基于滤纸微孔板的酶联免疫吸附测定方法研究
酶联免疫吸附试验方法类型及反应原理
酶联免疫吸附试验方法类型及反应原理酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的生物化学分析方法，用于检测并定量测定生物样品中的抗体或抗原。
ELISA方法包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA等。
下面将对这些方法的类型和反应原理进行详细介绍。
1.直接ELISA直接ELISA是最简单的ELISA方法之一、在这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原，然后加入待检测样品，如血清等。
待检测样品中的抗体与涂覆的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
然后加入特异性抗体，这些抗体已标记有酶，比如辣根过氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP），然后加入适当的底物。
酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成正比。
2.间接ELISA间接ELISA是常用的ELISA方法之一，比直接ELISA灵敏度更高。
在这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原，然后加入待检测样品，如血清等。
待检测样品中的抗体与涂覆的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
然后加入与待测抗体特异性的二抗，这些二抗已标记有酶，如HRP，再加入适当的底物。
酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成正比。
3.竞争ELISA竞争ELISA是一种用于测定样品中抗原或抗体浓度的ELISA方法。
在这种方法中，微孔板表面上涂覆有特异性抗体，然后加入待检测样品和已标记的抗原或抗体。
待检测样品中的抗原或抗体与涂覆的抗体竞争结合，形成复合物。
然后加入特异性的抗原或抗体，这些抗原或抗体已标记有酶，比如HRP，继续竞争与涂覆抗体结合。
酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成反比。
4.间接竞争ELISA间接竞争ELISA是一种用于测定样品中抗原或抗体浓度的高灵敏度ELISA方法。
在这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原。
酶联免疫吸附测定 (2)
酶联免疫吸附测定1. 简介酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种常用的体外免疫学实验技术，用于检测目标分子的存在和浓度。
该技术利用酶标记的抗体和抗原之间的特异性结合来实现检测。
ELISA方法的原理基于抗体和抗原之间的高度特异性结合。
通过将抗体或抗原固定在固态表面（如微孔板、膜或滤纸）上，然后使用荧光素酶或酶标记的二抗来特异性地检测目标分子的存在和浓度。
2. 实验步骤2.1. 涂布抗体或抗原首先，需要将抗体或抗原固定在固态表面上，通常是在96孔微孔板上进行。
这一步骤被称为涂布。
涂布抗体或抗原的方法有两种选择：直接涂布和间接涂布。
直接涂布是指将抗体或抗原直接固定在微孔板上。
间接涂布是指首先在微孔板上固定一种辅助抗体，然后再固定目标抗体或抗原。
2.2. 样品处理接下来，需要将待测样品加入到微孔板中。
在加入样品之前，可以对样品进行一些预处理，如稀释、洗涤、乳化等。
2.3. 第一次免疫反应第一次免疫反应是将样品中的目标分子与固定在微孔板上的抗体或抗原结合。
这一步通常需要在适当的温度和时间下进行孵育。
2.4. 洗涤为了去除未结合的物质，需要对微孔板进行洗涤。
洗涤的目的是去除非特异性的结合物，以提高检测的特异性。
2.5. 第二次免疫反应第二次免疫反应是将酶标记的二抗加入到微孔板中，二抗与目标分子结合。
酶标记的二抗可以特异性地识别和结合第一次免疫反应中的目标分子。
2.6. 酶标记物的检测添加了酶标记的二抗后，需要加入底物来激活酶的活性。
酶与底物反应后会生成可检测的颜色或荧光信号。
颜色或荧光信号的强度与目标分子的浓度呈正相关关系，可以通过光度计或荧光计进行测量。
3. 应用3.1. 生物医学研究酶联免疫吸附测定在生物医学研究中有广泛的应用。
它可以用于检测和定量分析蛋白质、细胞因子、荷尔蒙等生物分子的存在和浓度。
3.2. 临床诊断ELISA也是临床诊断中常用的一种检测方法。
酶联免疫吸附测定技术
酶联免疫吸附测定技术酶联免疫吸附测定技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的分析方法，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
该技术的原理是利用特异性抗体与待测物发生特异性结合，通过酶的催化作用产生颜色反应或荧光信号，从而得到定量或半定量的结果。
下文将详细介绍ELISA的原理、反应步骤以及其应用领域。
一、ELISA的原理ELISA的原理基于抗原与抗体的特异性结合。
它包括固定期（Coating）、阻断期（Blocking）、结合期（Binding）、洗涤期（Washing）和检测期（Detection）五个关键步骤。
1. 固定期（Coating）首先，在微孔板中将待测物固定在表面，这一步又称为固相抗原法。
通常使用多糖、蛋白质等具有反应性的物质将待测物固定在微孔板上。
固定完毕后，洗去多余的待测物。
2. 阻断期（Blocking）为避免非特异性结合和降低背景干扰，需要在上一步后加入阻断缓冲液，如牛血清白蛋白（BSA）或鱼明胶等，使孔洞表面被占满，阻断非特异性吸附位点。
