单克隆抗体技术讲解PPT课件
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单克隆抗体PPT课件
单克隆抗体的应用领域
01
02
03
04
基础研究
用于研究生物分子结构和功能 ，探索生命现象的本质。
诊断
用于检测生物样本中的抗原、 抗体、激素等生物分子，用于
疾病的诊断和监测。
治疗
用于治疗肿瘤、自身免疫性疾 病、感染性疾病等，通过与靶 分子结合，发挥治疗作用。
免疫学检测
用于检测食品、环境、生物武 器等中的有害物质和病原微生
高特异性
总结词
单克隆抗体具有极高的特异性，能够精确地识别和结合特定的抗原，几乎不会 与其它物质发生交叉反应。
详细描述
单克隆抗体的特异性表现在它能够精确地识别和结合细胞、蛋白质、病毒等抗 原的特定表位，这种结合具有高度的选择性，避免了与其他物质的交叉反应， 提高了检测和治疗的准确性。
高灵敏度
总结词
单克隆抗体可以用于鉴别血型、 检测血红蛋白病和白细胞表面抗 原，有助于血液疾病的诊断和治 疗。
生物标记与示踪研究
1 2
细胞分型
利用单克隆抗体标记不同细胞表面抗原，对细胞 进行分型和鉴定，有助于研究细胞发育、分化及 功能。
示踪研究
将单克隆抗体与荧光、放射性同位素等标记物结 合，追踪生物体内的物质分布、代谢和排泄过程。
良好的重复性
总结词
单克隆抗体的生产和制备具有高度的一致性和重复性，保证了产品质量和实验结果的可靠性。
详细描述
通过采用适当的细胞培养技术，可以在实验室条件下实现单克隆抗体的规模化生产和制备。由于单克 隆抗体的克隆来源单一，其生产和制备过程具有高度的一致性和重复性，这使得单克隆抗体的质量稳 定可靠，实验结果的可重复性强。
提高单克隆抗体的生产效率与质量
优化细胞培养条件
《单克隆抗体技术》课件
单克隆抗体的制备与纯化
单克隆抗体是通过杂交瘤细胞在体外培养或注射到动物体内进行体内培养产生的，经过一系列的分离 和纯化过程，最终获得高纯度、高特异性的单克隆抗体。
制备过程中通常采用各种层析技术、沉淀技术等对抗体进行分离和纯化，以确保获得高质量的单克隆 抗体。
单克隆抗体的鉴定与质量控制
鉴定是通过对单克隆抗体的免疫学特 性、生物学活性和分子结构等方面进 行检测和评估，以确定其特异性和质 量。
总结实验过程和结果，分析存在的问题和改 进方向，为后续实验提供参考和依据。
感谢您的观看
THANKS
生物标记物
用于研究细胞生物学、分子生物学 等领域。
03
02
生物药物
用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等 。
免疫分析
用于检测生物样品中的抗原、抗体 等。
04
02 单克隆抗体技术的原理
杂交瘤细胞系的建立
杂交瘤细胞系的建立是单克隆抗体技 术的核心步骤之一，通过将免疫脾细 胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细 胞。
通过抗原-抗体反应检测杂交瘤细胞产生的 抗体特异性。
克隆筛选
通过选择性培养基筛选出能够产生所需抗体 的杂交瘤细胞克隆。
细胞培养与抗体纯化
将筛选出的杂交瘤细胞进行培养，并采用蛋 白质纯化技术获得单克隆抗体。
实验结果分析与总结
结果分析
对实验结果进行统计分析，评估杂交瘤细胞 的抗体产生能力和特异性。
总结
这些杂交瘤细胞既具有脾细胞无限增 殖的能力，又具有产生特异性抗体的 能力，从而为单克隆抗体的制备提供 了稳定的细胞源。
杂交瘤细胞的筛选与克隆化
在筛选过程中，通过抗原-抗体反应检 测杂交瘤细胞产生的抗体，筛选出能 够产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞 。
《单克隆抗体》课件
05
单克隆抗体的未来发展
新型单克隆抗体的研发
总结词
随着生物技术的不断发展，新型单克 隆抗体的研发将更加活跃，以满足更 多治疗需求。
详细描述
新型单克隆抗体将通过基因工程技术 、蛋白质工程技术等手段进行设计和 优化，以改善其疗效、降低副作用和 降低生产成本。
单克隆抗体与其他技术的结合应用
总结词
单克隆抗体将与其他治疗手段和技术相结合，以实现更有效的疾病治疗和诊断 。
03
类型
IgG、IgM、IgA等。
单克隆抗体的发现和发展历程
1901年
Ehrlich提出“侧链学说”，认为抗体是 由细胞产生的化学物质。
1986年
FDA批准第一个单克隆抗体药物上市， 用于治疗非霍奇金淋巴瘤。
1975年
Kohler和Milstein首次成功制备出单克隆 抗体。
2014年
FDA批准第一个全人源单克隆抗体药物 上市，用于治疗类风湿性关节炎。
生物治疗
总结词
单克隆抗体在生物治疗中具有显著疗效 ，可用于治疗癌症、自身免疫病等多种 疾病。
VS
详细描述
