微生物计数
微生物菌落总数计数方法
微生物菌落总数计数方法微生物菌落总数计数方法有很多种，下面列举了其中的50种方法并对其进行详细描述：1. 胶平板法：将微生物样品通过稀释后均匀涂布在富营养培养基上，培养后统计菌落数量。
2. 液体计数法：使用专门的装置进行微生物菌落计数，例如波形计数器。
3. 膜过滤法：将微生物样品通过膜过滤器，然后将膜放到富养分培养基上进行培养和计数。
4. 容积法：将微生物样品通过稀释，然后使用容积计数器对其进行计数。
5. 水平采样法：将微生物样品通过固体培养基，然后根据采样水平进行菌落计数。
6. 微阵列计数法：使用微阵列技术进行微生物菌落计数，高通量，自动化程度高。
7. 波数计数法：通过光学检测装置对微生物样品的波数进行计数。
8. 流式细胞技术：通过流式细胞仪对微生物样品中的细胞进行计数和分析。
9. PCR技术：通过定量PCR对微生物样品中的特定基因进行定量，从而间接计算出微生物菌落总数。
10. 分光光度计法：通过分光光度计测定微生物样品中生物的光学密度，进而计算其菌落总数。
11. 过膜法：利用薄膜将微生物分布均匀后计数。
12. 电子计数法：通过电子显微镜进行微生物菌落计数。
13. 温度计数法：根据微生物在不同温度下的生长特性进行计数。
14. 荧光法：利用荧光染料对微生物菌落进行标记并计数。
15. 光学显微镜法：利用光学显微镜对微生物进行直接观察和计数。
16. 超声波法：利用超声技术将微生物分散均匀后计数。
17. 图像分析法：对微生物样品在图像上的特征进行分析，并计算菌落总数。
18. 颜色计数法：通过颜色反应对微生物菌落进行计数。
19. 电泳计数法：通过蛋白电泳对微生物进行计数。
20. 微型生物反应器法：利用微型生物反应器的特性对微生物进行计数。
21. 电化学法：通过电化学技术对微生物样品进行计数。
22. 生物传感器法：利用生物传感器对微生物进行快速计数。
23. 感光计数法：利用光敏感材料对微生物进行计数。
24. 气溶胶计数法：利用气溶胶技术对微生物进行计数。
如何计算食品中微生物的数量
食品中微生物数量的计算方法主要有：
1. 直接计数法（光测定法）：这是一种传统的计数方法，它通过显微镜或扫描计数仪来直接计数。
这种方法适用于能被杀死并能通过显微镜或扫描仪观察的微生物，如细菌和酵母。
2. 显微镜检视法：这是一种基于显微镜的计数方法，它可以在显微镜下观察到各种微生物，包括细菌、酵母、霉菌和原生动物。
通过计数每个视野中的微生物数量，可以计算出总体积中的微生物数量。
3. 电子探测器计数法：这是一种基于电子探测器的计数方法，它使用电子探测器来检测微生物的代谢活动或物理特征，如细胞大小、密度或形状。
这种方法适用于各种类型的微生物，包括细菌、酵母和霉菌。
4. 培养基计数法：这是一种基于培养基的计数方法，它通过在培养基中生长微生物来计数。
通过在特定培养基中培养样品，可以观察到微生物的生长和繁殖，并使用显微镜或电子探测器进行计数。
需要注意的是，食品中微生物数量的计算方法取决于所使用的实验室技术和设备，以及所研究的微生物类型和数量。
在进行食品微生物数量计算时，应该遵循相关的实验室操作规程和质量控制措施，以确保结果的准确性和可靠性。
微生物计数方法
微生物计数方法微生物计数是许多领域中重要的分析方法，包括环境科学、食品科学、医学和生物技术。
正确的计数方法能够准确地估计样品中微生物的数量，对于研究和工业应用都是至关重要的。
下面将介绍几种常用的微生物计数方法。
血细胞计数器法是一种使用显微镜进行微生物计数的经典方法。
该方法使用血细胞计数器对微生物样品进行计数，每个格子中的微生物数量被计算出来，然后进行统计分析。
此方法的优点是准确性高，但是耗时长，操作繁琐，需要熟练的操作人员。
流式细胞术是一种使用流式细胞仪进行微生物计数的现代方法。
该方法将微生物样品通过流式细胞仪进行计数和分析，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，但是设备成本高，维护成本也较高。
自动细胞计数器法是一种使用自动细胞计数仪进行微生物计数的现代方法。
该方法使用自动细胞计数仪对微生物样品进行计数，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，而且设备相对较为经济实惠，易于推广应用。
平板计数法是一种常用的细菌计数方法。
该方法将微生物样品涂布在平板上，培养后计算菌落数量，从而得出样品中的细菌数量。
此方法的优点是简单易行、成本低，但是结果受培养条件和操作者技能水平的影响，准确性相对较低。
不同的微生物计数方法具有不同的优缺点，应根据具体的研究目标和实际情况选择合适的方法。
为了提高计数的准确性，需要注意样品的采集、保存、制备和处理等方面的问题，确保样品的质量和代表性。
微生物的分离与计数是微生物学中重要的实验技术之一。
通过分离和计数，我们可以获得微生物群体的相关信息，如种类、数量、生长状况等，对于微生物学研究、应用以及工业生产等领域都具有重要的意义。
选择合适的培养基：根据目标微生物的种类和生长需求，选择适合的培养基。
培养基应具有营养丰富、透明度高、易于观察等特点。
制备样品：从目标环境中采集样品，如土壤、水、食品等，并进行预处理，以去除不需要的杂质和大型生物。
微生物计数方法
1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。
用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。
所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。
样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。
琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。
固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。
在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。
为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。
5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1%蛋白胨水），后者对食品中已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。
