试论水中粪大肠菌群检测方法及其研究进展
酶底物法检测水中粪大肠菌群方法验证
酶底物法检测水中粪大肠菌群方法验证摘要：本文对《水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》HJ1001 -2018、《生活饮用水标准检验方法》GB/T5750-2006进行了方法验证，以评价该两种检测方法是否适用于水中粪大肠菌群的检测工作，以确保该方法能够满足水中粪大肠菌群的测定。
关键词：粪大肠菌群；质控样品。
引言：试样与固定底物酶底物法（DST）采用大肠菌群能产生β—半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄色的原理，来判断水样中是否含耐热大肠菌群，大肠菌群的培养温度是44.5℃。
1.测定方法与参数（注：方法为酶底物法法，参数为质控样品）2.仪器与设备2.1恒温培养箱2.2冰箱2.3高压蒸汽灭菌锅2.4烘箱2.5量筒2.6吸管2.7程控定量封口机2.8 51孔或97孔定量盘2.9无菌水样瓶（100mL）2.10阳性比色盘2.11干热灭菌器3培养基和试剂3.1无菌水3.2科立德（固定底物技术酶底物法）检测试剂：MMO-MUG培养基。
4.样品的采集和保存4.1采样前准备：4.1.1采样瓶：高压灭菌瓶。
4.2样品采样及注意事项4.2.1将已灭菌和封包好的采样瓶，无论在什么条件下采样时，均要小心开启包封纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌污染。
4.2.2在采集江，河湖，库，地表水时，可握住瓶子底部直接将采样瓶插入水中，约距水面10-15厘米时，瓶口朝来水方向，使水样灌入瓶内。
如果没有水流，可握住瓶子水平前推，直至充满水样为止。
采样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。
采样后，采样瓶内上不应留有一些空隙，一边检验前充分混匀水样。
4.2.3从自来水龙头采集样品时，不要选用漏水的水龙头，采水前可先将水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌或用75﹪酒精溶液消毒水龙头，然后将水龙头打开，放水数分钟后除去水管中的滞流杂质。
采水时控制水流速度小心接入瓶内。
4.2.4在同一采样点进行分层采样时，应自上向下进行，以免不同层次的干扰；同一采样点与理化检测项目同时采样时，应先采集细菌等检验样品，否则样品可能被污染，采样前，不得用水样刷洗采样瓶。
粪大肠菌群的监测分析
1.粪大肠菌群粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，用来表明水质受污染的程度，主要来自粪便。
粪大肠菌群是一类能使乳糖发酵、产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在44.5 ℃培养24~48ｈ能发酵乳糖产酸产气。
通过对粪大肠菌群的监测，可了解水体受生活污水污染的状况。
粪大肠菌群适用于河流、湖泊等地表水、企业污水及医院废水的监测，是综合评价城镇污水，尤其是生活污水污染的一个必不可少的重要指标。
粪大肠菌群作为地表水环境质量标准唯一的一项微生物监测指标，我国多用多管发酵法进行检测，近几年也更新了好几个相关环境标准。
２样品的采集和保存2.1 采样瓶的准备和存放采集粪大肠菌群的采样瓶需要用牛皮纸封包好后，再经过高压灭菌器灭菌才能使用。
灭菌后的采样瓶里如果含有少量冷凝水，可以放在烘箱里烘干。
有条件的单位，也可以使用无菌采样瓶。
灭菌后的采样瓶也有其保存期，超过两周内未使用就必须重新灭菌。
绝大部分实验室都是在首次灭菌后不再管其使用期限。
采样瓶存放过久可能受到杂菌污染。
2.2 样品采集采样人员大多缺乏细菌学监测知识，出现很多采样不规范的现象。
如：微生物项目水样和理化水样混采；灭菌瓶开盖时间过早、水样在空气中暴露时间过长；水样采集量过满（既容易导致水样中细菌缺氧死亡，又不利于水样检测前振荡摇匀）；微生物样品和其他理化项目同时采样时，没有做到细菌样品优先采集；采样人员在采集样品时，没注意避免采样瓶受杂菌污染（手接触到瓶盖和瓶颈、采样设备不规范）。
2.3 样品运输保存在样品的运输和保存过程中，样品的冷藏是关键（温度过高过低都不利于样品的保存）。
由于仪器设备条件不够，运输过程不满足样品所需温度或者路途遥远，送检时间超过６ｈ，都会导致样品失效。
样品交接时间过长（在样品送入实验室之后，采样人员要将采样记录移交给业务室，然后由接样员对水样进行编号并将检测任务下发到监测室），导致样品没有及时分析而超过时限。
特别是，在执法监测和污染源监督性监测中，需要的采样时间长，有时还需要分时间段监测，这过程很容易造成样品超时。
水中粪大肠菌群检测方法及其研究进展_张济龙 (1)
95% 以上，快检试纸检测阳性结果与发酵法完全 活饮用水，酶底物法只能先将水样适当稀释后再
一致，纸片法与发酵法检测出阳性结果的最高稀 释度完全相同，出现的阳性份数基本相近［12］。赵 凌宇［13］以苏州地表水样品为样本，研究了不同培
进行检测。 4． 3 研究进展： 由于酶底物法在我国应用时间较 短，且试剂较昂贵，目前国内对于酶底物法的研究
使用） 即可完成检测工作，可在 24h 内同时检测总 和时间的投入。由于多管发酵法本身具有易推广
大肠菌群和粪大肠菌群数，且无需确认实验，可精 性且目前已被广大检测人员掌握，若再加以验证
确检测出 100ml 水样中的 1 个粪大肠菌群，单次 完善，亦可得到应用与普及。
样品操作时间极短（ 一般不超过 1 分钟） ，实验室
中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜 3． 1 检测方法： 接种 5 张大纸片 （ 纸片的规格是
贴在M － FC培养基上，44． 5℃ 温度下培养24 ± 2h， 15cm × 10cm） ，每张接种 10ml 水样； 接种 10 张小
