大鼠脂肪干细胞分离培养及细胞表型的研究

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大鼠脂肪源性干细胞的分离与鉴定

（广州医学院第一附属医院妇产科
广州５１０１２０）
摘要目的：体外分离培养大鼠脂肪源性干细胞，观察并记录大鼠脂肪源性干细胞的生长特点，探索其成骨分化潜能。方法：取ＳＤ大鼠腹股沟脂肪垫，消化分离出脂肪源性干细胞后进行传代培养。用ＭＴＴ（四甲基偶氮唑蓝）法对原代及１，３，５，７，９，１１，１３代细胞进行生长测定。流式细胞仪下对第４代脂肪源性干细胞进行表面标记物ＣＤ４４，ＣＤ１０６，ＣＤ１０５，ＣＤ４９ｄ的表达测
定。取第３代脂肪源性干细胞进行体外诱导分化实验；地塞米松、甘油磷酸钠、维生素Ｃ作用下成骨方向诱导。结果：细胞表面标记物ＣＤ４４，ＣＤ１０６，ＣＤ１０５，ＣＤ４９ｄ阳性率分别为９９．５９％，０．８５％，９５．００％，８９．５６％。ＭＴＴ绘制生长曲线显示经多次传代后细胞仍能保持较强的增殖能力。成骨诱导组诱导后，茜素红染色下可见钙结节沉积。结论：大鼠脂肪源性干细胞，持续
干细胞群，即脂肪源性干细胞（ＡｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅＤｅｒｉｖｅｄＳｔｅｍ

脂肪干细胞实验报告

一、实验背景随着生物科技的发展，干细胞研究已成为医学领域的前沿课题。

脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells，ASCs）作为一种易于获取、增殖能力强、多能性的干细胞，在组织工程、再生医学等领域具有广阔的应用前景。

本研究旨在探讨脂肪干细胞的分离、培养、鉴定及其在组织工程中的应用。

二、实验目的1. 探讨脂肪干细胞的分离、培养及鉴定方法。

2. 研究脂肪干细胞在组织工程中的应用。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：脂肪组织、DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、青霉素、链霉素、抗生素、鼠抗人CD105抗体、鼠抗人CD34抗体、鼠抗人CD29抗体、鼠抗人CD44抗体、鼠抗人CD45抗体等。

2. 实验仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、酶标仪、流式细胞仪等。

四、实验方法1. 脂肪干细胞的分离与培养（1）将脂肪组织剪成1mm×1mm×1mm的小块，用DMEM/F12培养基清洗3次，去除多余脂肪。

（2）加入0.25%胰蛋白酶消化脂肪组织，37℃水浴消化30分钟，1000r/min离心5分钟，弃上清。

（3）加入DMEM/F12培养基重悬细胞，吹打均匀，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

2. 脂肪干细胞的鉴定（1）采用免疫荧光染色法检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。

（2）采用流式细胞术检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。

3. 脂肪干细胞在组织工程中的应用（1）将脂肪干细胞接种于生物降解支架材料上，构建组织工程化脂肪组织。

（2）将组织工程化脂肪组织植入小鼠皮下，观察其成活情况。

五、实验结果1. 脂肪干细胞的分离与培养成功分离出脂肪干细胞，细胞呈梭形，生长旺盛。

2. 脂肪干细胞的鉴定免疫荧光染色和流式细胞术结果显示，脂肪干细胞表达CD105、CD34、CD29、CD44，不表达CD45。

9-8大鼠脂肪干细胞的分离培养1

大鼠脂肪干细胞的分离培养1.试剂配制1.1双抗培养基的配制用100万单位链霉素溶解在10ml去离子水中，抽出0.8ml以及用80万单位的青霉素溶解在8ml的去离子水中，抽出0.5ml，分别加入DM EM培养基中，即配成100U/m1青霉素，100U/m1链霉素双抗培养基。

1.2成骨诱导剂的配制地塞米松259溶解于100ml去离子水中，抽出10ul;10gβ一甘油磷酸钠溶解于6ml去离子水中，抽出lml;25g抗坏血酸溶解于100ml去离子水中，抽出100ul，分别加入100ml的培养基中，既配成了含1nmol/L 地塞米松，50ug/m1抗坏血酸，10mmol/Lβ一甘油磷酸钠的成骨诱导剂。

1.3 DMEM培养基的配制取一瓶DM EM溶解于1000ml去离子水中，搅拌均匀后，用7%NAHC03调节其PH值为7.2-7.4。

用滤器过滤，分装在100ml的清洁无菌生理盐水瓶中置4℃冰箱中。

1.4含10%胎牛血清的DM EM完全培养基的配制取10ml胎牛血清溶解于90mLDM EM培养基中，即可配成含10%胎牛血清的DM EM培养基，装在100ml的生理盐水瓶中置4℃冰箱中。

1.5 0.25%胰蛋白酶的配制用精确的天平称250mg胰蛋白酶，并溶解于100ml培养基中，即浓度为0.25%。

用7%NaHC03调节其PH值为7.2-7.4。

用滤器过滤后，分装在100ml的清洁无菌生理盐水瓶中置4℃冰箱中。

1.6 Ⅰ型胶原多克隆抗体配制I型胶原多克隆抗体用去离子水配成1:100工作浓度，置4℃冰箱中备用。

1.7 二氮联苯胺(diminob ℃nzidin ℃DAB)显色剂的配制分别取lml试剂A，50ul试剂B，50ul试剂按A到C加入，即配成lmLDAB显色剂。

在配制成30min内用于免疫细胞化学染色。

1.8 地塞米松(DXM)液的配制地塞米松25g溶解于100ml去离子水中，抽出10ul。

既配成了含1nmol/L地塞米松，使用时根据需要配制成不同浓度。

脂肪干细胞分离纯化方法的新研究成果-细胞生物学论文-生物学论文

脂肪干细胞分离纯化方法的新研究成果-细胞生物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——脂肪干细胞（adipose-derived stem cells）来源于脂肪组织，取材方便、对自体损伤较小，具有自我更新、多向分化能力、自体移植不发生排斥反应等特点，是组织工程中最有应用前景的种子细胞之一。

量很低，占3%左右，并且分离出来的细胞纯度不理想[1].因此如何获得足够量的、活性高的、高纯度的细胞极为重要。

随着科研技术的不断发展，研究者提出了脂肪干细胞不同的分离纯化方法。

本文就近年来脂肪干细胞分离纯化方法的新研究进展作一综述。

1 脂肪干细胞分离方法1. 1 组织块贴壁法组织块贴壁法即将脂肪组织剪成适宜大小的组织块，然后将组织块贴壁到培养瓶中进行培养[2].此法的核心是确保脂肪组织块贴壁，但在实际操作中很难保证每块组织块贴壁，尤其是在换液过程中，组织块很容易漂浮，导致脂肪组织的浪费。

