单克隆抗体应用 课件
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《单克隆抗体技术》课件
单克隆抗体的制备与纯化
单克隆抗体是通过杂交瘤细胞在体外培养或注射到动物体内进行体内培养产生的，经过一系列的分离 和纯化过程，最终获得高纯度、高特异性的单克隆抗体。
制备过程中通常采用各种层析技术、沉淀技术等对抗体进行分离和纯化，以确保获得高质量的单克隆 抗体。
单克隆抗体的鉴定与质量控制
鉴定是通过对单克隆抗体的免疫学特 性、生物学活性和分子结构等方面进 行检测和评估，以确定其特异性和质 量。
总结实验过程和结果，分析存在的问题和改 进方向，为后续实验提供参考和依据。
感谢您的观看
THANKS
生物标记物
用于研究细胞生物学、分子生物学 等领域。
03
02
生物药物
用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等 。
免疫分析
用于检测生物样品中的抗原、抗体 等。
04
02 单克隆抗体技术的原理
杂交瘤细胞系的建立
杂交瘤细胞系的建立是单克隆抗体技 术的核心步骤之一，通过将免疫脾细 胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细 胞。
通过抗原-抗体反应检测杂交瘤细胞产生的 抗体特异性。
克隆筛选
通过选择性培养基筛选出能够产生所需抗体 的杂交瘤细胞克隆。
细胞培养与抗体纯化
将筛选出的杂交瘤细胞进行培养，并采用蛋 白质纯化技术获得单克隆抗体。
实验结果分析与总结
结果分析
对实验结果进行统计分析，评估杂交瘤细胞 的抗体产生能力和特异性。
总结
这些杂交瘤细胞既具有脾细胞无限增 殖的能力，又具有产生特异性抗体的 能力，从而为单克隆抗体的制备提供 了稳定的细胞源。
杂交瘤细胞的筛选与克隆化
在筛选过程中，通过抗原-抗体反应检 测杂交瘤细胞产生的抗体，筛选出能 够产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞 。
《单克隆抗体》课件
05
单克隆抗体的未来发展
新型单克隆抗体的研发
总结词
随着生物技术的不断发展，新型单克 隆抗体的研发将更加活跃，以满足更 多治疗需求。
详细描述
新型单克隆抗体将通过基因工程技术 、蛋白质工程技术等手段进行设计和 优化，以改善其疗效、降低副作用和 降低生产成本。
单克隆抗体与其他技术的结合应用
总结词
单克隆抗体将与其他治疗手段和技术相结合，以实现更有效的疾病治疗和诊断 。
03
类型
IgG、IgM、IgA等。
单克隆抗体的发现和发展历程
1901年
Ehrlich提出“侧链学说”，认为抗体是 由细胞产生的化学物质。
1986年
FDA批准第一个单克隆抗体药物上市， 用于治疗非霍奇金淋巴瘤。
1975年
Kohler和Milstein首次成功制备出单克隆 抗体。
2014年
FDA批准第一个全人源单克隆抗体药物 上市，用于治疗类风湿性关节炎。
生物治疗
总结词
单克隆抗体在生物治疗中具有显著疗效 ，可用于治疗癌症、自身免疫病等多种 疾病。
VS
详细描述
通过靶向肿瘤细胞表面抗原或免疫系统中 的特定分子，单克隆抗体能够发挥抗癌作 用。例如，针对某些癌症的单克隆抗体药 物能够抑制肿瘤生长、扩散和转移，提高 患者生存率和生活质量。此外，在自身免 疫病治疗中，单克隆抗体也具有良好疗效 ，能够调节免疫系统，缓解单克隆抗体的概述 • 单克隆抗体的制备 • 单克隆抗体的特性 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的未来发展
01
单克隆抗体的概述
单克隆抗体的定义
01
单克隆抗体
由单一B细胞克隆产生的具有 高度特异性识别抗原表位的抗
抗体—单克隆抗体(免疫学检验课件)
体技术的基本原理
利用B细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。 基本原理：由两种细胞融合后产生的杂交细胞可 同时保持双方亲代细胞的主要生物学特征。
同时应用了淋巴细胞产生抗体的克隆选择学 说（一种克隆产生一种抗体）和细胞代谢缺陷补 救的机制。
致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
杂交瘤
二、制备单克隆抗体的基本方法
1.两种亲本细胞的选择与制备； 2.细胞融合； 3.杂交瘤细胞的筛选、培养； 4.杂交瘤细胞克隆化与细胞冻存； 5.单克隆抗体的大量制备； 6.纯化及鉴定。
聚乙二醇
HAT: 次黄嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T) HGPRT：次 黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶
三、单克隆抗体在医学中的应用
单克隆抗体
单克隆抗体
单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)是由
单个B细胞克隆产生的仅针对一种抗原表位的高特异 性抗体。
Geoveges Kohler1946-
Cesar Milstein1927-
1975年Kohler 和Milstein首先报道了细胞杂交技术， 该项成果荣获1984年度诺贝尔医学奖与生理学奖。
1.单克隆抗体的特性 高特异性 高均一性
对环境敏感 弱凝集反应和不呈现沉淀反应
2.单克隆抗体的应用 应用于： 临床诊断 检验诊断试剂， 临床治疗 治疗肿瘤等 研究工具 探针 鼠源单克隆抗体，限制了人体内的应用。