如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。
倾注培养1．操作方法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
测定微生物总数的方法
测定微生物总数的方法测定微生物总数是微生物学研究中的一项重要任务，它可以帮助我们了解微生物在环境中的分布和数量。
本文将介绍几种常用的测定微生物总数的方法。
一、直接计数法直接计数法是最直接、最常用的测定微生物总数的方法之一。
它通过使用显微镜观察样品中的微生物细胞数目来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、土壤样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于玻璃片上，用显微镜观察。
3. 在显微镜下，使用目镜和物镜进行放大观察，并使用计数室或计数网格进行计数。
4. 统计不同视野中的微生物数量，并计算平均值，从而得到微生物总数。
二、培养法培养法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品在培养基上培养并生长，然后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取适量的样品，如空气、食品、药品等，制备适当的稀释液。
2. 取一定量的稀释液接种于含有富营养物的培养基上。
3. 将培养基培养在适当的温度和湿度条件下，使微生物生长繁殖。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
三、膜过滤法膜过滤法是一种常用的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品过滤到膜上，然后将膜放置在培养基上进行培养和生长，最后观察和计数生长的菌落数来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 将稀释液通过膜过滤装置过滤到膜上。
3. 将膜放置在含有富营养物的培养基上进行培养和生长。
4. 观察培养基上生长的菌落，并进行计数。
5. 根据计数结果，计算微生物总数。
四、荧光显微镜法荧光显微镜法是一种高级的测定微生物总数的方法，它通过将微生物样品染色，并利用荧光显微镜观察和计数荧光染色的微生物细胞来进行测定。
具体操作步骤如下：1. 取一定量的样品，如水样、食品样等，制备适当的稀释液。
2. 取适量的稀释液滴于载玻片上，进行定性或定量染色。
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定方法微生物数量的测定方法微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中，也存在于人体内外。
了解微生物的数量对于环境监测、食品安全、医学诊断等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的微生物数量测定方法。
1. 直接计数法直接计数法是最直接、最常用的微生物数量测定方法之一。
它通过显微镜观察和计数来确定微生物的数量。
首先，将待测样品制备成适当的悬浮液，然后在显微镜下观察，并使用计数器进行计数。
这种方法适用于细菌和酵母等较大的微生物。
但是，由于显微镜观察需要较高的技术水平和时间，所以无法快速测量大量样品。
2. 培养法培养法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过培养微生物并计数生长的菌落来确定数量。
首先，将待测样品制备成适当的培养基，然后在恰当的温度和湿度条件下培养一段时间。
培养基中的微生物会形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于大部分微生物，但是它需要一定的培养时间，并且某些微生物可能无法在常规培养基上生长。
3. 膜过滤法膜过滤法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过将待测样品过滤到膜上，并将膜培养在适当的培养基上来确定数量。
首先，将待测样品通过特定孔径的过滤器过滤，然后将过滤后的膜放置在培养基上培养。
培养基中的微生物会在膜上形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。
这种方法适用于水样、空气样等液态和气态样品。
4. 分子生物学方法分子生物学方法是一种新兴且快速发展的微生物数量测定方法。
它通过检测和分析微生物DNA或RNA来确定数量。
常用的分子生物学方法包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）等。
这些方法可以快速、准确地测定微生物的数量，并且可以检测到少量微生物。
但是，分子生物学方法需要一定的实验设备和技术，并且对样品预处理要求较高。
总结起来，微生物数量的测定方法有直接计数法、培养法、膜过滤法和分子生物学方法等。
微生物计数解读
使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或 中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克 样品)中微生物细胞的数量。
已知：1毫升=1cm3=1000mm3
１cm3体积应含有小方格数为1000mm3／（ l／4000mm3） ＝４X106
计数
左上、左下、右上、右下 （100小格） 左上、左下、右上、右下、中格 （80小格）
16中格× 25小格计数室
25中格 × 16小格计数室
操作步骤
l.菌悬液制备 以无菌生理盐水制成浓度适当的菌悬液。每小格内约 有3~5个菌体为宜。 2.镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物， 则需清洗，吹干后才能进行计数。 3.加样品 将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的 毛细滴管将摇匀菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌 液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数 室均能充满菌液。取样时先要摇匀菌液；加样时计数 室不可有气泡产生。