Jing W 等人[3]采用组织块贴壁法分离培养8周龄BALB/c 小鼠脂肪干细胞时，在脂肪组织剪碎之前，先吸取脂肪组织表面附着的多余水分，将脂肪组织块接种到培养瓶后让组织块贴壁一段时间后再加入细胞培养液，这样的处理可以使脂肪组织块更加牢固地贴在培养瓶上。

本实验室采用此法分离脂肪干细胞时将组织块接种到培养瓶后置于培养箱内培养30 min 后再加入培养液，使得组织块贴壁更加牢固[4].1. 2 酶消化法酶消化法为原代细胞培养常用的方法之一，原理是利用新鲜离体组织的细胞生物学特性未发生明显的变化，仍具有二倍体遗传特性，通过消化液去除细胞间质，使细胞能够更好地吸收外界营养和排出代谢产物，短时间内获得大量的活细胞。

脂肪组织酶消化法即脂肪组织被剪成碎块置于酶中消化，再通过过滤、洗涤和离心等步骤去除漂浮在上层的脂肪细胞和油脂，从而得到脂肪干细胞。

JiangA 等[5]通过酶消化法从人脂肪组织中分离出脂肪干细胞，所培养的细胞贴壁生长、细胞形态为典型的长梭形成纤维样，表达脂肪干细胞特殊的表面标记物CD29、CD44、CD105,阴性表达造血干细胞相关的表面标记物CD34、CD45.酶消化法实际上是一种费时、昂贵的方法，尤其是在需要分离大量脂肪组织的时候，其弊端显得更为突出；在酶的种类、浓度、消化时间上存在很大差异，缺乏统一的标准，大多数研究者采用Ⅰ型胶原酶消化分离原代细胞[6],少数采用Ⅰ 型胶原酶[7]、IV 型胶原酶、VIII 型胶原酶[8]、胰酶[9]或者胶原酶联合应用胰酶[10]进行消化分离，酶的使用浓度从0. 05 ~ 2. 5 g/L 不等[11 -14],消化时间范围为0. 5~ 3 h[15 -17],从而使得分离出来细胞的活性、表型、潜能存在一定的差异；另一方面，市场上的胶原酶和胰酶纯度不高，可能包含有色素、内毒素、异种抗原、异种蛋白酶体[18 -19]; 消化法获得的脂肪干细胞不纯；人为操作过多，容易造成污染；此外，需要的脂肪组织量较大，当脂肪组织量较少时，采用此法无法扩增出足够量的脂肪干细胞用于后续分析[20].Griesche N 等[21]在常规胶原酶消化法分离脂肪干细胞的基础上作了一些改进，在消化获得的细胞接种培养60 min 后马上进行换液，与常规胶原酶消化法相比，此法可以明显减少desmin、smA 和six2的表达，提高干细胞标记物nestin、oct-4 和sall-1 的表达。

大鼠附睾脂肪间充质干细胞的分离培养和鉴定

组织工程的发展开辟了疾病治疗的新路径，它
ＡｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｂａｄｐｓ－ｅｖｄｓｍｃｌＡＳｏｔ．ｔｏｓＡＳｓｏｓｒｓｃ：ｊｃｖｏｏｔｎａｉｅｄｒｅｔｅｌＤＣ）ｆｒｓＭｅｈｄＤＣｆｔｒｉｉｏｉｅ（ａＷｉａ
ｒｔｅｅｄｇｓｅｔｏｌｇｎｓｙｅＩｓｌｔｎＴｅｇｏｈｃｒｅｏａｓｗｒｉｅｔｄｗｉｃｌｅａｅｔｐｏｕｉ．ｈｒｗｔｕｖｆＡＤＳｓｗａｈｃｅｙｃｌｈａｏＣｓｃｅｋｄｂｅｌ
ｄ— ＳＭＡｎｉｅｓｗｅｅｎｇｔｅＣｏｌｉｎＡＤＳａｅｕｅｓｓｅｅｌｏｉｓｅｅｇｎｅｒｎｕａｔｇｎｒｅａｉ．ｎｃｕｓｏｖＣｓｃｎｂｓｄａｅｄｃｌｆｒｔｕｎｉｅｇｄｅｓｓｉｔｈｉｌｓｌｔｏｎｔｂｅ，ｃｉｅｇｏｈｏｏｔｅｓｍｐｅｉｏａｉｎａｄｓａｌａｔｗｔｆＡＤＳ．ｖｒＣｓＫｅｒｙｗｏｄｓ：ａｉｏｅｄｒｖｄｓｅｃｌ；ｏｌｇｎｓｉｏａｉｎ；ｕｔｒｃｌｉｅｔｃｔｏｄｐｓ — ｅｅｔｍｅｌｃｌａｅａｅ；ｓｌｔｏｃｌｕｅ；ｅｌｄｎｉａｉｎｉｉｆ
维普资讯
３３８
第４２卷第４期２００８年８月
哈尔滨医科大学学报
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＨＡＲＢＮＭＥＤＩＩＣＡＬＵＶＥＲＳＹＮＩｎＩ

