急性毒性及长期毒性标准操作技术
中药新药药理毒理研究的技术要求
中药新药药理毒理研究的技术要求中药新药的药理毒理研究包括主要药效学、一般药理学、药代动力学及毒理学研究等。
中药新药的药效研究，以中医药理论为指导，运用现代科学方法，制定具有中医药特点的试验方案，根据新药的功能主治，选用或建立相应的动物模型和试验方法，其目的是对新药的有效性评价提供科学依据。
中药新药的毒理研究包括急性毒性、长期毒性和特殊毒性试验等，其目的是对新药的安全性评价提供科学依据。
一、基本要求（一）试验主要负责人应具有药理毒理专业高级技术职称和有较高的理论水平、工作经验与资历。
确保试验设计合理，数据可靠，结果可信，结论判断准确。
试验报告应有试验负责人签字及单位盖章。
（二）受试药物应处方固定、制备工艺及质量基本稳定。
（三）从事新药安全性研究的实验室应符合国家药品监督管理局《药品非临床研究质量管理规范》（GLP）的要求，药理研究也可参照实行。
二、主要药效研究（一）试验方法的选择1.试验设计应考虑中医药特点，根据新药的主治，参照其功能，选择相应试验方法，进行主要药效试验。
由于中药常具有多方面的药效或通过多种方式发挥作用等特点，应选择相应的方法证实其药效。
2. 药效试验应以体内试验为主，必要时配合体外试验，从不同层次证实其药效。
(二) 观测指标应选用特异性强、敏感性高、重现性好、客观、定量或半定量的指标进行观测。
(三) 实验动物根据各种试验的具体要求，合理选择动物，对其种属、性别、年龄、体重、健康状态、饲养条件、动物来源及合格证号等，应有详细记录。
(四) 给药剂量及途径1. 各种试验至少应设3个剂量组，剂量选择应合理，尽量反映量效和/或时效关系，大动物（猴、狗等）试验或在特殊情况下，可适当减少剂量组。
2. 给药途径应与临床相同，如确有困难，也可选用其他给药途径进行试验，但应说明原因。
(五) 对照组主要药效研究应设对照组，包括正常动物空白对照组、模型动物对照组、阳性药物对照组（必要时增设溶媒或赋形剂对照组）。
毒理学指标及试验操作汇总
.药物毒性试验指标1.急性毒性试验一、半数致死量（LD50）的测定(一)目的:观察受试物一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况。
(二)动物分组和剂量1.动物:一般用小白鼠8周龄，体重18---22g(同次试验体重相差不超过2g)大白鼠6~8周龄，体重120--150g，同次试验体重相差不超过10g。
2.受试物:溶于水的做成溶液，不溶于水的做成混悬液.(三)试验方法1.剂量:一般选用3一5个剂量，各剂量间剂距根据受试物情况和预试结果而定。
2.给药途径和容积:给药途径:应与临床试验的途径相一致。
口服药物应灌胃给药，一、二类新药应采用两种途径给药，其中一种应为推荐临床研究的给药途径。
水溶性好的药物还应测定静脉给药的急性毒性。
给药容积:小白鼠禁食(12~16小时)，不禁水，按体重计算:灌胃(ig)不超过0. 4ml/ 10g体重。
大白鼠禁食(12~16小时)，不禁水、灌胃(ig)，不超过3ml/只。
3.测定LD:将动物按体重随机分组，每组至少10只(雌雄各半)。
给受试物后立即观察50动物反应情况，每天观察一次连续观察七天。
详细逐天记录动物毒性反应情况及死亡分布，并用适当的统计学方法(申报时应说明方法名称)计算出LD值及95%可信限。
504.观察毒性反应:给受试物后应严密观察反应情况，并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲(饲料消耗量)、大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡等情况。
死亡动物应及时进行尸检，发现病变器官应做病理组织学检查。
若发现中毒反应或死亡率一与动物的性别有明显相关时，则应选择性别敏感的动物进行复试。
(四)试验报告和结果评价应详细具体，包括试验日期、动物的规格、性别、数量、受试物来源及含量、试验方法。
LD 值及其95%可信限，以及各剂量组的死亡率，或最大耐受量的值及其相当于临床剂量的50倍数.详细报告实验过程中动物出现的中毒表现及致死症状，综合评价受试物毒性大小。
急性毒性试验
试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
(完整版)急性毒性试验
试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
化学药物急性毒性试验技术指导原则
指导原则编号:【H】G P T 1-1化学药物急性毒性试验技术指导原则二○○五年三月目 录一、概述 (1)二、基本原则 (1)三、研究内容 (2)四、数据分析及评价 (4)五、名词解释 (5)六、参考文献 (6)七、附录 (7)八、著者 (16)化学药物急性毒性试验技术指导原则一、概述动物急性毒性试验（Acute toxicity test，Single dose toxicity test），研究动物一次或24小时内多次给予受试物后，一定时间内所产生的毒性反应。
拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验[1]。
