蛋白质分离技术
蛋白质组学的分离技术
蛋白质组学的分离技术引言蛋白质组学是研究生物体内所有蛋白质的组成、结构、功能及其在生物体内相互作用等方面的学科。
蛋白质是生物体内最重要的功能性分子之一，它们在细胞的生命活动中起着重要的作用。
为了深入了解蛋白质的功能和相互作用，科学家们致力于开发各种分离技术，以便从复杂的生物样品中纯化和鉴定蛋白质。
本文将介绍蛋白质组学的分离技术及其在生命科学研究中的应用。
一、凝胶电泳凝胶电泳是最常用的蛋白质分离技术之一。
它通过将蛋白质溶液加载到聚丙烯酰胺凝胶或聚丙烯酰胺-琼脂糖凝胶中，利用电场将蛋白质分离成不同大小和电荷的带状条带。
这些条带可以通过染色或质谱分析来鉴定和定量。
凝胶电泳可以分为两种类型：聚丙烯酰胺凝胶电泳和聚丙烯酰胺-琼脂糖凝胶电泳。
前者适用于较小的蛋白质分析，后者适用于较大的蛋白质分析。
二、液相色谱液相色谱是一种高效的蛋白质分离技术，它基于蛋白质与固定相之间的相互作用来实现分离。
液相色谱可以根据不同的物理或化学性质将蛋白质分离成不同的组分。
常见的液相色谱技术包括离子交换色谱、逆流动相色谱和亲和色谱等。
离子交换色谱通过蛋白质与固定相之间的电荷相互作用来实现分离；逆流动相色谱则是根据蛋白质与固定相之间的亲疏水性质来实现分离；而亲和色谱则是根据蛋白质与固定相之间的特异性结合来实现分离。
三、质谱分析质谱分析是一种高分辨率的蛋白质分析技术。
它通过将蛋白质分子转化为离子，并通过质量-荷质比（m/z）来鉴定和定量。
质谱分析可以分为两种类型：质谱质谱和质谱光谱。
前者通过将蛋白质分子进行碎裂，然后分析产生的碎片离子来鉴定蛋白质；后者则是根据蛋白质分子的整体质谱图谱来鉴定蛋白质。
质谱分析在蛋白质组学研究中具有重要的地位，它可以用于鉴定蛋白质的序列、修饰和结构。
四、二维凝胶电泳二维凝胶电泳是一种将蛋白质分离成多个维度的分析技术。
它结合了凝胶电泳和液相色谱的优点，可以更好地分离和鉴定复杂的蛋白质混合物。
二维凝胶电泳的原理是将蛋白质首先通过等电点聚焦（IEF）分离成不同的电荷，然后通过SDS-PAGE进一步分离成不同的大小。
蛋白质的分离纯化
蛋白质的分离纯化蛋白质是生命体中最基本的分子之一，它在细胞内发挥着重要的功能。
由于蛋白质的复杂性和多样性，研究人员通常需要从复杂的混合物中分离和纯化蛋白质。
蛋白质的分离纯化是生物化学和生物技术领域中非常重要的一项工作，它为我们深入研究蛋白质的结构和功能提供了必要的条件。
蛋白质的分离纯化可以通过多种不同的方法实现，这些方法包括离心法、凝胶过滤法、电泳法、层析法等。
在选择合适的方法时，研究人员需要考虑到蛋白质的特性以及实验的要求。
离心法是最常用的分离方法之一，在离心过程中，通过调整离心力和离心时间，可以实现不同密度的蛋白质的分层。
这种方法适用于分离大分子量的蛋白质。
凝胶过滤法是利用孔径不同的凝胶将蛋白质分离开来。
通常使用的凝胶有琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶，这些凝胶具有不同的孔径，可以根据蛋白质的分子量选择合适的凝胶进行分离。
电泳法是基于蛋白质的电荷和分子量差异而进行分离的方法。
最常用的电泳方法是SDS-PAGE电泳，通过使用SDS（十二烷基硫酸钠）对蛋白质进行解性和蛋白质间的形成复合物，使得蛋白质在电泳过程中仅仅受到电场力的影响，从而实现蛋白质的分离。
层析法是一种利用物质在载体上的分配和吸附性质进行分离的方法。
常见的层析方法有凝胶层析、亲和层析、离子交换层析等。
凝胶层析是通过利用载体颗粒的孔径进行分离，亲和层析是将特定配体固定在载体上，与目标蛋白质结合，从而实现分离，而离子交换层析是利用载体表面电荷与目标蛋白质的电荷相互作用进行分离。
在进行蛋白质的分离纯化时，需要注意以下几个关键步骤。
首先是样品制备，通常样品要经过细胞破碎、蛋白质提取等步骤，使得目标蛋白质从复杂的混合物中提取出来。
其次是样品的处理，包括去除杂质、调整蛋白质的溶液环境等。
然后是选择合适的分离方法，根据蛋白质的特性和实验要求来确定最适合的方法。
最后是纯化过程中的监测和分析，通过使用各种蛋白质分析方法，如SDS-PAGE、Western blot等，来确定目标蛋白质的纯化程度和鉴定其存在。
蛋白质相分离
蛋白质相分离引言蛋白质相分离是一种重要的实验技术，用于分离和纯化蛋白质混合物中的不同成分。
本文将探讨蛋白质相分离的原理、方法和应用。
蛋白质相分离的原理蛋白质相分离的原理基于蛋白质在不同条件下的物化性质差异。
蛋白质的物化性质包括分子质量、溶解度、电荷、极性等。
在蛋白质相分离实验中，通过调节条件，如pH值、温度、离子浓度等，可以使目标蛋白质与其他成分分离，达到纯化的目的。
蛋白质相分离的方法1. 过滤法过滤法是蛋白质相分离中最常用的方法之一。
通过选择合适的孔径的滤膜，可以将不同分子质量的蛋白质分离。
较大分子质量的蛋白质无法通过滤膜，而较小分子质量的蛋白质则可以通过滤膜，从而实现分离。
2. 凝胶电泳凝胶电泳是一种基于蛋白质电荷和分子质量差异的相分离方法。
通常使用聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶作为分离介质。
在电场作用下，根据蛋白质电荷的不同，蛋白质会在凝胶上形成不同的带状区域，实现分离。
3. 离子交换层析离子交换层析是一种基于蛋白质电荷差异的相分离方法。
根据蛋白质的净电荷，在带有电荷的离子交换树脂上进行吸附和洗脱实现蛋白质分离。