大鼠脂肪间充质干细胞的分离培养实验步骤

大鼠脂肪间充质干细胞的分离培养实验步骤
实验步骤
10天龄到4周龄大鼠1只，麻醉处死，75%乙醇浸泡消毒3~5min。

无菌条件下切开腹股沟皮肤，暴露腹股沟脂肪垫。

钝性剥离脂肪组织，清洗并去除筋膜组织及小血管。

将脂肪垫剪碎，转移至15mL离心管中。

加入3~4倍体积的0.1% I型胶原酶溶液，37℃水浴振荡约20min，直至细胞混合物成乳状浓稠液体。

期间可吹打脂肪组织，辅助消化。

250×g，4℃，离心5min。

注意离心机预冷至4℃。

小心吸去上层油脂，注意不要破坏位于下方的胶状沉淀。

加人5mL完全培养基，重悬沉淀，转移到新的离心管中，再次离心5min。

重复洗涤一次，吸去上清。

加入8mL完全培养基重悬沉淀，转移至T25培养瓶中，置于37℃，5% CO2温箱中。

待细胞贴壁生长48h后首次观察、换液。

换液时通过弃去培养基，从而去除未贴壁的细胞。

以后每两天更换一次培养基，细胞汇合达80%-90%时，0.25%胰蛋白酶消化，按1:2或1:3比例首次传代。

注：本方法仅供参考，可根据实验需求或经验做合理调整。

注意事项
取材时应将组织清洗干净，仔细剥离去除血管和筋膜组织。

脂肪组织在剪碎的过程中不能研磨，以免破坏细胞。

消化完后的组织在离心前把离心机预冷，使细胞更好的与油脂分离。

用明胶或者胶原蛋白处理培养皿底壁，有利于细胞的贴壁生长。

大鼠脂肪干细胞的分离培养及基本生物学性状研究

获得ＡＳＤＣ来源广，用广泛，目前已建立了相应的应
分离方法ｊ。本研究分离培养了ｓＤ大鼠的ＡＳＤＣ，并进行表型鉴定和基本生物学性状研究，为可注射的组织工程化心肌治疗心肌梗死提供种子细胞来源。
１Ｓ１０８３ＳＮ０７— ７８细胞与分子免疫学杂志（ｈｎＪＣｌＭｏｈｍｕｏ）００２（２Ｃｉｅｌｎｎ１２１，６１ｌ
１７２１
・
论著・
文章编号：０７—８３（００１１０７８２１）２—１１０２７— ３
心肌治疗心肌梗死提供种子细胞来源。方法：外分离培养体
大鼠脂肪来源的干细胞并进行传代培养，流式细胞术鉴定Ｃ９、Ｄ９Ｃ３Ｄ０Ｃ２、Ｄ４及Ｃ４Ｄ５的表达及检测细胞周期；绘制ＡＳＤＣ的生长曲线；通过细胞形态观察、特异性染色来检测脂
肪干细胞向成骨、脂肪细胞分化的能力。结果：大鼠ＡＳ成ＤＣ
液中和胶原酶，离心弃上清。经２０目筛网过滤后离心，用０
含１０ｍ／Ｂ０ＬＬＦＳ的 — Ｍ培养液重悬细胞，以６Ｘ１Ｌ密ＭＥ０／度接种至１０ｍ培养皿。４０ｍ８ｈ后首次换液，以后每３ｄ换液１次。待细胞达９％融合时，以２５ｇＬ胰蛋白酶和０．／０４ｍＩ的乙二胺四乙酸消化，传代。．ＭＬ１２２流式细胞术检测取Ｐ．．３代细胞消化计数后分装在５个Ｅｐｎｏ管中，整密度为１０ｔｐｅｄｆ调０Ｌ含１个细胞的单ｒ１Ｘ０

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及向脂肪细胞分化的实验研究

爬片显示约有６骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞。结论Ｏ
导分化为脂肪细胞。
大鼠骨髓间充质干细胞能进行体外分离培养并能诱
【关键词】骨髓细胞；问充质干细胞；脂肪细胞；细胞分化【中图分类号１Ｒ２．３９２【文献标识码】Ａ
ＥｐｒｍｅｔｏｆｅｅｔａｉｎｏｔＢｎａｒｗｅｅｃｙａｔｍｌｓｉｔｉｏｙｅｘｅｉｎｆＤｉｆｒｎｉｔｏｆＲａｏｅＭｒｏＭｓｎｈｍｌｅＣｅｌｎｏＡｄｐｃｔＳ
ｃｎａｎｎｅａｅｈｓｎｎｓｌｒＴｈｎｄｆｒｎｉｄｃｌｒｅｉｃｔｄｂｕａＶｔｉｏｔｉｉｇｄｓｍｔａｏｅａｄｉｕｉｅｉｅｅｔｎｒｆａｅｅｓｗｅｅｉｎｆａｅｙＳｄＩｓａｒｌｄｔｉｎ＿Ｒｅｕｔｓｌｓ
ｍａｒｗ．ｕｔｒｄａｄｐｓａｅ．ｒｏｃｌｅｎａｓｇｄＭＣｒｎｕｅｏｄｆｅｅｔｔｎｏａｉｏｙｅｎｉｄｃｉｎｍｅｉｍｕｓｗｅｅｉｄｃｔｉｒｎｉｅｉｄｐｃｔｓｉｎｕｔｄｕｄｆａｔｏ
ｔｅ１ｔａｆｅｅｎｎｕｅ，ｐｒｘｍａｅｙ６ｒｔｈ２ｈｄｙａｔｒｂｉｇｉｄｃａｐｏｉｔｌ０ｄａＭＣｓｗｅｅｉｄｃｔｄｐｇｎｃｃｌ￣Ｃｉｕｉｎｒｎｕｅｏａｉｏｅｉｅｌｄｓｏ￣ｓｏＣｓｃｎｃｌｒｎｉｅｅｔｔｔｄｐｃｔｓｉｉ．ａｕｔｅａｄｄｆｒｎｉｅｉｏａｉｏｙｅｖｔｕｆａｎｎｒｏ

脂肪干细胞分离培养操作方法

脂肪干细胞分离培养操作方法
大鼠脂肪干细胞的分离
将手术切取的大鼠脂肪组织尽量剪碎后移至离心管，其余步骤与人脂肪干细胞的分离一致。

经手术切除获得的大鼠皮下脂肪组织消化后原代培养24 h，肉眼观察会发现培养瓶底部贴附着一层网状薄膜，轻轻摇晃培养瓶可使这层网状薄膜从瓶壁上脱落，镜下观察发现大部分细胞都附着于这层膜上，通过吸脂术获取的人脂肪组织消化后则无此现象。

增加胶原酶的量和消化时间也无法避免，取材时的毛细血管或脂肪间结缔组织未被完全消化，穿过细胞筛进入了培养瓶并沉淀于瓶底部形成的。

胶原蛋白酶虽然可以特异性水解胶原蛋白的三维螺旋结构，但不会损伤其他蛋白质。

处理方法是37 ℃下用胰蛋白酶消化5 min。

然后利用40 μm 的细胞筛过滤后传代。

根据作者的经验，每毫升手术切除的大鼠脂肪可分离基质血管成分细胞约1.81×106个。

原代培养2.24×10^7个大鼠基质血管成分细胞，40 h后传代时约剩余6.2×10^6个细胞，细胞剩余率27%。

大鼠脂肪源性干细胞分离培养及在尿道周围移植后的分布

大鼠脂肪源性干细胞分离培养及在尿道周围移植后的分布目的：探索大鼠脂肪组织源性间充质干细胞的分离、体外培养方法，并采用阴部神经切断术的方法制作压力性尿失禁的大鼠模型，为其将来应用于大鼠压力性尿失禁治疗的动物试验研究提供实验依据。

