不同载体上微量接触类检材的相关问题探究

不同载体上微量接触类检材的相关问题探究摘要：手部接触类生物物证是目前案件中的主要生物物证，但关于此类物证在不同载体上DNA的检出量和检验效果、最佳前处理方法以及检材放置不同时间后的检出量和检验效果的变化尚无详细研究报道通过制备手部接触类生物检材，分别使用直接剪取法、胶带粘取法、两步擦拭法和真空吸取法对检材进行前处理，然后进行DNA提取，用筛选出的最佳前处理方法处理放置不同时间段·的检材，均使用常规程序对检材进行DNA提取、定量和复合扩增，并对各项结果进行分析和讨论。

实验观察到总体上使用直接剪取法进行前处理的检材提取到的DNA的量大于使用两步檫拭法和真空吸取法进行前处理提取到的DNA的量，且这4种前处理方法在不同载体的检材之间提取到的DNA量有差异；随着时间的推移，在放置360d内的DNA检出量和检验效果无较大差异；由此得出，不同载体上DNA的检出量和检验效果有差异，针对不同栽体，其最佳前处理方法也不同；检材常温干燥放置一年内，其DNA无明显降解。

关键词：物证；接触类DNA；DNA分型；前处理方法；载体中图分类号：K89 文献标识码：A 文章编号：1007-7847（2015）02-0145-09An Exploration on Trace Touch Related DNA Materials from Different SubstratesDONG Hui1，WANG Jing2，LI Cai-xia2，ZHANG Tao2，LIU Chao1*（1. Graduate School，Southern Medical University，Guangzhou 510515，Guangdong，China；2. Institute of Forensic Science，Key Laboratory of Forensic Genetics，Ministry of Public Security，Beijing 100038，China）Abstract ：Hand touch DNA material evidence is currently the main biological material evidence in the forensic cases. However，researches on the detection and inspection of DNA on different substrates，the best preprocess protocol and the change of the detection and inspection results of DNA on different substrates after placed at different times of these evidences have not been detailed investigated. DNA were extracted from mock exhibits after directly cutting method，wet and dry double swab technique，stubbing procedure and vacuum cleaner method. Then the best preprocess protocol was used to deal with the exhibits after placed at different times. DNA extracted from the samples was quantified and amplified using standard manufacture 1 s procedures，and the results were analyzed and discussed. The amount of DNA using direct cutting method for pretreatment was greater than the amount of DNA using the wet and dry double swab technique and the vacuum cleaner method for pretreatment. The four preprocess protocols show differences between different substrates. As time goes on，the amounts of DNA after placed various days had no significant differences. The detection，inspection of DNA and the best preprocess protocol on different substrates demon?strated clear differences. Under the normal temperature and dry conditions，the amounts of DNA detection in one year showed no degradation trends with time.Key words：biological evidence；touch DNA；DNA typing；preprocess method；substrate（Life Science Research，2015，19（2）：145?153）微量接触类是目前检案中经常遇到的疑难生物物证，也是目前法医遗传领域的研究热点和难点之一[1、2].由于此类物证检验成功率低，往往需要反复多次检验而成为案件检验的限速步骤。

微量接触类物证131是通过皮肤或粘膜接触而形成的一种物证，如刀柄、钥匙、手机、衣帽鞋袜、手套、门把手、果核、牙刷、饮料罐等客体上可能遗留有皮肤表皮脱落细胞或粘膜上皮细胞。

伴随犯罪智能化水平的提高，血迹、毛发、精斑等明显的生物物证常常被有意识的破坏掉，而微量接触类物证由于量少不易被识别往往被忽略。

此类潜在的生物物证由于只有少量脱落细胞或游离的DNA成份吒检验时很难判断载体上样本的具体部位，往往盲目剪取，剪取面积过大时又会降低DNA浓度或引入污染，但其检验结果往往可能成为案件侦破的关键线索和证据。

目前关于接触类生物物证的相关研究和报道还很局限[5]，所以本实验针对此类生物物证，从物证的前处理方法人手，以手部接触类生物物证为研究对象，研究了不同载体的DNA检出量和检验效果有何不同、前处理方法对DNA检出量和检验效果的影响，以及放置不同时间后，DNA检出量和检验效果的变化。