利用B细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。 基本原理：由两种细胞融合后产生的杂交细胞可 同时保持双方亲代细胞的主要生物学特征。
同时应用了淋巴细胞产生抗体的克隆选择学 说（一种克隆产生一种抗体）和细胞代谢缺陷补 救的机制。
致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
杂交瘤
二、制备单克隆抗体的基本方法
1.两种亲本细胞的选择与制备； 2.细胞融合； 3.杂交瘤细胞的筛选、培养； 4.杂交瘤细胞克隆化与细胞冻存； 5.单克隆抗体的大量制备； 6.纯化及鉴定。
聚乙二醇
HAT: 次黄嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T) HGPRT：次 黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶
三、单克隆抗体在医学中的应用
单克隆抗体
单克隆抗体
单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)是由
单个B细胞克隆产生的仅针对一种抗原表位的高特异 性抗体。
Geoveges Kohler1946-
Cesar Milstein1927-
1975年Kohler 和Milstein首先报道了细胞杂交技术， 该项成果荣获1984年度诺贝尔医学奖与生理学奖。
1.单克隆抗体的特性 高特异性 高均一性
对环境敏感 弱凝集反应和不呈现沉淀反应
2.单克隆抗体的应用 应用于： 临床诊断 检验诊断试剂， 临床治疗 治疗肿瘤等 研究工具 探针 鼠源单克隆抗体，限制了人体内的应用。
(培训课件)单克隆抗体PPT幻灯片
• 种类：氢氧化铝佐剂、短小棒状杆菌、脂多 糖、细胞因子、明矾等，其中弗氏不完全佐 剂（羊毛脂：石蜡油=1:5）和弗氏完全佐剂 （弗氏不完全佐剂＋灭活的分枝结核杆菌） 是目前动物实验中最常用佐剂。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
单克隆抗体公开课课件
单克隆抗体公开课课件
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的制备技术 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的抗体 分子。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种杂交瘤细胞是由一 个单一的B细胞与骨髓瘤细胞融合而成。这种杂交瘤细胞能够 大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体，因此这种抗体具有 高度特异性。
02
单克隆抗体的制备技术
杂交瘤技术
杂交瘤技术是制备单克隆抗体的经典方法，通过将免疫小 鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞的无限增殖能力，又具有免 疫脾细胞的抗体产生能力，通过筛选和克隆化培养，可以 得到单一抗体分泌的杂交瘤细胞。
杂交瘤技术制备的单克隆抗体具有高度特异性，可用于诊 断和治疗疾病。
食品安全与环境监测
02
通过单克隆抗体检测食品和环境中的有害物质，保障公共卫生
安全。
生物恐怖袭击应对
03
针对生物恐怖袭击的威胁，利用单克隆抗体快速识别和清除生
物武器中的毒素和病原微生物。
TH疾病的重要手段。目前，已有多种单克隆抗体药物获得批
准上市，为患者提供了新的治疗选择。
02
单克隆抗体药物的靶点选择
靶点选择是单克隆抗体药物研发的关键环节，针对不同的靶点，可以设
计出具有不同作用机制的单克隆抗体药物。目前，针对肿瘤细胞表面抗
原、细胞内信号转导通路等靶点的研究较为广泛。
03
单克隆抗体药物的疗效评估
单克隆抗体的制备过程
总结词
单克隆抗体的制备过程包括免疫动物、杂交瘤细胞的制备、筛选和克隆化、抗体生产以 及纯化。
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的制备技术 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的抗体 分子。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种杂交瘤细胞是由一 个单一的B细胞与骨髓瘤细胞融合而成。这种杂交瘤细胞能够 大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体，因此这种抗体具有 高度特异性。
02
单克隆抗体的制备技术
杂交瘤技术
杂交瘤技术是制备单克隆抗体的经典方法，通过将免疫小 鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞的无限增殖能力，又具有免 疫脾细胞的抗体产生能力，通过筛选和克隆化培养，可以 得到单一抗体分泌的杂交瘤细胞。
杂交瘤技术制备的单克隆抗体具有高度特异性，可用于诊 断和治疗疾病。
食品安全与环境监测
02
通过单克隆抗体检测食品和环境中的有害物质，保障公共卫生
安全。
生物恐怖袭击应对
03
针对生物恐怖袭击的威胁，利用单克隆抗体快速识别和清除生
物武器中的毒素和病原微生物。
TH疾病的重要手段。目前，已有多种单克隆抗体药物获得批
准上市，为患者提供了新的治疗选择。
02
单克隆抗体药物的靶点选择
靶点选择是单克隆抗体药物研发的关键环节，针对不同的靶点，可以设
计出具有不同作用机制的单克隆抗体药物。目前，针对肿瘤细胞表面抗
原、细胞内信号转导通路等靶点的研究较为广泛。
03
单克隆抗体药物的疗效评估
