培养基配方及配制方法
培养基配方
1. LB培养基:10 g/L胰蛋白胨(进口),5 g/L酵母提取物(进口),10 g/L NaCl。
若配制固体培养基,加入15 g琼脂粉;
2. YPD培养基:22 g/L的一水合葡萄糖,20 g/L胰蛋白胨(进口),10 g/L酵母提取物(进口)。
若配制固体培养基,加入20 g琼脂粉;
3. SC-Ura培养基:22 g/L含一水合葡萄糖,6.7 g/L YNB(无氨基酸酵母氮源),1.224g/L 氨基酸粉末(除Leu , Trp , His , Ura, Ade, Lys, Met以外的),配制相应缺陷型则补加其他7种氨基酸。
4. YPX 培养基:蛋白胨,20 g/L;酵母粉,10 g/L;木糖,20 g/L或50 g/L。
5. YPD+G418:G418:1ml/L
Leu(亮氨酸)0.38 g/L,
Ura(尿嘧啶)0.076 g/L,
100xHis(组氨酸)7.6g/L,加入10mL/L
100xTrp(色氨酸)7.6g/L, 加入10mL/L
100xAde(鸟嘌呤)7.6g/L 加入10mL/L
100xLys(赖氨酸)7.6g/L 加入10mL/L
100xMet(甲硫氨酸、蛋氨酸)7.6g/L 加入10mL/L
加入碱液调节pH至6.10左右。
若配制固体培养基,加入20 g琼脂粉;
全部氨基酸:。
培养基配方
1、PDA培养基(用于分离、培养植物内生真菌):马铃薯(去皮)200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。
用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 µ g/ml,用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基(用于分离、培养植物内生细菌):牛肉膏3g,蛋白胨5g,葡萄糖2.5g,琼脂粉15g,蒸馏水1000ml,pH 7.0。
用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50µg/ml,用于抑制真菌生长。
115℃,20min 灭菌。
3、LB培养基:胰蛋白胨10 g,酵母提取物5 g,NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;4、DSM1培养基:磷酸三钾26.631 g(pH=7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,牛肉膏3 g,NaCl 5 g,胰蛋白胨10 g,葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;5、DSM2培养基:磷酸三钾26.631 g(pH=7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,牛肉膏3 g,NaCl 5 g,细菌学蛋白胨10 g,葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;6、Msgg培养基:磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0),MOPs 100 mmoL/L(pH7.0),MgCl2 2 mmoL/L,CaCl2 700 mmoL/L,MnCl2 50 µM,FeCl3 50 µM,ZnCl2 1 µM,VB1 2 µM,甘油0.5 %,谷氨酸0.5 %,色氨酸50 µg/mL,苯丙氨酸50 µg/mL,蒸馏水1000 mL,pH 7.0。
7、N%NA培养基:牛肉膏3.0 g,细菌学蛋白胨10 g,NaCl 5 g,琼脂粉N*10 g,8、BGM1培养基:牛肉膏3 g,胰蛋白胨10 g,NaCl 5 g,磷酸三钾26.631 g(pH7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,葡萄糖1 g,蒸馏水1000 mL,pH 7.0。
常用培养基的配制成分及方法
一、常用培养基1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
2、SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。
分成100ml的小份,高压灭菌。
培养基冷却到室温后,再在每100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
3、SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌)。
4、TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。
冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中,使终体积为100ml。
高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。
5、2×YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。
注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
6、YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后,高压灭菌。
建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。
为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
二、常用抗生素氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。
培养基配方及配制方法
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸0.5h,纱布过滤,滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备:干麦芽首先进行粉碎(不能太粗,也不必太细。
太粗影响糖化效率,过细影响过滤速度),按麦芽重量的3~4倍加水,搅拌均匀后,37℃左右浸泡1小时,然后缓缓加温至55~63℃(在升温过程中应不断搅拌使温度均匀),保温4~6小时(用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时),糖化结束。
在糖化过程中,应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液,加1.8%琼脂,分装试管,每试管约5-10ml (视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
2基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中,煮沸溶解后,调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后,带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分:胰蛋白胨:20g,葡萄糖:1g,甘露醇:2g,柠檬酸钠:5g,去氧胆酸钠0.5g,磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1.5g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。