方法：无菌技术下获取SD大鼠双侧腹股沟区脂肪垫，消化离心，长期培养的方法获取脂肪源性间充质干细胞。

倒置相差显微镜观察细胞形态变化，对培养细胞进行免疫细胞化学染色，鉴定其表面分子标志。

结果：原代培养显示培养的脂肪源性间充质干细胞2d左右开始壁,10d-14d左右可达90%融合,基本上为梭形成纤维样细胞形态,免疫细胞化学示CD29阳性，CD34阴性。

阴部神经切断术后10天，除模型组和对照组一各有1只大鼠死亡外，均进行尿流动力学检测，三组手术前后ALLP分别为：对照组一为27.1±5.1和29.1±3.2cmH2O，对照二为29.5±4.9和27.4±72.3,模型组为24.8±3.8和14.7±3.0。

模型组手术后ALLP明显降低，且组织学检查亦证明模型组大鼠尿道周围括约肌明显萎缩。

结论：大鼠脂肪组织中含有大量间充质干细胞,细胞来源充足、取材容易、体外易于培养、细胞增殖数量大，是细胞移植理想的种子细胞。

双侧PNT后大鼠控尿能力明显下降，可以作为SUI模型。

本研究建立了获取大鼠脂肪组织源性间充质干细胞经及制作SUI大鼠模型的方法，为进一步实验研究提供了依据。

标签：间充质干细胞；脂肪组织；细胞培养；SUI模型压力性尿失禁(SUI)为女性的常见病和多发病，其发病率约为1 S%-6O%，多发生于老年人，因受经济、宗教、教育程度等因素的影响，其实际发生率比统计发病率更高。

SVl的症状严重与否都不自接危及生命，但它给患者的日常上作、生活及社交活动造成一定程度的影响，甚至会严重影响患者的生活质量乃至家庭和睦。

1临床资料注射疗法是将药物、化学制剂或自体组织等注入后尿道或膀肌颈内口粘膜下，使尿道腔变窄、拉长，延长功能性尿道的长度，提高尿道阻力，起到关闭尿道内口和后尿道的作用，从而达到有效控制排尿的口的。

脂肪干细胞的分离提取、鉴定及与脂肪颗粒的混合移植研究

脂肪干细胞的分离提取、鉴定及与脂肪颗粒的混合移植研究目的分離提取脂肪干细胞（ADSCs），对其进行成脂、成骨的鉴定，并与脂肪颗粒混合移植，观察移植后的脂肪组织的存活情况。

方法取大鼠腹股沟脂肪，磷酸盐缓冲液清洗，0.1%Ⅰ型胶原酶37℃消化1 h，离心，取沉淀，用含10%血清的DMEM培养基进行培养、传代，取第3代ADSCs用于成脂、成骨鉴定；另取第3代ADSCs用于移植，分为两组：ADSCs（密度为5×107/mL）0.9 mL+脂肪颗粒0.6 mL组、脂肪颗粒1.5 mL组，分别移植于大鼠背部两侧，共移植24只大鼠，分别于2周、1、3个月时脱颈椎处死8只大鼠，再取出背部脂肪组织。

结果大鼠ADSCs成脂、成骨诱导后，经油红O、茜素红染色呈阳性，移植2周、1个月时，两组取出的脂肪组织的体积变化不大；但移植3个月后，取背部脂肪组织，称重：脂肪颗粒1.5 mL组平均重量为（0.4551±0.0024）g，而ADSCs （密度为5×107/mL）0.9 mL+脂肪颗粒0.6 mL组的平均重量为（0.7798±0.0033）g，两组脂肪组织的重量差异有统计学意义（P < 0.05）。

结论原代分离、培养的ADSCs生长状况良好，具有向成脂、成骨分化的能力，与脂肪颗粒混合移植后组织的存活率高，并能够改善脂肪颗粒单独移植时的液化吸收情况。

[Abstract] Objective To isolate and culture the rat adipose-derived stem cells （ADSCs）and to identificate its multipotent differentiation ability and to observe the survival of transplantation of ADSCs with adipose compared with adipose in the back of the rats. Methods Adipose tissue were obtained from inguinal region and washed in PBS，then digested with 0.1% collagenase type Ⅰat 37℃for 1 h followed by centrifugation and ADSCs pellet was resuspended in DMEM with 10% fetal bovine serum （FBS）and seeded in flasks，cells at passages 3 were used for adipogenic differentiation and osteogenic differentiation，both sides of twenty-four rats were received subcutaneously 5×107/mL ADSCs resuspended in 0.9 mL of DMEM medium+0.6 mL of adipose and 1.5 mL of adipose，took out the adipose tissue of eight rats after two weeks，one month and three months respectively. Results ADSCs stained positively for oil red-O and alizarin red，two weeks and one month later，the weight of adipose had no difference with each other，however，after three months，the average weight of 1.5 mL of adipose group and the 5×107/mL ADSCs resuspended in 0.9 mL of DMEM medium+0.6 mL of adipose group were （0.4551±0.0024）g and （0.7798±0.0033）g respectively，thus，there were significant differences between the two groups （P < 0.05）. Conclusion ADSCs is in good condition and has adipogenic and osteogenic differentiation ability，ADSCs with adipose can improve the survival and the liquefied of the adipose after transplantation when compared with adipose alone.[Key words] Adipose-derived stem cells；Adipogenic induction；Osteogenic induction；Transplantation 脂肪组织的获得快捷、方便，2001年，Zuk等[1]从脂肪组织中分离到了一种具有多向分化能力的干细胞，即脂肪来源干细胞（ADSCs），有分化为脂肪、成骨、软骨、成肌等能力[2-3]，能够在体外稳定增殖，衰亡率低，少量的组织就可获得大量干细胞，适合大规模培养，是近年来的研究热点之一。