单克隆抗体的制备过程
总结词
单克隆抗体的制备过程包括免疫动物、杂交瘤细胞的制备、筛选和克隆化、抗体生产以 及纯化。
单克隆抗体(用)PPT
培养
顾
！
17
机
会
只
对
进
取
有
为
的
人
,
开 放
注射到小鼠体内
体外培养
庸
人
永
远
无
法 光
单克隆抗体
顾 由单个杂交瘤细胞通过克隆，所产生的化学性质
！ 单一、特异性强的抗体。
18
活动三、用以下文字和箭头来 构建单克隆抗体的制备过程
已免疫的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、BB 细胞，B瘤细胞，瘤瘤细胞、杂交瘤 细胞、产生专一抗体的杂交瘤细胞、 体外培养、体内培养、单克隆抗体、 融合、筛选
产生抗体的B淋巴细胞， 4.如果一个农夫被毒蛇
下文将其简称为B淋巴细 咬了，如何获得相应的
胞
抗体来治疗？
抗体：能够与抗原发生特
异性结合的免疫球蛋白。
能产生抗体的细胞是浆 细胞（即效应B细胞）。10
抗体的传统生产方法
抗原 反复注射
该法制备抗体的缺点：
产量低、纯度低，且 抗体的特异性差、灵 敏度低。
从动物的血清中分离抗体
诊断试剂——最广泛应用
准确、高效、简易、快速
21
治疗疾病和运载药物
主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗 癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。
“生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物 单抗导向，药物为弹头
22
两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程
一个诱导细胞融合的新方法
－－灭活的病毒 三个“一” 一个新细胞－－杂交瘤细胞
14
机
会 只
用抗原免疫小鼠
骨髓瘤细胞的培养
对
进Байду номын сангаас
《单克隆抗体》【公开课教学PPT课件 高中生物】
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
为什么“甲流”康复者或接 种疫苗1月以上者的血浆会成为 救治重症“甲流”患者的妙药？
血浆中的抗体会与“甲流” 病毒反应，从而将病毒消灭。
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
一、单克隆抗体
➢ 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白
• 能产生抗体的细胞是浆细胞
➢ 单克隆
由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂)形成的一个细胞 群
B淋巴细胞尽管可以产生多达百万种以上的特异性 抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体
怎样才能获得大量的单一性抗体呢？
做为科学家的你，如何设计生产方案？
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
G. Kohler
• 能产生单一抗体 • 其寿命仅有几天，无法长期体外培养
B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
无限增殖
细胞 杂交瘤 融合 细胞
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培
养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ）
A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞
C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）
宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来单克隆抗体22动物细胞工程宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来教学目标单克隆抗体单克隆抗体的应用宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来教学目标知识目标1学会运用动物细胞融合技术2简述单克隆抗体制备的过程3了解单克隆抗体在医学实践中的应用并说其应用实例能力目标让学生尝试设计单克隆抗体的制备过程指导学生掌握获取知识和探索生物科学的基本方法使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力
产生抗体 无限增殖
为什么“甲流”康复者或接 种疫苗1月以上者的血浆会成为 救治重症“甲流”患者的妙药？
血浆中的抗体会与“甲流” 病毒反应，从而将病毒消灭。
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
一、单克隆抗体
➢ 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白
• 能产生抗体的细胞是浆细胞
➢ 单克隆
由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂)形成的一个细胞 群
B淋巴细胞尽管可以产生多达百万种以上的特异性 抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体
