BRM-SJS大鼠长期毒性试验(精)
长期毒性作用及其试验方法演示文稿
☆如研究计划生育用药，应选择猴或其他大动物。
Beagle犬：原产英国，纯种小猎兔犬 Beagle犬的特点：体型小,毛短,性情温和,亲人,抗病力强
缺点：价格昂贵
二、实验动物
2. 起始月(周)龄 一般选择较年轻的或正处于生长发育阶段的动物。
长期毒性作用及其试验方 法演示文稿
第一节 基本概念和目的 第二节 试验设计原则及方法
第一节
基本概念和目的
一、定义
长期毒性试验是指试验动物连续多日接触较大 剂量的药物所引起的中毒效应，为观察这种中毒效 应而设计的毒理学试验称之为长期(慢性)毒性试验。
急性毒性试验
是为观察和评价急性毒性的有害作用或中毒反应 而设计的一种毒理学试验。研究药物一次或24小 时内多次给予受试药物后，一定时间内所产生的 毒性反应。
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物 三个剂量 给药途径应与临床拟用途径相同
一、一般原则和要求
总体原则 选用两种实验动物
至少在两种动物体上进行，兼顾雌雄性别。
一、一般原则和要求
总体原则
三个剂量
剂量至少分为高、中、低三个档次。 高剂量组应能充分反映药物的毒性， 低剂量组不出现毒性反应。 同时设一溶剂 ( 或赋形剂 ) 对照组或 已知药物毒性对照组。
第二节
试验设计原则及方法
一、一般原则和要求
基本原则 全面、严谨、合理 整体性 随机、对照、重复
一、一般原则和要求
基本原则 整体性
长期毒性试验不能与药效学、药代动 力性和其他毒理学研究割裂，试验设 计应充分考虑其他药理毒理研究的试 验设计和研究结果。长期毒性试验的 结果应该力求与其他药理毒理试验结 果互为印证、说明和补充。
急性毒性及长期毒性标准操作技术
急性毒性试验佚名试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1．动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%。
实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2．饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3．受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1．伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2．最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3．最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4．单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
长期毒性
二、动物本试验选用两种动物大鼠和狗,均购自锦州医学院实验动物中心。
经过一周检疫和适应 ,选择一般状况良好的动物用于试验。
分组时称量体重 ,雄性大鼠重1 2 2.7 士 2 9.5 g,雌性大鼠重 13 6.8 土 2 6.7 g ;雄狗重1 0.8 土 2.7 k g,雌狗重9.9 士 2.6kg。
试验方法1.分组鉴于急性毒性试验的给药量超过了限度试验的剂量(小白鼠注射给药超过0.2 g/100 k g), 可考虑只设一个剂量组。
另外,文献报告一次静脉给药的最大容量,大鼠和狗分别为0.l m l/10g 和20 m l / 只因此,本试验确定设二个剂量组:低剂量相当于上述最大容量(大鼠为10m l / k g,狗为l.7 m l / k g),高剂量则根据予试验的结果再扩大5、7倍(大鼠为4 5 m l/ k g,狗为1 3 m l / k g)。
为了比较,同时设生理盐水对照组(大鼠一次静注4 5m l / k g,狗为13 m 】/ kg )。
分组时将雌雄大鼠和狗按体重分层,再随机分配。
大鼠每组雌雄各1 0 只,狗为各2只。