通过靶向肿瘤细胞表面抗原或免疫系统中 的特定分子，单克隆抗体能够发挥抗癌作 用。例如，针对某些癌症的单克隆抗体药 物能够抑制肿瘤生长、扩散和转移，提高 患者生存率和生活质量。此外，在自身免 疫病治疗中，单克隆抗体也具有良好疗效 ，能够调节免疫系统，缓解单克隆抗体的概述 • 单克隆抗体的制备 • 单克隆抗体的特性 • 单克隆抗体的应用实例 • 单克隆抗体的未来发展
01
单克隆抗体的概述
单克隆抗体的定义
01
单克隆抗体
由单一B细胞克隆产生的具有 高度特异性识别抗原表位的抗
(培训课件)单克隆抗体PPT幻灯片
• 种类：氢氧化铝佐剂、短小棒状杆菌、脂多 糖、细胞因子、明矾等，其中弗氏不完全佐 剂（羊毛脂：石蜡油=1:5）和弗氏完全佐剂 （弗氏不完全佐剂＋灭活的分枝结核杆菌） 是目前动物实验中最常用佐剂。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
单克隆抗体21页PPT
动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同： •不需去除细胞壁 •不能发育成新的动物个体
一、动物细胞融合（细胞杂交）
1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个 细胞的过程。
2、结果：形成单核的杂交细胞 3、原理：细胞膜的流动性
物理法：离心、振动、电激
4、诱导方式 化学法：聚乙二醇（PEG)
生物法：灭活的病毒
杂交瘤细胞
既能无限增殖， 又能产生特异性 抗体的杂交瘤细 胞
【堂堂清】
1.单克隆抗体的优点是 _特__异__性__强_、__灵__敏__度__高_、__可__大__量__制_备______
2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的 原因是 每__一__种__B_淋_巴__细__胞__只__能_分__泌__一__种__特_异__性__抗__体_
单克隆抗体的应用
①作为诊断试剂：准确识别各种 抗原 的细微差别，并跟 一定抗原发生特异性 合，具有 准确、 高效 、 简易 、快速 优点。
物质 的结 的
②用于治疗疾病和运载药物：主要用于治 疗 癌症 ，可制成“ 生物导弹 ”，也有少量 用于治疗其他疾病。
下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。
（1）___动__物__细__胞__培__养__技术是单克隆抗体技术的基础。 （2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于__选__择____培养基。 （3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_特__异__性__强__,灵__敏__度__高_。 （4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采 用______灭__活__的__病__毒__。 （5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_在__体__外__大__量__增__殖__特点，又具备淋巴 细胞的_分__泌__特__异__性__抗__体__特点。 （6）淋巴细胞是由动物体____骨__髓___中的___造__血__干__细__胞___细胞分化、发育而来。 （7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____主__动__运__输__。
一、动物细胞融合（细胞杂交）
1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个 细胞的过程。
2、结果：形成单核的杂交细胞 3、原理：细胞膜的流动性
物理法：离心、振动、电激
4、诱导方式 化学法：聚乙二醇（PEG)
生物法：灭活的病毒
杂交瘤细胞
既能无限增殖， 又能产生特异性 抗体的杂交瘤细 胞
【堂堂清】
1.单克隆抗体的优点是 _特__异__性__强_、__灵__敏__度__高_、__可__大__量__制_备______
2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的 原因是 每__一__种__B_淋_巴__细__胞__只__能_分__泌__一__种__特_异__性__抗__体_
单克隆抗体的应用
①作为诊断试剂：准确识别各种 抗原 的细微差别，并跟 一定抗原发生特异性 合，具有 准确、 高效 、 简易 、快速 优点。
物质 的结 的
②用于治疗疾病和运载药物：主要用于治 疗 癌症 ，可制成“ 生物导弹 ”，也有少量 用于治疗其他疾病。
