小鼠体外受精的影响因素

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小鼠受精卵体外培养的影响因素

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２ｏ１６年１２月－下
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小鼠受精卵体外培养的影响因素
王晓佳
（辽宁省抚顺市农业特产学校，辽宁抚顺市１１３１２３）
摘要哺乳动物受精卵在从合子发育到囊胚的过程中对能量、蛋白质和其他物质所需要的量和种类都有所不同。从受精卵的成熟来看，影响因素是多方
有研究显示，３９１Ｅ时牛受精卵的成熟率明显高于３５ ℃、３７ ℃和４ｌ ℃。当温度达到４１ ℃时有明显危害。之后也有研究结果与其相似，发现不同温度下的培养效果差异
很大，当牛受精卵在３４、３６ ℃和３８．５ ℃下培养时，效果随温度而提高。而小鼠体外培养的最适宜温度是３８ — ３９ ℃。
口（ＴＧＦ－口）。８激素
的进展，胚胎的体外培养技术显得越来越重要。而在培养液中添加生长因子、激素、葡
氨基酸是早期胚胎培养的一种重要物质，具体来说，谷氨酞胺是胚胎代谢的主要
氮源，可以促进胚胎细胞的早期分裂，增强胚胎体外发育能力；在乳酸钠存在的情况
下。谷氨酞胺对于卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育有明显的促进作用；牛磺酸除了能够促进胚胎发育外，还具有抗氧化作用和解毒作用：甘氨酸可以维持细胞内渗透压，增强胚胎对高离子浓度环境的抗逆能力。
５蛋白质
胚胎发育阻滞和胚胎基因组转录都与胚胎内蛋白质合成有关，胚胎培养液中蛋白质含量不足与过剩都会对早期胚胎发育有

小鼠体外受精的影响因素

的验证。１１１ｃｒｙ．． —ｎｂ对小鼠ＩＦ的影响Ｖ
徐平等（０４年）验中还观察到，子的复苏２０实精
率与ＩＦ的受精率无直接关系，冻方法对小鼠精Ｖ冷子受精能力的影响比精子的活力更高，但是据史晓萍等（０６年）究报道，鼠新鲜精子的受精率略２０研小高于冷冻复苏精子的受精率。陆晔等（０３年）而２０研
化学的方法发现在小鼠的精子上有Ｅｂ的存在，ｒＢ
方面，即精子、子和培养液。文将这些因素予以卵本
进行系统的总结。
１精子因素
ｃｅｂＯＮ — ｒＢＡＳＤｓ能呈剂量依赖方式抑制小鼠体外
寡脱氧核苷酸能呈剂量依赖方式抑制小鼠体外受收稿日期：０００ — ４２１— ７１
作者简介：秀娟（９０，，师。孙１８一）女讲
伤也存在于精子头背部的前面质膜．体反应所需顶
蛋白正是在精子头部的喙部表达。而且小鼠冻融精
例则是１１：。小鼠体外受精时精卵比例范围变动较
对体外受精确有影响，且排卵后３４体外受精的～ｈ为最佳时间。
２３去卵丘和透明带外对小鼠ＩＦ的影响＿Ｖ
大，有报道为１０ — ０００１有时也可为５０１体０００２０：，０：。

雷帕霉素对小鼠体外受精胚胎早期发育的影响

不可少的，不过，由于信号传导系统的复杂性和目前研究手段的局限性，其在胚胎发育的早期阶段行使
的功能尚不清楚。本研究以ＩＣＲ小鼠胚胎为试验材料，以化学限
分离出来。它通过与细胞内受体ＦＫＢＰ１２结合形成
同浓度的ＲＡＰＡ，培养９０ｈ～９６ｈ后，发现１００ｎｇ／ｍＬＲＡＰＡ组的囊胚率显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）和其
他处理组（Ｐ＜０．０５）。囊胚细胞计数结果表明，１００ｎｇ／ｍＬＲＡＰＡ处理组囊胚内细胞团细胞数、滋养层细胞
动物医学进展。２０１３，３４（１２）：１０１ — １０５
ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ
雷帕霉素对小鼠体外受精胚胎早期发育的影响
周亮，张喜凤，周娜汝，吴蓉花，李运生，张宇，张运海
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ｍａｍｍａｌｉａｎｔａｒｇｅｔｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎ，ｍＴＯＲ）是磷脂肌醇激酶相关激酶
（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙＩｉｎｏｓｉｔｏｌｋｉｎａｓｅ — ｒｅｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅｓ，
外发育率（卵裂率、囊胚率）及囊胚质量（囊胚内细胞团细胞数、滋养层细胞数、总细胞数）。结果显示，在向原核期开始体外培养的受精卵培养液中添加不同浓度的ＲＡＰＡ，体外培养至２４ｈ时，各处理组的卵裂率与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５），受精卵卵裂未受影响；而在原核期及２细胞期开始培养的胚胎培养液中加中的一种进化上保守的丝氨酸／苏氨酸激酶＿】］，在应对营养物质、生长因子和细胞的能量时被激活，在细胞生长、代谢和衰老方面起到中心调控作用［２］。而雷帕霉素（ｒａｐａｍｙｃｉｎ，ＲＡＰＡ）是一种