3. 结合期（Binding）加入待测样本和特异抗体，特异抗体可与待测物发生特异性结合，形成抗原-抗体复合物。
一般将待测物样本加入微孔板后，经过一段时间的孵育，使抗原与特异抗体发生结合。
4. 洗涤期（Washing）在结合期后，需进行洗涤步骤以去除未结合的物质。
洗涤缓冲液通常使用含有洗涤剂的磷酸盐缓冲液，洗涤次数及力度需充分保证去除干净。
5. 检测期（Detection）在洗涤期后，加入与特异抗体结合的酶标记二抗，例如辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗兔IgG。
经过孵育后，待测物与酶标记二抗形成复合物。
最后，加入底物使酶催化反应产生颜色或荧光信号。
二、ELISA的应用领域ELISA技术在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用。
1. 生物医学研究ELISA被用于检测生物样本中的特定蛋白质、肽、抗体和核酸等。
酶联免疫吸附试验实验报告
酶联免疫吸附试验实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测目标蛋白或抗原的存在与浓度，以及对特定抗体的识别和结合情况。
通过本实验，我们可以了解到酶联免疫吸附试验的原理和操作步骤，以及在生物医学研究和临床诊断中的应用。
二、实验原理。
酶联免疫吸附试验是一种利用酶和抗体的特异性结合来检测抗原或抗体的方法。
其原理是将待检测的抗原或抗体吸附在微孔板表面，然后加入特异性抗体，并通过酶标记的二抗或底物来检测特异性结合的信号。
当待测物与特异性抗体结合后，通过底物的酶反应产生可定量的颜色反应，从而测定待测物的浓度。
三、实验材料和方法。
1. 实验材料，微孔板、待测抗原或抗体、特异性抗体、酶标记的二抗、底物溶液等。
2. 实验步骤，将待测抗原或抗体加入微孔板孔中，加入特异性抗体，洗涤孔板，加入酶标记的二抗，再次洗涤孔板，加入底物溶液，停止反应，测定吸光度。
四、实验结果。
通过本次实验，我们成功检测出待测物的存在与浓度，并观察到特异性抗体与待测物的结合情况。
根据实验结果，我们可以得出待测物的浓度，并进一步分析其在生物学过程中的作用和意义。
五、实验结论。
酶联免疫吸附试验是一种高度敏感和特异性的实验方法，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域。
通过本次实验，我们深入了解了酶联免疫吸附试验的原理和操作步骤，掌握了实验技术和数据分析方法，为今后的科研工作和临床诊断提供了重要的参考和支持。
六、实验展望。
酶联免疫吸附试验作为一种重要的生物学实验方法，具有广阔的应用前景。
今后，我们将进一步深入研究酶联免疫吸附试验的原理和技术，开展更多的实验和应用，为生物医学研究和临床诊断提供更多的支持和帮助。
七、参考文献。
1. Smith, J. et al. (2010). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Methods Mol Biol, 588, 89-94.2. Green, N. M. (2015). Avidin and streptavidin. Methods Enzymol, 184, 51-67.以上就是本次酶联免疫吸附试验的实验报告，谢谢阅读。
酶联免疫吸附的原理和步骤
酶联免疫吸附（ELISA）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于医学、生物学、生物化学、环境监测等领域。
它主要是通过酶标记抗体或抗原与待检测样品中的特定分子发生特异性反应，利用酶的催化作用来检测目标物质的存在量和浓度。
一、酶联免疫吸附的原理酶联免疫吸附的原理是基于免疫学和酶学的原理。
它利用抗体和抗原之间的特异性结合关系来检测待测物质的存在和浓度。
ELISA的原理主要分为两种类型：直接ELISA和间接ELIS A。
直接ELISA是将酶标记的抗体或抗原直接与待检测物质结合，然后用底物检测酶的活性，从而测定待检测物质的存在和浓度。
间接ELISA是将待检测物质与特异性抗体结合，再加入酶标记的二抗与第一抗体结合，最后用底物检测酶的活性，从而测定待检测物质的存在和浓度。
二、酶联免疫吸附的步骤酶联免疫吸附的步骤主要分为以下几个方面：1.涂层：将抗体或抗原涂在微孔板上，使其与微孔板表面结合。
2.阻断：用蛋白质或其他物质阻止非特异性结合。
3.样品加入：加入待测样品，使其与涂层的抗体或抗原发生特异性结合。
4.洗涤：用缓冲液洗去未结合的物质。
5.酶标记的抗体或抗原加入：加入酶标记的抗体或抗原，使其与待测物质结合。
6.洗涤：用缓冲液洗去未结合的物质。
7.底物加入：加入底物，使其与酶发生反应，产生可测量的信号。
8.停止反应：加入停止反应剂，停止底物的反应。
9.测量：用酶标仪或光度计测量信号的强度，从而计算出待测物质的存在量和浓度。
三、酶联免疫吸附的实际应用酶联免疫吸附在医学、生物学、生物化学、环境监测等领域都有广泛的应用。
1.医学应用：酶联免疫吸附可以检测血清中的病原体抗体，如乙肝病毒、艾滋病毒等；检测血清中的肿瘤标志物，如癌胚抗原、前列腺特异性抗原等；检测血液中的药物浓度，如抗生素、抗癌药物等。
2.生物学应用：酶联免疫吸附可以检测细胞因子、酶、蛋白质等生物分子的存在和浓度，用于研究生物学过程和疾病机制。
3.环境监测应用：酶联免疫吸附可以检测水、土壤、空气中的污染物，如重金属、有机物、农药等，用于环境监测和污染物的快速检测。
酶联免疫吸附筛查法
酶联免疫吸附筛查法酶联免疫吸附筛查法（Enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA）是一种常用的实验室技术，用于检测和定量分析体内特定抗原或抗体的存在。
该技术结合了酶学和免疫学的原理，通过酶与抗原或抗体的特异性结合反应，将抗原或抗体检测的结果转化为颜色或荧光信号，从而实现对目标物的快速、准确的筛查。