2 给药方法连续2 8 天,每天一次,按规定剂量给动物静注复方甘油注射液。
注射速度1 5 ~ 2 0m l /mi n。
注射部位,大鼠取尾静脉,狗取后肢小隐静脉。
3 观察与检查3.1 一般症状观察、体重和进食量测定每天午前、午后两次仔细观察动物的外形、活动有无异常。
每周一次测定动物体重和进食量。
3.2血液学及血液生化检查试验开始前一天及连续.给药 1 4、2 8天后,各对动物进行一次检查.血液学指标为:红细胞计数、血红蛋白、白细胞总数及分类、血小板计数。
血液生化指标有:谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、尿素氮及血清钠。
采血方法,大鼠,头两次以钳取眼球法,末次以断头法取血,狗则三次都是从后肢小隐静脉取血。
每次采血前须让动物断绝饮食8 小时,目的减轻药物对血液稀释的影响。
3.3 心电图检查试验前后给每只狗各做一次心电图( l导联) 检查。
长期毒性实验
长期毒性试验操作规程1.目的：观察连续重复给予受试物对动物所产生的毒性反应，首先出现的症状和严重程度，毒副反应的靶器官及其恢复和发展情况。
确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供参考。
2. 动物和材料：2.1动物一类新药首选Beagle犬和猴类，应写明供应单位。
根据试验周期的长短，一般选择性成熟青年动物为受试动物。
二、三、四类新药要求放松一些，但要根据实际情况选择合适的实验动物。
实验前大动物应检测心电，并做血液学和血液生化学分析，指标在正常范围内的动物，方可作为受试动物。
小动物分组方式通常采用随机分组，雌雄各半。
大动物通常每组动物4-6只，雌（无孕）雄各半，随机分组。
2.2 受试物和实验室3.试验方法3.1 剂量和分组3.1.1 一般设2-3个剂量组，一类新药应设三个剂量组和一个对照组。
剂量一般用g（或mg）/kg或单位/kg表示。
低剂量组略高于临床试验人用日最高剂量或按体表面积折算的动物药效学有效剂量。
低剂量组不应出现毒性反应。
高剂量组原则上应产生明显或严重的毒性反应或个别动物死亡。
在高、低两个剂量之间按等比关系再设置一个中剂量。
3.1.2 对照组不给受试物仅给等容量的溶媒或赋形剂。
如这些成分可能有毒性时，应另设一组对照组。
限度试验：如果经小鼠急性毒性口服给药剂量大于5g/kg或注射给药剂量大于2g/kg仍不出现毒性反应和死亡或仅个别动物有毒性反应时，可考虑只作一个高于临床拟用剂量50倍的剂量。
3.2 给药途径与方法3.2.1 给药应与临床用药途径一致。
3.2.2 口服药途径每天于喂食前定时给予。
若将受试物混在饲料、水中给予，每动物应分笼饲养，并采取严格有效措施，以保证每只动物按量在一定时限内服完。
3.2.3 经静脉、肌肉或皮下途径，其注射部位可于四肢或臀部等处交替进行。
3.2.4 受试物最好是每周7天连续给予，如试验周期在90天以上，可考虑每周给药6天，每天定时给药。
每周可根据体重情况调整给药量，按等容量不等浓度配制药物。
长期毒性试验教学案例
5.剂量及分组
▪ 至少3个给药组, 单位: mg(ml,IU) /kg 或 /m2 ▪ 以不等浓度等容量给药 ▪ 低剂量组--高于有效剂量，不出现毒性反应(一般为动物有效剂量
或临床治疗量的2~3倍)
▪ 中剂量组（1-n个）--产生轻微或中等度毒性反应 按 低剂量X高剂量计算
①药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应 适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有 可能出现毒性作用；
②药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增 毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。
③药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和 性的药物，则应酌情增加剂量。
5.剂量及分组