通常测定细菌菌剂含菌数时，10-7、10-8、10-9 土壤细菌数量，采用10-4、10-5、10-6 放线菌数量，采用l0-3、10-4、10-5 真菌数量，采用10-2、10-3、10-4
2．平板接种培养
混合平板培养法 涂抹平板培养法。
（1）混合平板培养法
将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置 三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液 各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释 液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释 液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度 时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已 融化并冷却至45—50℃的细菌培养基，轻轻转动平板 (P112)，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温 培养。至长出菌落后即可计数。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
(1)先将计数板盖上盖片在显微镜下，从低倍找到计数器位 置，不动。
(2)将稀释好菌悬液摇匀，用滴管吸入由盖玻片边缘滴入让 其自行渗透，使室充满（不宜过多，也不可有气泡）。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
第8页
(3)静止3-5分钟，先在低倍镜观察，然后换成高倍 镜进行计数。样品不宜太浓或太稀，最好每小格 控制在5-10个菌体为宜，计数需要重复二次。取 平均值。先后二次误差太大，需再重复计数。
2.微生物大小测定
பைடு நூலகம்
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
第5页
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
第6页
三、器材
显微镜；血球计数板；手揿计数器；盖玻片； 目镜测微尺；镜台测微尺。
酵母菌菌悬液； 枯草杆菌和金黄色葡萄球菌染色标本。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
第7页
四、操作步骤
在计数时，通常以五个中方格总菌数（每个中方格中数四 个小方格）即20个小方格总菌数（求平均值）。
比如：设20个小方格中总菌数为A，悬液稀释度B，那么 大格（0.1立方毫米总菌数） A/20×400×B。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
第3页
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
第4页
测量枯草杆菌长和宽及金黄色葡萄球菌直径。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
第12页
五、试验结果
1、P48题1 2、P92题1
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
第13页
六、思索题
1、依据你体会，用血球计数板误差主要来自 那些方面？应怎样防止误差，力争准确？
2、当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改 变接物镜，目镜测微尺每格所量镜台上物体 实际长度是否相同？为何？
微生物限度计数方法
微生物限度计数方法微生物限度计数方法是微生物学研究中常用的一种实验方法，它通过将样品中的微生物进行定量计数，从而评估样品的微生物污染程度。
本文将对微生物限度计数方法进行详细介绍，希望能为微生物研究提供有指导意义的参考。
微生物限度计数方法通常包括以下几个步骤：1. 样品制备：首先，需要将待测样品制备成适当的形式，以便于对微生物进行计数。
例如，对于液态样品，可以采用稀释平板法或过滤法进行计数；对于固体样品，可以使用剁碎法或振荡法等方法进行处理。
2. 稀释平板法：稀释平板法是一种常用的微生物计数方法。
该方法的基本原理是将不同稀释倍数的样品溶液分别加到含有培养基的平板上，经过培养后，可以根据每个平板上微生物的生长数量来计算样品中微生物的含量。
这种方法要求制备一系列稀释液，将样品进行逐步稀释，并接种到含有培养基的平板上。
3. 过滤法：过滤法适用于液态样品的微生物计数，尤其是样品中微生物数量较高的情况。
该方法的原理是通过滤膜，将微生物过滤出来并附着在膜上，然后将滤膜放置在培养基上进行培养。
培养后，可以通过计数膜上微生物的数量来评估样品中微生物的含量。
过滤法具有操作简便、有效快速等优点，适用于大量样品的计数。
4. 其他方法：除了稀释平板法和过滤法，还有一些其他常用的微生物计数方法，如MPN法、薄膜法、电子计数法等。
这些方法各有特点，可根据实际研究需要选择合适的方法进行微生物计数。
微生物限度计数方法在微生物学研究中具有重要意义。
通过对样品中微生物的计数，可以评估其污染程度，为食品安全、医药生产、环境监测等领域提供可靠的数据依据。
同时，微生物限度计数方法也有助于监控微生物的生长趋势，预测潜在的微生物污染风险，并采取相应的控制措施。
总之，微生物限度计数方法是微生物学研究中必不可少的一部分。
通过了解和掌握不同的计数方法，科研人员可以准确评估样品中微生物的含量，并及时采取措施来控制微生物的污染传播。
相信本文的内容能够为微生物研究者提供有用的指导意义。
微生物计数法
微生物计数法1）血球计数板法:血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1mm2面积上刻有400个小方格。
通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。
这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。