ELISA技术的原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合反应。
首先，将待测的抗原或抗体溶液加入到特定的酶标板孔中，使其与酶标抗体预先固定在孔中的抗原或抗体发生结合。
然后，经过一系列的洗涤步骤，去除未结合的物质。
接下来，加入含有特异性抗体的酶标抗体溶液，使其与孔中已结合的抗原或抗体形成抗原-抗体复合物。
再次进行洗涤步骤，去除未结合的酶标抗体。
最后，加入酶底物，酶与酶底物反应产生可测量的色素或荧光信号。
通过测量反应产生的信号的强度，可以定量地测定样品中抗原或抗体的浓度。
ELISA技术在医学诊断、生物学研究和药物开发等领域得到了广泛的应用。
在医学诊断中，ELISA常用于检测和筛查疾病标志物，如病毒抗体、癌症抗原、药物残留物等。
在生物学研究中，ELISA可用于检测和定量分析细胞因子、激素、生长因子等生物活性物质。
在药物开发中，ELISA可用于药物代谢和药物动力学研究，评估药物的药效和药物浓度。
ELISA技术的优点之一是其高灵敏度和高特异性。
由于ELISA采用双抗体夹心法，即在特定抗原或抗体的两侧分别固定特异性抗体，从而增加了目标物与抗体的结合机会，提高了检测的灵敏度。
此外，ELISA可以同时检测多个样品，节省了时间和成本。
此外，ELISA的结果可以通过颜色或荧光信号的定量测量，使结果更加可靠和准确。
然而，ELISA技术也存在一些限制。
首先，ELISA对样品的处理和操作要求较高，操作流程较为繁琐，需要严格控制实验条件。
其次，ELISA对抗体的选择非常重要，需要具有高亲和力和高特异性的抗体，以确保准确的检测结果。
酶联免疫吸附试验结果
酶联免疫吸附试验结果酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA），是一种广泛应用于生命科学中的试验技术，主要用于检测生物体内特定蛋白质和抗体的存在和数量。
本文将根据不同类别，介绍ELISA试验结果的分析。
一、直接ELISA试验结果分析直接ELISA试验是指将已知抗原沉淀于微孔板上，再加入待检测物，之后加入特定抗体进行检测的试验方法。
当待检测物含有对应的抗原，则抗原和特定抗体结合，形成固定的复合物。
此时，待检测物在微孔板中残留，被进一步检测。
如果待检测物中含有特定抗体，则会与预先添加的抗原结合。
根据特定抗体标记的物质进行检测。
直接ELISA试验结果为同轴柱，并且呈现梯度性图谱。
二、间接ELISA试验结果分析间接ELISA试验是指使用抗原沉淀于微孔板上，加入待检测物，并再次加入特定抗体进行检测的试验方法。
在该试验中，患者血清或其他样品中含有抗体，抗体与固定的抗原结合，形成复合物。
之后添加特定抗体，间接ELISA试验的结果为同轴柱，并且呈现梯度性的图谱。
三、竞争ELISA试验结果分析竞争ELISA试验是对样品中的特定物质进行检测的试验方法。
在试管中，抗体与已知抗原结合后，特定抗体标记的物质被加入竞争ELISA反应体系中。
如果合适的特定抗体分子与抗原分子竞争结合，则可抑制特定抗体分子与标记物结合，标记物的含量随之减少。
竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。
四、间接竞争ELISA试验结果分析间接竞争ELISA试验是对患者中特定物质的抗体进行检测的试验方法。
在该试验中，已知抗原沉淀于微孔板上，加入患者样品，之后加入特定抗体。
如果患者样品中含有特定抗体，将与特定抗体竞争结合，导致标记物与它竞争结合量的减少。
间接竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。
总之，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于特异性分子识别原理的分析方法，具有操作简单、稳定可靠、敏感度高等特点。
酶联免疫吸附筛查法
酶联免疫吸附筛查法酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay，简称ELISA) 利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。
ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
测定抗原主要有：1、竞争法（Competition method）：本法首先将特异性抗体吸附于固相载体表面，我们把抗原和抗体吸附到固相载体表面的这个过程，称为包被 （Coated），也可叫做致敏。
经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液，而另一组只加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为我们所要测定的未知抗原的量。
这种方法所测定的抗原只要有一个结合部位即可，因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。
该法的优点是快，因为只有一个保温洗涤过程。
但需用较多量的酶标记抗原为其缺点。
2、双抗体夹心法：本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。
这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位，因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用，而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。
酶联免疫吸附法标准
酶联免疫吸附法标准
酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的免疫分析技术，用于检测和定量分析特定蛋白质或其它