犬
单笼饲养，定量喂食。
Beagle 狗实验前至少驯 养 1~2 周;
杂种狗应先检疫，驱虫。
雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过 5只
2.饲养管理
主要因素
温度(℃ ) 湿度 换气次数 气流速度 压力 洁净度 落下细菌 照明 噪声 臭气
小鼠、大鼠 20-26 40-60% 10-15次/h 13-18cm/s 正压 100000级 ＜＝3个/皿
量毒关系、产生时间，达峰时间, 持续时间及反 复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性
▪ 找到毒性反应靶器官： Target organ ▪ 明确毒性反应是否可逆： Reversibility
————确定“DOSTR”
二、长期毒性试验的基本内容和要求 1.试验动物
▪ 二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬(Beagle犬), 必要时用猴；
非啮齿类动物
2周
2周
1月
1月
3月
3月
大鼠长期毒性试验质量控制探讨
控制 、 试验 过程 中的 全程 质 量 控制 和试 验结 束后 的
资料 整理 和实验报 告质 量控制 。
１ 试 验 设 计 质 量 控 制
积毒 性或 耐 受 性 等 ｕ 。这 充 分 说 明长 期 毒 性 试 验
【 ｂｔａｔ Ｈ ｗ ｔ ｃｎｒｌｈ ｕ ｌｙｏ ｎ・ ｒ ｏｉｔ ｔ ｔ ｎｒ ｓｉ ｖｒ ｉｐｒ ｎ．Ｉ ｉ ｌｄｓｔｅｑ ａｔ Ａ ｓ ｃ】 ｏ ｏ ｏｔ ｅｑ ａｔ ｆ ｏｇｔ ｍ ｔｘ ｉ ｅ ａ ｅ ｍ ｏ ａｔ ｔ ｎ ｕ ｅ ｕ ｌｙ ｒ ｏｔ ｉ ｌ ｅ ｃｙ ｓ ｏ ｔ ｓ ｙ ｔ ｃ ｈ ｉ
ｔ ｈｅ ｇ ｏｄ ａ ｏ ａｏ ｐ ａ ｔｃ ａ ｈ ｓａ ｄ ｒ ｏ ｒ ｔ ｐ ｏ ｅ ｕ ｅ， ｔ ｏ ｔ ｍｐｏ ａ ｔ ｎ ｄ ｆｉｕ ｔｉ ｔ ｎｔｏ ｈｅ ｏ ｔ ｏ ｌｂ ｒ ｔｒ ｒ ｃｉ ｅ ｎｄ ｔ ｅ ｔｎ ａ ｄ ｐｅ ａｉ ｙ ｎｇ ｒ ｃ ｄ ｒ ｈｅ ｍ ｓ ｉ ｔ ｒ ｎ ａ ｄ ｉ ｃ ｌ ｓ ｏ ｃｏ ｒｌ ｔ
２１ ０ ０年 １月
中 国 比较 医学 杂 志
Ｃ ＮＥＳ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰ ＨＩ ＥＪ ＡＲＡＴ ＶＥ ＭＥ ＣＩ Ｉ ＤＩ ＮＥ
Ｊ ｎ ａｙ，２ １ ａｕｒ ００
Ｖｏ ． ０ ＮＯ １ Ｉ２ ．
第２ Ｏ卷
第 １期
大 鼠长期 毒性 试 验 质量 控 制 探讨
提供 参考依 据 ， 临 床毒 副 反 应 的监 护及 生 理 生化 为
指标 检测 提供依 据 。 因此 ， 须对 长 期 毒性 试 验进 必 行质 量控 制 。主要 包括 试验 开始前 的试验设 计质量
量 、 毒反应 剂量 、 性 反应 剂 量 及安 全 范 围 ； 可 无 毒 并
长期毒性试验
大鼠的长期毒性试验1. 目的：观察连续给予受试动物后由于积蓄而对机体产生的毒性反应及其严重程度，提供毒性反应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒性反应剂量，为人用安全剂量提供参考。
试验条件：2动物：应写明动物的品系，生产单位及生产合格证号，等级，周龄，性别，体重，一般选用动物品系有Wistar、SD、或其他品系的远交系动物。
应根据试验期的长短选用不同周龄的大鼠，试验期在3个月内宜用6～8周龄大鼠，超过三个月者宜用5～6周龄大鼠。
试验开始时，体重差异应不超过平均体重的20%。
实验动物应雌雄分笼饲养，每笼不宜超过5只动物，所有动物试验前至少观察一周，并记录食量和体重等基础数字。
试验报告中应写明饲料供应单位及生产合格证，若用自己配置的饲料，应提供配方及成分含量的检测报告；应写明饲养动物实验室的合格证(未获得合格证者也应注明)及等级。
受试物：应写明受试物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配置方法。
受试物可以是临床试验制剂。