急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段，对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。
急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息[1，2]。
本技术指导原则适用于化学药物的动物急性毒性试验。
本指导原则重点阐述急性毒性试验中动物、剂量、给药途径选择的基本原则；对所获得数据的分析及评价要求；以及其中所涉及的科学原理与制定本指导原则的背景。
二、基本原则（一）实验管理药物的急性毒性试验属于安全性评价研究，根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
（二）具体问题具体分析急性毒性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。
应根据化合物的结构特点、理化性质、适应症特点和试验目的等选择合理的试验方法，设计适宜的试验方案，并结合其它药理毒理研究信息对试验结果进行全面的评价。
（三）随机、对照、重复急性毒性试验应符合一般动物试验的基本原则，即随机、对照和重复。
三、研究内容（一）受试物急性毒性试验的受试物应采用制备工艺稳定、符合临床试验用质量标准规定的样品，并注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，并附有研制单位的自检报告。
毒理学 长期毒性试验
蓄积毒性作用
药物进入机体后，经过生物转化以代谢产物或化学物原型排出体外。但是，当化学毒物
反复多次给动物染毒，化学毒物进入机体的速度(或总量)超过代谢转化的速度和排泄的速度
(或总量)时，化学毒物或其代谢产物就有可能在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为化学
毒物的蓄积作用 (accumulation) 。
三、长期毒性试验与急性毒性试验的根本差异
1.给药的期限不同
急性毒性试验为一次性给药或 24h 内多次给药。
长期毒性试验为连续多日接触一定剂量给药，给药期限可以从数天至终生甚至数代，一
般为临床用药的 3-4 倍。
表 3-1 常用实验动物的平均寿命及长期毒性试验给药期限
试验动物 平均寿命（年） 亚慢性试验给药期限（月） 慢性试验给药期限（月）
使用本方法时要注意染毒期间定期(每 4 天一次)给动物称重，按实测体重，调整化学毒 物的染毒绝对量。 3.剂量固定的 20 天蓄积法：
通常采用经口灌胃染毒方式，将动物随机分为 5 个组，包括阴性对照组和 1/20 LD50、 l/10 LD50、1/5 LD50 和 1/2 LD50 四个剂量组，每组动物数 10 只，雌雄各半。每日染毒一次， 连续染毒 20 天。观察每组雌雄合计的死亡动物数量。
①供试药物在体内的生物蓄积作用：测定有关的蓄积参数，有助于了解药物的蓄积性。 对于高蓄积性药物应适当减少剂量； ②供试药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增毒”，而这些酶又是否易被供 试药物本身所诱导或抑制。例如，某些药物如果抑制与其本身代谢或解毒有关的酶，则 该药物的给药剂量应酌情减少。 ③供试物在消化道中的稳定性，与胃肠道内容物有亲和性的药物，应酌情增加剂量。
功，是其它实验动物不可替代的。
急性毒性试验设计课件
案例四
总结词
急性毒性试验在食品添加剂安全性评价中具有重要意义，能够评估食品添加剂对 人体健康的潜在风险。
详细描述
急性毒性试验广泛应用于食品添加剂安全性评价中，通过给予实验动物单次或多 次剂量的食品添加剂，观察和记录动物的毒性反应和死亡情况，能够评估食品添 加剂对人体健康的潜在风险，为食品添加剂的安全使用提供科学依据。
数据清洗
去除异常值和缺失值，确保数据质量。
数据分析
采用合适的统计方法对数据进行分析，如均值 、标准差等。
数据可视化
使用图表展示分析结果，如折线图、柱状图等。
结果报告与结论
结果总结
概述试验结果，包括毒性反应类型、剂量效应关系等 。
结论
根据试验结果，得出结论并解释其意义。
建议
根据试验结果提出建议，如进一步研究必要性、安全 使用建议等。
染毒剂量
设置不同剂量组，确保剂量范围涵盖预期毒性反 应。
3
染毒频率
确定染毒频率，如单次或多次给药。
观察与记录
观察时间
设定观察周期，包括给药前、给药后短期、 中期和长期观察。
观察指标
列出需要观察的指标，如行为变化、生理参 数、病理学检查等。
数据记录
详细记录各组动物在各个时间点的数据表现 。
数据处理与分析
观察期的设置
总结词
观察期的设置是急性毒性试验中至关重要的一环，直接 关系到试验结果的完整性和准确性。
详细描述
观察期是指从给予动物受试物开始，直至观察到动物死 亡或恢复正常的这段时间。在试验设计中，应根据受试 物的毒性作用特点、动物的种属特性以及试验目的等因 素来确定合理的观察期。同时，还需根据观察到的症状 和体征以及死亡情况等数据进行详细记录和分析，以评 估受试物的毒性作用及其对动物的影响程度。