4. 亲和层析亲和层析是一种基于蛋白质与亲和剂之间的特异性相互作用的相分离方法。
通过将亲和剂固定在固定相上，然后将蛋白质混合物通过，蛋白质与亲和剂结合，其它成分可被洗脱，实现蛋白质的纯化。
蛋白质相分离的应用1. 生物医学研究蛋白质相分离是生物医学研究中不可或缺的技术。
通过分离纯化蛋白质，可以研究蛋白质的结构、功能和相互作用。
同时，蛋白质相分离也有助于发现新的生物标志物，用于疾病的诊断和治疗。
2. 药物研发蛋白质相分离在药物研发中起着重要的作用。
药物研发过程中需要纯化目标蛋白质，以进行活性检测、结构研究等。
通过蛋白质相分离技术，可以有效地提高药物研发的效率和成功率。
3. 食品工业蛋白质相分离也在食品工业中得到广泛应用。
通过蛋白质相分离技术，可以从原料中纯化蛋白质，用于食品的功能性增强和改良。
蛋白质分离
蛋白质分离蛋白质是生物体内最重要的分子之一，它们参与了生命体系的几乎所有生物过程，是维持和发挥细胞功能的必需组成部分。
高纯度蛋白质是进行蛋白质学研究的关键，因此开发高效的蛋白质分离技术具有重要的实际应用价值和科学意义。
蛋白质分离的原理蛋白质分离的原理基于蛋白质在不同条件下的物化性质的不同。
蛋白质分离是一个多步骤的过程，通常包括以下步骤：1. 细胞裂解和分离为了提取蛋白质，需要首先将细胞裂解并将其分离出来。
这可以通过机械打碎、超声波处理或化学破碎等方法实现。
2. 初步分离初步分离步骤通过利用蛋白质的溶解度、电荷、大小和亲和力等特性将混合蛋白质分开。
通常采用的方法有盐析、凝胶过滤、离子交换层析、透析、电泳等。
3. 高效分离高效分离步骤的目的是获得高纯度的目标蛋白质。
在高效分离中，采用的方法通常是亲和层析、大小排除层析、逆向相色谱等。
蛋白质分离技术的应用蛋白质分离技术已广泛应用于生物制药、生物技术和基因工程等领域。
以下列举几个典型应用：1. 制药蛋白质制药是现代医药领域的一个重要分支。
分离高纯度的蛋白质是制药的关键步骤之一。
通过蛋白质分离技术，可以制备出多种生物制剂、酶、抗体、疫苗和生长因子等药物。
2. 生物技术在生物技术领域，蛋白质分离技术也被广泛应用。
例如，可以利用亲和层析技术分离出纯化后的酶，然后将这些酶用于生物反应器中，提高酶的活性和稳定性。
3. 基因工程蛋白质分离技术在基因工程领域也得到了应用。
例如，在蛋白质工程中可以通过蛋白质分离技术获得高纯度的蛋白质，并将其用于合成和设计具有特定功能的蛋白质。
蛋白质分离技术的发展蛋白质分离技术在最近几十年里得到了长足的发展。
随着技术的进步和不断的创新，现代蛋白质分离技术已从最初的手工制备逐渐过渡到高通量、自动化的生物技术工具。
下面列举几个发展趋势：1. 集成化目前，人们已经开始将分离技术和其他技术集成为一个平台。
这种集成化的分离技术可以更加高效地从复杂混合物中分离出蛋白质。
蛋白质的分离和纯化技术
蛋白质的分离和纯化技术蛋白质是生命活动的重要组成部分，广泛存在于个体组织中，参与细胞各方面生理过程。
蛋白质的研究对于生命科学领域的发展有着极为重要的作用。
然而，对于蛋白质的分离与纯化技术，科学家们远非游刃有余。
因此，本文将深入探究蛋白质的分离与纯化技术。
一、蛋白质的分离技术蛋白质的分离技术是指将蛋白质分离出不同的组成分。
这一技术对于深入理解蛋白质的结构与性质具有至关重要的意义。
在蛋白质的分离技术中，一般采用以下几种方法。
1. 色谱法色谱法是一种常用的蛋白质分离技术。
该技术利用分子在色谱柱内路程的长短及其与固定相的亲疏性不同进行分离。
色谱法的种类繁多，包括离子交换色谱、凝胶过滤色谱、逆相色谱等等。
其中，离子交换色谱是一种常用的技术，其原理是利用带电离子在固定相和流动相之间的移动，实现蛋白质分离。
2. 应用电泳法电泳法是一种通过电场力使带电分子（如蛋白质等）在凝胶或液体中运动的技术。
电泳法分为水平电泳和竖直电泳两种。
其中，竖直电泳依托了载体凝胶或聚丙烯酰胺凝胶，通过蛋白质在其上的移动距离从而进行分离。
而水平电泳利用了专门的电泳分离仪器，将蛋白质定向在凝胶内运动，从而完成分离。
3. 超高速离心法超高速离心法是一种通过在高速旋转离心管内快速离心并重复洗涤，分离出不同种类的蛋白质的技术。
其原理是根据分子量大小、形状及密度的不同，将蛋白质分离开来。
超高速离心法的优点在于适用范围广、精度高。
二、蛋白质纯化技术蛋白质纯化技术是指将带有杂质的蛋白质组分经过一系列处理后，得到较为单一、纯度高的蛋白质的技术。
蛋白质纯化技术对于蛋白质结构及性质的研究极为重要。
在蛋白质的纯化技术中，一般采用以下几种方法。
1. 电吸附法电吸附法是一种利用电动势引起蛋白质在吸附固定相上的吸附性分离方法。
其基本原理是电动势过程将分子有序地排列在吸附剂上，从而实现蛋白质的吸附。
该方法适用于小分子量蛋白，具有纯化速度快，操作简便等特点。
2. 亲和层析亲和层析是官能团彼此配对的分子间吸引力引导下发生的某种物质在吸附剂上选择性吸附的分离方法，分离了同种蛋白彼此间在电性等方面的异质。
蛋白质分离纯化技术
蛋白质分离纯化技术
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目录
CONTENTS
1
蛋白质鉴定
2
蛋白质分离纯化技术
蛋白质分离纯化技 术是生物化学研究 的重要手段，下面 是蛋白质分离纯化 的一些基本技术和
方法
样品准备
样品准备
1.1 细胞破碎
细胞破碎是蛋白质提取的第一步，常见的细胞破 碎方法有物理法、化学法和生物酶学法
蛋白质分离纯化
2.2 根据电荷分离纯化