1材料与方法1.1实验材料普通棉线手套100只，粗棉质绳索（直径1cm、长8cm）30段，细棉质绳索（直径0.5cm、长8cm）30段，布片（4cmx4cm）30片，模拟门把手（木质，表面光滑附棕色油漆，直径2.5cm、长8cm）100个，玻璃片（2cmx7.5cm）60片，塑料绳索（8cm）30段，棉签100根，生物物证粘取器100个。

塑料物证袋（15cmX20cm）100个，剪刀200把，镊子200个。

1.2主要仪器和试剂AmpFLSTR?Identifiler?Plus 试剂盒（Ap?pliedBiosystems公司，美国），M48QIAGEN?试剂盒（QIAGEN公司，德国），Thermomixercomfort（Eppendorf公司，德国），漩涡混合器（昊诺斯公司，中国），磁力架（Promega公司，中国），蛋白酶K（Merck公司，德国），Quantifiler?HumanDNAquantificationkit（AppliedBiosystems公司，美国），MastercyclerproEppendorf?热循环仪（Eppendorf公司，德国），ABI3130x1遗传分析仪（AppliedBiosystems公司，美国），7500Real-timePCRsys?tems （AppliedBiosystems公司，美国）。

1.3方法1.3.1实验质量控制每次实验前，对实验材料和部分实验仪器用70%乙醇和0.05%的次氯酸进行浸泡或擦洗，在无菌的无纺布上进行干燥，并用紫外灯照射24h以上[6]。

随机抽取5片布片、2段粗棉质绳索和2段细棉质绳索用直接剪取法[7]进行前处理，随机抽取2段塑料绳索用真空吸附法[8]进行前处理，随机抽取3只手套用胶带粘取法[9、10]进行前处理，随机抽取3个模拟门把手和5个玻璃片用两步擦拭法[11、12]，进行前处理，随机抽取10根棉签和5个塑料物证袋，然后对所有检材进行DNA提取、定量、扩增和毛细管电泳，检测结果均为阴性。

1.3.2渗透性栽体的微量接触类DNA检材制备随机抽取8块布片随机分给实验无关个体8名（2名女性个体，6名男性个体），每个个体手部平均用力搓捏布片10s[13]，按2cmX2cm大小，剪为4片，随机3片分别采用直接剪取法、真空吸附法和胶带粘取法进行前处理。

随机抽取8段粗棉质绳索随机分给实验无关个体8名（2名女性个体，6名男性个体），每个个体手部平均用力搓拉绳索10s，按每段2cm大小，剪为4段，随机3段分别采用直接剪取法、真空吸附法和胶带粘取法进行前处理。

随机抽取8段细棉质绳索，随机分给实验无关个体8名（2名女性个体，6名男性个体），每个个体手部平均用力搓拉绳索10s，按每段2cm大小，剪为4段，随机3段分别采用直接剪取法、真空吸附法和胶带粘取法进行前处理。

随机抽取24只手套随机分给实验无关个体8名（2名女性个体，6名男性个体），每个个体3只手套，每次每个个体用右手带一只手套且平均用力搓捏10s，对3只手套进行相同的检材制备过程，随机3只手套分别采用直接剪取法、真空吸附法和胶带粘取法进行前处理，其中3种前处理方法处理的部位均是手套的大鱼际和小鱼际处。

每次检材制备时间间隔24h以上。

1.3.3非渗透性载体的微量接触类DNA检材制备随机抽取8段塑料绳索随机分给实验无关个体8名（2名女性个体，6名男性个体），每个个体手部平均用力搓拉绳索10s，按每段2cm大小，剪为4段，随机分别采用直接剪取法、真空吸附法、两步擦拭法和胶带粘取法进行前处理。

随机柚取24片玻璃随机分给实验无关个体8名（2名女性个体，6名男性个体），每个本3片玻璃，每次每个个体用右手平均用力按压玻璃10s，对3片玻璃进行相同的检材制备过程，随机3片玻璃分别采用两步擦拭法、真空吸附法和胶带粘取法进行前处理。