细菌基本检验技术(实验)

半固体观察
细菌在液体培养基中的生长现象
细菌染色标本的制作程序
涂片 → 干燥 → 固定 → 染色
革兰染色法（Gram stain）
方法（改良快速法）
– 初染： 结晶紫＋等量NaHCO3 3～5s，水洗
– 媒染： 碱性碘液
3～5s，水洗
– 脱色： 丙酮酒精
3～5s，水洗
– 复染： 碱性稀释复红
胞杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌（每个 同学只接种一个平板，一种细菌） （2）琼脂斜面——金葡、大肠埃希菌 （3）半固体琼脂——金葡、大肠埃希菌 （4）液体培养基——铜绿假单胞菌、大肠埃希菌 3. 需氧培养35～37℃、18～24h。
细菌接种与分离技术
1.树立无菌观念，掌握无菌技术
2.细菌的接种方法
结果： 菌体呈红色，芽胞呈绿色。
细菌检验基本技术
成都医学院 临床微生物学教研室
实验目的
1．掌握平板划线法、斜面、液体和半固体等 各种培养基接种方法。
2．熟悉接种细菌用具、接种细菌的环境要求 和无菌操作要领。
3. 掌握细菌涂片制作方法。
4. 掌握革兰染色法、芽胞染色法和细菌的形 态学检查方法。
器材和试剂
1．菌种 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌金葡、蜡样 芽胞杆菌、铜绿假单胞菌。
2．培养基 普通琼脂平板、斜面、半固体、肉汤培 养基。
3．试剂 革兰染色液、芽胞染色液。 4．其他：空白琼脂、未消毒平板、载玻片、生理
盐水、接种环、酒精灯、记号笔等。 5．光学显微镜 、普通培养箱等。
实验内容
第一次
1.练习平板划线分离接种（反复练习直至熟练掌握） 2. 细菌接种（用第一次实验中已制备好的培养基） （1）普通琼脂平板——金黄色葡萄球菌、蜡样芽
第二次
1. 观察细菌在各种培养基上的生长现象：平板、 斜面、液体、半固体等培养物的观察并记录。
2. 革兰染色 用普通琼脂平板或琼脂斜面上的细菌（包括G ＋、G－菌）做革兰染色，油镜观察细菌形态， 并用彩色笔绘图所观察的结果。
3. 芽胞染色（蜡样芽胞杆菌）
细菌菌落观察方法
细菌的菌落特征描述
菌落大小 形状（露滴状、圆形、菜花样、不规则等） 高度（突起、扁平或凹陷） 边缘（整齐、波形、锯齿状、卷发状等） 表面（光滑、粗糙等） 湿润度（干燥、湿润等） 透明度（不透明、半透明、透明等） 颜色（红色、灰白色、黑色、绿色、黄色或无色等） 溶血性（α溶血、β溶血或γ溶血） 特殊气味
Hale Waihona Puke Baidu
3～5s，水洗
结果 紫色：革兰阳性菌
红色：革兰阴性菌
影响因素
染色关键：脱色时间的长短 其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液
质量控制
革兰阳性菌——金黄色葡萄球菌ATCC25923 革兰阴性菌——大肠埃希菌ATCC25922
芽胞染色法（spore stain）
方法： 涂片→干燥→固定→5%孔雀绿加温染 3～5min → 水洗→0.5%沙黄1min→水洗、晾干、油镜检