长期毒性试验
大鼠的长期毒性试验1. 目的：观察连续给予受试动物后由于积蓄而对机体产生的毒性反应及其严重程度，提供毒性反应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒性反应剂量，为人用安全剂量提供参考。
试验条件：2动物：应写明动物的品系，生产单位及生产合格证号，等级，周龄，性别，体重，一般选用动物品系有Wistar、SD、或其他品系的远交系动物。
应根据试验期的长短选用不同周龄的大鼠，试验期在3个月内宜用6～8周龄大鼠，超过三个月者宜用5～6周龄大鼠。
试验开始时，体重差异应不超过平均体重的20%。
实验动物应雌雄分笼饲养，每笼不宜超过5只动物，所有动物试验前至少观察一周，并记录食量和体重等基础数字。
试验报告中应写明饲料供应单位及生产合格证，若用自己配置的饲料，应提供配方及成分含量的检测报告；应写明饲养动物实验室的合格证(未获得合格证者也应注明)及等级。
受试物：应写明受试物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配置方法。
受试物可以是临床试验制剂。
如受试物制剂的体积较大，以不含赋形剂的制剂，如中药浸膏为宜。
固态制剂灌胃给药，可选择适当的溶媒溶解，或研磨成细粉后用1%左右羧甲基纤维素钠(或10%阿拉伯明胶)制成混悬液，但应注意临用前需要摇匀。
避免混悬不匀引起计量误差。
长期毒性试验给药周期较长，固体制剂在配成溶液或混悬液后，冰箱放置，短期内用完，一面受试药物活性降低。
3试验方法：①受试物剂量：一般设三个剂量组和一个对照组。
给受试物剂量单位一般用mg/kg、或g/kg表示。
高剂量组：应使动物产生明显的或严重的毒性反应，或个别动物死亡。
中剂量组：应相当或高于药效学试验的高剂量，应使动物产生轻微的或中等程度的毒性。
低剂量组：略高于整体动物的有效剂量，在此剂量下动物应不出现毒性反应，属基本安全剂量。
对照组：不给收拾药物仅给等容量的溶媒或赋形剂，若所用溶媒或赋形剂可能有毒时，另加一组空白对照。
如果急性毒性试验结果毒性很低，测不出LD50，也未见明显毒性反应，可设高、低两个剂量，高剂量一般为拟用于临床剂量50倍以上(有困难时，可适当减少剂量，最低不能低于临床剂量30倍)并应高于药效学试验的高剂量。
化学药物长期毒性试验技术指导原则
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.1文档收集于互联网，如有不妥请联系删除.化学药物长期毒性试验技术指导原则一、概述长期毒性试验（重复给药毒性试验）是药物非临床安全性评价的核心内容，它与急性毒性、生殖毒性以及致癌性等毒理学研究有着密切的联系，是药物从药学研究进入临床试验的重要环节。
在药物开发的过程中，长期毒性试验的目的是通过重复给药的动物试验表征受试物的毒性作用，预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险。
具体包括以下五个方面：①预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、剂量－反应关系和时间－反应关系、可逆性等；②判断受试物反复给药的毒性靶器官或靶组织；③推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围；④提示临床试验中需重点监测的指标；⑤还可以为临床试验中的解毒或解救措施提供参考。
必须强调的是，长期毒性试验的最终目的是为临床试验和临床用药服务。
本指导原则旨在为长期毒性试验提供技术参考，同时也希望能够对药品的技术审评工作提供帮助，促进药品审评机构与药品注册申请人之间就长期毒性试验达成更为广泛的共识。
本指导原则为化学药物长期毒性试验的一般性原则，仅代表目前对于长期毒性试验的基本认识，其中的内容不完全是进行药物长期毒性试验时必须完成的内容。
具体药物的长期毒性试验应在本指导原则的基础上，根据药物的自身特点制订试验方案。
二、立题原则药物开发的背景和基础研究资料各不相同，在进行长期毒性试验之前应对药物的已有资料进行综合分析，判断是否可以通过已有资料达到长期毒性试验的目的，为临床试验和临床用药提供支持。
原则上，如果已有资料尚不能达到长期毒性试验的目的，从保证临床用药安全的角度就应该进行长期毒性试验；反之，则可以不必进行长期毒性试验。
三、基本原则（一）试验管理根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，药物的长期毒性试验必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。
长期毒性试验操作规程
长期毒性试验操作规程1.目的：观察连续重复给予受试物对动物所产生的毒性反应，首先出现的症状和严重程度，毒副反应的靶器官及其恢复和发展情况。
确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供参考。
2. 动物和材料：2.1动物一类新药首选Beagle犬和猴类，应写明供应单位。
根据试验周期的长短，一般选择性成熟青年动物为受试动物。