2.2.1 电泳 电泳是在电场作用下，带电粒子在介质中移动的现象。根据带电粒子在电场中 的移动速度不同，可以将不同电荷的蛋白质分离开来 2.2.2 等电聚焦电泳
等电聚焦电泳是将pH梯度与电泳相结合的技术，可以分离等电点不同的蛋白质
2.2.3 离子交换色谱 离子交换色谱是一种利用离子交换剂将带电粒子 从溶液中分离出来的技术，根据离子交换剂的电 荷性质不同，可以选择性吸附不同电荷的蛋白质
蛋白质分离纯化
2.4 根据生物学活性分离纯化
2.4.1 免疫吸附纯化
免疫吸附纯化是一种利用抗原-抗体之间的特异性结合进行蛋白质纯化的技术。在 免疫吸附纯化中，将特异性抗体包被在固相载体上，再将待纯化的蛋白质溶液通 过该柱子，抗原-抗体复合物会吸附在柱子上，而其他杂质则会被洗脱下来。最后 通过改变柱子的条件，使抗原-抗体复合物解离下来，得到纯化的蛋白质
蛋白质分离纯化
蛋白质分离纯化
2.1 根据分子量分离纯化
2.1.1 透析 透析是一种将溶液中的小分子物质与大分子物质分离开来的方法，主要用于去 除蛋白质中的小分子杂质 2.1.2 凝胶过滤 凝胶过滤是一种根据蛋白质分子大小不同进行分离的技术，大分子不能进入凝 胶内部的通道，而小分子则可以进入 2.1.3 超滤 超滤是一种膜过滤技术，通过不同孔径的超滤膜 ，将分子量不同的蛋白质分离
蛋白质分离和纯化的方法和技术
蛋白质分离和纯化的方法和技术蛋白质是生命体中极其重要的一种物质，它是细胞的基本组成单位，参与了多种生物学过程。
研究蛋白质在细胞中的功能与结构，需要对蛋白质进行高效、可靠的分离和纯化。
本文将介绍常用的蛋白质分离和纯化的方法和技术。
一、离子交换层析离子交换层析是分离蛋白质最常用、最成熟的方法之一。
其原理是利用蛋白质的电荷性质与离子交换树脂的对应性质，进行蛋白质的分离。
离子交换树脂可分为正离子交换树脂和负离子交换树脂两种类型。
正离子交换树脂的功能基团有负电荷，故可吸附具有正电荷的物质，例如氨基酸、多肽或蛋白质N端等；负离子交换树脂的功能基团有正电荷，故可吸附具有负电荷的物质，例如天冬氨酸、谷氨酸、磷酸基或蛋白质C端等。
根据目标蛋白质的电荷性质，选择合适的离子交换树脂进行分离。
离子交换层析速度较快，可分离多种电荷性质的蛋白质，但对样品的盐浓度要求较高，易受pH和盐浓度的影响，操作时需谨慎。
二、凝胶过滤层析凝胶过滤层析是利用孔径大小对蛋白质进行分离的方法。
凝胶过滤层析常用的凝胶有玻璃纤维、纤维素等。
玻璃纤维凝胶一般有不同的颗粒大小，大的颗粒孔径大，小的颗粒孔径小。
蛋白质分子较小，可通过大孔径的颗粒进入凝胶孔隙，而较大的物质被挡在颗粒外部无法穿过凝胶。
因此，蛋白质经过凝胶时易出现分子量排阻效应，使得小分子在大分子之前流出，从而实现了蛋白质的分离。
凝胶过滤层析操作简单，无需特殊设备或条件，但分离程度相对较低，不适宜纯化目标蛋白质。
三、亲和层析亲和层析是利用蛋白质与亲和柱中特定配体发生特异性结合，从而对蛋白质进行分离的方法。
亲和层析适用于具有特定结构、功能或序列的蛋白质，例如抗体、标签化蛋白、细胞受体等。
常见的亲和柱配体有融合蛋白、金属离子、细胞色素C等。
蛋白质样品在亲和柱上进行结合，待不结合蛋白质被洗脱后对结合蛋白质进行洗脱。
亲和层析具有选择性强、纯化程度高等优点，但亲和柱的制备成本较高，操作上也需注意其特异性。
【生物化学】第八章 蛋白质的分离纯化
㈤、凝胶过滤层析技术
⒈ 基原理
概念（排阻层析，分子筛层析）： 当生物大分子通过装有凝胶颗粒 的层析柱时，根据它们分子大小 不同而进行分离的技术。 原理：凝胶颗粒内部具有多孔网 状结构，被分离的混合物流过层 析柱时，比凝胶孔径大的分子不 能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之 间的空隙向下移动，并最先被洗 脱出来； 比网孔小的分子能不同程度的自 由出入凝胶孔内外，在柱内经过 的路程较长移动速度较慢，最后 被洗脱出来。
⒊ 分配纸层析
纤维素吸附的水是固定相，展层用的有 机溶剂是流动相
层析时混合氨基酸在这两相中不断分配， 使他们分布在滤纸的不同位置上。
此项技术可用于氨基酸成分的定量定性 测定。
⒊ 分配纸层析
操作：点样→展层→显 色用茚三酮显色时，得到 一个滤纸层析谱。 定义：原点到氨基酸停 留点的距离与原点至溶剂 前沿之比称为Rf值。 只要把溶剂系统、温度、 滤纸型号等条件确定，则 每一种氨基酸的Rf值是一 个确定值。
⒊ 分析型超速离心机
XL-A分析型超速离 心机 主要技术指标： 检测波长范围 200nm800nm 转子最大转速 40000RPM
什么是酶的活性中心？ 三维结构上比较接近的少数特异的氨基酸残基参与底物的 结合与催化作用，这一与酶活力直接相关的区域称酶的活 性部位。 在很多酶的活性中心均有His残基参与，原因是什么? 酶蛋白分子中组氨酸侧链咪唑基pK值为6.0-7.0，在生理条 件下，一半解离，一半不解离，因此既可以做质子供体，也 可以做质子受体，可以作为广义酸碱共同催化反应。 胰凝乳蛋白酶活性中心的催化三联体是指哪三种氨基酸？
⑵ 按两相所处的状态分类 流动相有两种状态：
*液体作为流动相 *气体作为流动相 固定相也有两种状态： *固体吸附剂作为固定相 *以吸附在固体上的液体作为固定相
蛋白质组学的分离技术
蛋白质组学的分离技术引言：蛋白质是生物体内最重要的分子之一，它们在细胞内发挥着各种生物学功能。
为了研究蛋白质的功能和相互作用，科学家们开发了各种蛋白质组学的分离技术。
这些技术可以将复杂的混合物中的蛋白质分离出来，并进行进一步的研究和分析。