下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。
（1）___动__物__细__胞__培__养__技术是单克隆抗体技术的基础。 （2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于__选__择____培养基。 （3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_特__异__性__强__,灵__敏__度__高_。 （4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采 用______灭__活__的__病__毒__。 （5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_在__体__外__大__量__增__殖__特点，又具备淋巴 细胞的_分__泌__特__异__性__抗__体__特点。 （6）淋巴细胞是由动物体____骨__髓___中的___造__血__干__细__胞___细胞分化、发育而来。 （7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____主__动__运__输__。
单克隆抗体概述ppt课件
2015年全球最畅销药物TOP 10中有5个单抗，分别是阿达木单抗、 英夫利昔单抗、利妥昔单抗、贝伐珠单抗和曲妥珠单抗，它们占 据了单抗药物的半壁江山，销售额约为426.6亿美元，约占2015 年全球单克隆抗体药物总销售额的44%。
根据预测，2016-2020 年，全球单抗产业仍将以9.84%的RAGR快 速发展（同期全球药品市场CAGR约为 5%），2020年市场规模有 望突破1300亿美元。
体外法
体外法(杂交瘤细胞体外培养法)的产品纯度高,可以避免鼠类病毒的
污染,简化质检项目,操作具有可控制性,适用于大规模工业生产,因此
是人用鼠源单抗生产方式的主要发展方向。体外法的制备流程也基
Hale Waihona Puke 本相同，即从超免疫的供体中即抗原免疫的小鼠获取脾细胞，选育
出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞，待细胞融合后，对单个
.
8
嵌合抗体三种应用形式
嵌合免疫球蛋白G 嵌合Fab和嵌合 F（ab’）2
.
9
人源化单克隆抗体
完全CDR移植抗体
部分CDR移植抗体
特异决定区移植抗体
.
10
完全CDR移植抗体
完全CDR移植抗体由于鼠源性抗体VR中的骨架区仍残留一 定的免疫原性，为最大限度的减少鼠源成分，用人FR替代鼠 FR可形成更为完全的人源化抗体，即在此抗体中除了３个CDR 是鼠源以外，其余全部是人源结构，这一类型的抗体称为CDR 移植抗体或改型抗体。应用这一策略，将鼠源McAb的CDR区 完全移植，得到了抗磷脂酰肌醇（蛋白）聚糖嵌合抗体。但随
.
11
部分CDR移植抗体
在简单CDR移植的基础上又相继发展了部分CDR移植技术。 研究发现轻链的 CDR1、CDR2和重链的CDR3对保证抗体与抗原 特异性结合至关重要，其余三个CDR的作用则较低。因此只将 抗体结合抗原必须的CDR移植到人抗体的FR骨架上即能获得对 人免疫原性更小的嵌合抗体，这类抗体称为部分CDR移植抗体。
根据预测，2016-2020 年，全球单抗产业仍将以9.84%的RAGR快 速发展（同期全球药品市场CAGR约为 5%），2020年市场规模有 望突破1300亿美元。
体外法
体外法(杂交瘤细胞体外培养法)的产品纯度高,可以避免鼠类病毒的
污染,简化质检项目,操作具有可控制性,适用于大规模工业生产,因此
是人用鼠源单抗生产方式的主要发展方向。体外法的制备流程也基
Hale Waihona Puke 本相同，即从超免疫的供体中即抗原免疫的小鼠获取脾细胞，选育
出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞，待细胞融合后，对单个
.
8
嵌合抗体三种应用形式
嵌合免疫球蛋白G 嵌合Fab和嵌合 F（ab’）2
.
9
人源化单克隆抗体
完全CDR移植抗体
部分CDR移植抗体
特异决定区移植抗体
.
10
完全CDR移植抗体
完全CDR移植抗体由于鼠源性抗体VR中的骨架区仍残留一 定的免疫原性，为最大限度的减少鼠源成分，用人FR替代鼠 FR可形成更为完全的人源化抗体，即在此抗体中除了３个CDR 是鼠源以外，其余全部是人源结构，这一类型的抗体称为CDR 移植抗体或改型抗体。应用这一策略，将鼠源McAb的CDR区 完全移植，得到了抗磷脂酰肌醇（蛋白）聚糖嵌合抗体。但随
.