二、三、四类新药要求放松一些，但要根据实际情况选择合适的实验动物。
实验前大动物应检测心电，并做血液学和血液生化学分析，指标在正常范围内的动物，方可作为受试动物。
小动物分组方式通常采用随机分组，雌雄各半。
大动物通常每组动物4-6只，雌（无孕）雄各半，随机分组。
2.2 受试物和实验室3.试验方法3.1 剂量和分组3.1.1 一般设2-3个剂量组，一类新药应设三个剂量组和一个对照组。
剂量一般用g（或mg）/kg或单位/kg表示。
低剂量组略高于临床试验人用日最高剂量或按体表面积折算的动物药效学有效剂量。
低剂量组不应出现毒性反应。
高剂量组原则上应产生明显或严重的毒性反应或个别动物死亡。
在高、低两个剂量之间按等比关系再设置一个中剂量。
3.1.2 对照组不给受试物仅给等容量的溶媒或赋形剂。
如这些成分可能有毒性时，应另设一组对照组。
限度试验：如果经小鼠急性毒性口服给药剂量大于5g/kg或注射给药剂量大于2g/kg仍不出现毒性反应和死亡或仅个别动物有毒性反应时，可考虑只作一个高于临床拟用剂量50倍的剂量。
3.2 给药途径与方法3.2.1 给药应与临床用药途径一致。
3.2.2 口服药途径每天于喂食前定时给予。
若将受试物混在饲料、水中给予，每动物应分笼饲养，并采取严格有效措施，以保证每只动物按量在一定时限内服完。
3.2.3 经静脉、肌肉或皮下途径，其注射部位可于四肢或臀部等处交替进行。
3.2.4 受试物最好是每周7天连续给予，如试验周期在90天以上，可考虑每周给药6天，每天定时给药。
每周可根据体重情况调整给药量，按等容量不等浓度配制药物。
关于一般药理急性毒性和长期毒性研课件
03
毒理研究的目的和 意义
为药物研发提供依据
在药物研发过程中，急性毒性研究是 初步评估药物安全性的重要步骤，可 以为后续的药物开发提供依据。
通过急性毒性研究，可以了解药物对 机体的影响程度，为药物剂量的选择 和临床试验的设计提供参考。
为药物安全性评价提供数据支持
长期毒性研究能够评估药物在长期使 用过程中对机体的影响，为药物安全 性评价提供数据支持。
细胞培养
利用细胞培养技术评估药物对细胞生长、增 殖和功能的影响。
临床试验
在人体上进行长期用药观察，评估药物在人 体内的长期安全性。
基因组学和蛋白质组学
利用基因组学和蛋白质组学技术，研究药物 对机体基因和蛋白质表达的影响。
长期毒性评价标准
毒性反应的可逆性
评估毒性反应是否可逆，以及 恢复的时间。
剂量-反应关系
发中的应用
新药临床前安全性评价
评估药物在动物体内的急性毒性
通过观察动物在短时间内接受大剂量药物后的反应，了解药物的毒性作用和致死剂量，为后续的安全 性评价提供依据。
检测药物对生殖和发育的影响
研究药物对动物生殖系统、胚胎和胎儿发育的影响，以评估药物在妊娠期和哺乳期使用的安全性。
药物再评价和新药注册
长期毒性研究
长期毒性定义
01
长期毒性是指药物在连续给药过 程中对机体产生的毒性作用，通 常在给药时间较长时出现，可能 涉及多个器官和系统。
02
长期毒性研究旨在评估药物在长 期使用过程中可能对机体产生的 潜在危害，为药物的安全性和有 效性提供科学依据。
长期毒性测试方法
动物实验
通过给动物连续用药一定时间，观察其毒性 反应，评估药物的长期安全性。
根据急性毒性测试结果，可以将化学物质分为不同的毒性 等级。例如，根据世界卫生组织的标准，可以将化学物质 分为剧毒、高毒、中等毒、低毒和微毒五个等级。
化学药物急性毒性试验技术指导原则
不同动物和给药途径下的最大给药容量可参考相关文献及实际情况来 确定。
（五）观察时间及指标[1, 2, 4, 5]
3
给药后，一般连续观察至少 14 天，观察的间隔和频率应适当，以便能 观察到毒性反应出现的时间及其恢复时间、动物死亡时间等。观察的指标 包括一般指标（如动物外观、行为、对刺激的反应、分泌物、排泄物等）、 动物死亡情况（死亡时间、濒死前反应等）、动物体重变化（给药前、试 验结束处死动物前各称重一次，观察期间可多次称重）等。记录所有的死 亡情况、出现的症状，以及症状起始的时间、严重程度、持续时间等。
2
化学药物急性毒性试验技术指导原则
一、概述
动物急性毒性试验（Acute toxicity test，Single dose toxicity test），研究 动物一次或 24 小时内多次给予受试物后，一定时间内所产生的毒性反应。
拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验[1]。急性毒性试验处 在药物毒理研究的早期阶段，对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官 具有重要意义。急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和 某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些 与人类药物过量急性中毒相关的信息[1，2]。
三、研究内容 （一）受试物