如受试物制剂的体积较大，以不含赋形剂的制剂，如中药浸膏为宜。
固态制剂灌胃给药，可选择适当的溶媒溶解，或研磨成细粉后用1%左右羧甲基纤维素钠(或10%阿拉伯明胶)制成混悬液，但应注意临用前需要摇匀。
避免混悬不匀引起计量误差。
长期毒性试验给药周期较长，固体制剂在配成溶液或混悬液后，冰箱放置，短期内用完，一面受试药物活性降低。
3试验方法：①受试物剂量：一般设三个剂量组和一个对照组。
给受试物剂量单位一般用mg/kg、或g/kg表示。
高剂量组：应使动物产生明显的或严重的毒性反应，或个别动物死亡。
中剂量组：应相当或高于药效学试验的高剂量，应使动物产生轻微的或中等程度的毒性。
低剂量组：略高于整体动物的有效剂量，在此剂量下动物应不出现毒性反应，属基本安全剂量。
对照组：不给收拾药物仅给等容量的溶媒或赋形剂，若所用溶媒或赋形剂可能有毒时，另加一组空白对照。
如果急性毒性试验结果毒性很低，测不出LD50，也未见明显毒性反应，可设高、低两个剂量，高剂量一般为拟用于临床剂量50倍以上(有困难时，可适当减少剂量，最低不能低于临床剂量30倍)并应高于药效学试验的高剂量。
〖医学〗BRM-SJS急性毒性试验报告
四、结果
动物灌胃一次后，两周内未见有动物死亡。动物给药后活 动正常，体重增加。BRM-SJS LD50不能测出。结果见表1。
五、说明
20g/100ml的药物浓度已稠至不能再浓缩提高，用该浓度 以0.2ml/10g体重（相当于4.0g/20ml/kg)给动物灌胃一次后， 没有发现动物死亡及肉眼可见的毒副作用，提示BRM-SJS毒性 较小，LD50未能测出。
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18.3土1.6 24.8土2.2
19.1土0.8 25.0土2.5
18.4土1.1 24.9土2.1
18.9土0.9 25.1土2.3
Dose(g/kg)
4.00 3.20 2.56 2.05 1.64
Death mouse number
0 0 0 0 0
二、材料：
1．受试物：BRM-SJS由北京临床肿瘤基因研究所提供，为 胶囊剂，批号2001-5。
2．实验动物：实验用18-22g昆明种小鼠，50只，国家二 级动物，雌雄各半，中国医学科学院肿瘤研究所动物室提供。 实验动物生产合格证号：京动许字(1999)第015号，动物实验 设施合格证号：(1996)第007，实验动物设施合格证号：京动 管准字(1994)第103号。实验全过程在室温20-24℃，相对湿 度40-60％，层流系统实验室完成。
表1 Table l
长期毒性作用及其试验方法PPT课件
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基本概念和目的
二、目的与意义
观察在试验动物长期重复给药的情况下，了解药物有无 蓄积作用，试验动物能否产生耐受性，试验动物会出现 哪些毒性反应，其剂量效应关系如何，涉及哪些组织， 主要靶器官是什么，损害的性质和程度如何，损害是否 可逆等；
观察在给试验动物长期重复给药的情况下，初步估计不 出现毒性作用的最大耐受量和出现毒性作用的最小剂量， 为拟定人用药的安全剂量提供参考。
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基本概念和目的
长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：
1. 给药的期限不同。
急性毒性试验为一次性给药或 24 小时内 多次给药；
长期毒性试验为连续多日接触一定剂量给 药，给药期限为临床用药的 3-4 倍时间。
对长期毒性试验各国之间无统一的时间规定。
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基本概念和目的
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第二节 试验设计原则及方法
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试验设计原则及方法