11
部分CDR移植抗体
在简单CDR移植的基础上又相继发展了部分CDR移植技术。 研究发现轻链的 CDR1、CDR2和重链的CDR3对保证抗体与抗原 特异性结合至关重要，其余三个CDR的作用则较低。因此只将 抗体结合抗原必须的CDR移植到人抗体的FR骨架上即能获得对 人免疫原性更小的嵌合抗体，这类抗体称为部分CDR移植抗体。
单克隆抗体技术讲解PPT课件
8
局限性 ： （1）固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范 围 （2）反应强度不如多克隆抗体 （3）制备技术复杂、费时费工、价格较高
9
三、单克隆抗体技术的应用
1.检验医学诊断
（1）病原微生物抗原抗体的检测：乙肝表面抗原试纸
（2）肿瘤抗原的检测
（3）免疫细胞及其亚群的检测 （4）激素测定：早孕检测试纸、女性排卵检测试纸 （5）细胞因子的测定 （6）其他：吗啡类毒品检测试纸等
抗体工程制药
单克隆抗体的制备
1
掌握：单克隆抗体的概念和特点、制备原理， 制备方法及基本过程 熟悉：单克隆抗体技术的应用 了解：单克隆抗体的发展
2
主要内容
1.单克隆抗体的发展 2.单克隆抗体的概念和特点 3.单克隆抗体技术的应用
4.单克隆抗体的制备过程
3
没有单克隆抗体前人类所遇见的问题
银屑病
手口足病
陷细胞可以在此培养基中生存。是常用的骨髓杂交瘤细胞选择性培
养对筛选方法的要求： 多——大量样品一次检测； 快——迅速取得检测结果； 准——检测结果可靠性高； 灵——检测方法灵敏度高。 常用筛选方法： ELISA、IFA等
15
6. 克隆化过程
方法：有限稀释法 克隆建立的标准：连续两次以上100%阳性孔 饲养细胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾细胞
2.蛋白质的提纯
3.肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术
10
四、单克隆抗体制备过程
致敏淋巴细胞的准备
骨髓瘤细胞的准备
细胞融合 选择性培养 抗体分泌细胞的筛选 克隆化过程
单克隆抗体的制取
11
1.致敏淋巴细胞的准备
动物选择：品系、年龄、性别、健康状态 抗原接种：方式—体内、体外 剂量—0.5-100g 次数—视抗原而定 间隔—视抗原而定 佐剂—视抗原而定 收集时间：末次接种后72 h
《单克隆抗体应用》课件
单克隆抗体的特性
总结词
单克隆抗体具有高度特异性、一致性和稳定性。
详细描述
由于单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的，因此它具有高度特异性，能够与特 定的抗原结合。此外，由于单克隆抗体的生产过程是高度控制的，因此其质量和 性能具有一致性和稳定性。
02
单克隆抗体的应用领域
生物医学研究
抗体标记技术
利用单克隆抗体与特定抗原的结 合特性，对生物样本中的抗原进 行标记，用于检测、定位和追踪 抗原的表达和分布。
利用单克隆抗体标记的免疫细胞对肿瘤进行攻击，提高肿瘤治疗的疗效和患者的生存率。
03
单克隆抗体的研究进展
新药研发
肿瘤免疫治疗
利用单克隆抗体作为肿瘤免疫治 疗的靶点，通过激活免疫系统来 攻击肿瘤细胞。
自身免疫性疾病治
疗
针对自身免疫性疾病，如类风湿 性关节炎、红斑狼疮等，单克隆 抗体可以抑制免疫反应，缓解症 状。
《单克隆抗体应用》ppt课件
CONTENTS
• 单克隆抗体的基础知识 • 单克隆抗体的应用领域 • 单克隆抗体的研究进展 • 单克隆抗体的挑战与前景 • 单克隆抗体的未来展望
01
单克隆抗体的基础知识
单克隆抗体的定义
总结词
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的具有高度特异性的免疫球蛋白。
详细描述
单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，这种细胞是由免疫的B细胞和骨髓瘤细胞融 合而成。这种杂交瘤细胞能够大量繁殖，并且只产生一种类型的抗体。
免疫疗法
单克隆抗体可以与免疫疗法结合，通过调节免疫 反应来增强抗肿瘤效果。
基因治疗
通过将基因导入单克隆抗体，可以实现更精确的 靶向治ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ，提高治疗效果并降低副作用。
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有限稀释法
计数
105/ml 104/ml
103/ml
5-20/孔
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7. 单克隆抗体的制取
体内—腹腔接种
注射特定 抗原蛋白
体外—培养罐法
培养骨髓瘤细胞
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞 融合
多种杂交细胞
专一抗体检验阳性
克隆上述杂交细胞
分开不同杂交细胞，克隆专 一抗体，检验阳性细胞
注射到小鼠体内