影响小鼠体外受精关键因素的研究

影响小鼠体外受精关键因素的研究
小鼠的体外受精是一种重要的生殖技术，在细胞和分子水平上的研究有助于进一步了解其机制。

本文将重点研究对小鼠体外受精的关键因素和其影响。

小鼠体外受精是一种使用体外培养基和人工控制的方法来实现受精的生殖技术。

其中至关重要的是受体细胞的质量和数量，能够影响卵子发育到体外受精成功的程度。

一些研究表明，体外受精的成功与小鼠内源性激素的水平有关。

例如雌激素和孕激素可以影响小鼠的卵泡发育和受体细胞的数量。

此外，催乳素和内皮素等因子也可以影响小鼠的体外受精成功率。

除此之外，影响小鼠体外受精成功的因素还包括卵子和精子的质量以及培养基和细胞因子的组合。

例如，高浓度的卵清蛋白和人类细胞因子可以促进卵子的发育和体外受精成功的率。

同时，适当的温度和CO2浓度也是小鼠体外受精成功的关键因素之一。

此外，小鼠体外受精的成功率还与受体细胞和精子的来源有关。

通常情况下，3周大的小鼠是首选作为受体细胞，因为此时它们的体内激素水平最适合体外受精。

而从6-8周大的小鼠收集的精子则具有更高的成功率。

总之，影响小鼠体外受精成功的关键因素和其复杂的机制，包括内源性激素、卵子和精子的质量、培养基和细胞因子的组合、温度和CO2浓度等。

深入研究这些因素对体外受精的影响，有助于进一步推进小鼠体外受精技术的发展，从而更好地服务于生物学、医学及生殖学研究。

影响小鼠体外受精关键因素的研究

影响小鼠体外受精关键因素的研究小鼠体外受精是一种重要的实验手段，在生命科学研究中被广泛应用。

小鼠体外受精的成功与否，受多种因素的影响。

本文将介绍影响小鼠体外受精的关键因素。

1. 小鼠品系的选择小鼠品系是影响小鼠体外受精的关键因素之一。

从小鼠天然种群中筛选出体外受精能力强的品系，能最大限度地提高体外受精的成功率和卵裂能力。

例如，ICR小鼠品系的体外受精能力较高，常用于小鼠体外受精研究。

2. 预处理卵母细胞卵母细胞的预处理是影响小鼠体外受精的另一个关键因素。

在小鼠卵母细胞的体外成熟过程中，需要特定的培养基和激素。

细胞的成熟程度直接影响到其体外受精能力。

此外，卵母细胞的悬浮浓度和孵化时间等因素也会影响卵母细胞的成熟水平和受精能力。

3. 精子的选取和处理精子的选取和处理是影响小鼠体外受精的另一个关键因素。

将优质精子选出并去除异常精子，能最大限度地提高小鼠体外受精的成功率。

此外，在体外受精前，需要将精液进行适当的处理，去除死精和精子余液等物质，保证精子的纯度。

4. 受精培养基的配方受精培养基的配方也是影响小鼠体外受精的关键因素之一。

钠离子、钙离子和镁离子等微量元素的浓度调节，对受精过程的成功与否产生直接的影响。

适当调节培养基浓度，如加入BME培养基等营养物质，对于提高体外受精率也有着积极的作用。

总之，小鼠体外受精的成功率受多种因素的复杂交互影响，需要针对具体实验进行管理调节。

研究者应该全面了解以上因素的作用，适当调节每个步骤，以提高小鼠体外受精的成功率。

精源性双酚A对小鼠体外受精和胚胎发育的影响

精源性双酚A对小鼠体外受精和胚胎发育的影响目的探讨双酚A（BPA）对小鼠体外受精和胚胎发育的精源性影响作用。

方法健康昆明种小鼠52只，雌雄各半，随机分为两组，实验组雄鼠用双酚A[10μg/（kg·d）]胃灌洗45 d后进行精子参数分析，同时取出正常喂养的雌鼠卵子进行体外受精，对受精情况、胚胎发育情况进行跟踪观察，对照组雄鼠采用相同体积的玉米油胃灌洗。

结果（1）双酚A灌洗组精子的活力33.15%显著低于正常组58.13%（P＜0.01）；畸形率显著高于正常对照组，分别为9.84%和2.11%（P ＜0.01）；（2）双酚A 灌洗组的受精率为43.28%，显著低于正常组78.13%（P ＜0.01），囊胚形成率为26.14%，略低于正常对照组30.11%，但差异无统计学意义（P>0.05）。

结论双酚A可致小鼠精子质量明显下降，受精和胚胎发育能力降低，是影响小鼠生育能力的重要的精源性因素。

标签：双酚A；体外受精；胚胎发育；畸形率双酚A（bisphenol A，BPA）化学名4-二羟基二苯基丙烷（C15H16O2），是苯酚和丙酮的重要衍生物，广泛应用于食品包装材料、牙科填充剂、婴儿用瓶等塑料行业，是人们在生产生活中不可避免接触到的一类环境雌激素，BPA可以各种环境介质为载体，通过呼吸、食物链等途径进入机体[1-2]，启动细胞内不同的信号传导途径，影响生精过程中正常的细胞凋亡过程，造成细胞过早、过多的凋亡，严重时引起成熟精子数目减少，精子畸形率增加[3]，甚至不育。

Martinez 等[4]早已经证实，BPA对大鼠和小鼠的发育毒性作用，对大鼠精子生成的影响亦有报道[5]，但对其对小鼠体外受精和胚胎发育的精源性系统研究未见报道，本研究拟对双酚A小鼠动物模型精子的发育情况、体外受精能力及胚胎发育进行系列跟踪研究，以探讨精源性双酚A对小鼠生育能力的影响。

1 材料与方法1.1 动物模型的建立1.2 实验方法1.2.1 精子的采集将BPA胃灌洗组和对照组颈推脱臼处死，剪取双侧附睾采用我们的专利产品“睾丸精子剥离器（专利号200920017966.0）”处理附睾和睾丸组织，获得精子，G-GAMETE培养液中上游30 min，收集后部分用于精子的质量分析，部分用于IVF授精。