选择在 M － FC 培养基上生长的蓝色或蓝绿色菌 纸片（ 纸片的规格是 5cm × 6cm） ，其中 5 张各接种
稀释比
1： 10 1： 100 1： 1000 1： 10000
接种水量（ ml）
取稀释后取水样 100、10、1、 0． 1、0． 01ml 各接种 1 管
表2
十管法水样接种表
接种量（ ml） 清洁地表水 受污染地表水和废水 备注： 高浓度应做更高的稀释
10 取用
1 取用 取用
0． 1 取用
备注： 若接种量为 100ml，则试管内应装有 50ml 三倍乳糖蛋白胨培养液； 若接种量为 10ml，则试管内应装有 5ml 三倍乳
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测方法
粪大肠菌群检测是一项非常重要的检测方法，可以帮助医生了解肠道菌群的健
康状况，对于一些肠道疾病的诊断和治疗具有重要的指导意义。
目前，常见的粪大肠菌群检测方法主要包括传统培养法、分子生物学方法和代谢产物分析法。
传统培养法是最早被使用的检测方法之一，其原理是将粪便样本在特定的培养
基上进行培养，然后观察和计数不同菌种的数量。
这种方法简单易行，但是存在着检测时间长、无法培养一些难以培养的菌种等缺点。
分子生物学方法是近年来得到广泛应用的一种检测方法，其原理是通过PCR
扩增、测序等技术，对粪便样本中的微生物DNA进行检测和分析。
这种方法可以
快速、准确地获取肠道微生物的信息，但是需要专业的设备和技术人员进行操作，成本较高。
代谢产物分析法是一种新兴的检测方法，其原理是通过检测粪便中微生物代谢
产物的种类和含量，来推断肠道微生物的组成和功能状态。
这种方法无需培养微生物，可以直接反映微生物的活动情况，但是目前仍处于研究阶段，需要更多的临床验证。
除了以上几种方法外，近年来还出现了一些新的粪大肠菌群检测技术，如16S rRNA测序技术、宏基因组测序技术等，这些新技术在提高检测灵敏度、准确性和
全面性方面具有一定优势，但是也存在着技术门槛高、设备昂贵等问题。
总的来说，粪大肠菌群检测方法在不断地发展和完善，不同的方法各有优缺点，应根据具体的临床需求和实际情况选择合适的检测方法。
未来随着技术的不断进步，相信粪大肠菌群检测方法会更加快速、准确、全面，为肠道健康的评估和疾病的诊断治疗提供更好的帮助。
水中粪大肠菌群的测定
初 发 酵 阳 性 结 果
A组 共6 （初）阳性数：5 现象：变乳黄色，产气
初 发 酵 阳 性 结 果
B组 共6管 （初）阳性数：5 现象：变乳黄色，产气
初 发 酵 阳 性 结 果
C组 共6管 （初）阳性数：2 现象：变乳黄色，产气
复 发 酵 阳 性 结 果
C组 共2管 （复）阳性数：2 现象：产气
试剂
仪器设备
单倍乳糖蛋白 胨培养液 三倍乳糖蛋 胨培养液 EC培养液
试管 移液管 漏斗 天平 高压灭菌锅 超净工作台 接种环
实验步骤
培养基的制备 初发酵 复发酵
培养基的制备
1、乳糖蛋白胨培养液 （1）单倍乳糖蛋白胨粉 单倍乳糖蛋白胨培养液 +小倒管（10ml/支，共12支） （初发酵阶段用） （2） 三倍乳糖蛋白胨粉 三倍乳糖蛋白胨培养液+小倒管（5ml/支，共6支） （初发酵阶段用） 2、EC培养粉
序号
备注
①
②
B
10
6
0
2
200
③
C
1000
2
2
结果报告
v 查MPN表，计算MPN值 MPN=2×10÷1×10＝200个／L
v 根据地表水环境质量标准（GHZBI-1991）中， 对环境质量卫生指标粪大肠菌群项目做出明确规 定：
Ⅰ类水质标准值≤200个／L
讨论题
配制好的培养基保存多少时间？存放时应注意哪 些事项？
配制好的培养基不宜保存过久，以少量勤配为宜。 已灭菌的培养基可在4—100C存放一个月。存放 时应避免阳光直射，并且避免杂菌侵入和液体蒸 发。
4.6g----200ml
3.45g----50ml
方法验证水质的粪大肠菌群
方法验证报告测试方法：HJ 347.2-2018测试项目：水质粪大肠菌群编写：日期：审核：日期：批准：日期：水质粪大肠菌群的方法验证1.目的确认所采用的方法适合于在本实验室进行对水质的粪大肠菌群的测定，照此方法检测和检验条件进行水样的粪大肠菌群检测，能保证检验结果的准确、可靠。
2.原理和范围2.1原理将样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产生的酸使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。
44℃复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为是粪大肠菌群。
通过查MPN表，得出粪大肠菌群浓度值。
2.2范围本法适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。
3.主要仪器3.1 净化工作台。
3.2 立式高压蒸汽灭菌器。
3.3恒温恒湿培养箱。
3.4电热恒温鼓风干燥箱。
3.5电子天平。
3.6酒精灯、试管架、试管（带塞子）、平皿、小倒管、三角烧瓶（带塞子）、刻度吸管、采样瓶、接种环。
4.主要试剂乳糖蛋白胨培养液、EC培养液。
5.检验步骤5.1样品稀释与接种5.1.1 15管法将样品充分混匀后，在5支装有已灭菌5ml三倍乳糖蛋白胨培养液的大试管中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品10ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品1ml，在5支装有已灭菌的10ml单倍乳糖蛋白胨培养液中（内有小倒管），按无菌操作要求各加入样品0.1ml。
对于受到污染的样品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样品稀释104倍，然后按照上述操作步骤分别接种10ml 、1ml 、0.1ml 。