2）染色计数法：为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。
借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。
如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。
3）比例计数法：将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。
这种计数方法比较粗放。
并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。
4）液体稀释法：对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（most probablynumber）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。
该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。
5）平板菌落计数法：这是一种最常用的活菌计数法。
将待测菌液进行梯度稀释，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。
保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。
一般以直径9cm的平板上出现50-500个菌落为宜。
但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。
微生物的计数实验报告
微生物的计数实验报告引言微生物是一类生活在我们周围、无法肉眼直接观察到的微小生物体，它们在自然界中起着重要的作用。
为了了解微生物的分布和数量，科学家们开展了许多微生物计数实验。
本实验旨在通过简单的计数实验方法，了解微生物的数量和分布情况。
材料与方法实验材料•试管•试管架•高倍显微镜•盖玻片•种植平板•物理盐水•洗净的玻璃滴管•显微镜目镜刻度尺实验步骤1.准备工作：将试管和盖玻片用70%乙醇消毒，待干燥后用吹吸管将物理盐水加入到试管中。
2.取一定量的样品：将待测样品取出一定量加入到试管中，摇匀使样品均匀分布。
3.进行稀释：根据需要，将待测试样品进行适当稀释。
4.取样：用洗净的玻璃滴管取出适量的稀释液，滴于盖玻片上。
5.进行计数：将盖玻片放置在显微镜下，调节到适当倍数，使用显微镜目镜刻度尺计数。
计数时应随机选取视野内的区域进行计数，统计每个区域内微生物的数量，并计算平均值。
6.记录结果：记录每个区域的计数结果，并将结果求平均得到最终的微生物数量。
结果与讨论通过以上实验步骤，我们得到了微生物的数量统计结果。
根据实验结果，我们可以得出一些结论和讨论。
首先，微生物的数量和分布与样品来源和环境密切相关。
我们可以通过对不同样品的计数实验，对微生物的数量和分布情况进行比较研究。
这有助于我们了解微生物在不同环境中的生长和繁殖情况。
其次，微生物计数实验也可以评估环境中微生物的污染程度。
通过对环境样品的计数实验，我们可以判断环境是否存在微生物污染，进而采取相应的措施进行清洁和消毒。
此外，微生物计数实验还可以用于研究微生物的生命周期和生长速率。
通过定期进行微生物计数实验，我们可以观察微生物数量的变化，进而了解其生命周期和生长速率。
结论微生物的计数实验是研究微生物数量和分布的重要手段。
通过本实验，我们了解了微生物计数实验的基本步骤，并对微生物数量和分布进行了一定的观察和分析。
微生物计数实验对于环境监测、食品安全、医学研究等领域具有重要意义，有助于我们更好地了解和控制微生物的生长和繁殖。
微生物的计数方法
1.血细胞计数法将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再以此为依据，估算总菌数。
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。
②对压在小方格界线上的细菌，应当取平均值计数。
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化2.稀释涂布平板法原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。
培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。
但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。
④此法若不培养成菌落，可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上，经固定染色后在显微镜下计数，这样又称涂片计数法。
染色可用台盼蓝，台盼蓝能使死细胞染成蓝色，可分别计数死细胞和活细胞。
3.滤膜法滤膜法是当样品中菌数很低时，可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。
然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数。
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。
例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。
在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。
此法也是统计样品中活菌的数目。
4.比浊法原理是在一定范围内，菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。
因此可借助与分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。
实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。
转载微生物计数方法汇总
引言概述：微生物计数是一种用于确定水、食品、药物、环境等中微生物数量的常用方法。
通过准确计算微生物的数量，可以评估其对人类健康和环境的影响，并采取相应的控制措施。
本文将对常用的微生物计数方法进行汇总，包括传统培养法、分子生物学方法、流式细胞术和显微分析等。