pH7.0制法:将上述物品加入蒸馏水中,加热溶解煮沸,调pH为7.0,分装,在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂成分:胨:12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆碱20g,氯化钠5g,琼脂18~20g,蒸馏水1000ml0,0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml,Andrade指示剂20ml.,甲液20ml,乙液20ml。
pH7.5 制法:将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,加入甲液乙液到基础液中,调pH,再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷却至50~55℃,倾注浇平板。
培养基配制的过程和注意事项
培养基配制的过程和注意事项一、培养基配制的基本步骤1. 材料准备:首先,需要准备培养基所需的各种原料和试剂。
常用的培养基原料包括蛋白胨、葡萄糖、琼脂等。
此外,还需要准备适量的水和试剂的称量工具。
2. 称量试剂:按照配方中的比例,准确地称取所需的试剂。
在称量过程中,应注意保持实验环境的清洁,并使用洁净的称量工具,以避免试剂受到污染。
3. 溶解试剂:将称取好的试剂溶解于适量的水中。
在溶解过程中,可以通过搅拌或加热的方式促进试剂的溶解。
溶解完毕后,应检查溶液的透明度和均匀性,确保试剂充分溶解。
4. 调整pH值:根据具体的培养基配方,使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
通过逐滴加入酸碱溶液,并经过搅拌均匀,逐步调整pH 值至所需范围。
在调整pH值的过程中,应注意避免过度调节,以免对培养细胞产生不良影响。
5. 加热消毒:将配制好的培养基加热至沸腾,保持沸腾状态持续5-10分钟,以达到消毒的目的。
在加热过程中,应注意避免溢出和烧焦,同时要保持试剂的充分混合。
6. 灭菌冷却:将消毒完毕的培养基冷却至适宜的温度,通常为45-50摄氏度。
在冷却过程中,应避免引入环境中的微生物污染,可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
7. 分装保存:将冷却好的培养基分装到无菌培养皿或试管中,并密封保存。
在分装过程中,要注意避免试剂接触到外界空气,以防止污染。
二、培养基配制的注意事项1. 实验环境要保持清洁,操作过程要注意无菌操作,以避免试剂受到污染。
2. 在配制过程中,应准确称取试剂的质量,并按照配方中的比例进行配比,以保证培养基的质量和配方的准确性。
3. 在试剂溶解和调整pH值时,应充分搅拌均匀,确保试剂充分溶解和均匀混合。
4. 加热消毒时,应注意控制加热时间和温度,以避免试剂烧焦或溢出。
5. 冷却过程中,要避免污染和细菌的侵入,可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
6. 培养基的分装要在无菌条件下进行,并尽快密封保存,避免试剂受到外界空气和微生物的污染。
培养基的配制
• 干热灭菌 • 湿热灭菌
• 过滤除菌 • 辐射灭菌
• 放射线辐照灭菌 • 紫外线灭菌
• 化学药品灭菌
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一般培养基用0.1Mpa,121.5℃,15~ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温 度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量 等具体情况而有所改变。
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过滤除菌
定无菌生长,方可使用。
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几种常用培养基配方
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:
牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g
NaCl 水 pH
5.0g 1000ml 7.4~7.6。
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高氏Ⅰ号培养基配方如下:
可溶性淀粉
20g
NaCl
0.5g
KNO3 K2HPO4·3H2O MgSO4·7H2O FeSO4·7H2O
• 碳源:提供微生物繁殖所需碳元素的营养物质。用途:糖、 蛋白质、核酸合成。
• 氮源:提供微生物繁殖所需氮元素的营养物质。用途:蛋 白质、核酸合成。
• 能源:提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射 能。
• 生长素:微生物生长必需,但又不能自行合成的有机物。 • 无机盐:提供微生物繁殖所需各种重要元素。 • 水分:水是保证生命活动重要的介质。
• 称量:按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化:在搪瓷杯中加入所需水量,玻棒搅匀,加热溶解。 • 调pH值:用1MNaOH或1MHCl调pH,用pH试纸对照。 • 加琼脂溶化:加热过程中要不断搅拌,可适当补水。 • 分装:注意不要污染棉塞。 • 包扎成捆,挂上标签(必须用铅笔写),注明何种培养基。 • 灭菌备用:培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h,确
琼脂
培养基配方及配置
培养基配方及配置
一般来说,培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分,包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分,如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分,如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置:
1.基础培养基成分:
- 水:900ml
-蛋白胨:10g
-酵母提取物:5g
-NaCl:5g
2.添加剂:(可根据实验需求进行必要的添加)
- 抗生素(如氨苄青霉素):100μg/ml
- 抗菌剂(如氯霉素):25μg/ml
3.配制方法:
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中,并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中,加水至1000ml,并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2(一般使用缓冲液进行调节)。