本文将介绍几种常用的蛋白质组学分离技术。
一、凝胶电泳凝胶电泳是最常用的蛋白质分离技术之一。
它利用凝胶的孔隙性质将蛋白质按照分子大小分离开来。
其中，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是最常用的凝胶电泳技术之一。
在SDS-PAGE中，蛋白质首先被处理成带有负电荷的复合物，然后通过电场在凝胶中迁移。
根据蛋白质的分子大小，蛋白质会在凝胶中形成一系列的带状条带，这样就可以将蛋白质按照分子大小进行分离。
二、液相色谱液相色谱也是一种常用的蛋白质分离技术。
它利用各种填料对蛋白质进行分离。
其中，凝胶过滤色谱是常用的液相色谱技术之一。
在凝胶过滤色谱中，蛋白质溶液通过填料时，蛋白质按照分子大小进行筛选，较大分子的蛋白质无法通过填料，而较小分子的蛋白质可以通过填料，从而实现了蛋白质的分离。
三、亲和层析亲和层析是一种利用亲和性分离蛋白质的技术。
它利用特定的亲和剂与目标蛋白质之间的相互作用，将目标蛋白质从混合物中分离出来。
例如，可以利用亲和层析柱中的亲和剂与目标蛋白质之间的特异结合，将目标蛋白质保留在柱中，而其他非特异结合的蛋白质则被洗脱出来，从而实现了目标蛋白质的分离。
四、二维凝胶电泳二维凝胶电泳是一种结合了凝胶电泳和液相色谱的高级分离技术。
它可以将蛋白质按照分子大小和等电点进行分离。
首先，蛋白质经过等电聚焦分离，根据蛋白质的等电点将其分离成水平方向的斑点。
然后，将凝胶垂直方向旋转90度，进行SDS-PAGE分离，根据蛋白质的分子大小将其分离成垂直方向的斑点。
通过这两次分离，可以得到一个蛋白质斑点图谱，方便进一步的蛋白质分析和鉴定。
结论：蛋白质组学的分离技术是研究蛋白质功能和相互作用的重要工具。
蛋白质分离技术(全)
1) 盐浓度（即离子强度）：
• 离子强度对生物大分子的溶解度有极大的影响，绝大多数蛋白质和酶， 在低离子强度的溶液中都有较大的溶解度，如在纯水中加入少量中性 盐，蛋白质的溶解度比在纯水时大大增加，称为“盐溶”现象。盐溶 现象的产生主要是少量离子的活动，减少了偶极分子之间极性基团的 静电吸引力，增加了溶质和溶剂分子间相互作用力的结果。 • 为了提高提取效率，有时需要降低或提高溶剂的极性。向水溶液中加 入蔗糖或甘油可使其极性降低，增加离子强度（如加入KCl、NaCl、 NH4Cl或(NH4)2SO4）可以增加溶液的极性。
• 1） 先分离膜，然后提取；如选用冷热交替法、 反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶 法和酶处理法使得细胞破碎，然后通过剃度离 心得到含有膜蛋白的粗组分。
• 2 ）用特殊的去污剂选择性的分离。在多数情 况下，都是采用去垢剂将疏水蛋白从其膜结构 中溶解下来。
三、分离与纯化
• 从细胞中提取得到的生物大分子往往是不纯 净的，含有大量杂质，必须进一步分离纯化， 这一阶段可分为粗分级分离和细分级分离两 步进行。
（一）材料的选择与预处理
• 选择材料主要根据实验目的而定。工业生产上注意选择含 量高、来源丰富、易获得、制备工艺简单、成本低的动植 物组织或微生物做原料。科研选材则无需考虑上述问题， 只要能达到实验目的即可。
• 实验材料选定后，常常需要进行预处理，如动物材料需要 除去一些与实验无关的结缔组织、脂肪组织；植物种子需 要除壳；微生物需要将菌体与发酵液分开。另外，必须尽 可能保持材料的新鲜，尽快加工处理。若不立即进行实验 或加工，应冷冻保存。
2.物理法： • 1) 反复冻融法：将待破碎的细胞冷至－15℃到－20℃，然后 放于室温 ( 或40 ℃)迅速融化，如此反复冻融多次，由于细胞 内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。 • 2) 超声波处理法：此法是借助超声波的振动力破碎细胞壁和 细胞器。破碎微生物细菌和酵母菌时，时间要长一些。 • 3) 压榨法：这是一种温和的、彻底破碎细胞的方法 。在 1000×105Pa～2000×105Pa 的高压下使细胞悬液通过一个小 孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。
蛋白质的分离、纯化
胰岛素的分离纯化
胰岛素是一种由胰腺分泌的激素， 具有降低血糖的作用。胰岛素的 分离纯化通常采用离子交换色谱
和结晶法。
胰岛素的分离纯化对于治疗糖尿 病具有重要意义。纯化的胰岛素 可以用于注射，帮助糖尿病患者
控制血糖水平。
在胰岛素的分离纯化过程中，需 要特别注意避免蛋白质的聚集和 变性，以确保产品的安全性和有
利用半透膜，根据不同物质之间的分 子大小和形状差异进行分离。
色谱分离
利用不同物质在固定相和流动相之间 的吸附、分配等作用力差异进行分离。
蛋白质的纯度鉴定
化学分析
电泳分析
利用蛋白质中的特定化学基团进行定量分 析，如测定氨基酸组成和序列、测定肽键 等。
利用不同蛋白质在电场中的迁移率差异进 行分离，再通过染色或放射自显影等技术 进行检测。
有机溶剂沉淀法
利用有机溶剂降低水的介电常数，使 蛋白质发生沉淀。常用的有机溶剂有 乙醇、丙酮等。
离心法
高速离心法
利用高速旋转产生的离心力使溶液中 的悬浮颗粒沉降，从而实现蛋白质的 分离。
超速离心法
在高速离心的基础上，利用密度梯度 离心技术，将不同密度的蛋白质进行 分离。
膜分离法
微滤
利用微孔滤膜，将溶液中的悬浮颗粒和微生物截留，从而实现蛋白质的分离。
蛋白质在水中的溶解度 受pH、离子强度、温度 等因素影响。不同蛋白 质具有不同的溶解度。