体外受精对小鼠早期生长发育的影响及性成熟期血清生化指标的分析

公司『ＣＳＸＫ（）０３００】沪２０ — ０３。雌鼠腹Ｊ注射８Ｉｊ卒ＵＰＧ，４再次腹腔注射８ＩｈＧ，１～５ｈＭＳ８ｈ后ＵＣ３１后从小鼠输卵管膨人部收集朱卵母细胞。雄鼠，取附睾，剪卜睾尾，附显微镊将精子挤入平衡过的ＨＦ液滴中，＿７℃ 、５Ｏ！Ｔ置Ｊ３％Ｃ培养箱获能１５ｈ．。动物饲养。沾级环境，密度 ≤ ５只／，ｒ清盒温度２～４，相对湿度４％～００２℃ ０６％，喂以配方饲料，白由采食和饮水，白动光控（２ｈ明／２ｈ暗）１１。１２实验仪器和试剂．Ｓｅ２０ｔｍｉ００解剖显微镜（ｅｓｎ）ＭｉｏＧｌＺｉ公］：ｃａ— ｓｒａｙＣ培养箱：ＦｌｏｘＯ２ａｃｎ培养皿；大平：取液器；自制的吸卵针，Ｈｉｃｔｈ全白动生化分析仪（００型）ａ７２等。孕马血清（ＭＳ，．ＰＧ）人绒毛膜促性腺激素（ＣｈＧ）
Ａｔ０８２（）ｐ．０，８２２
＝＝：：＝：＝＝＝：＝：＝＝＝：＝＝：：：＝＝＝＝＝：＝＝＝＝＝：
体外受精对小鼠早期生长发育的影响及
性成熟期血清生化指标的分析
冯玉芳－陶凌云ｚ，，一邵伟娟高诚：，
【中图分类号】５３【Ｑ０８０ —１８０文１０ —４８２０）２０ —３１
哺乳动物的胚胎体外操作和培养实验证实，胚胎体外操作可以导致胎儿表观改变，如低出生重、巨人儿、胎稚异常及出生屙夕亡等 …。体外Ｅ受精技术作为人类不孕不育的辅助治疗方法，住人类生殖领域得剑越米越多的应川，由体外受精技术所但诞生婴儿的健康问题也引起越米越多人的关注【。＇】目ｉ前，小鼠的体外受精技术比较成熟ｓ１，冈此，小鼠模是研究受精生理的重要手段。为此，本实验运体外受精技术，实验小鼠的精子和卵子将往体外受精，体外培养至２细胞胚胎，转移至一止常假孕母鼠内，测定１胚胎重利２初生重，４ｄ１ｄ以及性成熟期小鼠的血清生化指标，以研究体外受精对甲期胚胎发育及性成熟的影响。．

序贯共培养体系对小鼠体外受精胚胎发育效果的影响

ｔｗｓｕｅｏｏｃｔｅｗｔｆｒｌｅｇｎｖｔ１１ｒｕｔｓｏｅｈｔＴａｉｅｔｆｅｔｉｔｎｔｍｗａｅｏＴ（ｅａｓｍｄｆｒ－ｕｕｉｅｔｉｄｅｇｉｉｏ．１ｓｓｈｗｄｔＨＦｈｄｈｇｒｒｅｏｆｉｚｉｏａｐｒｃｌｒｈｉｚｒｅｅｌａｈａｒｌａｏｓｄｔ６Ｐ＜００）ｓｉ．５，ｕｔ —
ＥｅｔｏＳｑｉｌＣ－ｕｔｒｙｔｍｌｔｅＤｅｅｐｎｎａｉＭｍｉｅＢｆｃｆｅ￣ｍｔｏｃｌｅＳｓａｕｅＯｌｈｖｌｍｅｔｄＱｕｌｙｏｏａｔｆｎＦｒｌｅｔ￣ｉＷＡＧ－ｌｔａ（ｎｍｌＳｉｅｈＣｌｇｆｏｔｅｔ＆ＦＵｉｒｉ，ａｇｎ，ｈａｘ１１０ＮＹｉｌｌＡｉａｃ．ｃｏｌｅｏｒｗｓＡｎｖｓｙＹｎｌｇＳａｎｉ２０）窖ｅＴｅＮｈｅｔｉ７ｉｉｏｎＶｔｒ
ａｄｅｄｍｅｒａｌｕｔｒｙｔｍ．ｔｅｏａ觚ｃｅｔｖｒｏｍｂｙБайду номын сангаас ｅｅｏｍｎｅａｄｔｎａｔｒ２ｃｌｓｇｎｎｏｔｌｃｌｃｕｅｓｓｅｌｅｓｌｈｙｂｔｃｎｈｉｎｌｏｅｃｍｅｅｒｏｄｖｌｐｅｔｒｔｒａｉｆｙｏｅ．ｅｌｔｅ．Ｍｏｅｅｒｏｅｓｑｅｔａａｒｍｙｓｉｔｅｕｎｉｌｂｎｈ
维普资讯
安徽农业科学。ｏｍａ０Ａｈｉ．Ｓｉ２Ｏ。（８：２４３ＪｕｌｆｎｕＡｃ．０７３１）５９—５１５４