怎样才能获得大量的单一性抗体呢？
做为科学家的你，如何设计生产方案？
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
G. Kohler
• 能产生单一抗体 • 其寿命仅有几天，无法长期体外培养
B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
无限增殖
细胞 杂交瘤 融合 细胞
宝剑锋从磨砺出 梅花香自苦寒来
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培
养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ）
A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞
C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）
宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来单克隆抗体22动物细胞工程宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来教学目标单克隆抗体单克隆抗体的应用宝剑锋从磨砺出梅花香自苦寒来教学目标知识目标1学会运用动物细胞融合技术2简述单克隆抗体制备的过程3了解单克隆抗体在医学实践中的应用并说其应用实例能力目标让学生尝试设计单克隆抗体的制备过程指导学生掌握获取知识和探索生物科学的基本方法使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力
产生抗体 无限增殖
单克隆抗体-公开课课件
B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋 巴细胞
【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的
（ D）
• B淋巴细胞
B．T淋巴细胞
C．骨髓瘤细胞
D．杂交瘤细胞
【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下
列实验步骤中错误的是（ B ）
A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋 巴细胞
B．用纤维素酶×处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞
行常用__聚__乙__二__醇_____或___灭__活__的__病__毒__的诱导。
(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 3 种
类型的C细胞，因此需用____选__择__性__培养基筛选出D细 胞用于培养，D细胞的名称是 杂交瘤细胞 ，其特点
是___既__能__无__限__增__殖__又__能__产__生__特__异__性__抗__体__________。
二、单克隆抗体
1.抗体是由何种细胞产生的？ 效应B细胞（浆细胞）
2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分 泌多种抗体吗？
每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一 种特异性抗体 3.一种抗原侵入机体之后，引起 机体免疫反应产生的抗体只有一 种吗？
动物在免疫反应过程中，体 内产生的特异性抗体种类可多达 百万种以上
Ø出现在抗原分子表面、决定 抗原特异性Байду номын сангаас特殊化学基团.
（3）该方案的目的是__制__备__单__克__隆__抗__体___________。
3、治疗疾病和运载药物
主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗 癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。
“生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物
单抗导向，药物为弹头
【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单
单克隆抗体的临床应用进展PPT课件
疾病治疗方面的应用
单克隆抗体作为一种新型药物广泛应用于临床，该类药 物靶向性强、特异性高、毒副作用低，在抗肿瘤和自身免 疫系统疾病治疗领域得到了有力推广。
在抗肿瘤治疗中，单克隆抗体与放射性核素、毒素、 药物等连接，发挥针对肿瘤细胞的靶向治疗，从分子水平 逆转肿瘤细胞的恶性生物学行为，因而有“生物导弹”之 称。
疾病诊断方面的应用
以单克隆抗体为基础建立起来的方法，如ELISA、胶体金、 流式细胞术、电化学发光、免疫荧光法等，有效提高了检 测方法的灵敏度、特异度。
Shangjin Cui等建立胶体金的方法检测抗禽流感病 毒H5亚型抗体，选取830例鸡血清，结果该方法简单快速， 且敏感度达88．8％，特异度达97．6％。佟海侠等应用流 式细胞术对192例急性髓系白血病(acute myeloblastic le ukemia，AML)患者进行免疫分型，发现免疫分型对AML的诊 断和分型至关重要。Na Young Ji等p1应用ELISA方法检测 肝细胞癌病人血清中的膜连蛋白Ⅱ(Annexin A2，ANXA2)， 发现ANXA2可作为肝细胞癌的血清标志，ANXA2的过量表达 有助于肝细胞癌的诊断。
分 选 型 流 式 细 胞 仪 ：
