粪大肠菌群的测定步骤

粪大肠菌群的测定

1、半个月前配好初、复发酵所需培养液

2、采样时用500ml 广口玻璃瓶分开采样，牛皮纸封口

3、操作

（1） 培养液

初发酵 单倍乳糖蛋白胨培养液：

蛋白胨 10 g

牛肉浸膏 3 g

乳糖 5 g

氯化钠 5 g

蒸馏水 1000ml

调节PH 为7.2—7.4（NaOH ）

6%溴甲基紫乙醇溶液 1 ml 充分混匀后 10ml （三倍是5ml ）分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。

单月13个地表水（每个水样需10个单倍，5个三倍），2个创业（每个水样需15个单倍）。共190个（1900ml ）单倍，65个三倍（325ml ）。

双月10个地表水，2个创业。共130个（1600ml ）单倍，50个三倍（250ml ）。 创业的水一个月采两次水样

复发酵 EC 培养液

胰胨 20 g

乳糖 5 g

胆盐三号 1.5 g

磷酸氢二钾 4 g

磷酸二氢钾 1.5 g

氯化钠 5 g

蒸馏水 1000ml

充分混匀后 10ml 分装于试管中，盖紧塞于蒸气锅中灭菌20min （0.1—0.5kpa ），冷却后于药品储存箱保存。

三倍乳糖蛋白胨培养液： 蛋白胨 30 g 牛肉浸膏 9 g 乳糖 15 g 氯化钠 15 g 蒸馏水 1000ml 溴甲基紫乙醇溶液 3 ml

（2）做样

初发酵：

地表水15根管为一个水样。5根为一组。第一排为5ml三倍培养液，加10ml水样；第二排为10ml单倍培养液，加1ml水样；第三排为10ml单倍培养液，取1ml水样稀释至10ml后再从中取1ml至装有培养液的试管。

（10、1、0.1的取样量）

创业，每个水样15根单倍。同上逐级稀释，取样量为0.1、0.01、

0.001ml。

将初发酵管放入培养箱中培养，温度为37℃±0.5℃，时间为24h±2h。

观察：产酸产气为阳性，即变色且有气泡产生，可轻击试管查气泡。

复发酵：

呈阳性的试管进行接种后，做复发酵。将阳性的试管中溶液接种（接种环）到EC培养液中，放在45℃±0.5℃的水浴锅中培养24h±2h。水浴锅液面应高于管中液面。

观察：产气（有气泡）则证实为阳性。记录阳性试管数，查表可得MPN值。

结果表示单位为：个/L