LIF对小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精效果的影响

表３小鼠Ｇ期、ｂＶＰＩ期卵母细胞体外受精的观察
１３体外成熟．
将获得的ＣＣ和Ｄ分别在上述的培养液中洗２ＯＯ～３次，入预先平衡２ｈ的培养液中，于３ ℃ ，％Ｃ饱和移置７５Ｏ，湿度的Ｃ养箱培养，０培每隔１ｈ观察结果，以排出第一极
果提供参考依据。
２２不同浓度ＬＦ对卵母细胞体外成熟、外受精．Ｉ体
的影响
在培养液中添加ＬＦ可以促进小鼠卵母细胞的体外成Ｉ熟。但卵母细胞的成熟率并不是随ＬＦ浓度的升高而升高，Ｉ添加２ｇｍｌＬＦ能显著提高小鼠卵母细胞的体外成～６ｎ／的Ｉ熟率、外受精率，中添加６ｎ／的ＬＦ效果最好，并体其ｇｍｌＩ但不是添加越多效果越好，当达到或者超过８ｎ／时，鼠卵ｇｍｌ小母细胞的成熟率随ＬＦ浓度的升高反而有所下降。Ｉ
收集卵丘卵母细胞复合体（ＯＣ和有生发泡的裸卵（Ｏ）采Ｃ）Ｄ，卵过程控制在３ｎ之内。０ｍｉ１２培养液．ＤＭ培养液（糖）５ＭＥ低加％胎牛血清（州四季青公司杭产品）青霉素１Ｕ／ｌ链霉素１Ｕ／，ＦＨ１Ｕ／ｌ、０Ｉｍ、０ＩｍｌＳ０Ｉｍ（波第二激素厂产品）分别加入０２４６８１、０ｎ／ｌ宁、、、、、、０２ｇｍ的ＬＦｓｍ公司产品）自配改进的ＷｈｔｎｓＩ（ｇａｉ。ｉｅ ’ 受精液］ｔ。

影响冻融后小鼠精子受精能力的主要因素分析

繁殖生理与胚胎工程专栏·Special for Reproductive Physiology and Embryo Engineering 2019 年第 55 卷第 12 期
影响冻融后小鼠精子受精能力的主要因素分析
刘腾飞 1，章延嘉 1，蒋惠炎 2，马雪云 1* （1. 华东师范大学生命医学研究所，上海 201100；2. 华东师范大学计算机科学与软件工程学院，上海 201100）
移动角度（MAD）等参数进行测定，运用主成分分析法推测出对体外受精率影响较紧密的几个动力学因素。
结果显示：不同基因型小鼠冷冻精子复苏后参数各不相同，体外受精率不同。分析各精子参数与体外受精率
的相关性，VCL（P<0.05）、VAP（P<0.05）、VSL（P<0.05）和 ALH（P<0.05）是影响冻融后小鼠精子体
摘要：本文旨在探讨影响冻融后小鼠精子体外受精能力的主要动力学因素。实验复苏 2 种不同基因型的小鼠
冷冻精子进行体外受精，结合计算机辅助分析技术对精子的活率、活力率、密度、侧摆幅度（ALH）、直线
速率（VSL）、平均路径速度（VAP）、鞭打频率（BCF）、曲线速度（VCL）、前向性（STR）、线性度（LIN）、
其可以选择性表达于髓系细胞和神经细胞膜表面，而体内其他细胞则表达较少。对大量 SIRPA 结构缺失小鼠的研究显示，SPRIA 没有表现出明显的发育障碍或者生长迟缓现象，该基因可参与细胞生长的调节，但对于生物体内胚胎发育或是胚后发育并不起关键作用 [9]。 HTR6 是与精神分裂症、阿尔兹海默症有关，对该基因型小鼠模型的生殖无影响。根据对目前研究结果的追踪，均未发现以上 2 种基因型对小鼠生殖发育的影响。本研究选取 SIRPA 和 HTR6 2 种基因型小鼠的冷冻精子，运用计算机辅助分析技术（CASA）准确捕捉复苏精子头部运动图像，对精子动力学参数进行采集和分析，找出影响复苏精子受精能力的主要因素，进而达到对小鼠品系进行快速重建的目的。

解脲支原体不同生物群别对小鼠体外受精的影响

１。ＣＵｍｌ８型０Ｃ／
、
பைடு நூலகம்
ＵＵ浓度 ≤１Ｃ／时，０ＣＵｍｌ受精率、２评分、Ｄ４一细胞期胚胎形成率等胚胎发育指标与对照组比较差
异均无统计学意义（００）３ＵＰ＞．５；型Ｕ浓度 ≥１Ｃ／ｄ８Ｕ０ＣＵｎ、型Ｕ浓度 ≥１Ｃ／ｌ，０ＣＵｍ时受精率、２Ｄ评分、细胞期４一
ｅｃｏｐｆｒｉｉｏｆｒｌａｉｎｔｅｔｎ．ＩｈｏｔｌｒｕｎｔｅＣＳａｄｔｅｓｅｍｓｗｒｕｔｒｄｉｈｕａｈｇｕｏｖｔｅｔｉｔｒａｍｅｔｎｔｅｃｎｒｏｐ１ａｄ６，ｈＯＣｎｈｐｒｅｅｃｌｅｎｔｅｈ — ｒｎｒｉｚｏｏｇｕ
ｍｎｔｂｌｕｄ（Ｔ）ｍｄｉｏｔＵｎｔｅｔａｅｔｒｕ，，ｎ，ｈＯＳａｄｔｅｓｅｍｅｅｃｌｒａａｆｉＨＦｕｌｅｉｗｔｕＵ．Ｉｅｔｎｏｐ２３４ａｄ５ｔｅＣＣｎｐｒｓｗｒｕｔｅｉａｈｈｒｍｇｈｕｄｎ
ＡｂｔａｔＯｊｃｖ：ｏｏｓｒｅｔｅｉａｔｆｄｆｒｎｉａｓｏｒａｌｍｒａｔｕ（Ｕ）ｏｎｖｒｆｔｉｔｎｓｃｂｅｔｅＴｂｅｈｒｉｖｍｐｃｏｉｅｔｏｒｆｕｅｐａａｕｅｌｉｍＵｆｅｂｖｓｙｃｎｉｉｏｅｉｚｉｔｒｌａｏ（Ｖ）ｉｍｉｒｅｖｓｇｔｔｅａｏｅｉｅｅｔｏＵｉＦｔａｎ．ＭｔｏｓＴｅＵｒｔｅａｌｔＩＦｎｃｉｏｄｒｏｎｅｔａｔｇｎｃｆｃｆＩｅｔｔｅｈｄ：ｈＵｓｏｐｗｓｅｅｅｅｎｔｉｉｅｈｐｈｓＵｎＶｒｍｅｅｙ３ｓｃｄｔｒｐｅｅｔｉａＰｒｏｂｏｐ）ａｄｔｅＵｅｔｅｐｅｅｔｉａ２（９０ｂｔｐ）ｈｕｕｕｏｙｏｏｅｒｓｏｒｎｂｖ１（ａｉｙｅ，ｎＵｓｒｙｔｒｒｓｎｂｏｒＴ６ｉｙｅ．Ｔｅｃｍｌｏｃｔｃｎ－ｖｔｈｏｐ８ｏｅｖｏｓｅｐｅｅＣＣ）ｏｅｍｃｅｅｄｖｅａｄｍｙｉｏｔｅｃｎｏａｄｔａｅｔｒｕｓｈｏｓｐｒｓｗｒａｄｄｉｏｌｓ（ＯＳｆｈｉｅｗｒｉｉｄｒｎｏｌｎｏｔｌｎｅｔｎｏｐ．Ｔｅｍｕｅｓｅｍｅｅｄｅｔｘｔｄｔｈｒｒｍｇｎ