蛋白质的分离纯化方法
沉淀法
利用蛋白质的溶解度差异，通过改变 某些条件（如pH、离子强度、温度 等）使蛋白质沉淀析出。
离心分离
利用离心机的高速旋转产生的离心力， 根据不同物质之间的密度和沉降系数 差异进行分离。
膜分离
血红蛋白的分离纯化通常采用色谱技术，如凝胶过滤色谱和离子交换色谱。这些技术可以根据蛋白质 的大小、电荷和疏水性等性质进行分离。
蛋白质分离技术
双向凝胶电泳two-dimensional
electrophoresis，2-DE)：利用蛋白质的等电 点和分子量，结合凝胶化学特性，分离各种蛋 白质的方法。 基本原理：第一向在高压电场下对蛋白质进行 等电聚焦(IEF), 再在第一向垂直方向上进行第 二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。
Ettan DALT预制胶
凝胶灌制在塑料支持膜上。凝胶的确切大小为 255×196×1 mm。凝胶为均一浓度12.5%聚丙烯酰胺凝 胶，由甲叉双丙烯酰胺交联。它在Ettan DALTtwelve系 统中与Ettan DALT缓冲液试剂盒一起配套使用。
Hoefer SE600或Ruby ( 标准垂直电泳)，14（或 16）×15cm凝胶 选择因素 电泳时间2—5小时。 中等分离的效果（凝胶长 16cm）。 中等通量（最多可运行4 块胶）。 用13cm的IPG胶条进行 电泳效果最好。
Ettan DALTsix大型垂直电泳系统 ，26×20cm 凝胶 高分辨率（凝胶大小26×20 cm） 高上样量 高通量(DALTtwelve同时运行12块 胶, DALTsix同时运行6块胶) 最适合18cm和24cm IPG 胶条 缓冲液用量低： 12块胶只需10L, 6块胶只需5L
合成载体两性电解质
1975年，O’Farrell首次发表了分离大肠杆菌的
双向电泳优化方法，并成功地分离约1000个 E.coli蛋白。 利用了合成载体两性电解质（SCA）来生成PH梯 度 是混合的复合物，合成过程复杂，重复性小。 SCA的pH梯度不稳定且分子小易漂移，难以固定 在IEF胶内，由于水引起的电渗流导致阴极漂移现 象，大于7的蛋白丢失很多
非平衡pH梯度电泳
分离提纯蛋白质的方法
分离提纯蛋白质的方法
分离和提纯蛋白质是生物学和生物化学研究中常见的技术方法，其目的是获得纯度高、结构完整的蛋白质样品，以便进行结构和功能研究。
下面介绍几种常见的蛋白质分离和纯化方法：
1. 离心分离法：利用离心力将不同密度的蛋白质分离开来。
该方法适用于分离不同分子量的蛋白质。
2. 溶液层析法：利用化学亲和性或物理特性将蛋白质分离开来。
常见的溶液层析法有离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等。
3. 电泳法：将蛋白质样品置于电场中，根据蛋白质的电荷、分子量或等电点等特性，将蛋白质分离开来。
4. 超滤法：利用超滤膜的筛选作用将不同分子量的蛋白质分离开来。
该方法适用于提纯分子量较小的蛋白质。
5. 氯仿法：利用氯仿的亲油性和蛋白质的亲水性差异，将蛋白质从混合物中提取出来。
6. 水相萃取法：利用蛋白质在水相和有机相中亲和性不同，将蛋白质从混合物中萃取出来。
以上是常见的蛋白质分离和提纯方法，不同的方法适用于不同种类和不同性质的蛋白质。
在实际操作中，需要根据样品的特点选择合适的方法进行分离和提纯。
- 1 -。
蛋白质分离技术(全)
聚合物沉淀法
03
利用聚合物如聚乙二醇、聚丙三醇等与蛋白质结合形成沉淀。
离心分离法
高速离心
利用高速旋转产生的离心力使溶液中 的悬浮颗粒沉降，从而实现分离。
超速离心
利用超速离心机的高速旋转产生的强 大离心力，使亚细胞器和蛋白质等组
分分离。
密度梯度离心
在离心管中加入密度梯度介质，使不 同密度的组分在离心过程中形成不同
高效回收
在蛋白质分离过程中，保持蛋白质的活性和稳定性，实现高效回收也 是一大挑战。
蛋白质分离技术的展望
新型分离介质
开发新型的分离介质是蛋白质分离技术的重要发展方向，有望提高分离效率和特异性。
集成化与自动化
实现蛋白质分离技术的集成化和自动化，能够提高分离效率和降低成本，是未来的发展 趋势。
蛋白质组学技术
03
环境影响评价的应 用
蛋白质分离技术用于环境影响评 价，如对工业废水、废气排放的 监测等。
05
蛋白质分离技术的挑战 与展望
蛋白质分离技术的挑战
高分辨率分离
蛋白质具有复杂的结构和性质，实现高分辨率分离是蛋白质分离技 术的关键挑战之一。
特异性分离
由于蛋白质的多样性和相似性，实现特异性分离是另一个挑战，需 要开发更高效的分离方法。
蛋白质分离技术的历史与发展
01
蛋白质分离技术的发展可以追溯到19世纪末期，当时科学家开始使用沉淀法和 过滤法来分离蛋白质。
02
20世纪中期，随着电泳技术的出现，蛋白质分离技术得到了极大的发展。电泳 技术可以按照蛋白质的电荷和分子量大小进行分离，具有高分辨率和高灵敏度 等优点。
03
近年来，随着蛋白质组学研究的深入，蛋白质分离技术也在不断发展。新型的 蛋白质分离技术如色谱技术、质谱技术、纳米技术等不断涌现，为蛋白质分离 提供了更多的选择和手段。
蛋白质分离技术(全)
（二）分离纯化的要求
1、纯度：主要取决于研究的目的和应用上的要求。如作 为研究一级结构、空间结构，一级结构与功能的关系 的蛋白质制剂、工具酶和标准蛋白、酶法分析的酶制 剂，都要求均一；工业、医药方面应用的酶和蛋白质 制剂，达到一定纯度即可，不要求均一。