一、一般原则和要求
1.二种动物：啮齿类（大鼠） + 非啮齿（比格犬） 2.三个剂量：高、中、低三个档次，高剂量组充分 反映药物的毒性，低剂量组不出现毒性反应。 3.至少4组：溶剂 ( 或赋型剂 ) 对照组或已知药 物毒性对照组。 4.给药途径应与临床拟用途径相一致。 5.符合《中华人民共和国药品管理法》，执行“药 物非临床研究质量管理规范”。
长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异：
1. 给药的期限不同。 2. 给药的剂量范围不同。
急性毒性试验为一次性大剂量给药 长期毒性试验为低剂量长期积累
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基本概念和目的
毒理学 长期毒性试验
四、长期毒性试验的试验目的 1、发现在急性毒性试验中未发现的毒作用，为受试物的毒作用研究提供新的信息； 2、描述毒反应的性质和程度； 3、研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官； 4、研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量—反应(效应)关系，确定其观察到有害作用的最
出现毒性反应。同时应设溶剂或者已知药物的毒性对照组。
2.动物：应是年轻健康、来源清楚，对药物敏感、与人类代谢相类似的动物。
3.给药途径：与临床拟用途径一致。
4.观察指标：应能反映实验动物功能及结构的完整性是否受到损害。
一般是以药政部门的技术要求规范为核心，同时兼顾给药时限和给药剂量这两个重要因
素，对整个长期毒性试验做一个较为合理的安排和设计，力争高效率、全面地了解药物长期
行染毒,试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。 此时，计算累积总接触剂量[LD50(n)]，根据公式计算 K 值，进行评价。但若接触剂量已累积 达到 5 个 LD50 剂量，也可终止试验。 2.剂量递增法：
在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算 K 值进行评价。 一般来说，在试验第 2l 天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半， 说明其累积剂量已达 5.26LD50，即 K＞5。
•光照： 持续 12 小时明亮，12 小时黑暗，有利于刺激动物甲状腺激素、促肾上腺皮质 激素和生长激素的分泌；
•通风条件： •饮水质量：
•饲料配方：所用饲料应符合动物的营养标准，若用自已配制的饲料，应提供配方及营养 成分含量的检测报告，若是购买的饲料，应注明生产单位。
毒理学中的长期慢性毒性检测方法
毒理学中的长期慢性毒性检测方法毒理学中长期慢性毒性检测方法与探究毒理学是一门旨在研究生命体系中各种化学物质对人类、动物和环境的毒性影响的科学。
在现代人类社会中，人们对各种化学物质的使用越来越频繁，因此对于化学物质的毒性和安全性评估也越来越重要。
而长期慢性毒性检测方法是毒理学研究中不可或缺的一部分。
长期慢性毒性检测方法是对于某一化学物质在动物体内慢性毒性的影响进行评估的方法。
它通过持续给予试验动物某一特定剂量的化学物质来探究其潜在的负面影响。
这种评估需要持续数周至数年的时间，因此其费用和时间成本相对较高。
然而，长期慢性毒性检测方法仍然是毒理学研究中重要的一环。
对于长期慢性毒性检测方法的评估，常用的试验动物有老鼠、大鼠、兔子、狗等。
在一项长期慢性毒性检测实验中，动物要长期接受被测化学物质的暴露，并且要定期采集血样、尿样、组织样本等进行分析。
基于这些分析的结果，可以对被测化学物质在动物体内的影响进行详细的评估和分析。
在长期慢性毒性检测方法的实施中，建立合适的试验方案和得出合适的结论非常重要。
试验方案需要考虑到被测化学物质在动物体内的生物学运作规律，动物对被测化学物质的吸收、代谢和排泄规律等，同时还需要考虑到不同个体之间的生理差异。