分子的存在。
这种分析方法是基于抗原与抗体的高度特异性结合原理。
以下是酶联免疫吸附法的一般标准步骤：
1. 准备微孔板：将酶标板的孔洞涂覆有抗原或抗体，使其吸附
在微孔板上。
2. 样本处理：将待检样本经过必要的预处理，如稀释、清洗等。
3. 加入样本：将处理好的样本加入到微孔板中，使抗原或抗体
与样本中的目标物质结合。
4. 免洗步骤：根据实验需要，可能需要进行一些免洗步骤来清
除非特异性结合物质。
5. 加入检测抗体：加入检测抗体，用于与目标物质结合。
6. 再次免洗步骤：如有需要，进行免洗步骤来清除非特异性结
合物质。
7. 加入酶标记抗体：加入酶标记抗体，它与检测抗体结合形成
复合物。
8. 加入底物：加入底物，使酶作用并产生可测量的信号。
9. 反应停止：加入反应终止剂停止酶反应，停止信号产生。
10. 信号检测：使用酶标仪或其他测量设备测量底物反应产生的
信号强度。
11. 数据分析：根据标准曲线或其他定量方法，计算样品中目标
物质的浓度。
需要注意的是，ELISA的具体步骤可能会因实验目的、样品类型
等因素有所差异，以上所述仅为一般标准步骤。
酶联免疫吸附试验实验报告
酶联免疫吸附试验实验报告酶联免疫吸附试验实验报告酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的生物化学实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体的存在与浓度。
本实验旨在通过ELISA技术，检测和定量分析一种特定抗原在不同样本中的浓度变化。
实验材料和方法：1. 样本制备：收集不同来源的样本，如血清、尿液等，并进行离心分离获得上清液。
2. 酶标板涂覆：将待测抗原溶液加入酶标板孔中，保持一定的温度和时间，使抗原均匀地附着在酶标板表面。
3. 阻断：加入阻断液，封闭未被抗原占据的酶标板孔，避免非特异性结合。
4. 抗体结合：加入特异性抗体，与抗原结合形成抗原-抗体复合物。
5. 酶标记抗体结合：加入酶标记抗体，与抗原-抗体复合物结合，形成二抗夹心复合物。
6. 显色反应：加入底物，使酶标记抗体催化底物发生颜色变化。
7. 反应停止：加入停止液，终止显色反应。
8. 测定吸光度：使用酶标仪测定酶标板孔中的吸光度。
实验结果：根据测定吸光度值，我们可以得到不同样本中抗原的浓度变化。
通过比较不同样本的吸光度值，可以了解抗原在不同条件下的表达情况以及不同样本中抗原的相对浓度。
实验讨论：ELISA技术在生物医学领域具有广泛的应用，尤其在疾病诊断和药物研发方面起到了重要的作用。
通过ELISA技术，可以检测和定量分析目标抗原的存在与浓度，从而判断疾病的发生与发展，为临床诊断提供依据。
在本次实验中，我们选择了特定抗原作为目标，通过ELISA技术对其进行检测和定量分析。
实验结果显示，不同样本中抗原的浓度存在差异，这可能与样本来源、处理方法等因素有关。
通过进一步的研究和分析，可以进一步探究这些差异的原因，并为临床诊断和治疗提供更准确的依据。
此外，ELISA技术还可以用于药物研发过程中的药物筛选和药效评价。
通过检测药物对特定抗原的影响，可以评估药物的疗效和安全性，为新药的研发提供重要的参考依据。
简述酶联免疫吸附测定的原理
简述酶联免疫吸附测定的原理酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种高度敏感、高通量的免疫技术，常用于检测微量生物分子或抗体的存在与浓度。
ELISA的原理基于抗体与抗原之间高度特异性的结合，以及酶底物反应的可见色素反应。
ELISA的基本原理如下：1. 酶联：先将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板）上。
最常用的固相载体是聚丙烯酸酯（polystyrene），可以牢固地吸附抗原或抗体。
2.结合：在固相载体上固定的抗原与样品中的分子结合，以形成特异性的抗原-抗体复合物。
3.洗涤：为了去除非特异性结合的物质，需要进行反复的洗涤步骤。
4.检测：加入与目标分子相关的抗体，这些抗体经过标记，通常是酶标记。
这些标记的抗体与复合物中的目标分子结合。
5.洗涤：再次进行洗涤步骤，以去除非特异性结合的物质。
6.底物-酶反应：加入合适的底物，底物与酶标记的抗体发生反应，并产生可见的色素物质。
7.读数：用光度计测量反应物的吸光度，吸光度的强度与样品中目标物的浓度成正比。
ELISA的优点是具有高度的特异性和敏感性，可以检测极低浓度的物质。
此外，ELISA还可以同时检测多个样品，并且操作相对简单，不需要昂贵的设备。
ELISA的应用广泛，特别是在医学诊断领域。
例如，ELISA可以用来检测一些疾病的标志物，如乳腺癌、艾滋病、流感等。
此外，ELISA还用于酶抗体检测、药物监测、细菌和病毒的检测等领域。
虽然ELISA是一种非常有用的技术，但也存在一些局限性。
ELISA对样品中的杂质比较敏感，可能会导致假阳性结果。
此外，ELISA只能检测已知的抗原或抗体，无法发现新的目标分子。
此外，ELISA需要时间较长（通常需要2-4小时）。
综上所述，酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种重要的免疫技术，通过抗原与抗体的特异结合和酶底物反应，可以准确、敏感地检测微量生物分子或抗体的存在与浓度。
酶联免疫吸附法原理
酶联免疫吸附法原理酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的生物化学方法，用于检测特定抗原或抗体的存在或浓度。
ELISA的原理基于酶标记物、抗原抗体反应和酶底物的化学反应。
一般分为间接ELISA、直接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA等不同类型。
在间接ELISA中，首先将待检物质（如抗原）固定在微孔板上。
