第十四章 单克隆抗体_PPT幻灯片

以免疫转印法检测 特定抗原 以毒素连结抗体攻击 病变細胞 以 ELISA 侦测特定 病原体
SDA批准进入临床的治疗用单抗
•抗T细胞免疫毒素 •抗C-ALL免疫毒素 •131I-抗肝癌单克隆抗体 •抗人CD25单克隆抗体 •抗乙脑单克隆抗体 •抗流行性出血热抗体 •抗人CD3单克隆抗体 •抗人IL-8单克隆抗体
抗体治疗疾病的机制
抗原失活
免疫效应细胞 吞噬
抗原表面弱化 易受补体破坏
单抗研发的演变历程
鼠单抗 100% 鼠源 OKT-3 Panorex Zevalin
鼠/人嵌合单抗 (66-75 % 人源) ReoPro, Rituxan Remicade Simulect
人源化单抗
(90-95 % 人源)
发明单克隆抗体技术
Nobel Prize in 1984
抗体发展的三个阶段
多克隆抗血清 单克隆抗体 基因工程抗体
抗原 免疫
传统抗血清
所有抗体混合
31 2 4
BA LB /c
1234
脾脏 淋巴結 B 細胞
31 2 4
抗体药物销售趋势图
抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹
研究 医疗 检验
免疫球蛋白 基因载体的构建
H链嵌合载体
L 链嵌合载体
共转染细胞
人改型抗体（CDR移植）
定义：指利用基因工程技术，将人抗体可变区（V） 中互补决定簇（CDR）序列改换成鼠源单抗CDR序 列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体 亲和力的人源化抗体。RAb亦叫“重构型抗体”， 因其主要涉及CDR的“移植”，又可称为“CDR移 植抗体 意义：多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗
● 蛋白质性 抗原決定基 含有六个以上氨基酸
1 多克隆抗血清
白蛋白
球蛋白
a1 a2
ຫໍສະໝຸດ Baidu
b
（a）
（b）
（c）
对健康人用疫苗进行主动 免疫，免疫前（a）和免 疫后10天 （b）分别采血 并对血清蛋白进行凝胶电 泳分析。免疫前血清中的 g 球蛋白条带较宽，免疫 之后则相对集中。Bruton 氏病患者血清蛋白中的 球蛋白条带缺失（c）。
癌细胞 可培养生长
浆细胞 B cell 可分泌抗体 一個 B cell 只 产生一种抗体
YY Y
Y YY
YYY
YY YY Y
YY YY
细
胞
融合瘤
融
合
Hybridoma
两组染色体混在一起
也可以培养生長 产生专一性抗体
1 3
2 4
m m
m m
1 23
4
12 34
取出脾細胞
+ 癌細胞
细胞融合
单抗
各抗体分开
NS稀释至 2～5%
绵羊红细胞的制备流程图
摇动 1520min
周可
4℃
保
存
3
NS洗涤3 次 2000r/mi n
10min
取适量
100℃水浴 2～2.5h 杀菌
无菌试验
液体培养或 斜面培养 37℃24h
细菌细胞抗原的制备流程图
O菌体抗原
杂交瘤技术过程
可生产有用抗体的 淋巴細胞 若与 癌细胞融合，则形成稳定而可培 养的细胞株。
人源化抗体又称CDR移植抗 体
CDR序列
CDR序列
鼠单克隆抗体
人抗体
人源化抗体
图4 鼠单克隆V区人源化（CDR移植）
(3) 鼠单抗人源化
将小鼠Ig基因敲除，转染人Ig基因，在 小鼠体内产生人Ab，再经杂交瘤技术， 产生大量完全人源化抗体
●恒定区人源化——人-鼠嵌合抗体
●可变区人源化——人改型抗体
●用抗体库技术进行人源化
鼠单抗人源化
人-鼠嵌合抗体基因工程改造策略
启动子
Pr 鼠VH 人 CH
Pr 鼠VL 人 CL
Zenapax, Mylotarg, Herceptin, Campath100%
人源
Synagis
抗体攻击病毒
凝 集 细 菌
抗 SARS 的单抗 SARS-CoV
Epitope, Antigenic determinant
抗原決定基
● 一个抗原分子上可能有数个抗原決定基 ● 每個 抗原決定基 至少誘生一種專一性抗体