得出的结论需要综合考虑所有的实验结果，包括毒性效应、剂量效应、时间效应等多方面信息。
此外，当进行长期慢性毒性检测方法时，还需要注意对于动物的福利问题。
这不仅是出于道德敏感性的考虑，同时也要考虑到动物的健康状况对于实验结果的影响。
因此，在长期慢性毒性检测方法的实施中，需要对于试验动物进行定期的健康检查和妥善的饮食安排。
在现代毒理学研究中，长期慢性毒性检测方法被广泛应用于评估各种化学物质的毒性和安全性。
与其他较短时间的毒性实验相比，长期慢性毒性检测方法可以更加全面地评估某种化学物质的短期和长期效应。
同时，该方法可以探究某种化学物质在不同种类和不同组织中可能发挥不同的毒性效应。
总之，长期慢性毒性检测方法在现代毒理学研究中发挥着重要的作用。
《长期毒性试验》课件
展望
• 长期毒性试验应该更好地结合现代科 技手段进行
• 研究方向要更加多样化，应用对象更 加广泛
• 应该探索和建立其他模式，以更全面， 直观，普遍地评估实验物质对健康的 影响
生理、生化和组织学指标的 检测
长期毒性试验中，需要对实验动物 大量检测并比对其生理、生化和组 织学指标的改变，如肝肾功能，血 液流变学，氧化应激水平等。
长期毒性试验的数据分析
线性剂量-反应模型
该模型可以对人体内长期接 触实验物质后的剂量和反应 之间的关系进行分析，并通 过相关曲线将剂量-反应关系 定量化，以为优化剂量和规 范使用提供依据。
长期毒性试验的应用和意义
1 推动药物研发
长期毒性试验可以有效推动新药研发，对待药物的剂量、安全性和合理用药等方面进行 评估，为临床疗效和治疗效果提供重要依据。
2 建立化学物品安全评价体系
长期毒性试验为有关部门和机构建立起一个完整的化学物品安全评价体系，于化学危害 性的评估和防控提供重要的参考与依据。
生态流行学分析
该类分析方法从人群的角度 去分析，通过对人群中存续 时间较长的疾病与实验物质 暴露的关系进行分析，以发 现相关规律与相应的救治与 预防的策略。
生物信学分析
通过获取实验样本内某些生 物学物质，如基因、蛋白质、 代谢物等的数据信息，进行 计算、处理，以期发现与实 验物质暴露相关的生物标记， 从而对实验物质进行安全评 估。
《长期毒性试验》PPT课件
欢迎大家来到《长期毒性试验》课程，本课程将为您全面解读长期毒性试验 的定义、目的、方法、数据分析、应用和意义。
长期毒性试验的定义
定义
长期毒性试验是评估、研究 某一化学物质、药物或其他 物质对人体或动物体内长期 使用后的影响的一种生物学 检测手段。
药物毒理学长期毒性试验
11
步骤
到达
毒物
途径
Ａ
1
与靶分子相互作用
细胞功能 紊乱，损伤
修复紊乱
毒
2
性
3
Ｂ
作 用
4
Ｃ
药物毒性作用发展的潜在阶段
12
指对动物反复多次连续用药的毒性试验
目的：观察反复给药情况下，实验动物
➢ 出现的毒性反应、量效关系、主要的靶器官、损害程 度及其可逆性等；
7
第二水平，长期毒性试验 （第一阶段）
（1）两种品系、35天染毒、毒性量效曲线，推荐临床使用 途径；
（2）器官毒性试验、死亡情况、体重变化、血液学、临床 生化学、组织学检查；
（3）致突变活性第二阶段筛选； （4）生殖毒性试验； （5）受试动物的药代动力学研究； （6）行为试验； （7）协同、增效、拮抗作用。
2
治疗指数：TI= LD50/ ED50 ED50（median effective dose）: LD50 （median lethal dose ）: 药物实验动物的LD50和 ED50的比值称 为治疗指数（therapeutic index, TI） ，用以表示药物的安全性。
3
安全范围
• 有效量曲线和致死量曲线的斜率不一样时，以TI评
8
第三水平，长期毒性试验 （第二阶段） （1）动物长期毒性试验（半年以上）； （2）哺乳类动物致突变试验； （3）啮齿类动物2年致癌试验； （4）人类药代动力学试验； （5）人类临床试验； （6）短期和长期用药的流行病学资料。
9
（四）药物毒理学研究 在新药临床试验各阶段的任务
第一期临床研究 探索安全的人用剂量
大鼠长期毒性试验质量控制探讨