Байду номын сангаас
Linlin Qu等观察阿仑单抗对小鼠肠上皮淋巴细胞(in testinal intraepithelial lymphocytes，IELs)的影响， 取阿伦单抗处理小鼠的回肠和结肠做组织病理和免疫组化， 并用流式细胞仪检测IELs，与正常组作比较，发现处理组 小鼠的IELs数量和活力明显降低，凋亡细胞数量明显增高， 推断阿伦单抗可破坏小肠上皮内屏障作用，引起细菌感染。
单抗药物一般分为：治疗疾病（尤其是肿瘤）的单抗 药剂、抗肿瘤单抗偶联物、治疗其他疾病的单抗。单抗药 剂针对的靶点通常为细胞表面的疾病相关抗原或特定的受 体。如：最早被美国FDA 批准用于治疗肿瘤的单抗药物利 妥昔单抗；抗肿瘤单抗偶联物，或称免疫偶联物（Immuno conjugate）由单抗与有治疗作用的物质（如：放射性核 素、毒素和药物等）两部分构成，其中包括放射免疫偶联 物、免疫毒素、化学免疫偶联物，此外还有酶结合单抗偶 联物、光敏剂结合单抗偶联物等。
《单克隆抗体应用》课件
单克隆抗体的特性
总结词
单克隆抗体具有高度特异性、一致性和稳定性。
详细描述
由于单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的，因此它具有高度特异性，能够与特 定的抗原结合。此外，由于单克隆抗体的生产过程是高度控制的，因此其质量和 性能具有一致性和稳定性。
02
单克隆抗体的应用领域
生物医学研究
抗体标记技术
利用单克隆抗体与特定抗原的结 合特性，对生物样本中的抗原进 行标记，用于检测、定位和追踪 抗原的表达和分布。
利用单克隆抗体标记的免疫细胞对肿瘤进行攻击，提高肿瘤治疗的疗效和患者的生存率。
03
单克隆抗体的研究进展
新药研发
肿瘤免疫治疗
利用单克隆抗体作为肿瘤免疫治 疗的靶点，通过激活免疫系统来 攻击肿瘤细胞。
自身免疫性疾病治
疗
针对自身免疫性疾病，如类风湿 性关节炎、红斑狼疮等，单克隆 抗体可以抑制免疫反应，缓解症 状。
《单克隆抗体应用》ppt课件
CONTENTS
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的应用领域 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的挑战与前景 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的免疫球蛋白。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种细胞是由免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融 合而成。这种杂交瘤细胞能够大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体。
免疫疗法
单克隆抗体可以与免疫疗法结合，通过调节免疫 反应来增强抗肿瘤效果。
基因治疗
通过将基因导入单克隆抗体，可以实现更精确的 靶向治ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ，提高治疗效果并降低副作用。
单克隆抗体(monoclonalantibody)PPT课件
稀释方法获得产特定单克隆抗体的克隆
克隆化是指将抗体阳性孔进行克隆，目的是将抗体 分泌细胞、抗体非分泌细胞、特异性抗体分泌细胞 和无关抗体分泌细胞分开
大量获得单克隆抗体的方法
3. 单克隆抗体的应用
3.1 作为生物治疗的导向武器
将针对某一肿瘤的单克隆抗体与化疗药物或放疗药物连接， 利用单抗的特异导向作用，将药物带到靶器官，直接杀伤 靶细胞 抗肿瘤细胞毒剂，化疗药物、细菌毒素、植物毒素或放射 同位素等
杂交瘤细胞的筛选：HAT培养基筛选 讨论：细胞融合后，体系中会存在哪些细胞？
HAT系次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤 （aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三 种物质
单克隆抗体的选择及克隆化
杂交瘤细胞及阳性孔的筛选，用多孔细胞培养板筛选， 稀释度要保证每个孔不多于1个细胞，通过抗原抗体 杂交法检测阳性反应
由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混 合物。如:免疫血清（含多种特异性抗体）
Monoclonal antibody: 第二代抗体
由单一克隆B细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子某一特定抗原决定簇
的特异性抗体。特异性强、灵敏度高。 Genetic engineering antibody: 第三代抗体
在DNA水平对Ig基因进行切割、拼接或修饰，导入受体细胞表达的抗体。
思考题:
1. 单克隆抗体和普通抗体有何区别 2）作为一种新型免疫抑制 剂，治疗自身免疫疾病和抗器官移植排斥反应
3.4 作为研究工作的探针
利用单抗的特异性，将其作为探针，从分子、细胞和器官 等不同水平，研究抗原物质的结构与功能，从理论上阐明 机理 用荧光物质标记单抗作为探针，快速确定与其结合的相应 生物大分子在细胞中的位置和分布
单克隆抗体在医学上的应用 ppt课件
• 利用单克隆抗体的特性可把它作为研究工作中的 探针。此时，可以从分子、细胞和器官的不同水 平上，研究抗原物质的结构与功能的关系，进而 并可从理论上阐明其机理。
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4.增强抗原的免疫原性