2、活性：要求大分子保持天然构象状态，有高度的生物 活性。
吸附层析
亲和层析、金属 螯合层析
（一）粗分级分离
▪ 主要是利用盐析法、等电点沉淀、有机溶剂 沉淀等方法，使目的蛋白与其它较大量的杂 蛋白分开。
▪ 优点：简便、处理量大、既能除去大量杂质， 又能浓缩蛋白质。
▪ 缺点：分辨率低，产品杂质多。
1. 盐析（中性盐沉淀）
• 在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过 程称为“盐析”。除了蛋白质和酶以外，多肽、 多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。
+
+
++ +
带正电荷蛋白质 （疏水胶体）
阴离子
阳离子
不稳定蛋白颗粒
带负电荷蛋白质 （疏水胶体）
蛋白质聚集沉淀
⑵ 中性盐的选择
• 常用的中性盐中最重要的是(NH4)2SO4，因 为它与其他常用盐类相比有十分突出的优点 ：
• 1) 溶解度大：尤其是在低温时仍有相当高 的溶解度，这是其他盐类所不具备的。由于 酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定，因而 盐析操作也要求在低温下（0～4℃）进行。 由下表可以看到， 硫铵在0℃时的溶解度， 远远高于其它盐类：
3、收率：希望收率越高越好，但在分离纯化过程中总有 不少损失。而且提纯步骤越多，损失越大。
（三）分离纯化的一般程序
▪ 生物大分子的分离纯化一般可分为 以下几个阶段： ①材料的选择和预处理 ②破碎细胞及提取（有时还需要进 行细胞器的分离） ③分离纯化：包括粗分级分离和细 分级分离
蛋白质的分离纯化技术
蛋白质的分离纯化技术1、根据蛋白质带电性质不同的分离技术1.1离子交换层析以离子交换剂作为柱填充物，在中性条件下，根据由于蛋白质和多肽的带电性不同而引起的离子交换亲和力的不同而得到分离。
其可分为阳离子柱和阴离子柱两大类, 还有一些新型树脂，如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶琼脂糖凝胶树脂等。
离子交换剂有阳离子交换剂和阴离子交换剂。
当被分离的蛋白质溶液流经离子交换层析柱时，带有与离子交换剂可交换基团相同电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，带同种净电荷越多，吸附力越强。
随后用改变pH或离子强度的办法将吸附的蛋白质按吸附能力从小到大的顺序先后洗脱下来。
1.2电泳法电泳为带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。
蛋白质混合样品经过电泳后，被分离的各蛋白质组分的电泳迁移率互不相同，由各蛋白质组分所带的静电荷以及分子大小和形状的不同而达到分离。
现在常用的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），可以因不同蛋白质所带电荷的差异和大小差异高分辨率地分离或分析蛋白质。
在PAGE系统中加入十二烷基磺酸钠（SDS）,可以消除蛋白质所带电荷的差异，构成的SDS-PAGE系统是测定蛋白质的相对分子质量最常用的方法。
2、根据蛋白质溶解度不同的分离技术2.1蛋白质的盐析蛋白质在低盐浓度下的溶解度随着盐溶液浓度升高而增加，此称盐溶；当盐浓度不断上升时，蛋白质的溶解度又以不同程度下降并先后析出，此称盐析，从而达到分离纯化的效果。
2.2有机溶剂沉淀法有机溶剂能降低溶液的介电常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低；另有机溶剂与水的作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中便沉淀析出。
近年来的研究认为，有机溶剂可能破坏某种键如氢键，使空间结构发生变化，致使一些原来包在内部的疏水集团暴露于表面并与有机溶剂的疏水基团结合形成疏水层，从而使蛋白质沉淀。
利用不同蛋白质在不同浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法即为有机溶剂沉淀法。
蛋白的分离纯化详细讲解
变性和复性
• 原理：蛋白质在一定的理化条件下失 去原有的空间结构、生物学功能及部 分理化特性等称为变性.当变性条件去 除后恢复原有的空间结构及生物学功 能即为复性.
• 方法：尿素变性复性从包涵体中纯化 原核表达蛋白
二、蛋白质的分离纯化
分离纯化流程
原材料的获取
预处理 （沉淀）
纯化
细胞破碎
研磨 超声 渗透压 酶 ……
• 将上述作用体系的一方连接到层析基质上,使之 固定化,就有可能分离纯化专一作用tag <6-8 Histidine>镍离子-6
个组蛋白 T7-tag <MASMTGGQQMG> HSV-tag <QPELAPEDPED> S-tag <KETAAKFERQHMDS> VSV-G-tag <TTDIEMNRLGK> HA-tag <YPYDVPDYA>
一、蛋白质的分离纯化概述
与蛋白质分离纯化相关的理化特
• 分子大小
性
• 分子形状
哪些技术、原理
• 带电特性
• 溶解特性
• 与配体特异性结合不同
• 吸附性质
• 变性和复性
分子大小 重点
• 大小：蛋白质的分子大小主要取决于蛋白 质肽链的数目及每条肽链的氨基酸残基数 目.
• 常用方法 • 透析 • 超滤 • 凝胶过滤 • 离心
离蛋白质混合物最强大的技术,也是蛋白质组学研究的重要技术.