急性毒性试验的受试物应采用制备工艺稳定、符合临床试验用质量标 准规定的样品，并注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保 存条件及配制方法等，并附有研制单位的自检报告。所用辅料、溶媒等应 标明批号、规格和生产厂家，并符合试验要求。
（二）动物[1 ~ 4]
1、种属：不同种属的动物各有其特点，对同一药物的反应会有所不同。 啮齿类动物和非啮齿类动物急性毒性试验所得的结果，无论是质还是量上 均会存在差别。从充分暴露受试物毒性的角度考虑，应从啮齿类动物和非 啮齿类动物中获得较为充分的安全性信息。因此，急性毒性试验应采用至 少两种哺乳动物。一般应选用一种啮齿类动物加一种非啮齿类动物进行急 性毒性试验。若未采用非啮齿类动物进行急性毒性试验，应阐明其合理性。
药物的安全性评价试验方法
40
长期毒性试验
• 试验目的：观察动物直肠或阴道反复多 次接触受试药物后产生的毒性反应或死 亡情况。
• 试验材料 • 试验方法
41
局部刺激试验
• 试验目的：观察动物直肠一次或多次接 触受试药物后产生的刺激反应情况。
42
作出恰当的评价 3、通过实验结果确定毒性靶器官和毒性表
现 4、可结合其他试验同时观察
第三节 制剂的全身毒性试验
一、静脉注射制剂的全身毒性试验 1、血管刺激性试验 目的：观察受试静脉注射制剂经多次给药后对血
管刺激反应情况。 试验方法： 动物：家兔 分组：试验组、空白对照组 给药方法：多次静脉注射 观察指标：肉眼观察
2、试验材料： （1）动物：大鼠、豚鼠或家兔 （2）药物：液体或粉末制剂 3、试验方法： （1）试验分组：3个剂量组 （2）给药途径：滴入或吸入 （3）观察指标：全身状况、体重、呼吸、循环、
中枢神经系统、四肢活动等变化。 38
滴鼻剂和吸入剂刺激试验
1、试验目的：观察药物一次或多次滴入或吸入后动 物产生的刺激反应。
皮肤。
角质层
表皮 颗粒层
生发层
真皮依附于皮下组织，厚约2mm。
胶原
真皮 弹性硬蛋白
纤维母细胞
31
二、化学物质对皮肤毒性作用的类型 （一）皮肤原发性刺激 指药物直接作用于皮肤引起的病理学反应。
原发性刺激的表现：红斑、水肿、水疱 疹、溃疡、荨麻疹等 作用机理：1、直接刺激作用
类型等。
29
第十九章 局部用药的毒性研究
局部用药的毒性试验是根据局部用药部 位的解剖和生理特点设计的。
涂剂、擦剂
皮肤用药 膏剂、凝胶剂
其他透皮吸收制剂
急性毒性实验
急性毒性实验急性毒性实验是一种基于实验动物进行的可靠、可控的毒性检测方法，主要用于评估一种化学物质在短期接触下对生物体的毒性作用。
以下是急性毒性实验的详细介绍。
一、实验目的1. 评估化学物质的急性毒性作用。
2. 确定一定剂量的化学物质对特定实验动物的最大耐受剂量。
3. 为长期和亚急性毒性实验提供基础数据。
二、实验动物和分组1. 实验动物通常为小鼠、大鼠、兔等。
2. 根据需要确定不同的剂量组，每组一定数量的实验动物。
3. 为了比较不同实验物质的毒性作用，应设置对照组。
三、实验流程1. 预实验：由实验动物的发育期、性别、年龄、体重等因素评估剂量的大小。
2. 实验前麻醉：给实验动物注射一定的麻醉剂，减轻实验操作对实验动物造成的压力与伤害。
3. 实验操作：将事先测定好的化学物质按照设定的剂量进行注射、灌入或其他途径的给药，实验时间尽量控制在24小时内，保持实验环境稳定，记录实验动物对化学物质的反应。
4. 实验后观察：通过观察实验动物的症状、行为、体重、死亡率等指标评估化学物质的毒性作用。
5. 实验结束：根据实验数据计算化学物质的急性毒性指标，判定化学物质是否符合的相应毒性标准。
四、实验准则与安全注意事项1. 操作前应了解细节操作规范及化学物质对实验动物的毒性作用情况。
2. 操作过程中要保持操作环境的清洁整洁，注意安全防护，防止事故的发生。
3. 操作结束后，实验动物应得到合适的处置和善后。
4. 实验需要考虑3R（Reduce, Refine and Replace）原则，减少实验动物数量和痛苦，降低实验道德伦理压力。
五、结论2. 急性毒性实验是毒性检测领域中最常见的实验方法之一，是评估化学物质的毒性作用水平不可或缺的方法。
3. 在实验过程中，实验者应始终注意实验安全，防止事故的发生，以确保实验的科学性和可靠性。
急性毒性试验
三、近似致死量试验 国外近年来有采用少量动物进行近似致死量测定的方法。其中有的类似 LD50的预试验或霍恩氏法。每组用3—4只动物，设多组，详细观察并汜 录动物毒性反应井进行血液学，血液生化以及病理组织学观察。有的采用
剂量递增法即—只动物一个剂量以几何级数递增，根据前个剂量的反应，
决定下—个剂量。或采用剂量累积法，同一批动物间隔一定时间、剂量由 小到大给药，观察毒性反应，同时结合血药浓度的测定，确定动物的急性 毒性反应、靶器官、中毒或致死剂量、毒性反应时的血药浓度。剂量递增 法类似于LD50测定的阶梯法(或称序贯法、上下法)，适用小动物而且毒性 反应出现快的试验，10—20只动物即可测定。剂量累积法则适用大动物， 利用大约6只合格动物即可进行急性毒性试验的全面观察。另外，国外还
第一节
一、动物 (一)动物种
急性毒性试验方法的有关问题
动物种(或系)的差异是动物急性毒性差异的主要原因，药酶则是毒性种差