大鼠脂肪干细胞（radscs）的分离鉴定及向成牙本质细胞分化的实验研究

2、CD44免疫细胞化学染色。取第2代脂肪干细胞爬片行CD44的免疫细胞化学染色,Ⅰ抗:兔抗CD44抗体(1:100),FITC标记的Ⅱ抗(1;40),荧光显微镜下观察。对照组不加Ⅰ抗用PBS代替,其余步骤同实验组。
3、PRP的制备。经同一大鼠腹主动脉抽取全血10ml(预先加入10%枸橼酸钠抗凝剂),以1500r/miniig度离心10min,吸取上层血浆及血小板,再以3000rpm速度离心10min,其沉淀即为PRP。对全血及PRP进行血小板计数,确保PRP中血小板的数量是全血的4倍以上。将1 ml PRP加入98ml DMEM培养基中,同时加入1ml含5000 U牛凝血酶的100g/L CaCl<,2>溶液,即为含10ml/L PRP的DMEM条件培养基。
RT-PCR结果显示:实验组(TGF β1稳定转染组)的TGF β1、FN、ColⅡ、Aggrecan、MMP-2mRNA的表达较空染组和正常对照组均明显增多,而MMP-
14、统计学方法实验结果以x±S表示应用SPSS医用软件统计软件包进行统计。
研究结果:
原代培养细胞第二天贴壁,7-10d长满,倒置显微镜下见细胞呈纤维样,各代细胞形态无明显变化,传30代后细胞形态及生长速度仍无明显改变。脂肪干细胞的CD44免疫荧光染色呈阳性。MTT检测结果:相对于对照组,实验组有显著的统计学意义(P<0.01)。PRP诱导14天,ALP染色明显阳性。 ALP活性检测显示诱导组与对照组有显著性差异(P<0.01)。茜素红染色显示诱导14天可见钙结节形成。
第三军医大学
硕士学位论文
大鼠脂肪干细胞(rADSCs)的分离鉴定及向成牙本质细胞分化
的实验研究
姓名:***
申请学位级别:硕士
专业:口腔临床医学

SD大鼠腹腔脂肪干细胞分离培养和鉴定

SD大鼠腹腔脂肪干细胞分离培养和鉴定张洋洋;陈良安【摘要】目的建立一种有效的分离、培养SD大鼠腹腔脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cells,ASCs)的方法,从而为大鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的来源提供更广阔的选择.方法取4周龄雄性SD大鼠的腹腔脂肪组织,经0.1％Ⅰ型胶原酶消化,离心、洗涤后间充质干细胞专用培养基重悬,置于细胞孵箱中培养,长至80％融合后用0.25％胰酶-EDTA消化、传代培养,绘制细胞生长曲线,进行细胞形态、表面标志、成骨及成脂分化潜能鉴定.结果 ASCs贴壁生长,原代ASCs呈短小梭形,经传代后和培养时间的延长,细胞变为长梭形,旋涡状排列.培养第2、4、5、6d时,第5代的ASCs A值低于第3代,第8代的ASCs A值低于第3代和第5代,差异均有统计学意义(P＜0.05).ASCs阳性表达CD29、CD54、CD90.1,不表达CD31、CD45、CD106.结论通过贴壁培养可以从SD大鼠腹腔脂肪组织分离培养出高纯度的ASCs,此种方法获得的ASCs增殖速度快,可以成为SD 大鼠MSC的来源.%Objective To establish an effective and simple methodfor isolation and expansion of the adipose tissue-derived stem cells (ASCs),by using the adipose tissues of abdominal cavity of Sprague Dawley rat,and to provide another choice for cell source of mesenchymal stem cells (MSCs).Methods The adipose tissues were obtained from the abdominal cavity of Sprague Dawley rats aged 4 weeks.0.1％ collagenaseⅠ was chose n for digesting the adipose tissues.After washing and centrifugation,the cells were re-suspended in mesenchymal stem cell medium and cultured in cell incubator.The growth rate was assessed by MTT assay.ASCs were then verified by the flow cytometry analysis anddifferentiation assays.Results ASCs were spindle-like in shape and adhered to the plastic tissue culture medium,with high multiplication rate.The absorbance value of passage 5 was lower passage 3,and the absorbance value of passage 8 was lower than passage 3 and passage 5 on day 2,4,5 and 6(P＜0.05).ASCs were positive for CD29,CD54 and CD90.1,but negative for CD31,CD45 and CD106.Conclusion ASCs can be effectively isolated and expanded from the adipose tissues of abdominal cavity of Sprague Dawley rat,b.y using adherent culture.And ASCs from adipose tissues of abdominal cavity may be a good multipotential cell candidate for future cell replacement therapy.【期刊名称】《河北医科大学学报》【年(卷),期】2017(038)003【总页数】6页(P258-261,265,封3)【关键词】间质干细胞;细胞培养;生长曲线;脂肪组织;大鼠【作者】张洋洋;陈良安【作者单位】承德医学院附属医院呼吸内科,河北承德067000;中国人民解放军总医院呼吸内科,北京100853【正文语种】中文【中图分类】R332·论著·间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一种来源于中胚层的成体干细胞,这类细胞具有高度的自我更新能力，能够向外胚层、中胚层和内胚层三系分化，广泛存在于全身结缔组织和各个器官间质中。

大鼠脂肪干细胞的分离培养和鉴定

大鼠脂肪干细胞的分离培养和鉴定刘娜;温秀杰;刘宁;李向杰;刘鲁川;邓蔓菁【摘要】目的:体外分离培养大鼠脂肪干细胞(Adipose derived stem cell,ADSCs),并进行鉴定.方法:取出生后4 d SD大鼠的腹股沟皮下脂肪组织,经胶原酶消化获得脂肪细胞,通过有限稀释法克隆化培养、分离得到大鼠ADSCs,用含100 mL/L FBS 的DMEM培养液培养并传代.测定克隆形成率;流式细胞仪进行干细胞分子表型(Stro-1,CD90,CD105,CD34)检测;并进行成骨、成脂、成神经诱导.结果:有限稀释法所得细胞,有较强的克隆形成能力,STRO-1、CD90、CD105阳性表达,CD34阴性表达.成骨、成脂、成神经诱导实验证明所得细胞有多向分化能力.结论:有限稀释法克隆化培养可成功分离得到高纯度的ADSCs,为ADSCs在组织再生中的研究提供了可靠依据.【期刊名称】《牙体牙髓牙周病学杂志》【年(卷),期】2010(020)012【总页数】5页(P675-678,683)【关键词】脂肪干细胞;分离;鉴定;细胞克隆【作者】刘娜;温秀杰;刘宁;李向杰;刘鲁川;邓蔓菁【作者单位】第三军医大学第三附属医院野战外科研究所口腔科,重庆,400042;第三军医大学第三附属医院野战外科研究所口腔科,重庆,400042;第三军医大学第三附属医院野战外科研究所口腔科,重庆,400042;第三军医大学第三附属医院野战外科研究所口腔科,重庆,400042;第三军医大学第三附属医院野战外科研究所口腔科,重庆,400042;第三军医大学第三附属医院野战外科研究所口腔科,重庆,400042【正文语种】中文【中图分类】R780.2干细胞是指有克隆形成能力的未分化细胞，具有自我更新和多向分化的特点。