影响小鼠体外受精关键因素的研究

影响小鼠体外受精关键因素的研究作者：邱枫饶金鹏蔡益婷来源：《中外医学研究》2019年第32期【摘要】目的：探讨促排卵方案及小鼠体外受精环节中去除颗粒细胞、精液洗涤、精卵共孵育时间对昆明小鼠体外受精的影响，为人类辅助生殖技术提供理论基础，并为新开展的辅助生殖实验室建立质控提供更直接可靠的方法。

方法：（1）对昆明小鼠促排卵，促排药物孕马血清（PMSG）+绒毛膜促性腺激素（HCG）分为三个组合，分别为6 IU+6 IU，8 IU+8 IU，10 IU+10 IU，统计并比较三组获得的卵子数。

（2）分别用卵丘复合体和去除卵丘的卵母细胞与小鼠精子进行体外受精，比较两组受精率。

（3）用上游法和简单洗涤法处理小鼠精子，进行体外受精，比较两组受精率。

（4）精卵共孵育4 h和16 h，比较两组受精率。

结果：（1）促排药物PMSG+HCG为8 IU+8 IU时获得卵子数量显著高于其他两组（P<0.05）。

（2）卵丘复合体和去除卵丘的卵母细胞相比，受精率显著增高（P<0.05）。

（3）简单洗涤法洗涤精子后与卵子受精比上游法处理精子受精率高（P<0.05）。

（4）精卵共孵育4 h的受精率高于共孵育16 h受精率（P<0.05）。

结论：选择合适的促排卵药物组合PMSG 8 IU和 HCG 8 IU可以获得最多数量的卵子，减少小鼠资源的浪费，体外受精时去除卵丘复合体的卵丘细胞导致受精率显著下降，洗涤法处理精液较上游法明显提高受精率，短时受精能减少氧化应激对受精过程的影响，较隔夜受精受精率高。

【关键词】昆明小鼠促排卵體外受精doi：10.14033/ki.cfmr.2019.32.076 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）32-0-03[Abstract] Objective： To explore the effects of controlled ovarian hyperstimulation，granulosa cells removal， semen washing and the time of incubation for sperm and egg on the outcome in vitrofertilization of Kunming mice， provide theoretical basis for human assisted reproductive technology and provide a basis for the establishment of the new assisted reproductive laboratory. Method：（1） Different dosage of HMG and HCG were carried out to stimulate Kunming mice ovulation，doses were divided into three groups 6 IU+6 IU， 8 IU+8 IU， 10 IU+10 IU， then the quantity of oocyte in each group were compared to determine the best combination dose. （2） Oocyte-corona-cumulus complexes and M Ⅱ oocytes removed of cumulus cells were respectively used in vitro fertilization， then compared their fertility rates. （3） Mouse sperm were treated by upstream and washing methods， then compared their fertility rates. （4） The time of in vitro fertilization were respectively four hours and sixteen hours， then compared their fertility rates. Result：（1） The biggest amount and the best quality of oocytes when HMG and HCG were 8 IU+8 IU （P<0.05）. （2） The fertility rate of oocyte-corona-cumulus complex was higher than M Ⅱ oocytes removed of cumulus cells （P<0.05）. （3） The fertility rate of sperm treated by upstream was higher than washing methods （P<0.05）. （4） The fertility rate of incubation for four hours was higher than sixteen hours （P<0.05）.Conclusion： The most oocytes by selecting the appropriate combination of ovulation stimulating drugs （PMSG 8 IU+HCG 8 IU）， then the waste of resources in mice can be reduced. The removal of cumulus cells during in vitro fertilization can cause fertility rate significantly decreased， sperm treated by washing method upstream can develop the fertility rate than treated by upstream， short time fertilization can reduce the effects of oxidative stress on fertilization and the fertility rate is higher than overnight fertilization， so the appropriate fertilization methods and conditions should be chosen to improve the in vitro fertilization rate of mice.[Key word] Kunming mice Controlled ovarian hyperstimulation Vitro fertilizationFirst-author’s address： The Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine， Hangzhou 310052， China鼠胚实验（mouse embryo assay，MEA）是目前最常用于实验室培养液、耗材和设备质量控制的生物方法，适用于新建或新启动周期常规体外受精（IVF）实验室的质量控制[1]，帮助实验室人员熟练掌握胚胎操作技术，并为人类辅助生殖技术提供理论基础。