当样品接种量小于1ml 时，应将样品制成稀释样品后使用。
按无菌操作要求方式吸取10ml 充分混匀的样品，注入盛有90ml 无菌水的三角烧瓶中，混匀成1：10稀释样品。
水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析——酶底物法与多管发酵法
酶底物法（ Ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ） 是 利 用
大肠 菌 群能 分解 培 养 液 ， 使 之呈 黄 色 ， 以及 大 肠 埃
希 氏菌使 培 养液 在 波长 ３ ６ ６ ｎ ｌ ｎ紫外 光 下 产生 荧 光
Ｗａ ｎ ｇ Ｙａ ｎ，Ｌ ｏ ｎ ｇ Ｊ ｉ ａ ｈ ｏ ｎ ｇ ，Ｘｕ Ｘ ｉ ｏ ｎ ｇ ｆ ｅ ｉ ，Ｌ ｉ Ｊ ｉ ｎ ｇ
（ Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｏ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ，Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ ４ １ ０ ０ ０ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
第３ ８卷第 ７期 ２ ０ １ ３年 ７月
环 境 科 学 与 管理
ＥＮＶＩ Ｒ０Ｎ 佃 ＮＴＡＬ Ｓ ＣＩ ＥＮＣＥ ＡＮＤ Ｍ ＡＮＡＧＥＭ ＥＮＴ
Ｖ０ １ ． ３ ８ ＮＯ ． ７
Ｊ ｕ ｌ ｙ ２ ０１ ３
文 章编 号 ： １ ６ ７ ４— ６ １ ３ ９ （ ２ Ｏ １ ３ ） Ｏ ７— ０ １ ２ ６— ０ ３
结果ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ稳 定 ， 满 足环 境 监 测技 术 要 求 ， 可 用 以评 价 水 质 微 生 物 污 染 程 度 。
关键 词 ： 酶底物法 ； 多管 发 酵 法 ； 粪 大肠 菌 群 中 图分 类 号 ： Ｘ ８ ３ ０ ． ２ 文 献标 识 码 ： Ｂ
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｆ ｅ ｃ ａ ｌ Ｃｏ ｌ ｉ ｆ ｏ ｒ ｍ ｉ ｎ Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｂ ｙ Ｅｎ ｚ ｙ ｍｅ Ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ａ ｎ ｄ Ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｅ— — ｔ ｕ ｂ ｅ Ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ
水中粪大肠菌群检测方法的研究
水中粪大肠菌群检测方法的研究作者：张绮纯刘森林李燕林建华来源：《绿色科技》2016年第16期摘要：运用多管发酵法和滤膜法对水库水、自来水、井水粪大肠菌群进行了检测，结果表明：多管发酵法检测水样，过程耗时费力。
滤膜法检测水样，过程快速简便。
两种方法所得检测结果具有可比性，准确可靠。
关键词：粪大肠菌群；多管发酵法；滤膜法；比较研究中图分类号：X832文献标识码：A 文章编号：1674-9944（2016）16-0109-021 引言粪大肠菌群系指在44 ℃下能生长并发酵乳糖产酸产气的一组微生物。
2001年国家卫生部在《生活饮用水卫生标准》的基础上，重新修定颁布了《生活饮用水卫生规范》，新增加了粪大肠菌群为常规必检项目。
主要以该菌群的检出情况来表示检样中是否有有机物污染。
粪大肠菌群数的高低也预示了其对人体健康危害性的大小。
2 材料与方法2.1 材料乳糖蛋白胨培养基、EC肉汤培养基、M-FC培养基、MilliflexPlusPump过滤器、MILLIPORE滤膜0.45 μm、灭菌蒸馏水、超净工作台、高压蒸汽灭菌器，恒温培养箱，恒温水浴箱，移液管、酒精灯、发酵管。
采集的水库水、自来水、井水放入冰箱保存，5 h内送达实验室检测。
2.2 方法2.2.1 多管发酵法多管发酵法检测粪大肠菌群是指将待测水样按照3个不同的接种量，接种于乳糖蛋白胨培养液中培养，每个接种量5支发酵管，分为初发酵和复发酵两步进行。
初发酵试验：将水样充分混匀，水库水、自来水、井水样接种量分别是10 mL，1 mL和10-1mL，再分别接种到接种体积为10 mL盛有3倍浓度的乳糖蛋白胨培养液的发酵管中，接种量体积为1 mL或少于1 mL接种到普通浓度的乳糖蛋白胨培养液中，每个接种量样品各接种5只发酵管。
将上述发酵管放入37±0.5 ℃培养箱中培养 24±2 h。
若培养液由原来的紫色变为黄色，则证明产酸；若小倒管产生气泡，则说明产气，对各个管产酸产气阳性情况做好记录。
水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析
水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析湖南衡阳421200摘要:多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法是目前国内测定水中粪大肠菌群的常用标准方法。
分别从方法的检出限、方法操作、准确度和方法间的一致性四个方面对水中粪大肠菌群的测定进行了对比研究，总结出各方法的适用范围和优缺点，为分析人员根据实际条件和水样类型选择最佳方法提供参考。
关键词:粪大肠菌群;酶底物法;多管发酵法;滤膜法;纸片快速法粪大肠菌群是在 44．5℃ 温度下能生长并发酵乳糖产酸，产气，需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，主要来自粪便。
粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，可以指示水体是否遭受粪便污染，直接指示生活污水的污染，间接反映肠道致病菌的污染风险，是水质检验中非常重要的卫生指标。
目前，国内测定水中粪大肠菌群的标准分析方法有多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法。
多管发酵法早在 1985 年就列入了《生活饮用水标准检验方法》( GB 5750 －85) ，至今已经沿用了三十多年，是行业内公认的粪大肠菌群测定的经典方法，卫生、水利、环保等行业均有多管发酵法的方法标准。
美国公共卫生协会( APHA) 出版的《水和废水标准检验方法》( 20 版) 中方法 9221E 也采用的是多管发酵法; 滤膜法采用直接计数特征菌落的方式，不同于其它三种方法采用 MPN 法计数，其应用广泛性仅次于多管发酵法，美国 APHA 方法9222D和ISO9308 － 1: 2014采用的是滤膜法; 纸片快速法在西方发达国家采用较少，主要在一些发展中国家使用，环保部在 2015 年发布了测定水中粪大肠菌群的纸片快速法; 酶底物法利用粪大肠菌群在邻硝基苯－β － D －吡喃半乳糖苷培养基上培养产生β － D －半乳糖苷酶，该酶可以分解色源底物释放出黄色的邻硝基苯酚，通过颜色变化定性，MPN 法定量。
我国没有酶底物法测定粪大肠菌群的现行国家和行业标准，美国APHA 方法 9221 E、ISO 9380 － 2: 2012 和 GB5750． 12 －2006均将酶底物法列入标准，但仅限测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌。
水质粪大肠菌群的测定
将10g蛋白胨、3g牛肉寖膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水 中，调节溶液pH为7.2—7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混 匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于115℃高压灭菌器中灭菌 20min，贮存于冷暗处备用。 (此溶液用于检验大肠菌群)
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液：1.6g溴甲酚紫用无水乙醇定容到100mL。
3.从龙头装置采集样品时,不要选用漏水龙头，采水前将龙头打开至最大, 放水3~5min,然后将龙头关闭，用火焰灼烧约3min灭菌或用70%~ 75%的酒精 对龙头进行消毒，开足龙头，再放水1min，以充分除去水管中的滯留杂质 。 采样时控制水流速度，小心接入瓶内。
4. 采集地表水、废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭菌过的专用 采样装置采样。在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以 免不同层次的搅扰。
无论是哪一种方法，都是利用其可在高温生长并发酵乳糖 产酸、产气的特点，所以实验过程最终要的环节是严格地 控制好温度。
(1) 初发酵
将样品加入
培养基的试管中，37℃初发酵富集培养，大肠
菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸、产气，产生的酸使溴甲酚紫指
示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。 (
③耐热，在44-44.5℃的高温条件下仍可生长繁殖。 (耐热大肠菌群)
粪大肠菌群是大肠菌群的一种，是生长于人和温血动物肠道中的一组 肠道细菌，随粪便排出体外，约占粪便干重的1/3以上，故称为粪大 肠菌群。
受粪便污染的水、食品、化妆品和土壤等物质均含有大量的这类菌群。 若检出粪大肠菌群即表明已被粪便污染。
1.
将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。
每个样品至少用
滤膜法测定水质中粪大肠菌群方法验证10
检测分析方法验证报告报告编号:xxxxxxx方法名称：水质粪大肠菌群测定滤膜法验证人员：xxx xxx审核人员：xxx验证日期：xxxx年xx月xx日xxxxxx有限公司水质粪大肠菌群测定滤膜法一、方法依据本方法依据《水质粪大肠菌群的测定滤膜法》（HJ 347.1-2018）用滤膜法测定水中粪大肠菌群，适用于地表水、地下水、生活污水以及工业废水的粪大肠菌群测定。
本方法的检出限为，当接种量为100mL时，检出限为10CFU/L；当接种量为500mL时，检出限为2CFU/L。
二、方法原理将待测样品通过孔径为0.45μm的滤膜过滤，然后将滤膜置于MFC选择性培养基上，在44.5℃条件下培养24h，粪大肠菌群生长并发酵乳糖使指示剂变色，通过颜色判断是否产酸，并通过呈蓝色或蓝绿色菌落计数，测定样品中粪大肠菌群浓度。
样品采集时可加入硫代硫酸钠溶液消除活性氯对样品的干扰，或加入乙二胺四乙酸二钠溶液消除重金属离子对样品的干扰。
参加验证的人员情况登记表使用仪器情况登记表使用试剂及溶剂登记表三、分析步骤3.1样品过滤3.1.1待检样品组本次选用的待检样品为xx水源水，其接种量为100mL、10mL,最小过滤体积为10mL，接种量小于10mL时，应逐级稀释。
在无菌操作下用灭菌镊子夹取无菌滤膜贴放在已灭菌的过滤装置上，固定好过滤装置，将样品充分混匀后抽滤，以无菌水冲洗器壁2次。
样品过滤完后在抽气3s。
3.1.2阳性对照：取一粒大肠埃希氏菌（ATCC 25922）磁珠置于BHI液体培养液中，24h培养，使之菌悬液浓度在109CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10-7至10-8。