-用自制滤纸过滤器滤过,将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂,将相应的药物加入培养基中,并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌,或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程,不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时,需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度,并注意配制和保管过程中的无菌操作,以确保培养基的质量和有效性。
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质,能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件,因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方:-蛋白胨或复合氮源:10g-酵母浸出物:5g-葡萄糖:1g-NaCl:5g-K2HPO4:2g-MgSO4:0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方:-牛心提取物:3g-高级琼脂糖:15g-葡萄糖:10g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方:-玉米浸出物:4g-高级琼脂糖:15g-酵母浸出物:1g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方:-液体LB培养基:10mL-高级琼脂糖:15g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方:-羊血:50mL-肉浸出物:3g-酵母浸出物:3g-肉汤培养基:1L-红细胞素:5g-高级琼脂糖:3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方:-肉浸出物:5g-酵母浸出物:5g-NaCl:5g-蒸馏水:900mL- 加入0.1%的L-cysteine:10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项:-培养基中的成分应严格按照配方比例加入,并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感,需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整,一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中,避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方,不同的微生物有不同的需求,可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中,还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
培养基的配制方法
培养基的配制方法培养基是微生物学、生物学等实验中将微生物培养的一种物质基质,它提供了微生物生长所必需的营养和环境条件。
培养基的配制方法主要包括选择基质、添加营养成分、调节pH值、灭菌和包装等步骤。
以下是一般的培养基配制方法及注意事项。
1.选择基质培养基的基质可以选择为水或含有必要营养成分的溶液。
一般情况下,使用蒸馏水或双蒸馏水作为基质是比较常见的选择。
2.添加营养成分培养基中必须添加适当的营养成分,以满足微生物的生长需求。
常用的营养成分有碳源、氮源、无机盐、维生素和生长因子等。
常用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等,常用的氮源有氨基酸、酵母浸出物、肉浸出物等。
此外,还可以根据微生物的特殊要求增加一些其他的营养成分。
3.调节pH值pH值对于微生物的生长十分重要,大多数微生物的最适生长pH在6.5-7.5之间。
因此,培养基在配制过程中需要进行pH值的调节。
可以使用酸碱溶液(如HCl和NaOH)进行pH调节,并通过使用pH试纸或pH计监测pH值。
4.灭菌培养基的灭菌工作非常重要,它可以防止杂菌的污染。
常用的灭菌方法有高压灭菌、干热灭菌和滤过灭菌等。
高压灭菌是指将配制好的培养基放置在高压锅中,经过高温高压的处理。
干热灭菌是将配制好的培养基放置在烘箱中进行加热处理。
滤过灭菌是将培养基通过0.22um的无菌滤膜过滤,以去除微生物。
灭菌后,需要用无菌操作将培养基倒装入无菌培养器皿中。
5.包装灭菌后的培养基需要进行包装保存,以防止污染。
常用的包装方式有试管包装、琼脂平板包装和瓶装包装等。
试管包装是将培养基倒入试管中,用苏打棒打破试管口,并通过注封的方法密封试管。
琼脂平板包装是将培养基倒入无菌琼脂平板中,并使用无菌的平板封口膜密封。
瓶装包装是将培养基倒入无菌玻璃瓶中,用无菌胶塞封闭瓶口。
在配制培养基的过程中,还需要注意以下几点:1.保持操作环境无菌,使用无菌操作台、无菌器具和无菌操作方法。
2.注意各种添加物的浓度,不可过量或过少。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。
其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。
以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法:1. LB培养基(Luria-Bertani)LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基,其配方包括:- 1% 蛋白胨(tryptone): 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉(yeast extract): 提供维生素和生长因子-1%NaCl(氯化钠):调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入1.5%的琼脂。
2. YPD培养基(Yeast extract-Peptone-Dextrose)YPD培养基常用于酵母菌的培养,其配方包括:- 1% 酵母提取物(yeast extract): 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨(peptone): 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖(dextrose): 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入2%的琼脂。
3. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基,其配方包括:-10%胎牛血清(FBS):提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液(Penicillin-Streptomycin Solution): 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺(L-Glutamine): 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中,调整pH值至7.4,混合均匀即可。
实验室36种微生物培养基配制方法
实验室36种微生物培养基配制方法实验室养菌基是为微生物的培养和研究提供合适营养和条件的培养基质。
不同微生物对培养基的要求各不相同,因此实验室通常需要配制多种不同的培养基。
下面是36种常用的微生物培养基的配制方法。
一、通用培养基1. 营养琼脂培养基(Nutrient Agar)营养琼脂培养基是一种通用的培养基,适用于大多数微生物的培养。
其配方为:蛋白胨10克、葡萄糖5克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,加入琼脂,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
2. 营养肉膏培养基(Nutrient Broth)营养肉膏培养基是一种通用的液体培养基,适用于大多数微生物的培养。
其配方为:蛋白胨10克、牛肉提取物5克、葡萄糖5克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,高压灭菌,分装,即可使用。
3. 大肠杆菌选择性培养基(MacConkey Agar)大肠杆菌选择性培养基是一种常用的培养基,用于选择和鉴定大肠杆菌。
其配方为:蛋白胨17克、葡萄糖1.5克、恶瓜胆汁5克、硼酸紫0.5克、亮矾0.09克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2,加入琼脂,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
4. Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基(Sabouraud Dextrose Agar)Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基是用于真菌的培养和鉴定。
其配方为:脱氧胆汁10克、蔗糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至5.6-6.4,高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
二、选择性培养基1. VC菌属选择性平皿培养基(Vogel-Johnson Agar)VC菌属选择性平皿培养基是用于选择和鉴定Voges-Proskauer菌属(如克雷伯菌)的培养基。
其配方为:葡萄糖1克、琼脂15克、盐酸75克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、加热煮沸,冷却至55-60°C,加入胆盐酯高压灭菌,倒入平皿中,待凝固后用。
培养基的配制方法
培养基的配制方法培养基的配制方法是在实验室中作为微生物培养的基础,可以提供适当的营养物质和环境条件来促进微生物的生长和繁殖。
正确的配制培养基是进行微生物实验和研究的关键步骤之一。
下面将详细介绍培养基的配制方法。
1. 准备配制培养基所需的原料和仪器:- 食品级蛋白胨粉或胨蛋白水解物:提供微生物所需的氨基酸和营养物质。
- 食品级琼脂:用于凝固培养基。
- 蔗糖或葡萄糖:提供微生物的碳源。
- 盐:提供微生物生长所需的必需离子,如钠、钾、镁等。
- pH试纸或pH计:用于调节培养基的酸碱度。
- 常温和高温灭菌器:用于灭菌培养基。
- 烧杯、容器、磁力搅拌器和称量仪器:用于容器和搅拌培养基。
2. 测量和称量:- 根据所需的培养基成分和浓度,测量所需的蛋白胨量、琼脂量、蔗糖或葡萄糖量以及盐的量。
- 将测量好的原料放入烧杯中。
3. 加入适量的水:- 加入适量的去离子水或纯净水,将配方溶解。
4. 调节酸碱度:- 使用pH试纸或pH计来检测培养基的酸碱度。
- 如果需要调节酸碱度,则可以使用盐酸或氢氧化钠等脆性酸碱溶液加入培养基中以达到目标pH值。
5. 搅拌混合:- 将培养基溶液放入磁力搅拌器中。
- 开启搅拌器并搅拌溶液直到完全混合。
6. 灭菌:- 将配制好的培养基倒入适当容器中,如烧杯或琼脂培养皿。
- 对于常见的液体培养基,使用常温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌20-30分钟。
- 对于琼脂培养基,使用高温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌15-20分钟。
7. 倒盖和保存:- 等待培养基凝固后,盖上并标记培养基的名称、配方和配制日期。
- 将培养基保存在冰箱中或冷藏库中,在4摄氏度下保存。
总结一下,培养基的配制方法包括准备原料和仪器,测量和称量原料,加入适量的水,调节酸碱度,搅拌混合,灭菌和保存。
注意对于不同的微生物,培养基的配方可能会有所不同,需要根据具体的实验目的和需求进行调整。
正确配制培养基对于获得准确的微生物培养结果至关重要。
常用培养基配制方法
常用培养基配制方法:(1)基础盐培养基(MSM):(NH4)2SO42.0g,MgSO4·7H2O0.2g,CaCl2·2H2O 0.01g,FeSO4·7H2O0.001g,Na2HPO4·12H2O1.5g,KH2PO41.5g,蒸馏水1000 mL。
(2)LB培养基:蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠5g,蒸馏水1000 mL,pH7.5。
(3)高氏合成1号培养基:硝酸钾1g,磷酸氢二钾0.5g,硫酸镁0.5g,氯化钠0.5g,硫酸亚铁0.01g,可溶性淀粉20g,蒸馏水1000mL。
(4)查彼氏培养基:硝酸钠2g,氯化钾0.5g,硫酸镁0.5g,磷酸氢二钾1g,硫酸亚铁0.01g,蔗糖30g,蛋白胨0.5g,蒸馏水1000mL。
(5)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20 g,蒸馏水1000mL。
将无病马铃薯洗净去皮切碎,加蒸馏水1000mL,煮沸0.5 h,纱布过滤,滤液加蒸馏水补足1000mL,再加入葡萄糖,然后分装三角瓶灭菌备用。
(6)铵察氏琼脂培养基:氯化铵2g,氯化钾0.5g,硫酸镁0.5g,磷酸氢二钾1g,硫酸亚铁0.01g,蔗糖30g,蛋白胨0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000 mL。
(7)克氏合成1号琼脂培养基:磷酸氢二钾1g,碳酸镁0.3g,氯化钠0.2 g,硝酸钾1g,硫酸亚铁0.01g,碳酸钙0.5g,葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(8)葡萄糖天门冬素琼脂培养基:葡萄糖10g,天门冬素0.5g,磷酸氢二钾0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(9)葡萄糖酵母膏琼脂培养基:葡萄糖10g,酵母膏10g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(10)瓦氏肉汁琼脂培养基:蛋白胨5g,葡萄糖10g,牛肉膏10g,氯化钠5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(11)淀粉琼脂培养基:可溶性淀粉10g,碳酸镁1g,磷酸氢二钾0.3g,氯化钠0.5g,硝酸钠1g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