• 抗体对抗原免疫原性 的增强作用由来已久， 60年代就已发现幼猪 对破伤风类毒素难以 产生抗体，注射相应 特异性抗体IgG，就能 有效地提高对委内瑞 拉马脑炎病毒的免疫 应答。
注：抗原的免疫原性，首先决定于其自身的 化学特性，但同一种抗原，对不同种动物或 同种动物不同个体间其免疫原性强弱，可表 现很大差异，因此一种抗原的免疫原性是由 其化学性质和宿主因素决定的。
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5.作为医学检验试剂
• 单克隆抗体作为医学检验试剂，更能充分发挥其 优势。单克隆抗体的特异性强，大大提高了抗 原—抗体反应的特异性，减少了和其它物质发生 交叉反应的可能性，使试验结果可信度更大。单 抗的均一性和生物活性的单一性，使抗原—抗体 区应结果便于控制，利于标准化和规范化。
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• • • •
（1）诊断各类病原体 （2）肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原的检测 （3）检测淋巴细胞表面标志 （4）集体微量成分的测定
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6.作为亲和层析Βιβλιοθήκη 配体单克隆抗体能与其相应的抗原特异性结合，因而 能够从复杂系统中识别出单个成分。只要得到针 对某一成分的单克隆抗体，利用它作为配体，固 定在层析柱上，通过亲合层析，即可从复杂的混 和物中分离、纯化这一特定成分。
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解决方案
• 最新方法：——噬菌体技术和转基因鼠技 术 • 以分子生物学技术提取、扩增编码是人源抗体， 具有建库简单、抗体表达稳定等特点。迄 今已有多种抗体产生。可以预见，该技术 具有良好的发展和应用前景。
单克隆抗体技术及其应用.pptx
课堂小结
一个过程 单克隆抗体制备过程
一个细胞 两个“一”
一个优势
—— 杂交瘤细胞
—— 单克隆抗体特异性强 灵敏度高的优势
课后作业
1 预习：基因工程抗体的制备技术？
2 思考：COVID-19的疫情还在发展，人类对
未知领域的探索仍非常有限，医务科研人员 仍在努力科研攻关。我们在面对疫病时，该 如何提高自身的免疫力？
第十一章传染与免疫
温故知新
抗原(antigen , Ag)：凡 能 刺 激 机 体 产 生 抗 体 和 致 敏 淋 巴 细 胞 并 能与之发生反应的物质。
抗原 Antigen
机体
body
产物
抗体 Antibody
致敏T细胞
温故知新
抗体(antibody , Ab) ：能够与抗原 发生特异性结合的免疫球蛋白。 能产生抗体的细胞是浆细胞（即效 应B淋巴细胞）。
一、单克隆抗体的概念
一、单克隆抗体的概念
在动物发生免疫反应的过程中，要想获得大量的单一抗体， 必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。
单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb ）单个B细胞 的单一克隆，只产生一种化 学 性 质 高 度 均 一 、 特 异 性 强 的针对单一抗原表位的抗体。
一、单克隆抗体的概念
无论是细菌抗原还是病毒抗原，在其表 面通常具有多个抗原表位（每个抗原表位刺 激一个B淋巴细胞）。由多个表位刺激机体， 相应地就产生多种单克隆抗体，混杂在 一起就是多 克 隆 抗 体 (polyclonal antibody , PcAb)，它是混合抗体。 特点：产 量 低 、 纯 度 低 ，且特 异 性 差 。
press and McGraw-Hill Companies, Inc. 2015 7.杨汉春 动物免疫学(第二版) . 北京:中国农业大学出版社 2015 8.张权庚等 抗体制备与使用实验指南(译) . 北京:科学出版社 2018 9.免疫学网站 /bbs/
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例子： 用抗人绒毛膜促性腺激素（hGG） 亲和层析柱，就可以从孕妇尿中提取到纯的 hGG。
。
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作为生物治疗的导向武器
与化学药物、毒素、放射性核素、生物因 子、基因、分化诱导剂、光敏剂、酶等物 质构成单克隆抗体靶向药物，把杀伤肿瘤 细胞的活性物质特异的输送到肿瘤部位， 利用单抗对肿瘤表面相关抗原或特定的受 体特异性识别，从而把药物直接导向肿瘤 细胞，提高药物疗效，降低药物对循环系 统及其他部位的毒性。
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抗肿瘤单抗利妥昔单抗（rituximab ）( 美罗华) 是第一个被批准用于临 床治疗的单抗; 它是一种针对CD20 抗原的人鼠嵌合型单克隆抗体,进入 人体后可与CD20特异性结合导致B 细 胞溶解,从而抑制B 细胞增殖,诱导成 熟B 细胞凋亡,但不影响原始B 细胞 。
美罗华（Rituxan，rituximab）， 利妥昔单抗
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单克隆抗体产品市场应用情况
目前的单抗产品主要可以分为以下四类：