的重要原因之一。为推测新药对人的急性毒性，某些发达国家动物急性毒性 试验要求包含非啮齿类动物(除家兔外)在内的两种动物，我国对此未作出明 确规定。由于中药已在临床长期使用，一般认为，如尤特殊情况，使用一种 动物已基本上达到急性毒性试验的目的。目前虽常用的实验动物是小鼠或大 鼠。但在某些特殊情况下，例如受试物中已知含有强烈胃肠刺激物，就还应 再采用非啮齿类大动物进行实验，否则，即使毒性较大(如巴豆)也并不能引
正式试验：在预试验Dn和Dm剂量范围内按等比设三个以上剂量组，其组间 剂量的比值，一般在1；0．6至1：0．9范围内。购入动物试验前应驯化1星 期，随机或按体重分组，每组10只以上，雌雄各半，分别编号，给药前应禁 食(不禁水)过夜。各给药组和溶剂对照组按体重给药后，试验当日应多次观
蒙药沙日胶囊的急性及长期毒性实验
１ 急性毒性实验方法
１１ 动物 ： ． 昆明种 小 自 鼠， 体重 Ｉ —２ｇ 雌雄各 半 。 ８ ２， 随机分
组 。由内蒙古大学实验 动物中心提供 ， 沽级为 １ ｝ 爵 级。 １２ 药 品 ： １胶囊 ， ． 沙３ 内蒙古 医学院药剂 教研室提供 。三子
散 由内蒙古蒙药制药厂提供 ， 批号 ：１１７ ０ ０１ 。 １３ 方法 ： 自鼠灌 胃给药通 过预 实验 计算 出 Ｏ （ ｎ 和 ． 小 ％ Ｄ）
沙１ ３胶囊是我 国药典 收藏 的蒙 古族 用药验方 “ 三子 散” （ 诃子 、 川楝子 、 栀子） 经药剂学研究改 进成 为胶囊制 剂 ， 使其 便于临床的定 量使 用。沙 日胶 囊在药 效学研 究 中证实 具有 体内抗 菌和体 外抑 菌的作用 ， 了更进 一步的 探讨 ， 在用 为 其
２ １ 动物 ： ｓｒ ． Ｗｉａ 大白 鼠， ｔ 体重 １０—１０ ２ ５ｇ雌雄各半 ， 随机分
组 。由内蒙古大学实验动物 中心提供 ， 洁级为 １ 清 级。
２２ 方法 ： ． 动物选 用 ６—８周 龄大 白鼠每组 ２ ０只， 雌雄各 半， 雌雄分笼饲 养 ， 给药前观 察 ２ ４小 时 ， 录食 量 、 记 饮水量 、 体重 。 ２３ 给药方 法： ． 每天上 午灌 胃给药 分对 项组 、 低剂 量组 、 中 剂重组 、 高剂 量组 。 ２４ 实验方法： ． 连续 给药 ２周及 ４周后分 别从受 试组 中随 机取 出 １ Ｏ只， 断头 后 立 即解 剖 取 出肝 、 、 ， 重并 做记 肾 肺 称
郑 伦
王烈群
张 谰 高建钢
摘 要 ： ： 究蒙药沙 日 囊的急性及 长期毒性 实验 ， 目的 研 胶 为临床使 用提供 科学依据。方 法 ： 用 中药毒性 实验 及安全 实验 方 采
4-2 急性毒性试验程序与急性毒性评价
第二节急性毒性试验程序与急性毒性评价一、急性毒性试验程序(一) 急性试验剂量分组探讨外来化合物急性毒性应首先测定其半数致死剂量或浓度(LD50或LC50)。
对一个未知毒性的外来化合物求其LD50(LC50)，应先做预试验。
做预试验方法很多，这里仅介绍其中一种。
首先了解分析受试化合物的化学结构和其理化性质，确定其所属已知化合物或其衍生物的种类，有何特殊基团及其分子量、熔点、沸点、比重、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂溶性等，依此查阅文献，找出与受试化合物化学结构与理化性质近似的化合物的毒性资料，并以其LD50(LC50)值作为受试化合物的预其毒性中值；但应注意，一定是相同动物种系和相同接触途径。
以此预期毒性中值为待测化合物的中间剂量组，再上下各推一到两个剂量组做预试验。
每个剂量组间的组距可以大些，有利于找出受试化合物的致死剂量范围。
初起组距可用剂量间的4倍差，即以log4(log4＝0.6)来划分各组剂量。
求外来化合物LD50时设置几个剂量组较为合适，应依预试验结果而定。
一般设置5~7个剂量组即可，它即符合统计计算要求又可节省人力和财力。
每个剂量组的动物数，小鼠不少于10只、大鼠6~8只、家兔4~6只，若设计采用霍恩氏法计算LD50时，动物数可减少。
每组动物应雌雄各半；如化合物毒性有性别差异，则应分别求雌、雄性动物各自的LD50(LC50)。
(二) 观察持续时间测定外来化合物的LD50(LC50)，一般要求计算实验动物接触化合物之后两周内的总死亡数。
对于一些速死性化合物求其LD50(LC50)也可仅计算24小时的死亡率。
也可仅计算24小时的死亡率，有些速杀性化合物的24小时LD50与两周LD50值往往没有差别。
但应注明是多少时间的LD50值，以便于在进行毒性比较时有共同的基础。
在观察期间应保障实验动物有完全的膳食、充足的饮水及适宜的温湿度环境，以防止动物出现非中毒性死亡。
(三) 症状观察观察实验动物接触外来化合物的中毒症状是了解该化合物急性毒性的十分重要的一环，是补充LD50这个参数不足的重要方面。
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急性毒性试验佚名试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1．动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%。