然后，在孔中加入一定浓度的非特异性蛋白质（如牛血浆蛋白、BSA）来防止非特异性吸附。
接着，加入一定浓度的特异性抗体与待检物质发生反应，形成特异性抗原-抗体复合物。
随后，孔中加入与特异性抗体结合的酶标记抗体，与特异性抗体结合形成二抗-一抗复合物。
通过洗涤去除未结合的物质，只保留特异性反应的复合物。
最后，加入酶底物使其与酶物质（如辣根过氧化物酶）发生化学反应，产生可测定的色产物。
测定光密度或发色强度，可以间接反映待检物质的浓度或存在情况。
直接ELISA与间接ELISA类似，不同之处在于直接ELISA中使用酶标记的一抗直接与待检物质发生特异性反应，不需要使用酶标记抗体。
竞争ELISA常用于检测样品中特定抗体的含量。
首先，在空孔或微孔板上固定抗原，加入待测样品（可能含有特异性抗体）和已知浓度的酶标记抗体。
酶标记抗体与待测样品中的特异性抗体发生竞争结合抗原，竞争程度与待测样品中特异性抗体的浓度成反比。
通过测定酶底物的反应程度和已知浓度的抗体进行对比，可以推算出待测样品中特异性抗体的浓度。
夹心ELISA结构类似于间接ELISA，但其中待检测样品（如血清）同时含有特异性抗体和抗原。
首先，在微孔板上固定特异性抗体，待检测样品中的抗原与之发生结合。
然后，加入与抗原结合的酶标记抗体。
洗涤后，再加入酶底物进行化学反应，通过测定光密度或发色强度，可以间接反映待测样品中的抗原浓度。
通过上述步骤，ELISA方法可以准确、快速地检测出待测物质的浓度或存在情况，具有高灵敏度和高特异性。
酶联免疫吸附实验步骤大全(精华版)
酶联免疫吸附实验步骤大全(精华版)实验目标：酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的生物分析技术，用于检测特定抗原或抗体的存在。
本文档提供了酶联免疫吸附实验的详细步骤。
材料准备- 微孔板（96孔）- 酶标仪- 新鲜的标本样本- 洗涤缓冲液- 包被缓冲液- 阻断缓冲液- 标准物质或阳性对照- 检测抗体或酶标记的二抗- 底物液实验步骤1. 将微孔板的一行作为阴性对照，填充标准物质或阳性对照到其他行中。
每个孔位重复3次。
2. 加入样本到微孔板中。
3. 将板放入酶标仪中进行孵育，温度和时间根据实验要求设定。
4. 倒出孔内液体，用洗涤缓冲液洗涤孔位3次。
5. 加入包被缓冲液到每个孔中，孵育一定时间。
6. 倒出孔内液体，用洗涤缓冲液洗涤孔位3次。
7. 加入阻断缓冲液到每个孔中，孵育一定时间。
8. 倒出孔内液体，用洗涤缓冲液洗涤孔位3次。
9. 加入检测抗体或酶标记的二抗到每个孔中，孵育一定时间。
10. 倒出孔内液体，用洗涤缓冲液洗涤孔位3次。
11. 加入底物液到每个孔中，孵育一定时间。
12. 使用酶标仪测量吸光度值。
13. 根据吸光度值绘制标准曲线或计算样本中目标物质的浓度。
结论本文档简要介绍了酶联免疫吸附实验的步骤，包括材料准备和实验操作。
根据实验要求，您可以根据这些步骤进行实验，并获取目标物质的浓度或检测结果。
请确保遵循实验室安全操作规程并使用正确比例的试剂。
免疫酶联免疫吸附实验报告
免疫酶联免疫吸附实验报告免疫酶联免疫吸附实验报告免疫酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测和定量测定生物样本中特定抗原或抗体的存在。
本实验旨在通过ELISA法检测某种病毒感染后产生的抗体水平，以评估免疫系统的应答能力。
实验材料和方法：1. 样本制备：收集病毒感染后的血清样本，离心去除细胞和颗粒物，得到清澈的血清。
2. 酶标板涂布：将目标抗原溶液加入酶标板孔中，孵育一段时间，使抗原吸附于酶标板表面。
3. 洗涤：将洗涤缓冲液加入酶标板孔中，轻轻摇动，倒出液体，重复此步骤多次，以去除未结合的抗原。
4. 反应：加入待测血清样本和辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人免疫球蛋白G（IgG）抗体，孵育一段时间，使抗体与抗原结合。
5. 洗涤：重复第三步骤，去除未结合的抗体。
6. 显色：加入底物溶液，使底物与HRP发生反应，产生可见的颜色。
7. 终止反应：加入终止液，停止底物与HRP的反应。
8. 测定：使用酶标仪测定吸光度，根据标准曲线计算待测样本中抗体的浓度。
实验结果：根据实验操作步骤，我们成功地进行了ELISA实验，获得了一系列吸光度值。
通过绘制标准曲线，我们可以将吸光度值转化为抗体浓度。
进一步分析数据，我们发现不同样本的抗体浓度存在差异。
这表明，病毒感染后，机体会产生相应的抗体作为免疫应答的一部分。
讨论与分析：ELISA法是一种高灵敏度、高特异性的实验方法，广泛应用于医学、生物学和疾病诊断领域。
通过本实验，我们验证了ELISA法的可行性，并获得了关于抗体水平的有用信息。
在实验过程中，我们注意到样本制备的重要性。
样本的质量和处理方式会直接影响实验结果的准确性。
因此，在实验前，我们需要仔细选择和处理样本，确保样本中的抗原或抗体得到充分释放和稳定。
此外，实验中的洗涤步骤也非常重要。
洗涤的目的是去除未结合的抗原或抗体，以减少非特异性信号。
酶联免疫吸附实验报告
酶联免疫吸附实验报告导言酶联免疫吸附实验是一种用于检测抗原或抗体的常用方法，其原理是利用酶的特异性活性，使其与试验物发生特异性反应，并通过测定酶反应产生的信号来确定目标物的存在与否。
本实验报告将介绍使用酶联免疫吸附实验来检测抗原的方法和结果。
实验材料与方法材料：实验所需材料包括试剂盒、检测板、洗涤缓冲液、标准物质、底物试剂等。
方法：首先准备样本和标准溶液，按照试剂盒说明书的指导加入相应试剂，进行酶联免疫吸附实验。
实验过程中需要进行洗板步骤、底物反应、反应终止等操作。
实验结果与分析通过此次实验，我们成功检测到了目标抗原。
比如，我们可以观察到在某个特定波长下，底物反应产生了显著的吸光度值。
这是因为被检测的抗原与特异性抗体反应，在酶反应的作用下，产生了底物反应所需的物质，从而使底物反应溶液的颜色发生变化。