目前，用于组织修复和再生的间充质干细胞(mesenchymal stemcells，MSC)多采用成体多能干细胞［1］。

长久以来，骨髓基质干细胞(bone marrow derived stem cells，BMMSC)一直是在干细胞研究领域应用最广的干细胞。

大鼠附睾脂肪垫脂肪源性干细胞的分离培养及分化潜能

Linchuang Kangfu. 2009;13(14):2685-2690.
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摘要
背景：相对于骨髓基质干细胞，脂肪源性干细胞来源丰富，取材方便，干细胞丰度高，极易培养，具有多向分化潜能，有望成为组织工程、细胞治疗以及基因转染良好的源细胞，但目前对脂肪源性干细胞的研究尚处于初级阶段。目的：拟在体外分离培养大鼠脂肪源性干细胞，并探讨其分化潜能。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于 2008-06/2009-01 在南方医科大学组胚教研室和南方医院临床医学实验中心完成。材料：SPF 级成年雄性 SD 大鼠 1 只，由南方医科大学实验动物中心提供。方法：无菌条件下切取大鼠双侧附睾尾脂肪垫，胶原酶消化法分离培养脂肪源性干细胞，胰蛋白酶消化法传代扩增。取第 4 代脂肪源性干细胞接种到 96 孔板，5×104 个细胞/皿，待细胞贴壁后分成 3 组：成骨诱导组加入成骨培养基，成脂诱导组加入成脂培养基，对照组仍用基础培养基，培养 14 d。主要观察指标：脂肪源性干细胞的形态变化、体外增殖能力、细胞免疫化学鉴定结果。脂肪源性干细胞成骨和成脂分化能力。结果：体外培养的脂肪源性干细胞易扩增，传代后以长梭形细胞为主，呈旋涡状排列，克隆样生长；经多次传代仍能保持较强的增殖能力，细胞生长曲线呈“S”形；细胞表面标志 CD44 和 CD49d 呈阳性表达，CD106 呈阴性表达。脂肪源性干细胞经成骨诱导 7 d 后，碱性磷酸酶染色呈阳性；成脂诱导 3 d 后，油红 O 染色示胞浆内有脂滴出现；对照组细胞碱性磷酸酶染色呈阴性，无脂滴存在。结论：从大鼠附睾脂肪垫内分离的脂肪源性干细胞易于培养和传代扩增，在特殊条件下可分化为成骨细胞和脂肪细胞。关键词：脂肪源性干细胞；培养；诱导；免疫细胞化学 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2009.14.015

鼠脂肪干细胞的分离、培养和鉴定

鼠脂肪干细胞的分离、培养和鉴定朱灿红;张旦红;陈正荣;王美娟;张亚【摘要】Objective:To investigate the method of isolation, culture and identification of ADSCs, so as to provide a reliable source of cells for tissue engineering, cell therapy and gene therapy. Methods: ADSCs were isolated and purified from adipose tissues of mice by repeated adherence, and their shapes were observed. Growth curve was studied by using MTT method. Cells surface markers were identified through flow cytometry; ADSCs were induced by different inducing me-dia to test their differentiation potentials. Results: On the second day ADSCs were a small population of polygonal, trian-gle-shaped cells and most population of spindle shaped cells, On the fifth day, cells grew in colonies and were of fibrob-last-like morphology. On the tenth day, cells were homogenously of spindle-shaped appearance and were circinately ar-ranged. The shape of the passaged cells was similar with that of the primary cells;The growth curve of ADSCs appeared as a typical ‘S-shaped curve’. 96.6% of the cells were positive for CD90 and 85.3% for CD44.Only 0.5% of the cells were positive for CD45 and CD11b. Oil droplets of induced ADSCs became red by Oil Red-O staining test;It appeared as black particles within the cells by modified Gomori staining and a black mineralized nodule within the cells by Von kossa stain-ing; Cartilage nodule like structures were blue by Alcian blue staining. Conclusions: ADSCs were isolated from adipose tissue by using repeated adherence method in mice, they were accorded with allthe characteristics of stem cells, which provided a rich source of stem cells for the clinical application of stem cells.%目的：研究脂肪干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）的分离、培养和鉴定的方法，为组织工程、细胞疗法、基因疗法提供可靠的细胞来源。