大鼠长期毒性试验质量控制探讨许迪;孔利佳;杜佐华;周顺长;叶明霞;熊美云【摘要】大鼠长期毒性试验是费时长、参加人员多、消耗财力和物质大、操作繁琐复杂而又经不起重复的一个高难度研究工作,对其进行质量控制显得尤为重要.主要包括试验开始前的试验设计质量控制、试验过程中的全程质量控制和试验结束后的资料整理和实验报告质量控制.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2010(020)001【总页数】4页(P61-63,69)【关键词】长期毒性试验;质量控制;大鼠【作者】许迪;孔利佳;杜佐华;周顺长;叶明霞;熊美云【作者单位】华中科技大学同济医学院实验动物学部,武汉430030;华中科技大学同济医学院实验动物学部,武汉430030;华中科技大学同济医学院药理学系,武汉430030;华中科技大学同济医学院实验动物学部,武汉430030;华中科技大学同济医学院实验动物学部,武汉430030;华中科技大学同济医学院实验动物学部,武汉430030【正文语种】中文【中图分类】R-332长期毒性试验可以观察连续反复给药时，实验动物出现的毒性反应、剂量与毒性效应的关系、主要毒性靶器官、毒性反应的性质和程度、毒性反应是否可逆等；还可观察在连续反复给药时，动物的耐受量、无毒反应剂量、毒性反应剂量及安全范围；并可了解毒性产生时间、达峰时间、持续时间及可能反复产生毒性反应的时间，有无迟发性毒性反应、有无蓄积毒性或耐受性等［1］。
这充分说明长期毒性试验在临床前安全性评价中的重要地位，对于新药研究成功与否起举足轻重的作用。
长期毒性试验是临床前毒性评价的主要内容，是新药审评重点内容之一，是能否过渡到临床试用的主要依据。
另外，它为临床安全用药的剂量设计提供参考依据，为临床毒副反应的监护及生理生化指标检测提供依据。
因此，必须对长期毒性试验进行质量控制。
主要包括试验开始前的试验设计质量控制、试验过程中的全程质量控制和试验结束后的资料整理和实验报告质量控制。
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3. BRM-SJS对大鼠血象的影响： 白细胞：给药前后各组大鼠同期比较。外周白细胞计数无 明显差异，波动于正常值水平。见表3。 白细胞分类：表4说明试验期间大鼠外周白细胞分类的组间 同期比较，W-SCC 和 W-LCC 均在正常值范围，无明显差 异。 红细胞和血色素：表 5 、表 6 为大鼠外周血红细胞和血色素 检测结果，同期组间比较无差异，均在正常值范围。
动物实验设施合格证号，京动管准字(1996)第007号。
3. 试验方法：大鼠购入后观察1周，未发现不健康大鼠。随 机分为 4组，每组 40只，雌雄各 20只，即 (1) 空白对照组：灌服 与药液同体积的供动物饮用的蒸馏水 20ml/kg；(2) RBM-SJS低 剂量组：1.0g/kg；(3) RBM-SJS中剂量组：2.0g/kg；(4) BRMSJS高剂量组：4.0g/kg。 给药容积2ml/100g体重。每天灌胃，连续180天。服药的三 个月内每周称重并调整药量，平时观察动物服药后的反应，包 括饮食、活动、毛发、神志、口鼻眼眦、二便及死亡情况。每 月定期记录1次日进食量。 给药前，给药后 30天，60天， 90 天和停药后 30天，分别由 尾 静 脉 取 血 检 查 计 数 红 细 胞 (RBC) ， 血 色 素 (Hb) ， 白 细 胞 (WBC)及分类，血小板(P)等指标。给药90天和停药后30天处死 前，摘取眼球，取血测定血液学10项生化指标，包括谷草转氨 酶 (AST) ，谷丙转氨酶 (ALT) ，碱性磷酸酶 (ALP) ，总蛋白 (TP) ，白蛋白 (ALB) ，总胆红素 (T-BIL) ，肌酐 (Crea) ，总胆固醇 (TCHOL) ，尿素氮 (BUN) 和血糖 (GLU) 。每于尾静脉采血日，同 时作尿常规检查。
一、试验目的：
观察大鼠在长期服用BRM-SJS过程中，有无蓄积性或迟缓性 毒副反应，以及出现的毒副反应在停药后的 30 天内是否能够恢 复正常。
二、材料与方法：