人源化抗体和完全人源化抗体由于其副反应小、效价高，代表了未来单 抗产品的发展趋势。目前处于研发过程中的单抗产品主要为人源化抗体 。通过通用名的后缀，我们就可以辨认出产品是属于那种结构的抗体。
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自1986年第一只单抗进入市场以来，截至2013年，经美国 FDA批准上市的单抗药物一共有46种，进入临床试验阶段 的单抗则接近220多种，治疗范围涵盖肿瘤、自体免疫疾 病、治疗器官移植排斥反应、抗感染、止血、呼吸道疾病 等，其中又以肿瘤和自体免疫疾病药物市场最大，种类最 多。2010年肿瘤和自身免疫抗体药物占据整个单克隆药物 市场76%的份额。此外，抗体还应用于病毒感染、心脑血 管、骨质疏松等领域。
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莫罗单抗(muromonab- CD3, CD3-单 克隆抗体，Orthoclone，OKT3)是 FDA 批准用于肾移植患者防止异体 排斥反应的第一个鼠源型McAb。此 外，人-鼠嵌合抗体Basiliximab、 人源化McAb Daclizumab 在器官移 植排斥反应的治疗上也取得了良好 的效果。
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作为免疫抑制剂
主要用于移植排斥反应的防治。 ➢ 抗人T淋巴细胞单抗（McAb）作为一种新型免疫抑制剂，已广泛
用于临床治疗自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反应。 ➢ 注射抗小鼠Thy-1抗原的单抗，可以抑制小鼠同种皮肤移植的排
斥反应。 ➢ 对于同种骨髓移植的供体骨髓，在体外经抗T细胞
单抗加补体处 理，能够减轻移植物抗宿主病的发生。
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增强抗原的免疫原性
将单抗制成佐剂加在疫苗里，则可减少疫苗接种时药物的用量和避免多次接 种并不能引起机体更地产生免疫应答，从而减少疫苗接种的风险。 佐剂的作用机理：
改变抗原的物理性状，可 使抗原物质缓慢地释放 延长了抗原的作用时间
佐剂能刺激 吞噬细胞对 抗原的处理
可刺激致敏淋巴细 胞的分裂和浆细胞
莫罗单抗(muromonab- CD3, CD3-单克隆抗体， Orthoclone，OKT3)
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作为研究工作中的探针
利用单克隆抗体的特性可把它作为研究工作中的探针。此时，可 以从分子、细胞和器官的不同水平上，研究抗原物质的结构与功 能关系，进而可以从理论上阐明其机理。 例子：用荧光物质标记单抗作为探针，能快速地确定与其结合的相 应生物大分子在细胞中的位置和分布。
产生抗体
改变抗体的产生类型以 及产生迟发型变态反应
，并使其增强
1 234567
增加抗原的表面积 ，使抗原易于被巨
噬细胞吞噬
可促进淋巴细胞之 间的接触，增强辅
助T细胞的作用
可提高机体 初次和再次
免疫应答
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检验医学诊断试剂
病原微生物抗原、抗体的检测 肿瘤抗原的检测 免疫细胞及其亚群的的检测 激素测定 细胞因子的测定
作为检验医学实验室的诊断试 剂，单克隆抗体以其特异性强 、纯度高、均一性好等优点， 广泛应用于酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、免疫组化和 流式细胞仪等技术。并且单克 隆抗体的应用，很大程度上促
进了商品化试剂盒的发展。
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农兽药快速检测
农兽药属于小分子物质，半抗原，无免疫原性， 不能刺激动物产生抗体，必须先将其制备成人工抗原， 以人工抗原免疫动物，使动物的免疫系统发生应答反 应，从而制备出对该农药具特异性的多或单克隆抗体。 国外已制备多种农兽药单克隆抗体 并应用于农药和兽 药残留的免疫分析。
单克隆抗体的应用
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1
单克隆抗体技术的应用
作为亲和层系的配体
2
检验医学诊断试剂
作为生物治疗的导向武器 作为免疫抑制剂
5
增强抗原的免疫原性
作为研究工作中的探针
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2
作为亲和层系的配体
先用待提纯蛋白质制成单抗，再将单抗固 定在惰性固相基质上，作为配体，制成层析 柱。而后倒入混合液，当混合液流经单抗时， 相应的蛋白质与单抗特异性结合，杂质则随 洗脱剂流走。再用特殊的洗脱剂将蛋白质洗 脱下来，则可将蛋白质提纯。
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感谢大家 请对不足之处提宝贵意见！
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作为生物治疗的导向武器
与化学药物、毒素、放射性核素、生物因 子、基因、分化诱导剂、光敏剂、酶等物 质构成单克隆抗体靶向药物，把杀伤肿瘤 细胞的活性物质特异的输送到肿瘤部位， 利用单抗对肿瘤表面相关抗原或特定的受 体特异性识别，从而把药物直接导向肿瘤 细胞，提高药物疗效，降低药物对循环系 统及其他部位的毒性。
