHI和EcoRⅠ双酶切后与Mr38000基因目的片断进行连接反应后，转化感受态E.coliDH5α。

挑取的克隆子进行酶切鉴定，切出约1151bp大小片段的为阳性克隆子(图2)，命名为pQE-80L-Mr38000。

M:DNAmarkerDL2000;1,2:pQE-80L–Mr38000;图2pQE-80L-Mr38000重组质粒BamHI和EcoRⅠ双酶切鉴定结果2.3Mr38000蛋白在pQE-80L表达载体中的诱导表达将pQE-80L-Mr38000经37℃活化过夜，经IPTG诱导表达后做SDS-PAGE分析，从电泳图中可以看出在Mr为38.5╳103一致处出现了一条表达带，表达量约占菌体总蛋白的20%(图3)。

M：蛋白分子量marker;1:未诱导的pQE-80L-Mr38000质量重组菌E.coliDH5α;2-4:诱导的pQE-80L-Mr38000质量重组菌E.coliDH5α;图3(His)6-Mr38000融合蛋白的SDS-PAGE分析2.4目的蛋白的鉴定所构建的重组质粒表达的Mr38000蛋白以带有6个组氨酸的融合蛋白的形式出现，使用鼠抗(His)6mAb验证Mr38000蛋白的表达。

结果显示在Mr为38.5×103处有一显色带，而对照无相应条带(图4)。

M：蛋白分子量marker;1:(His)6-Mr38000proteinexpression2.DH5α图4(His)6-Mr38000融合蛋白的Westernblot分析结果2.5目的蛋白的可溶性分析将上清和沉淀分别所制样品，进行SDS-PAGE分析表明表达产物主要在细菌裂解后的沉淀中，而上清中则很少(图5)。