常用培养基配方范文
常用培养基配方范文培养基配方是微生物学研究的基础,它们提供了养分和条件,促进微生物的生长和繁殖。
常用培养基配方有多种,以下是几个常用的配方范文。
一、莱文斯坦-鲍德尔培养基(Luria-Bertani agar)配方:成分:1.蛋白胨:10克2.酵母提取物:5克3.食盐:10克4.琼脂:15克5.蒸馏水:1000毫升6.高氯酸钠(0.1M):2毫升(pH7.2)制备方法:1.将蛋白胨、酵母提取物和食盐加入蒸馏水中,加热至溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀,再加入高氯酸钠调节pH值。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.琼脂的煮沸时间通常为15~20分钟。
二、营养琼脂培养基(Nutrient agar)配方:成分:1.蛋白胨:5克2.细胞色素:1克3.维生素B1:0.1克4.卵黄:10克5.食盐:5克6.琼脂:15克7.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、细胞色素、维生素B1、卵黄和食盐加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.煮沸时间可根据需要适当延长,但不要超过20分钟。
三、马尿素琼脂培养基(MacConkey agar)配方:成分:1.蛋白胨:17克2.硼砂:1.5克3.细胞色素:2.5克4.氯化钠:5克5.水合甲基红:0.03克6.钴绿:0.015克7.红绿二色砂:0.15克8.琼脂:13.5克9.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、硼砂、细胞色素、氯化钠、水合甲基红、钴绿和红绿二色砂加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.此培养基适用于选择肠道革兰氏阴性杆菌。
以上是常用的几个培养基配方范文,供参考使用。
在制备培养基时,需要注意消毒操作,以防止污染。
另外,不同微生物对培养基的要求也有所不同,可以根据实际需要进行配方的修改和优化。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法一、培养基配方常用的培养基是复合培养基,包含有机成分和无机成分两部分。
其中,有机成分提供微生物所需的碳源、氮源和能源等,无机成分提供微生物所需的无机盐和微量元素等。
以下是一个典型的复合培养基配方:有机成分:1.蛋白胨:提供氮源和碳源;2.葡萄糖:提供碳源和能源;3.酵母提取物:提供维生素和微量元素。
无机成分:1.磷酸盐缓冲液:提供pH缓冲效果;2.硝酸盐:提供氮源和无机盐;3.氯化钠:提供无机盐;4.磷酸氢二钾:提供缓冲效果和无机盐;5.硫酸镁:提供镁离子。
二、培养基配制方法1.准备容器:使用无菌烧瓶、试管、培养皿等容器,并用高压蒸汽灭菌器进行灭菌处理。
2.称量成分:按照配方中的比例,准确称量有机成分和无机成分。
3.溶解有机成分:将蛋白胨、葡萄糖和酵母提取物分别加入适量的蒸馏水中,通过搅拌或加热溶解均匀。
4.准备无机成分溶液:将磷酸盐缓冲液、硝酸盐、氯化钠、磷酸氢二钾和硫酸镁按照配方中的比例加入适量的蒸馏水中,通过搅拌溶解均匀。
5.校正pH值:使用pH计测定培养基的pH值,如有需要,可以用盐酸或氢氧化钠调节pH值至合适的范围。
6.加入蛋白胨溶液:将溶解好的蛋白胨溶液加入无机成分溶液中,并通过搅拌均匀。
7.加入葡萄糖溶液:将溶解好的葡萄糖溶液加入已配制好的培养基中,并通过搅拌均匀。
8.加入酵母提取物:将酵母提取物溶液加入培养基中,并通过搅拌均匀。
9.调节体积:根据实验需要,可以添加蒸馏水或其他添加剂来调节培养基的体积和浓度。
10.灭菌处理:将配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌处理,保证培养基的无菌状态。
以上就是一个典型的培养基配方及配制方法的示例,只是其中的一个例子,不同的微生物可能需要不同的培养基配方和配制方法。
在实验中,根据具体的需求调整培养基的配方,确保能满足微生物的生长需求,并通过灭菌处理保证培养基的无菌状态。
各种培养基的制作方法
配方一萨氏(Sabouraud's)培养基蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。
1.营养肉汤培养基牛肉膏 0.3克蛋白胨 1.0克NaCl 0.5克水 100毫升pH 7.0~7.2在烧杯中加水,称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl,加热溶化后,调节pH值至7.0~7.2。
分装,加棉塞,高压蒸汽灭菌即成。
常用于培养细菌。
2.营养琼脂培养基在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。
常用于培养细菌。
3.肉汁蛋白胨液体培养基牛肉 500克蛋白胨 10克NaCl 5克pH 7.1~7.2取新鲜牛肉500克,去净脂肪、筋腱后,绞碎或剁碎,加水1000毫升浸泡,15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。
用纱布将肉汁过滤,补足失水。
向肉汁中加入蛋白胨和食盐。
将肉汁加热,放入苏打(碳酸钠)至红色,调整pH值。
分装,高压蒸汽灭菌。
将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质,制成液体培养基,如需制成固体培养基,可在每100毫升液体中加入2克琼脂,加热溶化后,分装,再次进行高压蒸汽灭菌。
常用于培养细菌。
4.高氏一号培养基(淀粉琼脂培养基)可溶性淀粉 2克K2HPO4 0.05克MgSO4·7H2O 0.05克KNO3 0.1克NaCl 0.05克FeSO4 0.001克琼脂 2克水 100毫升pH 7.2~7.4在烧杯中加水95毫升,加热至沸腾,取可溶性溶粉2克,用5毫升水调成糊状,倒入沸水中和匀。
再称取其它药品,陆续加入烧杯内(待一种药品溶解后,再加入第二种药品)。
待全部药品溶解后,停止加热,补足失水,调pH值至7.2~7.4。
分装后,高压蒸汽灭菌。
本培养基常用于培养放线菌。
5.马铃薯蔗糖培养基马铃薯 200克蔗糖 10克琼脂 20克水 1000毫升自然pH称取200克马铃薯片,加水1000毫升,煮沸半小时,用纱布过滤,补足失水。
146种常见培养基的配方
146种常见培养基的配方培养基是微生物学实验中常用的一种重要实验工具,通过调配合适的培养基,可以提供微生物生长所需的营养物质,从而促进微生物菌落的繁殖和生长。
下面将介绍一些常见的培养基配方,涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