大鼠皮下脂肪分离间充质干细胞的体外培养及鉴定

大鼠皮下脂肪分离间充质干细胞的体外培养及鉴定秦宇红;陈光辉;边素艳;张琰琴;李天德【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2007(011)033【摘要】BACKGROUND: Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADMSCs) have the multilineage differentiation potential, and are relatively easier to be obtained, thus they have attracted more and more attention as a new seed cell for cell engineering.OBJECTIVE: To observe the in vitro culture conditions of ADMSCs isolated from rat's subcutaneous adipose tissue, and identify them using immunohistochemical staining.DESIGN: An animal experiment.SETTING; Department of Cardiology, the General Hospital of Chinese PLA.MATERIALS: One healthy male Wistar rat of clean degree, 4 months old, weighing 200 g, was used. DMEM, fetal bovine serum were from GIBCO; Monoclone antibodies of rabbit-anti-rat CD13, CD34, CD44, CD45, CD105, D-related human leucocyte antigen (HLA-DR), factor-Ⅷ, vov Willebrand factor (VWF), Myosin, SABC kits and DAB staining kit from Wuhan Booster Biological Engineering, Co.,Ltd; Adeno-associated virus encoding green fluorescent protein from Vector Gene Technology Company Limited (Beijing).METHODS: The experiments were carried out in the Department of Internal Medicine, the General Hospital of Chinese PLA in October 2006. ① Cell isolation and culture: 0.3 g adipose tissu e was cut from subcutaneous adipose tissue of Wistar rat's groin under asepticcondition, then minced and digested before culture, DMEM was changed at 2-3 days after plenty of fusiform-shap ed attached cells were observed under microscope, and the cell growth was observed. The cell concentration was adjusted to 2×107 L-1, then seeded into 96-well plate, and 100 μL for each well. From the second day, 3 wells were randomly selected every day, the cells were released with tripsin, and counted with blood cell c ounting chamber under inverted microscope. ② Cell viability assay: ADMSCs of passages 3 to 8 were added to DMSO freeze medium, and thawed after 2-4 weeks, and the cell viability was assessed by trypan blue dye exclusion. ③Immunohistochemical staining and i dentification: 2 ×107 L -1 cells were seeded to culture plate, then the immunohistochemical (SABC method) identification and Oil red O staining were performed to determine the cell surface antibodies of CD13, CD34, CD44, CD45, CD105, HLA-DR, factor-Ⅷ, HLA-DR and VWF. ④Lineage-specific differentiation and identification: The ADMSCs were plated on multi-well chamber and induced with lineage-specific media supplementation at least two weeks and identified byhistologic/immunohistochemical assay of Oil red O for adipogenisis, alkaline phosphatase (ALP) stain for osteogenisis and Myosin monoclonal antibody for myogenisis. ⑤Transfected adenovirus carried green fluorescence protein (AD-GFP) medium: The fourth generation of ADMSCs were seeded on 96-well plate, 3 000 cells for each well, serum-free DMEM was changed after 24 hours, and added by AD-GFP at the same time, then transfected with different multiplicity of infection (MOI) of 1∶50, 1∶100,1∶150 and 1∶200respectively, and then the transfection was observed.MAIN OUTCOME MEASURES: ① Results of cell isolation and culture; ② Cell viability after freezing and thawing; ③Results of immunohistochemical staining and identification; ④ Results of lineage-specific differentiation and identification;⑤ Results of transfected adenovirus carried AD-GFP.RESULTS: ① About 3.6×105 attached cells were obtained from 0.3 g subcutaneous adipose tissue, and these cells could be subcultured for passages in vitro with stable population doubling time. ② The cells were thawed after freezing for 2-3 weeks, and the trypan blue staining showed that the cell viability was above 90%. ③ The immunocytochemical staining showed that CD13, CD44, CD105 were positive and CD45, factor-Ⅷ, HLA-DR and VWF negative in different generations. ④ From the second generation, a few Oil red O positively stained cells were observed, which were obviously increased after prolonging the refreshing. After lineage-specific differentiation, the cells were all positive by Oil red O staining, ALP staining and Myosin immunohis tochemical staining. ⑤ 72 hours after transfection, it was observed under fluorescence microscope that most cells were green fluorescence when the MOI value was 1∶200, the transfection was successful, and it was generally determined that the transfection rate was above 90%.CONCLUSION: A large number of ADMSCs with multilineage differentiation potential can be easily obtained from rat adipose tissue, osteoblast, myoblasts, they can be expanded in large quantity and stored in vitro for long time, AD-GFP were also successfully transfected.%背景:脂肪间充质干细胞具有多向分化能力,并且相对更加容易获得,因此作为一种新的细胞工程的种子细胞日渐受到重视.目的:观察从大鼠皮下分离脂肪间充质干细胞的体外培养情况,并对其进行免疫细胞化学染色等鉴定.设计:动物实验.单位:解放军总医院心内科.材料:选用1只健康雄性Wistar大鼠,清洁级,鼠龄4个月,体质量200 g;Ⅰ型胶原酶、DMEM培养基、特级胎牛血清(GIBCO公司);免抗大鼠CD13、CD34、CD44、105、Ⅷ因子、HLA-DR、VWF、Myosin等多克隆抗体及SABC试剂盒(武汉博士德公司);绿色荧光蛋白-重组腺病毒包装载体为北京本元正阳基因技术有限公司产品.方法:实验于2006-10在解放军总医院心内科完成.①细胞分离和培养:全麻下取Wistar大鼠腹股沟脂肪垫0.3 g,剪碎,消化后培养,镜下观察有大量梭形贴壁细胞后二三天换DMEM培养液,观察细胞生长情况.调整细胞浓度为2×107 L-1接种于96孔细胞培养板,每孔100 μL.从第2天起每日随机取3孔,胰蛋白酶消化细胞,分别用血球计数板在倒置显微镜下计数.②细胞存活率的计算:收集第3至第8代细胞,加入预配好的DMSO冻存液,2～4周后复苏,台盼蓝染色检测细胞存活率.③免疫细胞化学染色及鉴定:以2×107 L-1的细胞数接种多孔培养板,24 h后行CD13、CD34、CD44、CD45、CD105、Ⅷ、HLA-DR、VWF因子等细胞表面抗体的免疫细胞化学(SABC法)鉴定及油红染色.④多细胞系定向诱导分化及鉴定:用多孔板接种后加含特定诱导因子的培养基进行多系定向诱导分化,并进行油红O脂肪颗粒染色,对成骨诱导组进行碱性磷酸酶组化染色,对成心肌诱导组进行肌浆球蛋白免疫组化染色.⑤转染腺病毒携带的绿色荧光蛋白基:用96孔板接种第4代ADMSC,同时加入Ⅰ型腺病毒为载体的绿色荧光蛋白,以不同MOI值1∶50、1∶100、1∶150、1∶200转染,观察转染情况.主要观察指标:①细胞分离和培养观察结果.②冻存与复苏后细胞存活率.③免疫细胞化学染色及鉴定结果.④多细胞系定向诱导分化及鉴定结果.⑤转染腺病毒携带的绿色荧光蛋白结果.结果:①从0.3 g皮下脂肪分离出约3.6×105贴壁细胞,并可在体外多代传代培养扩增.②细胞冻存2～4周后复苏用台盼蓝染色示存活率在90%以上.③各代CD13、CD44、CD105等免疫细胞化学染色均阳性,CD45、Ⅷ因子、HLA-DR、VWF等免疫细胞化学染色均阴性.④从第2代开始,各代均可见少量细胞油红O染色阳性,而且在延长培养基的换液时间后,油红O染色阳性细胞明显增多.体外多系定向诱导分化后油红O染色、碱性磷酸酶染色、肌浆球蛋白免疫组化检测分别阳性.⑤转染72 h后荧光显微下观察,在MOI值1∶200见绝大多数细胞发出绿色荧光,转染成功,粗测转染率在90%以上.结论:可以从大鼠皮下脂肪成功分离出大量具有成脂、成骨、成肌等多向分化潜能的间充质干细胞,该细胞可以在体外培养进行多代传代及大量扩增、长期冷冻保存,并且成功转染了Ⅰ型腺病毒为载体的绿色荧光蛋白基因.【总页数】5页(P6701-6705)【作者】秦宇红;陈光辉;边素艳;张琰琴;李天德【作者单位】解放军总医院心内科,北京市,100853;解放军总医院心内科,北京市,100853;解放军总医院心内科,北京市,100853;解放军总医院心内科,北京市,100853;解放军总医院心内科,北京市,100853【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.大鼠骨髓间充质干细胞分离、体外培养和向软骨细胞表型定向分化的实验研究[J], 丁晓飞;赵劲民;陈维平;杨志;苏伟2.兔骨髓间充质干细胞的分离、体外培养、鉴定及成脂诱导 [J], 戚宗泽;罗云飞;侯勇;郭永章;朱洪3.兔骨髓间充质干细胞的分离、体外培养、鉴定及成脂诱导 [J], 戚宗泽;罗云飞;侯勇;郭永章;朱洪;4.兔骨髓间充质干细胞的分离、体外培养、鉴定和体外标记 [J], 朱峰;胡贞贞;郭光华;王红梅5.全骨髓法体外培养分离大鼠骨髓间充质干细胞及PKH26标记 [J], 叶小凤;何援利;王雪峰;付霞霏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠腹股沟脂肪间充质干细胞的分离、培养、鉴定及活体标记