影响小鼠体外受精关键因素的研究

影响小鼠体外受精关键因素的研究引言体外受精技术是一种常见的生殖医学技术，通过这种技术可以在实验室中成功培育出胚胎，为生殖医学和动物模型研究提供了重要的工具。

在小鼠模型中，体外受精技术已经被广泛应用，但是受精成功率却并不稳定，这给小鼠体外受精研究和应用带来了挑战。

了解影响小鼠体外受精成功的关键因素是非常重要的。

本文将讨论一些影响小鼠体外受精关键因素的研究，包括体外受精培养条件、卵母细胞质量、精子质量和受精卵培育条件等方面的研究成果，以期为提高小鼠体外受精成功率提供理论基础和实验指导。

体外受精培养条件的研究体外受精的成功与否很大程度上取决于培养条件的优劣。

一些研究表明，培养基中人工合成的胺基酸和葡萄糖浓度对培养小鼠卵母细胞的成熟和受精有重要影响。

一些实验结果显示，低葡萄糖浓度会导致卵母细胞成熟过程中出现异常，从而影响其受精率。

培养基中的营养物质和生长因子也对小鼠体外受精过程有一定影响。

一些研究指出，添加一定浓度的胰岛素样生长因子可以提高小鼠体外受精成功率，并促进卵母细胞的正常发育。

除了培养基的成分外，培养条件的温度、湿度和氧气浓度也对小鼠体外受精的成功有重要影响。

一些研究发现，在体外受精的过程中，将培养环境保持在37摄氏度和5%二氧化碳浓度的条件下，可以提高卵母细胞受精率和胚胎发育质量。

体外受精培养条件的优化对小鼠体外受精的成功起着至关重要的作用，需要对培养基成分、培养条件的温湿度和氧气浓度等因素进行深入研究和优化，以提高小鼠体外受精成功率。

卵母细胞质量对体外受精的影响卵母细胞的质量也是影响小鼠体外受精成功的关键因素之一。

一些研究表明，卵母细胞在体外受精过程中的成熟和发育状态直接关系着受精率和后续胚胎的质量。

一些研究发现，年龄较大的母鼠产生的卵母细胞质量较差，受精率也相对较低，而年轻母鼠产生的卵母细胞质量较好，受精率相对较高。

一些研究还发现，卵母细胞的细胞质内含物如线粒体的数量和活性，以及细胞核内染色质的稳定性等对小鼠体外受精也有一定影响。

影响小鼠体外受精关键因素的研究

影响小鼠体外受精关键因素的研究小鼠体外受精（IVF）是一种重要的生物学研究方法，它在生殖医学和遗传学等领域得到广泛应用。

IVF技术的成功与否受多个因素的影响，本文将介绍影响小鼠体外受精的关键因素。

体外受精的成功与否与培养基的质量密切相关。

培养基是培养和发育胚胎所需的营养物质的来源，其质量直接决定了受精卵的存活和发育能力。

目前常用的培养基包括M16和KSOM等，它们均含有必要的氨基酸、糖类和无机盐等物质。

培养基中的生长因子、细胞因子和激素等对胚胎的发育也起到重要的调节作用。

小鼠体外受精的关键因素之一是受精卵的品质。

受精卵质量的好坏直接决定了其存活和发育的能力。

通常情况下，受精卵应具有适当的直径、光滑的外表和均匀的质地。

受精卵的形态结构和细胞内的核型也会影响其发育潜力。

在体外受精的过程中，要选择质量好的受精卵，以提高受精率和胚胎发育率。

影响小鼠体外受精的关键因素之一是体外受精操作的技术。

体外受精过程中的各个步骤，如卵巢超排、取卵、精子处理和受精等，都需要进行精细而熟练的操作。

特别是受精操作，需要在严格的无菌条件下进行，以保证受精卵的洁净度和受精率。

操作过程中要注意操作技巧和细节，确保操作的准确性和稳定性。

第四，环境因素也会对小鼠体外受精的结果产生一定影响。

温度、湿度和气体组成等环境因素的改变会影响培养基的pH值和渗透压等生理参数，从而影响受精卵的存活和发育能力。

在体外受精实验中，要控制环境因素的变化，从而保证实验的可重复性和结果的准确性。

影响小鼠体外受精的关键因素包括培养基的质量、受精卵的品质、体外受精操作的技术和环境因素等。

通过优化这些关键因素，可以提高小鼠体外受精的成功率和胚胎发育率，为相关研究提供更可靠的数据和结果。

影响小鼠体外受精关键因素的研究

影响小鼠体外受精关键因素的研究
小鼠体外受精（IVF）是一种常用的生殖技术，被广泛应用于研究遗传学、发育生物学和生殖毒性等领域。

影响小鼠体外受精的关键因素包括实验条件、培养基配方和操作技术等。

实验条件是影响小鼠体外受精的重要因素之一。

保持实验室温度、湿度和光照等环境因素的稳定性是确保实验成功的关键。

饲养小鼠的饮食、水质和饲养密度等也会对体外受精结果产生影响。

为了提高受精率和胚胎发育的成功率，需要优化实验条件。