体外培养
单克隆抗体
陷细胞可以在此培养基中生存。是常用的骨髓杂交瘤细胞选择性培
养基。
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5. 抗体分泌细胞的筛选
对筛选方法的要求： 多——大量样品一次检测； 快——迅速取得检测结果； 准——检测结果可靠性高； 灵——检测方法灵敏度高。 常用筛选方法： ELISA、IFA等
15
6. 克隆化过程
方法：有限稀释法 克隆建立的标准：连续两次以上100%阳性孔 饲养细胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾细胞
2.骨髓瘤细胞的准备
细胞株处于良好的生长状态 细胞株保持HGPRT缺陷状态
HGPRT：次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶
12
3. 细胞融合
致敏淋巴细胞
骨髓瘤细胞 50%PEG 1 mL 培养液 10 mL
离心 1000rpm 10 min
37 °C摇动、由慢 渐快1min、静止 1.5min
离心 1000rpm 7min
7
2. 单克隆抗体的特点 优点 ： （1）理化性状高度均一、结构、氨基酸顺序、特异性等 一致 （2）生物活性单一、灵敏度高 （3）与抗原结合的特异性强，适用于以标记抗体为特点 的免疫学分析方法 （4）便于人为处理和质量控制，来源容易，可以在体外 “永久”地存活并传代 （5）可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗
8
局限性 ： （1）固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范 围 （2）反应强度不如多克隆抗体 （3）制备技术复杂、费时费工、价格较高
9
三、单克隆抗体技术的应用
1.检验医学诊断
（1）病原微生物抗原抗体的检测：乙肝表面抗原试纸
（2）肿瘤抗原的检测
（3）免疫细胞及其亚群的检测 （4）激素测定：早孕检测试纸、女性排卵检测试纸 （5）细胞因子的测定 （6）其他：吗啡类毒品检测试纸等
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思考：
1、如何大量生产单克隆抗体？
2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？
18
谢谢
祝：同学们学习进步
19
抗体工程制药
单克隆抗体的制备
1
掌握：单克隆抗体的概念和特点、制备原理， 制备方法及基本过程 熟悉：单克隆抗体技术的应用 了解：单克隆抗体的发展
2
主要内容
1.单克隆抗体的发展 2.单克隆抗体的概念和特点 3.单克隆抗体技术的应用
4.单克隆抗体的制备过程
3
没有单克隆抗体前人类所遇见的问题
银屑病
手口足病
2.蛋白质的提纯
3.肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术
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四、单克隆抗体制备过程
致敏淋巴细胞的准备
骨髓瘤细胞的准备
细胞融合 选择性培养 抗体分泌细胞的筛选 克隆化过程
单克隆抗体的制取
11
1.致敏淋巴细胞的准备
动物选择：品系、年龄、性别、健康状态 抗原接种：方式—体内、体外 剂量—0.5-100g 次数—视抗原而定 间隔—视抗原而定 佐剂—视抗原而定 收集时间：末次接种后72 h
加入HAT培养液悬 浮细胞，置于培养 孔内
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4. HAT选择性培养
HAT是用于筛选具有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)或胸苷激酶
(TK)活性缺陷细胞的培养基。含有次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸
苷(T)和甘氨酸。在氨基蝶呤(二氢叶酸类似物)存在下，这种酶缺陷 的细胞不能通过核苷酸合成旁路合成次黄嘌呤和胸苷。HPRT和TK缺
1984年获得诺贝尔医学和生理学奖。
6
二、单克隆抗体的概念及特点
1.概念 （1）抗体：是机体在抗原刺激下产生的能与该 抗原特异性结合的免疫球蛋白。 （2）单克隆抗体（monoclonal antibody ）：(简 称单抗 )，由经过特定的抗原处理过的效应B细 胞和骨髓瘤细胞杂交得到的杂交瘤细胞产生的具 有特异性识别某抗原上的某一个特定抗原决定簇 的抗体。
亚急性湿疹
癌症
4
用于诊断鉴定人的血型类别
犬瘟热病毒单克隆抗体
用于寻常型银屑病亚急性湿疹
Байду номын сангаас
用于复发或耐药的滤泡性中 央型淋巴瘤 5 单克隆抗体药物
一、单克隆抗体技术发展
Georges J.F. Kohler Cesar Milstein
1975年将产生抗体的淋巴细胞与肿瘤细胞融合, 成功建立了单克隆抗体技术。