取10-7大肠埃希氏菌菌悬液进行接种，其接种量为100mL、10mL，最小过滤体积为10mL，接种量小于10mL时，应逐级稀释。
在无菌操作下用灭菌镊子夹取无菌滤膜贴放在已灭菌的过滤装置上，固定好过滤装置，将样品充分混匀后抽滤，以无菌水冲洗器壁2次。
大肠菌群检测方法及研究进展
大肠菌群检测方法及研究进展大肠菌群常常被当作食品、水体中肠道病原体污染的指征，寻求建立快速、敏感的大肠菌群检测方法一直是关注的问题。
本文主要归纳了检测大肠菌群发酵法、滤膜法、酶底物法、纸片法、聚合酶链式反应技术、荧光原位杂交技术、试剂盒法、自动化检测方法等的各自优缺点及研究进展。
标签：大肠菌群；检测方法；研究进展大肠菌群是指一群能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，包括埃希氏菌属（大肠杆菌）、肺炎克雷伯菌属、柠檬酸杆菌属和肠杆菌属。
多年来，国内外都以大肠菌群作为食品、水体污染的常用指示菌之一，并评价和判断食品被粪便污染的程度和有无肠道致病菌污染的可能。
肠道病原体是最为常见的污染食品、水体的病原微生物，动物（包括人类）的排泄物是其主要来源，每年因肠道病原体污染水或食物造成人类食物中毒的例子很多。
由于大肠菌群在肠道菌群中所占比例最大，在污染食品、水体中的含量远远高于其他肠道病原体，因此大肠菌群常常被当作食品、水体中可能存在肠道病原体的指征。
大肠菌群数量越多，表示受到粪便污染的程度越大，也就是肠道病原体侵入的可能性越大，在大肠菌群中又以检测大肠杆菌（Escherichia coli，E coli）最为常用。
因此，人们对大肠菌群检测技术的研究越来越多，要求越来越高。
目前国内外现行的检测技术主要有以下几种：1 传统方法传统方法主要包括多管发酵（multiple—tube fermentation，MTF）技术和膜过滤（membrane filter，MF）技术。
这两种技术普遍得到世界各国的批准应用，例如具有代表性的美国环保局（EPA）和法国标准化联合会（FSA）分别在2O 世纪9O年代批准在本国实施，并制定了相应的判别标准。
1.1 多管发酵技术试管发酵技术被用作大肠菌群检测至今已有8O年的历史，其原理是依据大肠菌群能够发酵乳糖、产酸、产气的特点。
将样品进行系列10倍稀释，分别接种到含有乳糖培养液的试管中，在36±1℃培养24 h，观察产酸、产气情况，完成初发酵试验阳性样本还需进行确认试验[1]。
水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究
水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究摘要：本文采用固定底物酶底物法与传统多管发酵法对水中粪大肠菌群进行比对试验，比较两者检测结果的一致性。
结果表明，两种方法在结果一致性方面相关性好，无统计学意义上的显著性差异，与多管发酵法相比，酶底物法具有简便快速、结果准确、特异、实验过程污染的可能性低、无二次污染等优点。
关键词：固定底物酶底物法多管发酵法粪大肠菌群Comparative Study on Two Detection Methods of Fecal Coliform in Water (Thermotolerant Coliforms )Luo Yun Liuzhou Environmental Protection Monitoring Station, Guangxi 545001Abstract: This paper conducts a comparative test on fecal coliform in water with Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique and traditional Multiple-tube fermentation technique and compares the consistency of detection results. The result shows that both methods have a good correlation in the consistency of results and there is no significant difference in statistical sense. Compared to multiple-tube fermentation technique, enzyme substrate technique has such advantages as simplicity, rapidness, accurate result, specificity, low possibility of pollution in the experimental process and secondary pollution avoided.Key words: Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique; Multiple-tube fermentation technique; Fecal coliform粪大肠菌群（耐热大肠菌群）是水质污染的重要指标之一。
水体中耐热大肠菌群的研究意义及检测方法研究进展
水体中耐热大肠菌群的研究意义及检测方法研究进展水是生命之源，而水体中的微生物则是我们生活中不可或缺的一部分。
随着工业和城市化进程的加速，水体污染问题日益严重。
耐热大肠菌群是水体中常见的一类微生物，其存在往往意味着水质受到了细菌污染，对人体健康造成潜在危害。
对水体中耐热大肠菌群的研究意义重大，而其检测方法的研究更是至关重要。
一、研究意义1. 揭示水质污染情况水体中的耐热大肠菌群是源自人或动物粪便的一类细菌。