正文内容：1.传统培养法1.1常用菌落计数法1.1.1平板计数法1.1.2液体计数法1.1.3膜过滤计数法1.2确定菌落形成单位（CFU）1.2.1CFU的计算方法1.2.2CFU与微生物数量的关系1.3常用培养基和培养条件1.3.1非性别细菌培养基1.3.2好氧和厌氧条件的培养基1.3.3具有特定功能的培养基1.4培养法的优缺点1.4.1优点1.4.2缺点1.5常见的微生物计数错误和解决方法1.5.1误差来源1.5.2解决方法2.分子生物学方法2.1PCR技术2.1.1原理2.1.2应用领域2.2实时荧光定量PCR技术2.2.1原理2.2.2应用领域2.3DNA微阵列技术2.3.1原理2.3.2应用领域2.4优点和局限性2.4.1优点2.4.2局限性3.流式细胞术3.1原理3.2鉴别和定量微生物种群3.3应用领域3.4优点和局限性4.显微分析法4.1直接显微镜计数法4.1.1复式显微计数法4.1.2平行法显微计数法4.2涂片显微法4.2.1移动计数法4.2.2固定计数法4.2.3确定营养级别4.3优点和局限性4.3.1优点4.3.2局限性5.其他新兴方法5.1基于纳米技术的微生物计数方法5.2光学技术和化学分析方法5.3微生物计数自动化设备5.4应用领域和趋势总结：微生物计数是一项重要且复杂的工作，可通过传统培养法、分子生物学方法、流式细胞术和显微分析法等多种方法进行。
每种方法都有其优缺点，应根据具体需求选择适合的计数方法。
随着技术的不断进步和新兴方法的应用，微生物计数方法将更加准确、高效，并在各个领域得到广泛应用。
微生物计数方法
微⽣物计数⽅法1．操作⽅法：以⽆菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌⽣理盐⽔或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加⼊稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。
⽤1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注⼊含有9ml灭菌⽣理盐⽔或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释⼀次即换⽤1⽀1ml灭菌吸管。
2．⽆菌操作：操作中必须有“⽆菌操作”的概念，所⽤玻璃器⽫必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。
所⽤剪⼑、镊⼦等器具也必须进⾏消毒处理。
样品如果有包装，应⽤75%⼄醇在包装开⼝处擦拭后取样。
操作应当在超净⼯作台或经过消毒处理的⽆菌室进⾏。
琼脂平板在⼯作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中⼀点，宜多采⼏个部位。
固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每⼀稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每⼀稀释度应更换⼀⽀吸管。
在进⾏连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流⼊，勿使吸管尖端伸⼊稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。
为减少稀释误差，SN标准采⽤取10mL稀释液，注⼊90mL缓冲液中。
5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌⽣理盐⽔，有的采⽤磷酸盐缓冲液（或0.1%蛋⽩胨⽔），后者对⾷品中已受损伤的细菌细胞有⼀定的保护作⽤。
如对含盐量较⾼的⾷品（如酱油）进⾏稀释，可以采⽤灭菌蒸馏⽔。
倾注培养1．操作⽅法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平⽫中，每个稀释度做两个平⽫。
微生物计数
引言概述：微生物计数是一种常用的实验方法，用于确定给定样品中微生物的数量。
微生物包括细菌、真菌、病毒等，在环境、食品、医疗和制药等领域具有广泛的应用。
微生物计数可以帮助我们了解样品中的微生物污染程度，从而采取相应的控制措施。
本文将从样品采集、培养基选择、培养方法、计数方法和数据分析等方面进行详细阐述。
正文内容：一、样品采集1.选择合适的采样工具，如无菌棉签、采样棒等。
2.选择适当的采样位置，例如环境中的空气、地表、水体等，食品中的表面、内部等。
3.采样前要对采样工具进行灭菌处理，以避免污染。
二、培养基选择1.根据微生物的需求选择适当的培养基，如营养琼脂、作用琼脂等。
2.营养琼脂适用于大多数微生物的生长，而作用琼脂则会选择性地促进某些微生物的生长。
3.考虑到培养基的成本和专业性，可以选择购买市售的培养基或根据需要自制。
三、培养方法1.无菌技术是进行微生物培养的关键，包括消毒台、无菌器材的使用等。
2.根据微生物特性选择适当的培养条件，包括温度、湿度、pH 值等。
3.培养时间的确定需要参考微生物生长特性，一般应根据标准方法进行培养。
四、计数方法1.直接计数法可以直接观察显微镜下的微生物数量，适用于样品中微生物数量较少的情况。
2.布斯计数法通过在琼脂平板上进行培养，根据菌落的数量来估算微生物的数量。
3.膜过滤法适用于微生物数量较多的情况，将样品过滤到膜上，再将膜放在琼脂平板上培养。
4.测定浓度的方法有直接读数法、稀释法和纷悬液法等，根据实际情况选择合适的方法。
五、数据分析1.进行数据统计，计算平均值、标准差等统计指标。
2.结合样品来源、培养条件等因素进行数据分析，寻找异常情况或抗原菌的存在。
3.统计分析结果，对不同样品进行对比，评估微生物污染程度。
总结：微生物计数是一种重要的实验方法，可以用于确定样品中微生物的数量。
在进行微生物计数时，需要注意样品采集、培养基选择、培养方法、计数方法和数据分析等因素。
合理操作和准确的数据分析可以提高微生物计数的准确性和可靠性，为环境控制和品质监测等方面提供参考依据。
微生物计数方法有哪些
微生物计数方法有哪些
微生物计数方法有以下几种：
1. 平板法：将微生物样本或其稀释液均匀涂布在专用培养基的平板上，培养一定时间后，根据形成的菌落数量进行计数。
2. 液体计数法：使用计数室和显微镜，在显微镜下直接观察并计数液体中的微生物数量。
3. MPN法：根据微生物在一系列稀释液的阳性和阴性反应，根据统计学原理计算出微生物数量。