实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2．饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3．受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1．伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2．最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3．最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4．单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
如初始剂量出现严重的毒性反应，那就用下一个挡次的剂量进行预试，如该动物存活，就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。
每个剂量给一只动物，预试一般不超过5只动物。
每个剂量试验之间至少应间隔24小时。
给受试药物后的观察期至少7天，如动物的毒性反应到第7天仍然存在，尚应继续再观察7天。
在上述预试的基础上进行正式试验。
每个剂量最少用10只动物，雌雄各半。
根据预试的结果，由前面所述的四种剂量中选择出可能产生明显毒性但又不引起死亡的剂量；如预试结果表明，50mg/kg引起死亡，则降低一个剂量档次试验。
试验观察：给受试药物后至少应观察2周，根据毒性反应的具体特点可适当延长。
对每只动物均应仔细观察和详细记录各种毒性反应出现和消失的时间。
给受试药物当天至少应观察记录两次，以后可每天一次。
观察记录的内容包括皮肤、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循环、自主及中枢神经系统行为表现等。
动物死亡时间的记录要准确。
给受试药物前、给受试药物后1周、动物死亡及试验结束时应称取动物的体重。
所有动物包括死亡或处死的动物均应进行尸检，尸检异常的器官应作病理组织学检查。
固定剂量试验法所获得的结果，参考下表标准进行评价。
单次口服固定剂量试验法结果的评价二、非啮齿类动物的急性毒性试验（近似致死剂量试验）（一）试验条件1．动物品系：一般用6只健康的Beagleg狗和猴。
选用其他种属的动物时应说明原因。
年龄一般为6-8月龄。
同批试验中，试验初始动物的体重应不超过或者低于所用动物平均体重的20%。
试验前至少驯养观察2周，观察记录动物的行为活动、饮食、体重、心电图及精神状况，择其正常、健康、雌性无孕者作为受试动物。
2．饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
注明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3．受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）近似致死剂量试验方法：1．估计可能的毒性范围：根据小动物的毒性试验结果、受试药物的化学结构和其它有关资料，估计可能引起毒性和死亡的剂量范围。
2．按50%递增法，设计出含10-20个的剂量序列表。
3．根据估计，由剂量序列表中找出可能的致死剂量范围，在此范围内，每间隔一个剂量给一只动物，测出最低致死剂量和最高非致死剂量，然后用二者之间的剂量给一只动物，此剂量即为所要求的近似致死剂量。
4．给药途径：原则上应与临床用药途径相同，如有不同，应说明理由。
5．观察记录：给受试药物后观察14天，当天给受试药物后持续观察30分钟，第1-4小时再观察一次，以后每天观察一次。
仔细观察记录各动物的中毒表现和其出现和消失时间、毒性反应的特点和死亡时间。
中毒死亡或中毒表现明显者，需作大体解剖检查。
尸检异常的组织器官应作组织病理学检查。
三、说明：（一）创新药物应提供两种动物的急性毒性试验资料，一种为啮齿类动物，另一种为非啮齿类动物。
（二）溶于水的药物，啮齿类动物应提供两种给药途径的毒性试验资料，一种静脉注射途径，一种临床途径，若临床用静脉注射途径时，可只做静脉注射的急性毒性试验。
反复给药的毒性试验（长期毒性试验）一、目的观察动物反复给予受试药物后，对机体产生的毒性反应及其严重程度，主要的毒性靶器官及其损害的可逆性，提供无毒性反应剂量及临床上主要的监测指标，为制定人用剂量提供参考。
二、试验条件（一）动物1．动物品系：一般用两种动物，一种啮齿类动物，另一种为非啮齿类动物。
常用SD或Wister大鼠和Beagle狗或者猴。
选用其他动物，应说明原因。
2．年龄：根据试验期限的长短而定。
大鼠一般6～9周龄。
Beagleg狗一般6～12月龄。
试验开始时体重差异不应超过或者低于该次试验动物平均体重的20%。
3．实验前至少驯养观察2周。
观察记录动物的行为活动、饮食、体重、精神状况、心电图、有关血液学及血液生化学等功能指标。
选择正常、健康、雌性无孕动物作为受试动物。