当水质受到污染时，这些细菌往往会大量繁殖，进而导致水体污染程度显著增加。
研究水体中耐热大肠菌群的分布和数量，能够揭示水质污染的程度，为水环境保护和治理提供重要参考。
2. 评估水体安全耐热大肠菌群中的一部分菌株可能对人体健康造成影响，甚至引发疾病。
通过研究耐热大肠菌群的分布情况，可以评估水体的安全性，及时采取措施保障人类的健康。
3. 发展新型检测技术耐热大肠菌群检测方法的研究，不仅可以帮助我们更准确地了解水体情况，也能促进检测技术的发展，为水环境监测提供更加高效、便捷的手段。
二、检测方法研究进展1. 基于生物学特性的检测方法目前常见的耐热大肠菌群检测方法主要基于其生物学特性，包括培养法、PCR法和免疫法等。
培养法是最传统也是最常用的检测方法，通过培养分离细菌，并结合生化反应进行鉴定。
PCR法则是通过扩增目标基因片段，从而快速准确地检测耐热大肠菌群的存在。
免疫法则是利用抗原与抗体反应的原理，通过免疫学方法检测耐热大肠菌群。
2. 基于基因组学的检测方法随着基因测序技术的发展，基于基因组学的检测方法逐渐成为研究热点。
通过对耐热大肠菌群基因组的深入研究，可以发现更多的特异性基因片段，从而设计更为准确的检测方法。
基因组学技术还可以帮助我们了解耐热大肠菌群的进化和遗传特性，为后续研究提供更多的参考。
3. 基于纳米技术的检测方法纳米技术的应用为耐热大肠菌群的检测带来了新的可能。
纳米材料具有高灵敏度、高选择性和高稳定性的特点，可以用于设计更加灵活的检测方法。
水体中耐热大肠菌群的研究意义及检测方法研究进展
水体中耐热大肠菌群的研究意义及检测方法研究进展水体中耐热大肠菌是一类能够在高温环境下存活并繁殖的大肠杆菌的一群。
它们通常存在于人类和其他动物的肠道中，也常常会随着粪便进入水体中。
水体中的耐热大肠菌群的研究对于保障水质安全、防止水源污染以及预防水源相关疾病的传播具有重要意义。
本文将对水体中耐热大肠菌群的研究意义及检测方法的研究进展进行探讨。
一、研究意义1.1水质安全水是生命之源，水质安全关系到人民群众的身体健康和生活质量。
耐热大肠菌群是一类存在于水体中的潜在病原菌，其存在可能会对水质造成潜在威胁。
对水体中耐热大肠菌群的研究能够帮助提高对水源安全的认识，从而采取相应的防控措施，保障人民饮用水的安全。
1.2水源污染由于人类和动物的排泄物中含有大量的耐热大肠菌，如果这些排泄物进入水体而未经处理，就会导致水源的污染。
耐热大肠菌群是水体中细菌污染的一个重要指标，研究水体中耐热大肠菌群的分布规律和影响因素，对水源的保护和治理具有重要意义。
1.3疾病传播水体中的耐热大肠菌可能成为疾病传播的潜在媒介。
一旦水体中的耐热大肠菌超标，就会增加人群接触致病微生物的风险，导致水源相关疾病的传播。
研究水体中的耐热大肠菌群对于预防疾病的传播具有非常重要的意义。
二、检测方法研究进展2.1传统培养方法传统的耐热大肠菌检测方法是通过将水样在特定培养基上培养，然后观察菌落形态进行鉴定。
这种方法简单易行，但需要较长时间才能得到结果，且存在对检测人员的操作技能有一定要求，并且存在漏检、误检的问题。
2.2分子生物学方法随着分子生物学技术的发展，PCR技术和实时荧光定量PCR技术已经成为耐热大肠菌检测的主要方法之一。
PCR技术可以准确、快速地检测出目标菌群的存在，并且对于样品的处理要求也较低，适用性较强。
实时荧光定量PCR技术还可以实现对菌群数量的精准检测，因此在水体中耐热大肠菌的检测中得到了广泛的应用。
2.3生化方法生化法是通过测定目标微生物在水样中的代谢产物来确定目标微生物的存在和数量。
比较快速检测水中粪大肠菌群的方法
f论与综述清洗世界Cleaning World第36卷第12期2020年12月文章编号：1671-8909 ( 2020) 12-0121-003比较快速检测水中粪大肠菌群的方法刘招椿(宁德市环境监测站东侨分站，福建宁德 352 1000)摘要：目的：粪大肠菌群集中产生在温血动物和人的粪便当中，其数量的多少在一定程度上直接代表着水体受粪便污染的具体程度，是目前国际上所通行的对受粪便污染水质监测的重要指示菌，其也是对城市污水特别是 生活污水进行综合评价的关键指标之一。
现阶段，我国环境监测部门主要采用多管发酵法和膜过滤法作为标准的 检测方法，但是这两种方法在检测过程中所花费的时间往往都比较长，一般需要两三天的时间，并且实验步驟十 分繁琐，对于环境的要求非常高。
为此，简便快速的检测方法至关重要。
关键词：水中粪大肠菌群；快速检测；固定底物酶底物法；多管发酵法中图分类号：X 321 文献标识码：A〇引言分析水中粪大肠菌群快速检测方法-固定底物酶底 物法与多管发酵法的比较，进而为实际检测工作提供更 多更好的检测方法。
方法：在检测水中粪大肠菌时分别利用固定底物酶 底物法与多管发酵法进行检测，在此基础上对两种方法 的检测结果进行比较。
结果：对大肠菌群进行科学检测 时，利用酶底物法与多管发酵法所检测出来的结果，在 一定程度上具备非常强的相关性，在浓度范围相对较低 的状态下样品浓度所具备的相关性比高浓度范围更好， 二者差异有统计学意义。
结论：利用酶底物法的检测结 果在一定程度上会比多管发酵法的检测结果低，这极有 可能与酶底物法检测的大肠埃希氏菌、多管发酵法检测 的粪大肠菌群所造成的，当置信度控制在95%的条件 下是允许存在差异的，并且与环境各方面的监测要求十 分相符，基于检测水中粪大肠方法成本价格、准确度、 灵敏度、简易性及定量范围的考虑，建议选用97孔定 量盘法与酶底物法检测水中粪大肠菌群。
1实验部分1.1仪器设备和试剂材料(1) 仪器设备。
水中粪大肠菌群测定方法
水中粪大肠菌群测定方法嘿，咱今儿就来说说这水中粪大肠菌群测定方法。
你想想看啊，水这东西，咱天天都得用，喝的、洗的、用的，要是水里有啥不干净的东西，那可不得了！这粪大肠菌群就是得重点关注的家伙。
咱先来说说多管发酵法吧。