1.药物：BRM-SJS，北京临床肿瘤基因研究所提供。 2. 动物： Wistar 大鼠 160 只， 50-60g ，月龄 1.5 个月。雌雄 各半，二级实验动物。购自中国医学科学院实验动物中心，合 格证号医动字01-3008号。 本所实验动物室实验动物设施合格证号：京动管准字 (1994) 第 103号。
三、试验结果
1. 动物一般状况：4组动物试验期间饮食正常，活动自如， 口鼻眼雌无分泌物，毛发光泽不紊乱。试验期内，动物无死 亡。表1 显示 BRM-SJS 对大鼠进食量的影响，数据显示，大 鼠的组间进食量无明显差异。 2. BRM-SJS对大鼠体重的影响，结果见表二。停药后次日称 重，高剂量雄性大鼠体重为 290.818.5克，稍低于对照组相 应的 330.323.3(P<0.05) ，停药后 30 天恢复期内，该组大鼠 体重已升至356.518.8克，与对照组雄性鼠比较(361.821.6 克)已无明显差异(P>0.05)。其余各组动物同期比较体重增长 基本一致。
指数，表明心、肝、脾、肺、肾、胰、肾上腺，睾丸或卵
巢的重量和脏器系数均属正常范围。服药组与对照组比较
无明显差异。
7. 病理组织学检查
心脏：各组大鼠心肌细胞排列整齐，未见心肌变性，坏死或 断裂，间质内未见炎症细胞浸润。
肝脏：各组大鼠肝脏的肝小叶轮廓清楚，肝细胞索围绕中央 静脉呈放射状排列。服药结束后恢复期后，部分大鼠肝细 胞出现浊肿变性，这种变化对照组和服药组均存在，且发生 率相近。
脾：脾包膜完整，脾小结清晰。 肺：各组大鼠的肺泡清晰，细支气管粘膜完整。
肾：皮质髓质界限清楚，皮质内肾小球结构可见，无肿胀、 纤维化，肾曲管上皮完整。
卵巢：雌性大鼠卵巢各级卵泡发育正常，黄体形成可见。
胃、胰、肾上腺、睾丸：镜下检查均为正常结构。
四、小结：
大鼠连续灌服 BRM-SJS3个月，各服药组动物的一般状 况，体重，血液学检查，血液生化学指标检查，尿常规，主 要脏器重量和脏器系数均在生理范围。病理形态学检查中， 部分大鼠肝细胞出现浊肿变性，这种改变属非特异病因的可 逆性病变，且对照组、给药组发生率相近，因此应与服药无 关。本实验中在大鼠服药的最高剂量为 4.0g/kg 时，动物无 死亡，但对体重增长有一定影响。经30天恢复期后，已与对 照组体重无异。 BRM-SJS 在长毒试验中未出现明显的毒性 作用。
血象检查用日本东亚 F820 全自动血象分析仪，血液生化 指标检测用 Olympus AU600 生化检测仪进行，病理切片采用 Olympus BH-20光学显微镜阅片。 给药结束后24h处死中、低剂量组全部大鼠，对照组、高 剂量组处死半数动物 ( 雌雄各 20 只 ) ，停药后 30 天，再处死两 组剩余的半数动物，作恢复期观察。 凡处死后的大鼠，立即进行尸体解剖，目视主要脏器的 外观是否有病理改变，留取并称重心、肝、脾、肺、肾、胰 、肾上腺、睾丸或卵巢，用以计算脏器指数 (g/100g 体重 ) ， 留取全部或部分组织器官用10%福尔马林液固定，常规程序切 片，HE染色后进行组织形态学镜检。
血小板计数：亦显示5次查血各组数值都在正常值水平。组 间同期比较或组内不同期比较，均无明显差异(表7)。
4. 血液生化指标：外周血生化指标测定结果证实，给药结 束和恢复期后的10项指标约在正常值水平，同期或不同期
组间比较基本一致(表8)。
5. 尿常规：给药前、中、后5次检查结果，尿常规各项指
标均未见异常(表10)。 6. 主要脏器指数：表9显示大鼠9种脏器的重量和脏器的
北京临床肿瘤基因研究所
BEIJING CLINICAL TUMOUR GENE RESEARCH CENTER
BRM-SJS大鼠长期毒性试验
摘要：本研究观察了 BRM-SJS 用药过程中对大鼠进食、生 长、血象、肝肾功能生化指标，主要脏器系数和组织形态学影 响。应用Wistar大鼠160只，采用三个剂量，连续灌胃给药 90 天，即1.0g/kg 20ml，2.0g/kg 20ml，4.0g/kg 20ml。在给药 过程中和停药后30天定期检查上述有关指标。 结果证实：BRM-SJS对大鼠进食，血液学指标，血液生化 指标均未见明显影响，对9种重要脏器，(心、肝、脾、肺、肾、 胰、肾上腺、睾丸或卵巢)的脏器指数无明显影响，肉眼观察 未见病理改变，镜下观察亦无阳性发现。