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抗肿瘤单抗利妥昔单抗（rituximab ）( 美罗华) 是第一个被批准用于临 床治疗的单抗; 它是一种针对CD20 抗原的人鼠嵌合型单克隆抗体,进入 人体后可与CD20特异性结合导致B 细 胞溶解,从而抑制B 细胞增殖,诱导成 熟B 细胞凋亡,但不影响原始B 细胞 。
美罗华（Rituxan，rituximab）， 利妥昔单抗
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单克隆抗体产品市场应用情况
目前的单抗产品主要可以分为以下四类：
人源化抗体和完全人源化抗体由于其副反应小、效价高，代表了未来单 抗产品的发展趋势。目前处于研发过程中的单抗产品主要为人源化抗体 。通过通用名的后缀，我们就可以辨认出产品是属于那种结构的抗体。
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自1986年第一只单抗进入市场以来，截至2013年，经美国 FDA批准上市的单抗药物一共有46种，进入临床试验阶段 的单抗则接近220多种，治疗范围涵盖肿瘤、自体免疫疾 病、治疗器官移植排斥反应、抗感染、止血、呼吸道疾病 等，其中又以肿瘤和自体免疫疾病药物市场最大，种类最 多。2010年肿瘤和自身免疫抗体药物占据整个单克隆药物 市场76%的份额。此外，抗体还应用于病毒感染、心脑血 管、骨质疏松等领域。
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莫罗单抗(muromonab- CD3, CD3-单 克隆抗体，Orthoclone，OKT3)是 FDA 批准用于肾移植患者防止异体 排斥反应的第一个鼠源型McAb。此 外，人-鼠嵌合抗体Basiliximab、 人源化McAb Daclizumab 在器官移 植排斥反应的治疗上也取得了良好 的效果。
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作为免疫抑制剂
主要用于移植排斥反应的防治。 ➢ 抗人T淋巴细胞单抗（McAb）作为一种新型免疫抑制剂，已广泛
用于临床治疗自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反应。 ➢ 注射抗小鼠Thy-1抗原的单抗，可以抑制小鼠同种皮肤移植的排
斥反应。 ➢ 对于同种骨髓移植的供体骨髓，在体外经抗T细胞
单抗加补体处 理，能够减轻移植物抗宿主病的发生。
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增强抗原的免疫原性
将单抗制成佐剂加在疫苗里，则可减少疫苗接种时药物的用量和避免多次接 种并不能引起机体更地产生免疫应答，从而减少疫苗接种的风险。 佐剂的作用机理：
改变抗原的物理性状，可 使抗原物质缓慢地释放 延长了抗原的作用时间
佐剂能刺激 吞噬细胞对 抗原的处理
可刺激致敏淋巴细 胞的分裂和浆细胞
莫罗单抗(muromonab- CD3, CD3-单克隆抗体， Orthoclone，OKT3)
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作为研究工作中的探针
利用单克隆抗体的特性可把它作为研究工作中的探针。此时，可 以从分子、细胞和器官的不同水平上，研究抗原物质的结构与功 能关系，进而可以从理论上阐明其机理。 例子：用荧光物质标记单抗作为探针，能快速地确定与其结合的相 应生物大分子在细胞中的位置和分布。
产生抗体
改变抗体的产生类型以 及产生迟发型变态反应
，并使其增强
1 234567
增加抗原的表面积 ，使抗原易于被巨
噬细胞吞噬
可促进淋巴细胞之 间的接触，增强辅
助T细胞的作用
可提高机体 初次和再次
免疫应答
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检验医学诊断试剂
病原微生物抗原、抗体的检测 肿瘤抗原的检测 免疫细胞及其亚群的的检测 激素测定 细胞因子的测定
作为检验医学实验室的诊断试 剂，单克隆抗体以其特异性强 、纯度高、均一性好等优点， 广泛应用于酶联免疫吸附试验 、放射免疫分析、免疫组化和 流式细胞仪等技术。并且单克 隆抗体的应用，很大程度上促
进了商品化试剂盒的发展。
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农兽药快速检测
农兽药属于小分子物质，半抗原，无免疫原性， 不能刺激动物产生抗体，必须先将其制备成人工抗原， 以人工抗原免疫动物，使动物的免疫系统发生应答反 应，从而制备出对该农药具特异性的多或单克隆抗体。 国外已制备多种农兽药单克隆抗体 并应用于农药和兽 药残留的免疫分析。
单克隆抗体的应用
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单克隆抗体技术的应用
作为亲和层系的配体
2
检验医学诊断试剂
作为生物治疗的导向武器 作为免疫抑制剂
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增强抗原的免疫原性
作为研究工作中的探针
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作为亲和层系的配体
先用待提纯蛋白质制成单抗，再将单抗固 定在惰性固相基质上，作为配体，制成层析 柱。而后倒入混合液，当混合液流经单抗时， 相应的蛋白质与单抗特异性结合，杂质则随 洗脱剂流走。再用特殊的洗脱剂将蛋白质洗 脱下来，则可将蛋白质提纯。
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