4. 过滤法：通过将微生物样本过滤到培养基上，可以将微生物固定在培养基表面上，以便进行计数。
5. 流式细胞仪：利用细胞在流体中流动的特性，利用光散射、荧光等技术进行微生物计数。
除了以上几种常用的计数方法，还有一些其他的方法用于微生物计数，如近红外光谱法、PCR法、逆转录-聚合酶链反应等。
这些方法可以根据实际需要进行选择和应用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
血球计数板
A.正面图 B.纵切面图 1.血球计数板 2.盖玻片 3.计数室
16小格 × 25中格计数室
25小格 × 16中格计数室
图5-2 计数室的两种刻度形式
每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为 1mm2，每个小方格的面积为1／400mm2，盖上盖玻 片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所 以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm3，每个小方格 的体积为l／4000mm3。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
每ml(g)样品中的活菌数= （每皿菌落数平均值/取样体积）×稀释倍数
混合平板计数法： 每ml(g)样品的菌数=同一稀释度几次重复的 菌落平均数×稀释倍数 涂抹平板计效法： 每ml(g)样品的菌数=同一稀释度几次重复的 菌落平均数×10×稀释倍数
将实验结果填入下表中
菌落计数规则：
（一）选择平均菌落数在30~300间的平板
4.显微镜计数 加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载 物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高 倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重 新调节稀释度后再计数。位于中格双线上的菌体一般只 数上方和左边线上的。如遇芽胞大小达到母细胞的一半 时，即作为两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数 室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。 5.清洗血细胞计数板 使用完毕后，将血细胞计数板在水龙头用水冲洗干净， 切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜 检，观察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不 干净，则必须重复洗涤至干净为止。
微生物的计数技术
一、测定微生物数量的方法
直接计数法（总菌计数法） 显微镜直接计数法
间接计数法 稀释平板计数法（活菌计数法） 液体稀释培养法 比浊法 浓缩法
显微镜直接计数法
是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的 具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜 下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
16中格× 25小格计数室
25中格 × 16小格计数室
操作步骤
l.菌悬液制备 以无菌生理盐水制成浓度适当的菌悬液。每小格内约 有3~5个菌体为宜。 2.镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物， 则需清洗，吹干后才能进行计数。 3.加样品 将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的 毛细滴管将摇匀菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌 液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数 室均能充满菌液。取样时先要摇匀菌液；加样时计数 室不可有气泡产生。
特点
1、由于死亡的细菌不能繁殖成菌落，所以该法只 计数活菌数； 2、该法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低， 原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上 观察到的只是一个菌落； 3、为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加 到三个或三个以上的平板上，计算菌落平均数。 4、细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30300个菌落为宜；霉菌以每个培养皿10-100 个为宜。
血球计数板
血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片 上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽， 其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边 上面各有一个方格网。每个方格网共分9大 格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用 作微生物的计数。
计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16 个中方格，而每个中方格又分成25个小方格； 另一种是一个大方格分成25个中方格，而每 个中方格又分成16个小方格。但是不管计数 室是哪一种构造，它们都有一个共同特点， 即每个大方格都由400个小方格组成。
（2）涂抹平板计数法
涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先 将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编 号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不 同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重 复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每 个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲 灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不 更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20— 30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转， 保温培养，至长出菌落后即可计数。
细菌计数板（一般）--薄 血球计数板（菌体较大）酵母菌\霉菌孢子 --厚
（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）
直接计数法（总菌数测定法）
显微镜直接计数法操作（视频）
1、优点：所需设备简单，可迅速得到结果，能同 时观察微生物形态特征； 2、缺点：难以计数微小的细菌；难与区分死、活 3、适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数
五、注意事项
1.有压线的菌体，计上不计下，计左不计右。 出芽计一半。 2.因菌液在血球计数板处于不同空间，要在 不同焦距下才能看全，所以，观察时必须 不断调细螺旋（调焦距长短），方可找全 3.每个样品重复2—3次，若两次差别太大应 重测
死、活细菌的区分
间接计数法
稀释平板计数法 一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液， 然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中 与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定 时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成 的菌落数量，依据稀释倍数，进行菌落总数的测定， 每ml(g)样品中的活菌数=（每皿菌落数平均值/取 样体积）×稀释倍数
通常测定细菌菌剂含菌数时，10-7、10-8、10-9 土壤细菌数量，采用10-4、10-5、10-6 放线菌数量，采用l0-3、10-4、10-5 真菌数量，采用10-2、10-3、10-4
2．平板接种培养
混合平板培养法 涂抹平板培养法。
（1）混合平板培养法
将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置 三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液 各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释 液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释 液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度 时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已 融化并冷却至45—50℃的细菌培养基，轻轻转动平板 (P112)，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温 培养。至长出菌落后即可计数。
使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或 中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克 样品)中微生物细胞的数量。
已知：1毫升=1cm3=1000mm3
１cm3体积应含有小方格数为1000mm3／（ l／4000mm3） ＝４X106
计数
左上、左下、右上、右下 （100小格） 左上、左下、右上、右下、中格 （80小格）
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培 养一段时间才能取得，而且测定结果易受多 种因素的影响，但是，由于该计数方法的最 大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛 用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、 饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染 程度的检测
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应 根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多 时，稀释度应高，反之则低。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平 皿－－培养48小时－－计数报告。
结果计算
计算结果时，常按下列标准从接种后的3个稀 释度中选择一个合适的稀释度，求出每克菌剂 中的含菌数。 (1）同一稀释度各个重复的菌数相差不太悬殊。 （2）细菌、放线菌、酵母菌以每皿30—300个 菌落为宜，霉菌以每皿10—100个菌落为宜。 选择好计数的稀释度后，即可统计在平板上长 出的菌落数，统计结果按下式计算。
1、只有一个稀释度符合，以该稀释度的平均菌落数乘 以稀释倍数报告； 2、有两个稀释度符合，取决于二者比值（高稀释度的 菌落数除以低稀释度的菌落数的值）： 若比值小，报告平均数；若比值大于2，报告其中较 小的数字。
（二）所有菌落数均不在30~300间 以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数 1、若所有稀释度的菌落平均数均大于300， 则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数 报告； 2、若所有稀释度的菌落平均数均小于30，则 按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报 告；