生物化学实验复习题 2

生物化学实验复习题：

1.试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。

在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋光度是不同的。其在171～195之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。

2.淀粉含量测定的方法有几种？比较各方法特点。

淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋光法等。

1、酸水解法：面粉经乙醚除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖，

按还原糖测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。

2、酶水解法：面粉经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用

盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。

3、旋光法：在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条

件下，不同面粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在171~195之间，因此可用旋光法测定淀粉的含量。

3.简述旋光法测定淀粉的关键步骤。

1.样品的处理

在电子天平上称取小麦粉2.5000g置于三角瓶中→加入50ml 1%HCl混成浆状（不能有结块）→沸水浴中准确加热15min→先加1ml 30% ZnSO4混匀→再加1ml 15%亚铁氰化钾混匀→移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去最初15ml收集其余滤液。

2.旋光度测定

取滤液20ml置于旋光管中，先用1%HCl 调节旋光仪“0”点，然后将样品溶液放入旋光仪中测α

4.写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。

5.试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。

含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。

浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。

6.蛋白质含量测定的方法有几种？比较各方法特点。

定氮法,双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮蓝法（Bradford法）.

凯氏定氮灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为±2％费时

10小时将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长

双缩脲法（Biuret法）灵敏度低 20mg 中速 20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定,但不太灵敏；不同蛋白质显色相似

紫外吸收法较为灵敏 50～100mg 快速 10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基

在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；

Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高 5mg 慢速 40～60分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；

各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化

考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高 5mg 快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；

SDS 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化

7.简述凯式定氮法测定蛋白质的关键步骤。

1、消化：在电子天平上称取小麦粉0.2000g--0.4000g 置于凯氏试管底部→加混合

混合催化剂0.5g和3ml浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（2h左右）取出放入通风橱内至不冒白烟，向其中加20ml水，并移至100ml容量瓶定容→即得样品消化液。

同时每4组8人做1空白实验：0.5g混合催化剂+3ml浓硫酸置于凯氏试管中放入消化炉加热至淡绿色（1h左右）→冷却后加水移入100ml容量瓶中定容得空白消化液。

2.蒸馏与吸收：吸取10ml 2%的硼酸于三角瓶中→加4d甲基红-溴甲酚绿混合指示

剂（若变绿色则用0.01mol/L HCl调至紫红色）。将其置于冷凝管下端并使管尖插入液面以下，再吸取5ml消化液从漏斗上方加入蒸馏室内用水洗两次，并加入10ml 40%NaOH后水封（注意：勿使漏斗内玻杆取下以防漏气），然后打开通气阀进行加热蒸馏，直至吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸馏3min→先移去吸收液再停止加热以防倒吸。

3. 滴定：用0.01mol/L HCl 滴定吸收液由绿色退去变红色为止，记下耗去标准盐

酸的体积(V1.V0)。

8.写出计算蛋白质含量的公式并说明各符号的含义。

9.试述淀粉酶活力测定的实验原理。

淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。α-淀粉酶可作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，生成麦芽糖。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。

淀粉酶存在于萌发后的禾谷类种子中，，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。两种淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化。β-淀粉酶不耐热，在70℃15min钝化。根据它们的这种特性，采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力），再减去α-淀粉酶的活力，就可求出β-淀粉酶的活力。

10.淀粉酶活力测定的方法有几种？比较各方法特点。