1.琼脂肉汤培养基(NB)-牛肉脱脂粉5g-酵母提取物2.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml2.大肠杆菌复合培养基(LB)-液体培养基-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g- 蒸馏水 1000ml-琼脂板-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml3. 肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)-蛋白胨17g-紫胆汁盐1.5g-普鲁士蓝盐1.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml4. 脱氧胆盐琼脂培养基(Deoxycholate Agar)-脱氧胆酸钠20g-普鲁士蓝盐0.8g-蛋白胨7.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml5.阿米巴选择性琼脂培养基(KV培养基)- 鸡蛋清 20ml- 中性红溶液 12ml-NaCl0.5g-纤维素0.25g- 盐酸 1ml-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml6. 革兰氏阳性菌选择性琼脂培养基(Mannitol Salt Agar)-蔗糖10g-氯化钠75g-酵母提取物5g-麦芽提取物1g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml7. 维生素富集琼脂培养基(Burkholder's Basal Salt Medium)-NaNO31g-KCl0.5g-MgSO4·7H2O0.2g-CaCl2·2H2O0.02g-FeSO4·7H2O0.01g-琼脂14g- 蒸馏水 1000ml8. 三氯化铁琼脂培养基(Cetrimide Agar)-硫酸镁0.8g-氯化钴0.05g-氯化锌0.01g-氯化亚铁0.03g-三氯化铁0.03g-比色琼脂糖15g- 过滤蒸馏水 1000ml9. 库氏四甲基铵琼脂培养基(Chapman Agar)-高氯酸钠5g-脲7.5g-酵母提取物2g-海藻酸钠20g-紫胆汁盐0.25g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml10. 还原格兰氏琼脂培养基(Reduced Gram-negative Broth)-蛋氨酸0.5g-异亮氨酸0.5g-半胱氨酸0.5g-菜碱0.5g-胀氨酸0.5g-琼脂7g- 蒸馏水 1000ml这些是其中的一部分常见的培养基配方,涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
常用培养基及添加剂的配制
1.牛心脑浸汁-辅助琼脂:(BHI-S)BHI 琼脂100mL氯化血红素-维生素K1 1mL脱纤维蛋白血(兔血)5-10mL 2.胰蛋白水解物-大豆琼脂(TS)胰蛋白水解物(或胰蛋白胨) 1.5g大豆胨0.5gNacl 0.5g酵母提取物0.5g盐酸半胱氨酸液0.4mL琼脂 2.0g蒸馏水加至100mL 3.Gifu厌氧培养基:(GAM)胰蛋白胨 1.0g大豆胨0.3g多价蛋白胨 1.0g酵母提取物0.5g肝浸汁10mL VPI盐溶液0.2g牛肉浸膏5mL盐酸半胱氨酸0.4mL 旈基乙醇酸钠0.03g 葡萄糖 1.0g 琼脂 1.8-2.0g 刃天青(0.1%)0.5g 蒸馏水加至100mL 4.Rogosa 乳杆菌选择培养基(LS)胰蛋白水解物(或胰蛋白胨) 2.0g酵母提取物 1.0g琼脂4g葡萄糖 4.0g (储存液)磷酸二氢钾 1.2g 12g枸橼酸三铵0.4g 4g硫酸镁(MgSo4 7H2O) 1.0g 10g硫酸锰(MnSo4 4H2O)0.4g 4g硫酸亚铁(FeSo4 7H2O)0.08g 0.8g醋酸钠(CH3COONa 3H2O)(乙酸钠) 5g 50g冰乙酸(99.5%)0.264mL 2.64mL聚山梨酯-80 0.2g 2gDH2O 200mL 200mL(每100mL培养基加10mL)5.TPY培养基胰蛋白胨 3.0g酵母提取物0.8g葡萄糖 2.0g磷酸二氢钾 1.2gK2HPO4 3H2O 0.4gNaCO30.4gNaCl 0.4gDH2O 200mL琼脂 2.5g /200mL6.普通血琼脂培养基(BA)牛肉浸膏(0.5-1.0)g蛋白胨 1.0gNaCl 0.5gK2HPO4 2.0g酵母提取物0.5g葡萄糖 1.0g琼脂 1.8g蒸馏水加至100mL7.轻唾培养基(MS)胰蛋白胨 1.0g示胨0.5g蔗糖3-5g(可根据需要将蔗糖量增至20g)葡萄糖0.1gK2HPO4 3H2O 0.53g琼脂 2.0g0.1%曲利本蓝7.5mL0.1%结晶紫0.8mL蒸馏水加至100mL8.轻唾-杆菌肽琼脂(MSB)MS琼脂(蔗糖含量为20%)100mL杆菌肽溶液(200U/mL)0.1mL灭菌MS琼脂50℃左右时加入杆菌肽溶液,混匀倒板9.轻唾-磺胺二甲嘧啶琼脂(MS磺胺琼脂)MS琼脂100mL*磺胺二甲嘧啶(5%) 1.0mL*1%的亚碲酸钾溶液0.28mL灭菌MS琼脂冷却至25℃时加入*10.TYCSB琼脂胰蛋白酶水解物 1.0g酵母提取物0.5g盐酸半胱氨酸溶液0.4gK2HPO4 3H2O 0.53g蔗糖20g琼脂2gDH2O 100mL灭菌后冷却至50-55℃时加入杆菌肽溶液(200U/mL)0.1mL,混匀倒板11.Rogosa 乳杆菌选择培养基(LS)胰蛋白水解物(或胰蛋白胨) 1.0g酵母提取物0.5g磷酸二氢钾0.6g枸橼酸三铵0.2g葡萄糖 2.0g硫酸镁(MgSo4 7H2O)0.5g硫酸锰(MnSo4 4H2O)0.2g硫酸亚铁(FeSo4 7H2O)0.04g醋酸钠(CH3COONa 3H2O)(乙酸钠) 2.5g冰乙酸(99.5%)0.132mL聚山梨酯-80 0.1g琼脂 1.8gDH2O 100mLLS盐溶液的组成:MgSo4 7H2O 5.57gMnSo4 2H2O 1.20gFeSo4 7H2O 0.34gDH2O 50 mL混合上述成分并加热使之溶解。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法培养基是一种用于细菌、真菌、酵母等微生物的生长和繁殖的基质。
不同的微生物对培养基的要求不同,因此配方也会有所差异。
下面是一种常用的培养基配方及配制方法。
1.碳源:常见的碳源包括葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
碳源的添加能够提供微生物的能量和碳原子。
2.氮源:常见的氮源包括氨基酸、尿素、硝酸盐等。
氮源的添加能够提供微生物生长所需的氮元素。
3.矿物质:常见的矿物质包括钠、钾、氯等。
矿物质的添加能够提供微生物生长所需的微量元素。
4.生长因子:一些微生物对特定的生长因子具有依赖性,例如维生素和氨基酸等。
5.pH缓冲剂:常见的pH缓冲剂有磷酸盐缓冲液、琼脂等,用于调节培养基的pH值。
6. 凝固剂:常见的凝固剂包括琼脂、Agar等,用于使培养基变成固体状。
培养基配制方法:1.按照配方将所需的各种成分加入适量的蒸馏水中。
注意要先将一些难溶的固体成分溶解后再加入。
2.配制的过程中要注意无菌操作,使用无菌的容器和仪器,避免细菌及其他微生物污染。