• 基本步骤：第一相等电聚焦后,在等电聚焦的垂直的方向进行第二
相SDS-PAGE.
双向凝胶电泳的原理：第一向基于蛋白质的等电点不 同用等电聚焦分离,第二向则按分子量的不同用SDSPAGE分离,把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面 上分开.
分离纯化蛋白质的方法
分离纯化蛋白质的方法分离纯化蛋白质是生物学研究中的重要一环。
蛋白质是生命活动的基础，它们参与了许多生化反应和细胞功能的调节。
因此，研究蛋白质的结构和功能对于理解生命活动的本质具有重要的意义。
然而，蛋白质的分离纯化是一项复杂的工作，需要利用不同的方法和技术。
本文将介绍一些常用的方法和技术，以帮助读者更好地理解蛋白质的分离纯化过程。
一、离心法离心法是最常用的分离蛋白质的方法之一。
它利用不同蛋白质的沉降速度差异，将混合物中的蛋白质分离开来。
离心法可以分为低速离心和高速离心两种方式。
低速离心的转速通常在500-5000 rpm之间，可以用来分离细胞器和细胞碎片。
高速离心的转速通常在20000-40000 rpm之间，可以用来分离蛋白质和病毒颗粒等微小颗粒。
二、凝胶过滤法凝胶过滤法是一种按分子量大小分离蛋白质的方法。
它利用凝胶的孔隙大小将蛋白质分离开来。
分子量大的蛋白质无法进入凝胶的孔隙，只能在凝胶表面停留，而分子量小的蛋白质可以进入凝胶的孔隙中，被分离出来。
凝胶过滤法常用于分离分子量相近的蛋白质。
三、离子交换色谱法离子交换色谱法是一种利用蛋白质和离子交互作用分离的方法。
它利用带电离子交换树脂将混合物中的蛋白质分离出来。
蛋白质的带电性质与树脂表面的带电离子相互作用，从而实现分离。
离子交换色谱法常用于分离带正电荷或带负电荷的蛋白质。
四、亲和层析法亲和层析法是一种利用蛋白质与某种特定分子之间的亲和力分离的方法。
它利用固定在树脂表面的特定分子与混合物中的蛋白质发生亲和作用，从而分离出目标蛋白质。
亲和层析法常用于分离具有特定结构或功能的蛋白质。
五、透析法透析法是一种利用半透膜将混合物中的小分子物质和大分子物质分离的方法。
它利用半透膜的选择性通透性将小分子物质透过膜外，而将大分子物质留在膜内。
透析法常用于分离蛋白质和其他小分子物质。
六、电泳法电泳法是一种利用蛋白质的带电性质和电场作用进行分离的方法。
它将混合物中的蛋白质置于电场中，通过电泳移动的速度将蛋白质分离出来。
蛋白质分离的方法
蛋白质分离的方法蛋白质分离是一种常用的生物化学技术，用于从混合物中分离和纯化蛋白质。
以下是几种常用的蛋白质分离方法：1. 沉淀法：沉淀法是最简单和最常用的蛋白质分离方法之一。
它利用蛋白质在水溶液中的溶解度差异，通过添加适量的盐、有机溶剂或高分子化合物等沉淀剂，使目标蛋白质从溶液中沉淀出来。
常用的沉淀剂包括硫酸铵、乙醇、丙酮等。
2. 凝胶色谱法：凝胶色谱法是一种基于分子大小分离蛋白质的方法。
它利用凝胶颗粒构成的凝胶柱作为分离介质，将混合物中的蛋白质通过洗脱液进行洗脱。
不同大小的蛋白质分子通过凝胶柱时，会根据其大小被不同程度地阻滞，从而实现分离。
3. 电泳法：电泳法是利用蛋白质分子在电场中的迁移率差异进行分离的方法。
它通过在电场中施加不同的电压和电流，使蛋白质分子在电场中移动。
不同大小的蛋白质分子在电场中的迁移率不同，从而实现分离。
常见的电泳法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维素膜电泳等。
4. 亲和色谱法：亲和色谱法是一种利用蛋白质与固定相之间的特异性亲和力进行分离的方法。
它通过将目标蛋白质与固定相之间的特异性结合，实现与其他蛋白质的分离。
亲和色谱法通常与其他色谱技术结合使用，如离子交换色谱、凝胶色谱等。
5. 高效液相色谱法：高效液相色谱法是一种高分辨率、高速度的蛋白质分离方法。
它利用高压泵将混合物中的蛋白质通过固定相和流动相之间的分配进行分离。
高效液相色谱法具有高分辨率和高速度的优点，适用于大规模蛋白质分离和纯化。
以上是常见的蛋白质分离方法，每种方法都有其优缺点和适用范围。
在实际应用中，需要根据实验要求和目标蛋白质的性质选择合适的方法或方法组合来实现蛋白质的分离和纯化。
蛋白质分离技术
04
新兴蛋白质分离技术
色谱分离技术
高效液相色谱
离子交换色谱
利用不同物质在固定相和流动相之间 的吸附、溶解等化学性质差异进行分 离，具有高分辨率、高灵敏度等特点。
利用离子交换剂与溶液中离子的交换 性质进行分离，常用于蛋白质的分离 和纯化。
毛细管电泳
利用电场对带电粒子进行分离，具有 高分离速度、高分辨率和自动化程度 高等优点。
高速离心机是常用的设备，通过 高速旋转产生离心力，使密度不 同的蛋白质在离心管中沉降，从
而实现分离。
离心分离技术具有操作简便、分 离效果好等优点，适用于大规模
蛋白质分离。
沉淀分离技术
沉淀分离技术是利用蛋白质的 溶解度差异进行分离的方法。
通过改变溶液的pH值、离子强 度或加入有机溶剂等手段，使 蛋白质发生沉淀，从而实现分 离。
常见的沉淀分离技术包括盐析、 等电点沉淀和有机溶剂沉淀等。
介 质对蛋白质的分离作用进行分离的方法。
凝胶电泳中常用的凝胶介质包括琼脂糖 通过施加电场，蛋白质在凝胶中迁移， 凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等，它们能够根 不同大小的蛋白质会停留在不同的位置，
据蛋白质的大小和电荷进行分离。 从而实现分离。凝胶电泳分离技术具有 分辨率高、操作简便等优点，广泛应用 于蛋白质分析和纯化。