结论通过本次实验我们证实了酶联免疫吸附实验可以用于检测抗原。
这种方法具有灵敏度高、准确度高的特点，广泛用于医学、生物学以及生化领域的研究中。
酶联免疫吸附实验可以快速、简单地检测大量样本，并得到可靠的结果。
展望虽然酶联免疫吸附实验在目前的医学研究中被广泛使用，但仍有一些改进的空间。
例如，我们可以进一步优化实验条件，提高实验的灵敏度和准确度。
此外，我们也可以将酶联免疫吸附实验与其他技术手段相结合，进一步扩展其应用领域。
结语本实验报告介绍了酶联免疫吸附实验的方法、结果和意义。
这是一种常用的检测方法，可用于确定抗原的存在和浓度。
酶联免疫吸附实验不仅在医学研究中起着重要作用，也在生物学和生物化学研究中发挥着重要作用。
通过不断改进和创新，酶联免疫吸附实验有望在未来更广泛地应用于科学研究和临床实践中。
酶联免疫吸附测定实验报告
酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样本中特定分子的存在。
本实验旨在通过ELISA技术，对特定抗原在样本中的含量进行测定，并了解其原理及应用。
一、实验原理ELISA技术是一种基于免疫反应的实验方法，其原理主要包括固相吸附、特异性结合、酶标记和显色反应。
首先，在微孔板中固定特异性抗体，形成固相吸附。
然后，加入待测样本，样本中的目标抗原与固相抗体结合。
接着，加入酶标记的二抗与目标抗原结合，形成特异性结合。
最后，通过添加显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化，从而定量分析目标抗原的含量。
二、实验步骤1. 准备样本和试剂：收集待测样本，如血清、尿液或细胞培养上清液，并准备好ELISA试剂盒中的各种试剂。
2. 板洗涤：将微孔板放入洗板机中，加入洗板缓冲液，进行洗涤步骤，以去除未结合的物质。
3. 固相吸附：将特异性抗体加入微孔板孔中，孵育一段时间，使其与固相吸附。
4. 样本孵育：将待测样本加入各孔中，与固相抗体结合，在恒温条件下孵育。
5. 二抗结合：加入酶标记的二抗，与目标抗原结合形成特异性结合。
6. 洗涤：再次进行洗板步骤，去除未结合的物质。
7. 底物反应：加入显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化。
8. 反应终止：加入终止液，停止酶催化反应。
9. 测定吸光度：使用酶标仪测定各孔的吸光度值。
10. 数据分析：根据吸光度值，绘制标准曲线，通过比较待测样本的吸光度值，计算出目标抗原的浓度。
三、实验结果通过ELISA实验，我们成功测定了待测样本中目标抗原的含量。
根据标准曲线，我们计算出了各样本中目标抗原的浓度。
这些结果将有助于我们了解样本中特定分子的水平，从而进一步研究其生物学功能和相关疾病的发生机制。
四、实验应用ELISA技术具有广泛的应用领域，包括生物医学研究、临床诊断、药物开发等。
酶联免疫吸附法实验步骤
酶联免疫吸附法实验步骤以酶联免疫吸附法实验步骤为标题的文章如下：酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测抗原或抗体的存在和浓度。
下面将详细介绍ELISA实验的步骤。
1. 基本原理ELISA实验基于特定抗原与抗体的高度特异性结合。
通常将抗原固定在试板上，然后加入待测样品，样品中的目标分子（如抗体或抗原）与固定在试板上的抗体或抗原发生特异性结合。
最后，通过加入酶标记的二抗或底物，可以定量测定目标分子的存在和浓度。
2. 实验步骤2.1. 预处理将试板中的孔洗涤至少3次，去除未结合的物质，然后加入阻断缓冲液，封闭非特异性结合位点，防止后续步骤的非特异性结合。
2.2. 样品处理加入待测样品到试板中，使样品中的目标分子与固定在试板上的抗体或抗原发生特异性结合。
样品处理的时间和温度可以根据实验需要进行优化。
2.3. 洗涤洗涤试板以去除未结合的物质，避免后续步骤的干扰。
洗涤次数和洗涤缓冲液的类型可以根据实验需要进行调整。
2.4. 酶标记的二抗处理加入酶标记的二抗，使其与待测样品中的目标分子结合。
该二抗可以与特定抗原或抗体结合，并且具有酶标记物，例如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）。
2.5. 再次洗涤洗涤试板以去除未结合的酶标记的二抗，避免后续步骤的干扰。
2.6. 底物处理加入底物，例如TMB（3,3',5,5'-四甲基苯基二胺）或ABTS（2,2'-氨基丙基硫酸盐）等，使其与酶标记的二抗反应产生显色或荧光。
产生的显色或荧光强度与目标分子的存在和浓度成正比。
2.7. 反应停止加入反应停止液，停止底物的反应。
反应停止液改变底物的化学性质，使其停止产生显色或荧光。
2.8. 读取结果使用酶标仪或光谱仪读取试板上的显色或荧光信号强度。
根据标准曲线或对照样品的信号强度，可以计算出待测样品中目标分子的浓度。
酶联免疫吸附试验实验报告
酶联免疫吸附试验实验报告实验目的：本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）技术，检测特定抗原或抗体的存在，进而了解其在疾病诊断、治疗监测和流行病学研究中的应用。
实验原理：酶联免疫吸附试验是一种基于抗原-抗体特异性结合的固相免疫测定技术。
在实验中，首先将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板）上，然后加入待测样本，通过特异性结合形成抗原-抗体复合物。
随后，加入酶标记的第二抗体，与抗原-抗体复合物结合。
最后，加入底物产生可检测的信号（如颜色变化），通过光度计测定吸光度，从而定量分析抗原或抗体的含量。
实验材料：1. 微孔板2. 待测样本（血清、尿液等）3. 特异性抗体或抗原4. 酶标记的第二抗体5. 底物溶液6. 洗涤缓冲液7. 标准品8. 光度计实验方法：1. 准备微孔板，将特异性抗原或抗体稀释后固定在微孔板的孔中。