3.将配制好的培养基混合均匀,使各个成分充分溶解。
可以通过搅拌或加热溶解等方法进行混合。
4.调节培养基的pH值。
使用酸碱试剂(如盐酸和氢氧化钠)进行调节,直到达到适合所需微生物生长的pH值范围。
5.如果需要固体培养基,可以加入适量的凝固剂(如琼脂)。
溶解后加入培养基中,然后将培养基煮沸消毒使凝结。
6.将配制好的培养基装入适量的培养皿或试管中。
7.灭菌处理。
使用高压灭菌器或自动培养箱等设备进行灭菌处理,以杀死培养基中的微生物。
通过以上步骤,就可以得到配制好的培养基。
根据不同的微生物要求和实验需要,可以调整培养基的成分和浓度,以获得最适合微生物生长和繁殖的环境。
培养基配方及配置
培养基配方及配置培养基是一种提供养分和条件给细胞、组织或微生物生长和繁殖的人工环境。
不同种类的细胞或微生物,需要不同的培养基来满足其生长和繁殖的需求。
下面将介绍细胞和微生物培养基的配方及配置方法。
1.培养基配方:不同细胞或微生物的培养基配方各有不同,下面是常用的细胞培养基的配方示例:-DMEM培养基配方:Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)是一种广泛应用于动物细胞培养的基础培养基。
其主要成分包括:- 无铁媒介物(Iron Medium):DMEM中通常包含高浓度的铁盐,例如铁氯化物。
- 糖类(Glucose):DMEM中通常包含葡萄糖,用于提供能量供细胞代谢。
- 氨基酸(Amino acids):DMEM中包含多种氨基酸,用于蛋白质的合成。
- 维生素(Vitamins):DMEM中通常添加B族维生素和其他必需维生素。
- 盐类(Salts):DMEM中含有多种无机盐,例如氯化钠、磷酸盐等。
- 缓冲液(Buffer):DMEM中的缓冲液用于维持培养基的pH值。
- 补充物(Supplements):DMEM中可添加血清、激素和生长因子等提供细胞生长所需的物质。
-LB培养基配方:大肠杆菌(Escherichia coli)的最常用培养基是Luria-Bertani (LB)培养基。
其主要成分包括:- 蛋白质源(Protein source):LB培养基中通常添加琼脂和酵母提取物作为蛋白质源。
- 碳源(Carbon source):LB培养基中添加葡萄糖等碳源供菌落生长所需。
- 盐类(Salts):LB培养基中含有多种无机盐,例如氯化钠、磷酸盐等。
- 缓冲液(Buffer):LB培养基的缓冲液用于维持培养基的pH值。
- 抗生素(Antibiotics):LB培养基中添加抗生素,用于选择性培养目标菌株。
- 补充物(Supplements):在LB培养基中还可以添加亲水胶体、氧化还原剂等。
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培养基配方1 斜面菌种保存培养基培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸,纱布过滤,滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备:干麦芽首先进行粉碎(不能太粗,也不必太细。
太粗影响糖化效率,过细影响过滤速度),按麦芽重量的3~4倍加水,搅拌均匀后,37℃左右浸泡1小时,然后缓缓加温至55~63℃(在升温过程中应不断搅拌使温度均匀),保温4~6小时(用摩尔/升碘液测定为黄色至无色时),糖化结束。
在糖化过程中,应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液,加%琼脂,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
2 基菌落总数检测平板计数琼脂培养基将?胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中,煮沸溶解后,调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后,带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测GN增菌液成分:胰蛋白胨:20g,葡萄糖:1g,甘露醇:2g,柠檬酸钠:5g,去氧胆酸钠0.5g,磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1.5g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。
制法:将上述物品加入蒸馏水中,加热溶解煮沸,调pH为,分装,在115℃高压灭菌15min。
HE琼脂成分:胨:12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆碱20g,氯化钠5g,琼脂18~20g,蒸馏水1000ml0,%溴麝香草酚蓝溶液16ml,Andrade指示剂20ml.,甲液20ml,乙液20ml。
制法:将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,加入甲液乙液到基础液中,调pH,再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷却至50~55℃,倾注浇平板。
注1:此培养基不能高温灭菌。
注2:甲液的配置:硫代硫酸钠:34g,柠檬酸铁钠:4g,蒸馏水:100ml。
注3:乙液的配置:去氧胆酸钠:10g,蒸馏水:100ml。
注4:Andrade指示剂的配置:酸性复红:0.5g,1mol/l的氢氧化钠溶液:16ml,蒸馏水:100ml。
将酸性复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液,数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1~2ml。
SS琼脂3.3.1 基础培养基:成分:牛肉膏:5g,胨:5g,三号胆盐:3.5g,琼脂:17g,蒸馏水:1000ml。
制法:将牛肉膏蛋白胨,三号胆盐加入到400ml蒸馏水中,将琼脂加入到600ml蒸馏水中,煮沸使其溶解,然后液混合,于121℃下灭菌15min,保存备用。
3.3.2 完全培养基成分:基础培养基:1000ml,乳糖:10g,柠檬酸钠:8.5g,硫代硫酸钠:8.5g,10%柠檬酸铁溶液:10ml,1%中性红溶液:,%煌绿溶液:。
制法:加热融化基础培养基,按比例加入处染料以外的所有成分,搅拌均匀,调,加入中性红溶液和煌绿溶液,混合均匀后浇平板。
注1:配制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱48h内使用。
注2:煌绿溶液配好后,应在10日内使用。
注3:可以购买SS琼脂的干燥培养基。
麦康凯琼脂成分:蛋白胨:17g,胨:3g,猪胆盐(牛、羊胆盐):5g,氯化钠:5g,琼脂:17g,蒸馏水:1000ml,乳糖:10g,%结晶紫水溶液:10ml,%中性红水溶液:5ml。
制法:将蛋白胨、胨、猪胆盐、氯化钠溶解于400ml蒸馏水中,调,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,将两液混合均匀,于121℃下灭菌15min备用。
临用时加热融化琼脂,趁热加入乳糖,等冷却到50~55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,搅拌均匀后浇平板。