（二）饲养管理1．饲料：所用饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应提供生产单位。
2．实验的环境条件：应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
（三）受试药物：应写明受试物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
三、试验方法（一）试验分组：一般设三个剂量组和一个对照组。
必要时尚需设溶媒对照组。
低剂量组原则上应高于同种动物药效有效剂量，在此剂量下，动物不出现毒性反应；高剂量组原则上应使动物产生明显的或严重的毒性反应，甚至引起少数动物死亡；为观察毒性反应的剂量关系，在高、低剂量组之间应再设1个中剂量组。
（二）动物数：每组动物的数量应根据给药周期的长短决定。
大鼠一般为雌、雄各10～30只；Beagle狗或者猴，一般雌、雄各3～4只。
（三）给药途径：原则上应与临床用药途径相同。
若用其他途径应说明原因。
口服给药一般采用灌胃给予受试药物。
如采用将受试药物混入饲料中服用，应提供受试药物与饲料混合的均匀性、受试物的稳定性、有关受试物质量检查及说明动物食入规定受试药物的量等方面的资料，以确保获得准确可靠的试验结果。
临床用药途径为静脉注射时，由于给药周期长，大鼠静注有困难时，可用其它适宜的途径代替。
原则上应每天给药。
试验周期长的试验，也可采取每周给药6天。
每天给药时间应相同。
应根据体重增长情况适时调整给药量。
（四）观测项目：原则上应根据受试物的特点选择其相应的观测指标。
一般共性的观测指标最少应包括以下内容：1．一般观察：外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便性状、食量、体重、给药局部反应、狗的心电图变化等。
大鼠群养时，应将出现中毒反应的动物取出单笼饲养。
发现死亡或濒死动物，应及时尸检。
试验期间如动物发生非药物性的疾病反应时，应及时进行隔离处理。
2．血液学指标：红细胞、网织红细胞计数、血红蛋白、白细胞总数及其分类、血小板。
3．血液生化指标：天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、丙氨酸氨基转换酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、血糖（GLU）、总胆红素（T-BIL）、肌酐（Crea）、总胆固醇（T-CHO）。
4．系统尸解和病理组织学检查：系统尸解：应全面细致，为组织病理学检查提供参考。
脏器重量：一般应称取下列脏器和组织的重量并计算脏器系数：心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、睾丸、子宫、脑、前列腺。
病理组织学检查：对照组和高剂量组动物及尸检异常者应详细检查，其它剂量组在高剂量组有异常时才进行检查。
内容包括：肾上腺、胰腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、脑垂体、前列腺、脑、脊髓、心、脾、胸骨（骨和骨髓）、肾、肝脏、肺、淋巴结、膀胱、子宫、卵巢、甲状腺、胸腺、睾丸（连附睾）、视神经。
（五）恢复性观察：最后一次给受试药物后24小时，每组活杀部分动物检测各指标，留下部分动物，根据受试物的特点，继续观察一定时间再活杀检查，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。
在此期间除了不给受试物外，其它观察内容与给受试物期间相同。
（六）观测指标的时间和次数：应根据试验期限的长短和受试物的特点而定。
原则上应尽量发现最早出现的毒性反应。
四、说明（一）关于反复给药毒性试验的期限：原则上根据临床用药的疗程而定。
1．一般药物的给药期限，可参考下表设计：表1一般药物反复给药的毒性试验期限2．细胞毒类受试药物，由于细胞毒类受试药物的毒性强弱差别较大，临床上的用药方案也有很大差别，有的一周给药一次，有的两周甚至三周给药一次，因此，很难规范为一种模式。
应根据具体受试药物的特点和反复给药毒性试验的目的设计毒性试验方案。
急性毒性是指动物一次或24小时内多次接受一定剂量的受试物，动物在短期内出现的毒性反应。
其目的是为新药的研发提供参考信息。
中华人民共和国卫生部于1993年颁发的《中药新药研究指南》和国家药品监督管理局1999年颁发的《中药新药药理毒理研究的技术要求》，对于统一、规范中药急性毒性试验，推动我国中药的研究和开发起到了积极的作用。
但随着新药研究手段的不断改进，对中药、天然药物认识的进一步深入，这些要求越来越表现出它的局限性。
多数中药、天然药物作用温和，中药复方制剂通过合理的配伍，也可能使毒性减轻。
多数中药、天然药物新药，其处方来源有些是古方，有些是医院制剂或临床经验方，有一定的临床应用基础。
但由于现代中药、天然药物制剂运用了大量的新技术甚至新的理论，与传统中药相比，物质基础和给药方式可能有明显改变，而有些改变带来的结果又是未知的，特别是当某些成分的含量明显提高后，其药理作用可能会明显增强，毒性反应也可能明显增大。
因此，中药、天然药物进行急性毒性试验研究十分必要。