就好像是个大侦探在找线索一样，把水样分成好多份，分别放到不同的管子里，给它们创造适合的环境，然后等着看有没有啥反应。
这就像是在观察一群小“嫌疑人”，看谁露出马脚。
如果有管子里出现了一些特殊的现象，嘿，那可能就找到目标啦！还有滤膜法，这就像是给水流过一个特别的滤网。
把水过滤一遍，那些粪大肠菌群就可能被留在滤膜上。
然后再去观察这个滤膜，看看有没有它们的踪迹。
这就好像是在沙滩上找贝壳，仔细地搜寻着。
平板计数法也挺有意思呢！把水样涂在平板上，就像给它们安排了一个小舞台，然后等着看哪些家伙会冒出来，在这个小舞台上“表演”。
通过观察这些“小演员”的数量和状态，就能大概知道水里的情况啦。
你说，这测定方法是不是挺神奇的？就像是给水里的这些小东西来了一场大排查。
咱得认真对待啊，不然喝了不干净的水，那肚子可不得闹腾啊！这可不是开玩笑的事儿。
而且啊，测定的时候可得细心再细心，不能有一点马虎。
这就跟咱做一件重要的事情一样，得全神贯注，不能出岔子。
要是稍微不注意，可能就错过了关键的信息，那可不行。
想象一下，如果因为测定不准确，导致我们以为水是干净的，结果却不是，那会带来多大的麻烦呀！所以说，这水中粪大肠菌群测定可真是个重要的活儿，一点都不能含糊。
咱普通老百姓可能平时不太会去做这个，但咱得知道有这么回事儿，得关注咱喝的水是不是安全的。
这也是对自己和家人负责呀！可别小看了这小小的粪大肠菌群，它们要是在水里闹腾起来，那可不好收拾呢！总之呢，水中粪大肠菌群测定方法是保障我们用水安全的重要手段，我们得重视起来，让我们的生活用水干干净净、健健康康的，这样我们才能放心地使用呀！你说是不是这个理儿？。
废水中粪大肠菌群的检测方法研究
废水中粪大肠菌群的检测方法研究摘要：多管发酵法和滤膜法是中国环境保护行业标准（HJ/T 347-2007）法定的检测废水中粪大肠菌群的方法。
本文基于滤膜法，对其培养时间进行研究，优化了检测方法。
结果表明：优化后的检测方法与行业标准方法得出的检测结果一致，该优化后的方法适用于废水中粪大肠菌群的检测。
关键词：废水，粪大肠菌群，滤膜法Study on Detection Method of Fecal Coliform in WastewaterABSTRACT：Manifold zymotechnics and filter membrane are two methods for the detection of fecal coliform bacteria in wastewater according to China Environmental Protection Industry Standard（HJ/T 347-2007）. In this paper，the culture time was studied based on the filter membrane method，and the detection method was optimized. The results show that the optimized method is in accordance with the test results obtained by the environmental protection standard detection method，andthe optimized method is suitable for the detection of fecal coliform bacteria in the wastewater.Key words：Waste water，Fecal coliform，Filter membrane method 粪大肠菌群（Fecal Coliform）是总大肠菌群的一部分，生物学特性为：产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
水中粪大肠菌群标准
水中粪大肠菌群标准水中的粪大肠菌群是指一种常见的肠道细菌，它们存在于人和动物的粪便中。
这些细菌在水中存在的时间很短，但却能给水质带来巨大的影响。
因此，监测和控制水中的粪大肠菌群是确保水安全的重要措施之一。
粪大肠菌群是一类革兰氏阴性菌，包括大肠杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌等。
它们存在于人和动物的肠道中，是肠道微生物群的一部分。
由于粪大肠菌群主要存在于粪便中，因此它们的存在通常被认为是粪便污染的指示物。
通过监测水中的粪大肠菌群数量，可以评估水体是否受到粪便污染，从而判断水质是否符合安全标准。
粪大肠菌群对人体健康造成的风险主要是通过食物和水传播。
当水中存在大量粪大肠菌群时，可能存在肠道病原微生物的传播风险，如腹泻、呕吐等疾病。
尤其是在饮用水中存在粪大肠菌群时，会直接暴露于人体消化系统，增加患病的风险。
因此，定期监测水中的粪大肠菌群数量，并采取相应的控制措施是非常重要的。
通过实验室的分析方法，可以快速准确地检测水中的粪大肠菌群数量。
常用的检测方法包括培养法、PCR法和免疫学方法等。
其中，培养法是最常用的方法之一。
通过将水样接种在含有特定培养基的培养皿中，培养出粪大肠菌群，并根据菌落数量来评估水样中的细菌浓度。
PCR法则通过检测目标基因的特异性序列来定量粪大肠菌群的数量。
免疫学方法则利用特异性抗体与粪大肠菌群中的抗原结合，进而检测和定量细菌的浓度。
除了监测水中的粪大肠菌群数量，还需要采取相应的控制措施来保证水质安全。
首先，水源的保护是关键。
确保水源的清洁和无污染是预防粪大肠菌群污染的首要步骤。
其次，水处理是重要的环节。
通过采用适当的水处理技术，如过滤、消毒等，可以有效地去除水中的粪大肠菌群。
此外，定期检查和维护水处理设施的运行状况也是必要的。
最后，加强水源周边环境的管理和监管，限制污染源的排放，也是控制粪大肠菌群污染的重要措施之一。
水中的粪大肠菌群标准是确保水质安全的重要指标。