大鼠腹股沟脂肪间充质干细胞的分离、培养、鉴定及活体标记毕晓娟;马艳;江明【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)014【摘要】BACKGROUND: Adipose-derived stem cells (ADSCs) are easily collected and abundantly cultured, ADSCs can proliferate rapidly when being cultured in vitro, with multi-directional differentiation potential, ADSCs are expected as seed cells for tissue engineering and cell therapy.OBJECTIVE: To culture rat ADSCs in vitro, and to mark and identify its differentiation.METHODS: Collagenase Ⅰ digestion was used to isolat e ADSCs from rat groin fat pads under sterile condition. ADSCs were passaged and amplified by the trypsin digestion. At the third passage, growth curve of the third passage ADMSCs was drawn by cytometry. Cellular surface antigens HCAM, CD106, CD29, CD49D and CD34 were examined using flow cytometry. Giemsa staining, Feridex-Iabeled and induced to differentiate into osteoblasts and lipocytes. Oil red staining was used to examine lipocyte induction, alizarin red staining wwas used to examine osteoblast induction.RESULTS AND CONCLUSION : In vitro cultured ADSCs were mainly spindle-shaped and whirlpool-shaped arranged. The third passage ADSCs were positive for CD29, but negative for CD34, HCAM, CD49d and CD106. Curve of growth detection had logarithmic phase and platform phase, the positive expression of Feridexreached 80％. ADMSCs were differentiated into lipocytes and osteoblasts under certain conditions. ADSCs isolated from rat epididymal fat pads can be easily cultu red, passaged and amplified, and which can mark alive and differentiate into osteoblasts and adipocytes under certain conditions.%背景:脂肪间充质干细胞具有来源丰富、取材方便、体外有较强增殖能力并具有多向分化的特点,有望成为骨组织工程、细胞治疗等的种子细胞.目的:培养扩增大鼠脂肪源间充质干细胞,以活体标记并鉴定其分化潜能.方法:无菌条件下取大鼠双侧腹股沟脂肪,Ⅰ胶原酶消化法分离培养脂肪源性干细胞,胰蛋白酶消化法传代扩增.取第3代脂肪干细胞进行流式检测HCAM、CD106、CD29、CD49D和CD34,生长曲线测定,吉姆萨染色,菲立磁标记,成脂诱导后油红O染色及成骨诱导后茜素红染色钙结节.结果与结论:细胞呈长梭形漩涡样生长,第3代细胞流式鉴定CD29阳性,CD34、HCAM、CD49d、CD106低表达,生长曲线测定有对数生长期,平台期,菲立磁标记阳性率达80%,并且在一些诱导剂下分化为脂肪细胞及成骨细胞.提示,来源于大鼠腹股沟脂肪分离获得的脂肪源干细胞易于培养和传代扩增,并可活体标记且在特殊条件下可分化为成骨细胞和脂肪细胞.【总页数】5页(P2512-2516)【作者】毕晓娟;马艳;江明【作者单位】新疆医科大学第一附属医院,医学研究中心干细胞研究室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市,830054;新疆医科大学第一附属医院,医学研究中心干细胞研究室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市,830054;新疆医科大学第一附属医院,血液二科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市,830054【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养表型鉴定与标记 [J], 何忠杰;马俊勋;方驰华;杨丽萍2.大鼠脂肪间充质干细胞体外分离培养及CM-DiI标记后的传代示踪 [J], 周虹;郭杏;李丹;高小春;熊爱兵;谭美云3.人髌下脂肪垫来源脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定 [J], 刘玉平;刘涛;王明明;李明;俞光荣4.人髌下脂肪垫来源脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定 [J], 刘玉平;刘涛;王明明;李明;俞光荣;5.大鼠附睾脂肪间充质干细胞的分离培养和鉴定 [J], 刘梦雪;乔虹;姜玉玲;李强;孙玉倩;张巾超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2型糖尿病大鼠脂肪来源干细胞功能的研究的开题报告

2型糖尿病大鼠脂肪来源干细胞功能的研究的开题报
告
背景：
2型糖尿病（T2DM）是一种常见的代谢性疾病，其主要特征是胰岛
素抵抗和胰岛素分泌不足。

T2DM患者常常伴随着肥胖、高血压和高血脂。

T2DM患者往往伴随着脂肪组织的代谢紊乱，影响到了脂肪干细胞（ASC）的生物学功能，从而影响到了身体的代谢。

因此，研究ASC在T2DM疾
病中的作用以及其在治疗这类疾病中的潜在价值具有重要意义。

研究目的：
本研究旨在探究2型糖尿病大鼠脂肪来源干细胞（ADSCs）的生物
学功能，深入研究其在治疗T2DM中的作用，阐明ADSCs在T2DM治疗
中的潜在价值。

研究内容：
本研究将采用Wistar大鼠作为实验对象，将其分为对照组、糖尿病
组和ADSCs治疗组，每组10只大鼠。

随后，将对糖尿病大鼠脂肪组织中分离出的ADSCs进行细胞培养和鉴定，检查其多向分化能力和细胞表型
特征，并利用实时荧光定量PCR技术检测其相关基因的表达变化。

最后，将接种ADSCs的糖尿病大鼠进行血糖、胰岛素、脂质代谢以及炎症相关
指标的检测。

意义：
本研究将为ADSCs在T2DM治疗中的作用提供实验依据，并有助于进一步揭示T2DM患者脂肪组织代谢紊乱所影响的细胞生物学机制。

此外，本研究还有望为T2DM的临床治疗提供新的治疗方向和思路。