2. 将待测样本加入到相应的孔中，使其与固相的抗原或抗体发生特异性结合。
3. 洗涤微孔板，去除未结合的样本。
4. 加入酶标记的第二抗体，使其与抗原-抗体复合物结合。
5. 再次洗涤微孔板，去除未结合的第二抗体。
6. 加入底物溶液，使酶催化底物产生颜色变化。
7. 使用光度计测定各孔的吸光度，根据标准曲线计算待测样本中抗原或抗体的浓度。
实验结果：实验结果显示，通过测定不同浓度的标准品，我们建立了标准曲线。
将待测样本的吸光度值代入标准曲线，计算得到样本中抗原或抗体的浓度。
实验数据表明，吸光度与抗原或抗体的浓度呈正相关，符合ELISA实验的预期结果。
实验讨论：本实验中，ELISA技术成功地用于检测特定抗原或抗体的存在。
然而，实验过程中可能存在一些影响结果准确性的因素，如样本的稀释比例、酶标记抗体的活性、底物的稳定性等。
此外，实验操作的标准化和重复性也是保证结果可靠性的关键。
实验结论：通过本实验，我们掌握了ELISA技术的原理和操作流程，并成功应用于抗原或抗体的定量检测。
该技术在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用前景。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
摇摇
分析化学
第 40 卷
凭注。 然而,在纸基芯片表面修饰抗原时,主要依靠非特异性吸附。 在这种情况下,中性或负电性微粒难
以被稳定吸附[22],其它结合力较弱的分子也很容易在洗涤过程中损失。 传统聚苯乙烯微孔板对牛血清 白蛋白( BSA) 和乳清蛋白的吸附能力明显强于其它蛋白质,因而可利用 BSA 等封闭试剂获得良好的封 闭效果。 但是滤纸纤维对抗原、酶标二抗和封闭试剂 BSA 等不同蛋白质的结合能力没有显著差别[22], 导致测定过程中封闭效果不理想、背景信号较高。 针对这些问题,本研究提出在滤纸表面负载氨基或羧 基修饰的 SiO2 微球,利用其强极性增强纸基芯片包被抗原的能力,提高信噪比。 本研究在滤纸微孔板 上建立了酶联免疫吸附检测方法,为研制低成本的便携式疾病检测设备提供了新思路。
DOI: 10. 3724 / SP. J. 1096. 2012. 20420
基于滤纸微孔板的酶联免疫吸附测定方法研究
白 鹏摇 罗 雁摇 李 英摇 余晓冬* 摇 陈洪渊
( 南京大学化学化工学院, 生命分析化学国家重点实验室, 南京 210093)
摘摇 要摇 用光刻法在普通定量滤纸上制作出了疏水图案,得到了滤纸微孔板。 将表面修饰后的 SiO2 微球负 载在滤纸表面,以提高滤纸纤维吸附蛋白质的能力,基于此建立了以间接酶联免疫吸附法测定羊抗兔免疫球 蛋白的方法。 以酶标兔抗羊 IgG 为例,负载 SiO2 微球后,滤纸微孔板吸附该蛋白质的量提高了 20% ~ 700% ; 将 SiO2 负载法应用于羊抗兔 IgG 的检测时,可使信号增强 20% ~ 150% 。 在本实验条件下,测定羊抗兔 IgG 的线性范围为 3伊10-12 ~ 3伊10-8 mmol/孔。 本方法使生物免疫试剂消耗量减少至 3 ~ 5 mL/孔、检测时间降至 20 min/板、滤纸微孔板制作成本可低至约每板 1.1 美元,为研制准确、快速和低成本的疾病检测设备提供了新的 思路和可能性。
摇 2012鄄04鄄20 收稿;2012鄄07鄄23 接受 本文系国家重大科学仪器设备开发专项子课题( No.2011YQ17006711) ,973 计划课题( No.2011CB911003) 和国家自然科学基金创新研 究群体项目( No.21121091) 资助 * E鄄mail: yuxd@
制作纸基检测装置的第一步是在纸上制造出疏水的隔离带,从而让亲水部分( 即纸) 形成所需的通 道、网络或其它形状。 Wijitar 等[6]用丝网印刷技术将固体蜡涂在滤纸表面,加热后蜡渗入滤纸即可形成 相应的图案。 Bruzewicz 等[10]使用改装的绘图机将溶解在正己烷中的聚二甲基硅氧烷( PDMS) “ 绘制冶 在滤纸上,获得疏水壁垒。 Xu 等[3]成功地将具有纤维素反应活性的疏水化试剂以喷墨打印的方式印制 在纸上,利用这种办法还可以将生物分子或指示试剂输送到纸上的特定位置。 Abe 等[4] 用喷墨蚀刻法 除去了纸上的聚苯乙烯涂层,得到亲水性通道;与之类似的还有用等离子氧化的方法来去除疏水涂 层[11]。 然而,由于涂层或“ 墨水冶 通常只能被涂覆在纸的表面,上述印刷类方法很难获得贯穿整层纸张 横截面、宽度均一的图案,因此限制了纸基芯片的二维及三维结构应用。 为克服此不足之处,Whiteside 课题组采取以光刻胶浸润滤纸后紫外线光刻的方法获得了精度高、宽度均一的图案化滤纸板 [12] ,并对此 方法展开了一系列的研究和改进[5,13 ~ 18],其中一项重要的工作就是制备了与传统 96/384 微孔板相同规 格的纸基微孔板[19],并成功用于定量检测人体血清中抗 HIV鄄1 gp41[20]。 目前的报道中纸基芯片已成功 应用于检测葡萄糖、乳糖、尿酸、胆固醇、乙醇和抗坏血酸等多种小分子 [5,7,21] 以及血清中的抗原抗体。
制备过程如图 1 所示,将滤纸浸润于 SU鄄8 光刻胶中,置于匀胶机中以 1500 r/min 旋转 5 ~ 10 s, 甩去 多余光刻胶,悬挂在鼓风干燥箱中,于 95 益 下烘 1 h 至充分固化。 冷却后覆盖上预先打印好图案的透明聚 氯乙烯(PVC)塑料掩膜(6伊6 孔阵列圆,直径 5 mm/孔),在紫外曝光机(4 ~ 7 mJ/cm2 ) 下正反面分别曝光 15 ~ 20 s。 65 益 下烘 0.5 h。 冷却后在 SU鄄8 光刻胶显影液中超声 2 ~ 5 min,沥去显影液,用丙酮冲洗 2 次,置于鼓风干燥箱中 40 益 下干燥后待用。 2. 3摇 抗原包被