注:结晶紫和中性红水溶液配好后,须经高压灭菌。
伊红美蓝琼脂(EMB)成分:蛋白胨:10g,乳糖:10g,磷酸氢二钾:2g,琼脂17g,2%伊红Y溶液:20ml,%美蓝溶液:10ml,蒸馏水1000ml,。
制法:将蛋白胨、磷酸盐、琼脂溶解于蒸馏水中,调pH,于121℃下灭菌15min备用。
临用时加热融化琼脂,并加入乳糖,冷却至50~55℃时加入伊红和美蓝溶液,混合均匀后浇平板。
三精铁琼脂成分:蛋白胨:20g,牛肉膏:5g,乳糖:10g,蔗糖:10g,葡萄糖:1g,氯化钠:5g,六水硫酸亚铁铵:0.2g,硫代硫酸钠:0.2g,琼脂:12g,酚红:0.025g,蒸馏水:1000ml,。
制法:将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中,调pH,然后加入琼脂,加热溶解,加入%酚红水溶液,摇匀,分装时量多一点,于121℃下灭菌15min,搁高层斜面备用。
葡萄糖半固体发酵管成分:蛋白胨:1g,牛肉膏:0.3g,氯化钠:0.5g,%溴甲酚紫酒精溶液:,葡萄糖:1g,琼脂:0.3g,蒸馏水:100ml,。
制法:将蛋白胨,牛肉膏,氯化钠加入水中,调pH后,加入琼脂,煮沸溶解,再加入指示剂和葡萄糖。
分装,于121℃下灭菌15min,备用。
半固体管成分:蛋白胨:1g,牛肉膏:0.3g,氯化钠:0.5g,琼脂:~0.4g,蒸馏水:100ml,。
制法:将上述成分溶于水中,加热煮沸,并调pH后分装小试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用。
尿素琼脂成分:蛋白胨:1g,氯化钠:5g,葡萄糖1g,磷酸二氢钾:2g,%酚红溶液:3ml,琼脂:20g,蒸馏水:1000ml,20%尿素:100ml,±。
制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,调pH,加入琼脂后加热使其溶化并分装小瓶,121℃高压灭菌15min,冷却至50~55℃后,加入经过滤灭菌的尿素溶液,最终尿素浓度为2%,最终的pH应为±。
分装于灭菌试管内,搁斜面备用。
西蒙氏柠檬酸盐琼脂成分:氯化钠:5g,七水硫酸镁:0.2g,磷酸二氢铵:1g,磷酸氢二甲:1g,柠檬酸钠:5g,琼脂:20g,蒸馏水:1000ml,%溴麝香草酚蓝溶液:40ml,。
制法:先将盐类溶解于水中,调pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃下灭菌15min,搁成斜面。
实验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于36℃±1℃培养4天,每天观察结果,阳性者斜面上有菌落生长。
培养基由绿色转为蓝色。
氰化钾(KCN)培养基成分:蛋白胨:10g,氯化钠:5g,磷酸二氢钾:0.225g,磷酸氢二钠:5.64g,蒸馏水:1000ml,%氰化钾溶液:20ml,。
制法:将除氰化钾以外的成分配好分装,121℃灭菌15min,放在冰箱内使其充分冷却,每100ml培养基加入%氰化钾溶液(最后浓度为1:10000),分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4ml,立刻用橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月,同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装备用。
试验方法:将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成作为稀释菌液,挑取1环接种于氰化钾培养基,另外挑取1环接种于对照培养基,在36℃±1℃下培养1~2天,观察结果,如有细菌生长,则为阳性,经2天后不生长则为阴性。
注:氰化钾是剧毒物质,使用时应小心,切勿沾染,以免中毒。
夏天分装培养基应在冰箱内进行,实验失败的主要原因是封口不严,氰化钾逐渐分解,变成氢氰酸气体逸出,以致药物浓度降低,细菌生长,造成假阳性现象。
氨基酸脱羧酶实验培养基成分:蛋白胨:5g,酵母浸膏:3g,葡萄糖:1g,蒸馏水:1000ml,%溴甲酚紫乙醇溶液:1ml,L-氨基酸或DL-氨基酸:0.5g或1g/100ml,。
制法:除氨基酸以外的所有成分加热溶解后,分装每瓶100ml,分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。
L-氨基酸按%加入,DL-氨基酸按1%加入。
再调,对照培养基不加氨基酸。
分装于灭菌的小试管内,每管,上面滴加一层液体石蜡。
115℃高压灭菌10min。
实验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36℃±1℃下培养18~24h,观察结果,氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。
阴性者因为碱性物质产生,但因葡萄糖产酸而是培养基变成黄色,对照管应为黄色。
蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨或胰蛋白胨:20g,氯化钠:5g,蒸馏水:1000ml,制法:将上述成飞混合均匀,分装小管,121℃灭菌15min。
靛基质试剂:柯凡克试剂:将5g对二氨基甲醛溶于75ml戊醇中,然后慢慢加入浓盐酸25ml。
欧-波试剂:将1g对二氨基苯甲醛溶于90ml95%的乙醇内,然后慢慢加入浓盐酸20ml。
实验方法:挑取少量接种物接种,在36℃±1℃下培养1~2天,必要时可培养4~5天,加入柯凡克试剂约,轻摇试管,阳性者试剂层呈深红色,或加入欧-波试剂,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者接触面上呈玫瑰红色。
注:蛋白胨应含有丰富的色氨酸,每批蛋白胨买来后应用已知菌种实验。
糖发酵管成分:牛肉膏:5g,蛋白胨:10g,氯化钠:3g,十二水磷酸氢二钠:2g,%溴麝香草酚蓝溶液:12ml,蒸馏水:1000ml,。
葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃灭菌15min。
其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100ml,121℃灭菌15min,另将各种糖类配好10%溶液,一同灭菌,将5ml糖溶液加入到100ml液体培养基中,以无菌操作分装小试管。
注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
实验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃,一般观察2~3天,迟缓反应需观察14~30天。
5%乳糖发酵管成分:蛋白胨:0.2g,氯化钠:0.5g,乳糖:5g,2%溴麝香草酚蓝水溶液:,蒸馏水:100ml,。
制法:除乳糖以外的各成分溶解于50ml蒸馏水内,调pH,将乳糖溶解于另外50ml蒸馏水中,分别于121℃灭菌15min,将两者混合,以无菌操作分装到小试管中。
注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1天内发酵。