通过监测和控制水中的粪大肠菌群数量，可以评估水质是否受到粪便污染，从而采取相应的控制措施。
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等 方法 ， 对水中粪大肠菌群检 测结果更具备使用价 值。
【 关键词 】 水体 ； 粪大肠 菌群 ； 检测 方法 【 中图分类号 】 Ｒ １ ２ ３ ． １ 【 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号 】 ２ ０ ９ ５ — ２ ０ ６ ６ （ ２ ０ １ ５ ） １ ４ — ０ ０ ０ ３ — ０ ２
１ 粪大肠菌群检 测方法的介绍
ｌ ｌ前 已有 的 粪 大 肠 茵 群 的检 测 方 法 包括 多 管 发 酵 法 、 ｆห้องสมุดไป่ตู้快
１ － ３ 快速 纸 片法
通 过 纸 片 上 呈现 的 红 色菌 落 ． 对粪大肠茵群进行判 断， 如 速 纸 片 法 以及 滤膜 法和 酶 底 物 法 、 荧光 原 位 杂 交技 术 和 Ｒ Ｐ Ｒ 技 术等 ， 因 为 荧 光 原位 杂 交技 术和 Ｒ Ｐ Ｒ技 术 需要 消 耗 大 量 的 果 茵落 的 周 围 出现 黄 圈是 因 为 粪 大 肠 茵 群在 对乳 糖 产 酸进 行 仪 器费用， 且 操 作 不 方便 ． 因此 在 实 际的 检 测 中很 少用 这 两 眼 分 解 时 产 生 的 变 色现 象。 检 测方 案 ： 技术． 本 文 将 通 过 对 多管 发 酵 法 、 滤 膜 法 以及 快 速 纸 片 法 和 酶
该 方 法 是 通 过 大肠 菌群 中产 生 的 Ｂ 一 半乳糖苷酶对 Ｐ Ｇ 进 行分解 ， 使 其 培 养 液 呈现 出黄 色 ， 以及 通 过 大肠 埃 希 氏 茵 中 产
养液； 取容量 为 ｌ ｍＬ的 等量 水样 ， 分 别 添加 到 ５支 试 管 中 ． 该 试 管 中舍 有 容 量 为 １ ０ ｍ Ｌ且 浓 度 一 般 的 乳 糖 蛋 白胨 培 养 液 ：
的 条件 下进行 培 养 ． 在 ｌ ８ ￣ ２ ４ ｈ后 对 其 培 养 结果 进 行 观察 ． 纸片 上 出现 紫红 色菌 落或 者 黄 圈 以及 红 晕 等情 况都 为 阳性 ． 然后 通
过 呈现 出阳性 的 纸 张 ． 查 询 其 ＭＰ Ｎ值 。 得 出相应 的结 果Ｐ ｌ 。
１ ． ４ 酶 底物 法
Ｌ ｏ Ｗ ｃ Ａ Ｒ Ｂ ０ Ｎ Ｗｏ Ｒ Ｌ Ｄ ２ ０ １ ５ ， ５
环境保护
试论水 中粪大肠 菌群检测方法及其研究进展
王菊花 （ 重庆市 渝北区 环境监测站， 重庆 渝北４ ０ １ ４ ２ ０ ）
【 摘 要】 当水体 受到粪便 污染后， 容易使肠道病 毒得到肆意扩散与传播 ， 而采用科学 的手段 对粪大肠 菌群进行检 测， 能有效 的体现 出水 体中
强， 是 革 兰 氏 阴性 无 芽胞 杆 菌 中的 一种 。 这 类 茵群 是 当前 国 内 面朝 上 ， 禁止 滤膜 和 培 养 基 之 间 出现 气 泡 ， 通 过 将 倒 置 的 平 板 外 环 境 监 测 部 门对 水 体 污 染程 度 进 行 检 测 的相 关之 一 ．在 卫 放 入 恒 温箱 的 方 式进 行 培 养 ， 此 时 恒 温 箱 的 温度 为 ３ ７ ℃， 培 养 生 学方 面有 一 定 的 意 义 。 通过 对 水 中的 粪 大肠 茵群 及 时进 行 时 间为 半 小 时 ，然后 再 将 其 移 动 到 温 度 为 ４ ４ ℃的 恒 温 箱 内进 检测 ， 能使 相 关人 员能 尽 快 了解 监 测 水 域 的 水 体 的 污 染 状 况 ． 并 对 其 采取 相 应 预 防和 控 制 措施 有 着 重要 影 响［ ” 。 行 培养 ， 培养 的时 间为 １ ８ ～ ２ ４ ｈ ． 在 Ｍ— Ｆ Ｃ 培 养 基 中选 择 生 长 颜 色为 蓝 色或 者 蓝绿 色的 茵 落 开展 计数 工作 ，并 通过 该数 量 对 样 品 中含 粪 大 肠 茵数 进 行 计 算 。
底 物 法 进 行 具 体 介 绍
１ ． １ 多管 发酵 法介 绍
样 品接 种 量 和 多 管发 酵 法 中一 样 。 选 择规 格 为 １ ５ ｅ ｍ ｘ ｌ ０ ｅ ｍ 的 ５张 大纸 片 ，并在 每 张纸 片 中接 种 容 量 为 １ ０ ｍＬ的样 品 ， 然
ｃ ｍｘ ６ ｃ ｍ的 １ ０张 小纸 片进 行 接 种操 作 ．其 中 ５ 该 方法 主 要 是 通 过 观 察 大肠 杆 菌 群 在 繁 殖 过 程 中让 乳 糖 后 选择 规格 为 ５ 张 接种 容 量 为 ｌ ｍ Ｌ的 样 品 ． 其 余 ５张 均接 受稀 释 后 的样 品 ， 稀 发 酵 的 同 时使 乳 糖 蛋 白胨 的 营养 液 变黄 且 产 生 气 泡 的 现 象 为 释 的 比为 １ ： １ ０ ， 容量为 ｌ ｍ Ｌ 。将 这部 分 纸 片放 置在 温度 为 ４ ５ ℃ 依 据。
检测方案 ：
（ １ ） 初 发 酵 试 验 步骤 ： 通 过 无 菌操 作 汲取 容 量 为 １ ０ ｍ Ｌ的 水样 ． 确保 该样 品属 于混 合 摇 匀转 态 ． 将 水 样 分 别 装 入 到 ５支 试 管 中， 该 试 管 中 均含 有 容 量 为 ５ ｍ Ｌ三 倍 浓缩 乳 糖 蛋 白胨 培
粪 大肠 菌 群 属 于 能在 温 度 为 ４ ４ ． ５ ｏ Ｃ ± ０ ． ５ ￣ Ｃ 的 条 件 下 存 活 保 持 干 净 ， 通过 这样 的方 式使 样 品 中的细 菌都 集 中在 滤 膜 上 。 的 大肠 茵群 ，该 类 茵 群 主要 由 埃 希 氏 菌属 和 产 气杆 菌属 以及 （ ２ ） 细 茵 的 培 养 步骤 ： 利 用 镊 子 将 滤 膜 移 动 到 Ｍ— Ｔ Ｅ Ｃ培 枸 缘 酸 菌 属 和 副 大 肠 茵属 构 成 ．具 备 耐 热性 ．水 中存 活 力较 养 基 上 ， 使 用镊 子 时 ， 应 注 意 夹 住 滤 膜 的 边 缘 。 将 滤 膜 的 拦 截