第 4请0提卷供第一作者的手机号码以方便编分辑析部化和学作(F者EN联X系I H,此UA号X码U不E)会摇 公研布究在摇 期摇 刊中;请认真核实参考文献的第作期 201者加2 年,。期月刊摇,年摇 ,卷摇 ,摇期摇,起摇 止摇 页摇 码摇 是摇 否摇 正摇 确以Ch及in文ese献J是our否na与l o文f A中n一aly一tic对al应Ch;本em文ist为ry封摇面摇文摇章摇且摇有摇彩摇图摇，摇版摇面摇费摇增 ~
摇摇
用量选择 5 mL。 此外,对于羊抗兔 IgG 的检测,考虑到待测抗体浓度范围、洗涤过程中可能的损耗及检 测信号范围,本实验选择 1 g/L 作为包被抗原的浓度,选用 0.1 g/mL 酶标二抗,以获得相对较强的信号。 3. 1摇 SiO2 微球对滤纸吸附 IgG 的影响
滤纸由交织的纤维素分子“ 网络冶 构成,纤维素结构中存在大量的羟基残基,纸能吸收 22% 左右的 水,而且其中 6 ~ 7% 的水以氢键形式与纤维素的羟基结合。 在通常的生物活性应用中,纸浸润在水溶 液中,表面的非晶形纤维素和半纤维素溶胀并微弱电离而带负电,能以静电吸附的方式与正电性微粒结 合,但很难与中性或负电性微粒结合[22]。 结合力较弱的分子很容易被洗掉。 对于纸基微孔板,可以利用 这种非特异性吸附包被抗原。 但强烈的非特异性吸附一方面有利于将蛋白质修饰在滤纸表面,另一方 面也会在结合酶标二抗时引入较强的背景信号从而降低检测的灵敏度。 因为不同于聚苯乙烯材料,滤 纸的纤维素对 IgG、酶标 IgG、BSA 等不同蛋白质的吸附能力并没有显著差别,所以封闭效果不佳。 结 合酶标二抗时缩短孵育时间虽然能降低背景信号,但待测信号也降低,信噪比反而下降。 为了尽可能降 低这种负面影响,提高信号强度,本研究将表面修饰有氨基或羧基的 SiO2 微球( 粒径为 5 mm) 负载在孔 径 11 mm 的微孔滤纸板的亲水区域,由于分散 SiO2 微球的溶剂乙醇能迅速挥发,且未施加负压,SiO2 微球主要沉积在滤纸表面,其暴露在外的 NH2 或 COOH 对蛋白质有更强的结合能力。 为表征 SiO2 微球对蛋白质吸附情况的影响,本实验将 3 mL 碱性磷酸酶标记的兔抗羊 IgG 滴加在负载有 SiO2 微球的孔中,3 min 后用 PBS 洗涤 3 次,加入 5 mL 酶底物 BCIP/NBT 显色,15 min 后测定灰度值,结果见 图 2。 对于 0.001, 0.01 和 0.1 g/L 兔抗羊 IgG,与无 SiO2 负载时相比,负载有 NH2 鄄SiO2 微球的滤纸微孔 板使信号分别增强了 6.88 倍、2.88 倍和 21% ;而 COOH鄄SiO2 微球负载的滤纸使信号分别增强了 3.18 倍、1.88 倍和 15% ,显然,随着兔抗羊 IgG 浓度的降低,信号增强的幅度大大提高,说明 IgG 优先吸附在 了极性更强的 SiO2 微球上。 当 IgG 浓度不断升高,SiO2 微球表面的结合位点被占据并趋于饱和,因而 信号增幅下降。 此外,NH2 鄄SiO2 微球对兔抗羊 IgG 的结合能力更强,这可能是因为在 pH 7.4 的缓冲溶 液中,IgG 呈负电性,能与呈正电性的氨基产生较强的静电吸附作用。 而 COOH鄄SiO2 微球带负电,因此 结合兔抗羊 IgG 的能力弱于 NH2 鄄SiO2 微球。 利用此结果,可以在负载有 NH2 鄄SiO2 微球的滤纸微孔板 上包被抗原,从而有效提高包被效率,减少抗原试剂损耗量,降低非特异性吸附产生的背景信号。
关键词摇 滤纸; 微孔板; 光刻; 酶联免疫分析; 二氧化硅微球
1摇 引摇 言
近年来,随着微流控芯片技术的迅速发展,纸作为一种廉价易得的材料进入了科研工作者的视线。 纸轻薄、可燃、易加工,表面能修饰多种功能基团或共价结合蛋白质、DNA 和一些小分子,其强吸水性使 得设备不需要额外的动力系统[1]。 基于纸的诸多优点,研究人员通过多种加工方法将其作为基材,引入 了微流控分析设备,以期实现快速、实时并且价格低廉的疾病诊断,从而为广大的发展中国家和地区提 供更为经济的疾病监控方法[2 ~ 9]。
百思优科技发展有限公司) ;兔免疫球蛋白 G(IgG)、羊抗兔 IgG、碱性磷酸酶( AP) 标记的羊抗兔 IgG、AP 标记的兔抗羊 IgG( 北京博奥森生物技术有限公司) ;牛血清白蛋白( BSA,BIOSHARP 公司) ;5鄄溴鄄4鄄氯鄄 3鄄吲哚基磷酸盐/氯化硝基四氮唑蓝溶液( BCIP/NBT,AMRESCO 公司); 单分散二氧化硅微球(5.0 mm, 2.5% ( w / V),天津市倍思乐色谱技术中心); 丙酮( 分析纯, 国药集团化学试剂有限公司); 实验用水为 Millipore 纯水机制备的超纯水。 2. 2摇 图案化滤纸板的制备
将制备的 6伊6 孔滤纸板固定在两片打好 孔的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)透明板中,向 亲水孔中滴加兔 IgG 溶液,37益 下孵育 至 干 燥。 滴加 5% BSA 封闭纤维素中未结合位点, 37益 下孵 育 至 干 燥。 对 于 负 载 SiO2 的 滤 纸 板,先滴加 SiO2 微球的乙醇悬浊液,待溶剂挥 发后再包被抗原并封闭。 2. 4摇 间接酶联免疫吸附法测定羊抗兔 IgG
与传统的聚苯乙烯微孔板相比,纸基微孔板具有以下显著优点:(1) 样品及试剂用量很少摇 对于纸 基微孔板,每次 3 ~ 5 mL/孔的试剂用量即可完成检测,约为传统微孔板的 1/10; (2) 检测快速使用传统 微孔板时的孵育和封闭时间约为 1 h,整个检测通常需要 3 h 或更多;而在纸基微孔板上完成一次间接 ELISA 检测的时间不超过 25 min;(3) 成本低条件优化后,每张 96 孔纸基微孔板的材料成本可低至每 板 0.03 美元( 实验室水平) [20],昂贵的生物试剂的用量大幅度降低,极大地削减了使用成本。 此外,传统 微孔板需要使用价格酶标仪检测信号,而纸基微孔板用非常便宜的台式扫描仪即可获取信号; (4)图案 设计简单有利于与现有的工具及设备兼容集成。 尽管纸基微孔板的检测限和灵敏度低于传统方法,但