培养基配方也是影响小鼠体外受精的关键因素之一。

培养基是体外受精过程中提供营养和环境支持的重要组成部分。

常用的培养基包括杂交培养基、全能性细胞培养基和胚胎培养基等。

这些培养基的配方不仅需要提供足够的营养物质，还需要满足胚胎的生长和发育需求。

添加适宜的气体环境（如CO2和O2）也是保证受精和胚胎发育成功的关键。

操作技术也会对小鼠体外受精的结果产生重要影响。

包括卵母细胞采集、精子处理、体外受精和胚胎培养等环节。

在卵母细胞采集过程中，需要控制采集时间和方法，避免对卵母细胞造成伤害。

在精子处理过程中，需要筛选活跃和健康的精子，并控制精子浓度。

体外受精的关键是控制受精时间和受精方式。

胚胎培养过程中，需要保持培养环境的稳定和标准化，以促进胚胎的正常发育。

影响小鼠体外受精的关键因素包括实验条件、培养基配方和操作技术等。

优化这些因素可以提高小鼠体外受精的成功率，并为相关研究提供可靠的实验基础。

影响小鼠体外受精关键因素的研究

影响小鼠体外受精关键因素的研究
小鼠体外受精（IVF）是一种重要的生殖技术，可以用来研究生殖生物学和生物医学领域的相关问题。

在小鼠体外受精胚胎植入到母体或者用来进行细胞实验研究中，都有广泛
的应用。

小鼠体外受精成功率的提高一直是一个备受关注的问题，因为这直接关系到相关
研究的有效性和可靠性。

对影响小鼠体外受精的关键因素进行研究具有重要的意义。

体外受精成功的关键因素包括卵子的质量、受精卵发育环境和受精卵植入过程。

在这
些关键因素中，卵子的质量是最基本的因素之一。

卵子的质量直接影响着受精卵的发育能
力和质量，决定了体外受精成功率的高低。

研究表明，小鼠卵子的质量受到多种因素的影响，包括遗传因素、环境因素和营养因素等。

通过研究这些影响因素，可以为提高小鼠体
外受精成功率提供理论基础和实践指导。

一、遗传因素
小鼠体外受精的早期发育过程受到基因的调控，因此遗传因素是影响小鼠体外受精的
重要因素之一。

研究发现，一些基因缺陷会导致小鼠卵子发育异常，进而影响体外受精的
成功率。

通过基因工程技术和遗传学方法，可以筛选和鉴定影响小鼠体外受精的关键基因，从而为提高小鼠体外受精成功率提供有效的遗传改良策略。

二、环境因素
三、营养因素
影响小鼠体外受精的关键因素包括遗传因素、环境因素和营养因素等。

通过研究这些
因素的作用机制和相互关系，可以为提高小鼠体外受精成功率提供有效的理论基础和技术
支持。

在今后的研究中，需要重点关注这些关键因素的调控策略，以期为小鼠体外受精技
术的应用和发展提供更多的支持和保障。

小鼠体外受精代孕鼠体重和饲料对其生产的影响

体外受精（In vitro fertilization ，IVF ）和胚胎移植是一项重要的辅助生殖技术。

生物净化是利用受精卵透明带的屏障作用，结合体外受精和胚胎移植技术，可以去除目的品系小鼠所感染的细菌、病毒、体内外寄生虫等病原体，将小鼠微生物等级提升至SPF 级及以上，并有效减少或阻止病原体通过一个活体小鼠传染给饲养在屏障设施内的其他小鼠［1，2］。

因此，科研人员坚持不懈研究可以提高体外受精率、胚胎发育率以及高产仔率的方法。

洪胜辉等［3］研究发现在小鼠体外受精液（HTF ）中添加GSH 1mmol/L 时，体外受精效果最好。

张景锋等［4］研究发现带颗粒的卵母细胞和不带颗粒的卵母细胞的最佳精卵孵育时间不同。

张长勇等［5］研究发现妊娠期母鼠添加营养补充剂能够增加仔鼠的体质量，利于仔鼠的生长发育。

也有研究表明母鼠年龄也会影响其妊娠结果和仔鼠行为学［6］。

但是对于胚胎移植时，代孕母鼠自身体重和营养状态对后续妊娠率和产仔率的影响却少有研究。

本研究通过比较在移植相同数量同等质量胚胎的情况下，不同体重范围代孕母鼠的妊娠率、产仔率的差异来探寻最佳状态的代孕母鼠；并比较移植后给孕鼠喂食不同饲料对其产崽造成的影响，以期为优化小鼠生物净化和扩繁提供理论依据。

1材料与方法1.1试验动物本研究所使用试验动物为6~10周SPF 级ICR雌性小鼠，体重分为22~27g 、28~33g 、34~39g 三组。

3~4周C57BL/6J 雌性小鼠和三月龄C57BL/6J 雄性小鼠。

以上小鼠均购于上海集萃药康生物有限公司。

动物饲养在华中科技大学同济医学院附属同济医院实验动物中心SPF 级屏障环境中，小鼠生长环境维持在温度23~26℃，湿度40%~70%，自动光控（白昼黑夜各12h ），小鼠自由饮食饮水。

小鼠在到达该中心后均喂养繁殖饲料，代孕ICR 母鼠在接受移植胚胎手术之后再进行分组饲养，一组进行繁殖饲料喂养，一组进行维持饲料喂养。

不同抗氧化剂对小鼠体外受精胚胎发育的影响的开题报告

不同抗氧化剂对小鼠体外受精胚胎发育的影响的开题报告
研究背景：
抗氧化剂是指能够减少或阻止氧化反应的化学物质。

氧化反应是指物质与氧气接触时发生的化学反应，可能导致细胞和组织的损伤。

由于氧气在代谢中起着至关重要的作用，因此氧化反应在正常代谢过程中是难以避免的。

然而，氧气的氧化作用也可能导致生物体遭受损伤，因此抗氧化剂在保护细胞和组织免受氧化性损害方面具有天然的优势。

受精胚胎是指人或动物体中受精卵发育成为胚胎的初期阶段。

体外受精技术已经广泛应用于医学临床和动物繁殖中。

然而，在体外受精和胚胎培养的过程中，可能会因为氧化反应的影响而导致受精胚胎的发育受阻。

因此，研究不同抗氧化剂对受精胚胎发育的影响具有重要意义。

研究问题：
不同抗氧化剂对小鼠体外受精胚胎发育的影响是什么？
研究方法：
- 采用小鼠体外受精模型来研究不同抗氧化剂对胚胎的发育影响。

- 实验分为三组。

每组均设有对照组和实验组。

- 分别加入不同抗氧化剂（如维生素C、维生素E、葡萄籽提取物等）到培养基中，观察其对受精胚胎的发育是否有影响。

- 通过观察胚胎的形态和数量，以及相关基因和蛋白的表达变化来评估各组的受精胚胎发育情况。

研究意义：
- 研究不同抗氧化剂对受精胚胎发育的影响，可为体外受精和胚胎培养技术的改进提供理论依据。

- 在医学临床和动物繁殖中，应用抗氧化剂可降低氧化反应对胚胎的影响，提高成功率，对促进人类和动物生殖健康具有一定的现实意义。

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作者简介：秀娟，（９）讲师，孙女１－，８０邮箱：ｕｘｕｕｎ６１３ＣＩｓｎｉｊａ６￣．Ｏ６Ｉｌ
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吴凌峰等（ｏ２５年）ｏ采用免疫组织化学方法观察Ｍｙｂ转录因
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的梳理总结。
白免疫组化染色积分光密度的下降，而无义ｔＯＮ由于与ａＤｓｔ
影响小鼠体外受精的因素虽然多，但是是总结起来可以分ｃｅｂ２因无互补序列，察到类似的作用。 — ｒＢ基未观这表明ｃｅｂ２ — ｒＢ为三个大的方面，即精子方面的因素、卵子方面的因素、培养液与受精关系密切，此作用是序列特异性和剂量依赖性的。
员膜，体反应所需蛋白正是在精子头部的喙部表达，且小鼠顶而
冻融精子的线粒体形态异常：肿胀，部分嵴缺失，由此说明冻融
精子线粒体的缺陷可能与精子受精能力和快速前进运动能力的子家族成员ｃｍｂ蛋自在小鼠精子和卵母细胞一卯丘复合物中丧失密切相关’、 —ｙ，鼠冻融精子受精能力低是由于冷冻和解冻过程Ｊ的分布。结果发现，— ｙｃｍｂ寡脱氧核苷酸能呈剂量依赖方式抑制中头部及尾部的损伤所引起的，造成了精子顶体的损伤及顶体小鼠体外受精率，表明ｃｍｂ与受精关系密切，作用是序列这 —ｙ此内容物的丢失，至于冻融精子不能发生顶体反应，法穿透卵以无特异性和剂量依赖性的。子透明带。因为线粒体的损伤，鼠的冻融精子也丧失了受精所小
到结果表明两只公鼠受精率差异有显著性。赵丹凤等（０６研２０年）究的认为对于体外受精率的结果是否受精子遗传背景的不同而
变化还需要进一步的验证。
１１１ —ｍｙ．．ｃｂ对小鼠ＩＶＦ的影响
ＮｓｉｎｉｚｏｈｏＨ等（０年）２４通过扫描电镜和透射电镜观察发现０精子冷冻后顶体出现畸变同时损伤也存在于精子头背部的前面
钟志胜（０２３年）道，０等报在实验中用免疫组织化学的方法发
段，小鼠体外受精己经是一项较为成熟的技术。但是，影响小鼠现在小鼠的精子上有Ｅｂ２的存在，— ｒＢＳＤｓ呈剂量ｒＢｃｅｂ２ＯＮ能Ａ
体外受精的因素很多，很复杂。文将这些因素予以进行系统依赖方式抑制小鼠体外受精率，同时伴有精子细胞上Ｅｂ也本并ｒＢ蛋
下降。
最近的一些研究结果表明，精子携带的遗传信息也会对小鼠ＩＦ和胚胎发育产生一定的影响。Ｎｋｇｔ２０）陆晔等Ｖａａａ（０年和ａ０
（０３的研究表明，２０年）不同遗传背景小鼠冻融精子的体外受精率
不同。陈２ｏ年）只公鼠的精子进行体外受精实验，ｉ￣Ｎ（５用两ｏ得
方面的因素。
１精子冷冻对小鼠ＩＦ的影响－２Ｖ徐平等（０年）验中还观察到，的复苏率与ＩＦ的受２４实０精子Ｖ精率无直接关系，冷冻方法Ｘｄ鼠精子受精能力的影响比精子的Ｃ，
ｌ精子因素
１１子遗传因素对小鼠Ｉ．精ＶＦ的影响
文献标识码：Ａ
文章编号：０１０６（）０５０８ — １０ — ７９２１ｏ — ０４３（（．
小鼠作为一种最常用的实验动物，仍然是人们研究中首选１１２Ｅｂ２对小鼠ＩＦ的影响．ｒＢ．Ｖ
的一种动物模型。小鼠体外受精技术是研究受精生理的重要手
活力更高，在史晓萍等（０年）究小鼠新鲜精子的受精率但是２６研０略高于冷冻复苏精子的受精率而陆哗等（ｏ年）２３研究对相同年ｏ龄５不同品系的小鼠进行精子冷冻实验，Ｆ精率较新鲜精个Ｉ受Ｖ子都有明显下降。总结起来说，鼠ＩＦ受精率较新鲜精子都有小Ｖ
８— ４ —
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孙秀娟１，２
（１东北农业大学动物科技学院，黑龙江哈尔滨１（３；黑龙江农垦科技职业学院，５００２）黑龙江哈尔滨１０３）５４１
中图分类号：８３￥１．３
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ＣｕｆＺｅｇ２０）５ｈｎｈｎ等（５牛疱疹病毒（ＨＶ１Ｐ２与截短的糖蛋ｕ０￣Ｂ～）２Ｖ
虽然人们对于使用ＤＡ疫苗的安全『Ｎ生存有疑虑，担心ＤＡＮ
白Ｄ－ｔ）￣Ｎ（Ｄ偶联构建ＤＡ疫苗，ｇＮ皮内注射免疫，４４ｈ２ — ８荧光可能会整合到宿主细胞的染色体上而造成插入突变，但众多研究法检测到Ｖ２Ｐ２在细胞高水平表达，后期检测特异性抗体ｌＧ与结果并未发现有插入突变的现象。质粒ＤＡ住动物体内会缓慢ｇＮ