蛋白质芯片技术
微阵列芯片
将大量蛋白质分子固定在固相基 质上，通过与标记的样品进行反 应，实现蛋白质的快速检测和分
离。
蛋白质微球芯片
利用微球体作为载体，通过表面修 饰和包覆实现蛋白质的固定化和分 离。
纳米孔芯片
利用纳米孔道作为分离介质，通过 电泳原理实现蛋白质的分离和检测。
蛋白质组学技术
蛋白质质谱分析
蛋白质分离技术
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蛋白质分离纯化的条件
蛋白质是一类结构复杂的生物大分子，在细胞和抽提液中蛋白质的性状也不尽相同，
离开天然环境，蛋白质分子变得极不稳定，因此从正常生物材料中提取各种蛋白质均需要特定的条件。
(一)缓冲液缓冲液可以抗衡蛋白质溶液中pH值的改变，选择合适的缓冲液对于维持
一定pH 值下蛋白质的稳定及保证实验的重复性十分重要。
各种缓冲液原则上都可用于蛋白质的分离纯化，但具体选择何种缓冲液要视分离纯化的目的物性质及所采用的纯化技术而定，例如缓冲液中的无机成分(磷酸盐、硼酸盐、碳酸盐等)可以与酶或底物反应,从而影响酶的活性；大多数动物细胞在37℃生理状态下的pH值是7.0-7.5之间，因此应选择相应的缓冲液；对凝胶过滤方法，大多数缓冲液均可适用；离子交换层析中的阴离子交换层析，阳离子缓冲液首选Tris缓冲液，阳离子交换层析，阴离子缓冲液首选磷酸缓冲液。
在选择缓冲液时，
最好对pka相近的一些缓冲液进行比较试验，以避免有的缓冲液与所研究的蛋白质之间发
生不良的相互作用，影响蛋白质的分析分离。
(二)盐、金属离子和整合剂大多数蛋白质如球蛋白，在稀盐溶液中才能溶解，因此应采用含盐(氯化纳)缓冲液。
通常用0.1-0.2mol/L NaCI或KCl来模拟生理状态下的离子强度。
某些金属离子特别是二价金属如Ca2+、Mg2++等往往是酶的组成部分，失去金属离子其活性会大大下降,如果这些确是我们所需要保护的，则应避免其与缓冲液中的成分形成复合物。
但有些蛋白质含疏基,而这些疏基是活性所必须的，为减少金属离子对活性的影响，可以在
缓冲液中加入特异金属离子的螯合剂(Chelate)除去这些金属离子，如Zn2+的螯合剂为邻二氮杂菲；Ca2+的螯合剂为乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)；重金属及其它金属离子为
乙二胺四乙酸(EDTA)。
(三)还原剂细胞内有许多种还原成分，一旦细胞破碎，由于和氧的接触以及稀释作用而使抗氧化成分减少，导致许多蛋白质被氧化而失去活性，如巯基蛋白，一般应加入一些还原剂。
如抗坏血酸、巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)可以有效防止上述的氧化过程。
(四)去垢剂去垢剂为双极性分子,可在水中溶解。
除胆酸盐外,去垢剂分子通常是由线性或带有分枝的碳氢化合物尾部和结构各不相同的亲水性头部组成。
去垢剂的一个重要特性就是可以形成分子团结构。
当膜蛋白与去垢剂分子接触时，膜蛋白的疏水区或穿膜区被去垢剂分子覆盖，成簇的去垢剂分子将亲水性头部向外，使其能与水溶性缓冲液相溶。
另外,去垢剂形成的微胶粒分子量对于透析、凝胶过滤层析、非变性电泳都是非常重要的。
为了使蛋白质更好的溶解和保持蛋白质的活性，需选择合适的去垢剂。
如溶解膜蛋白可选择TritonX-1 00；1-3%浓度的TritonX-100能使许多蛋白质活性保持不变；Tween-20通常用在固相免疫细胞化学反应(如ELISA、RIA、免疫印迹等)中用来阻断非特异性蛋白之间的相互作用；SD S等离子型去垢剂由于可使蛋白质以单体形式被分离，常用于蛋白质分子量的测定；CHAP S常用于离子交换层析和等电聚焦电泳,含有CHAPS的蛋白质溶液可以冰冻保存。
如果用不同的去垢剂均不能获得较好的结果,可以探索多种去垢剂混合使用。
（五）蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时，会释放出多种蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速被抑制才能保持蛋白质不被降解。
由于大多数蛋白酶的最适pH在3-5或更大，因此可以采用低pH条件降低蛋白酶的活性，但最重要的是加入蛋白酶抑制剂。
不同类型的蛋白酶可选用不同的蛋白酶抑制剂，有时需要几种蛋白酶抑制剂混合使用。
蛋白质的环境因素及保存
1、表面效应蛋白质的稀溶液易于使蛋白质失活，这可能是由于玻璃容器表面效应的结果。
这一作用可以在溶液中加入高浓度的其它蛋白，如牛血清白蛋白(BSA)来防止；另外玻璃表面非特异的吸附可损失大量的纯化蛋白（5cm2的玻璃表面可吸附1μg蛋白）,
在溶液中加入BSA也可大大降低这种非特异性的吸附作用。
通常在酶活性测定中至少加入0.1mg/ml BSA，而在蛋白质储存液中则加入10mg/ml的BSA。
2、温度除了极少数酶是在低温条件下失活,称为“不耐低温酶”,如线粒体ATP酶，大多数酶在温度高时会失活。
蛋白质也一样，在温度超过30-40℃时，蛋白质变得极度不稳定，大多数会由于热变性而失去活性，蛋白质在低温时其半衰期可延长。
3、储存蛋白质短期保存(1天至1周)时，可以溶液状态在4℃保存。
如需长期储存(超过1周)，根据需要可以采取不同的方式，如在硫酸铵溶液中以沉淀悬浮的方式于4℃保存；或者用硫酸铵沉淀蛋白，离心后在液氮中冷冻，然后低温保存；最好的方法是将蛋白质以冻干的粉末保存。
以冰冻干燥的失水状态保存蛋白质对许多蛋白质是有利的，但冻干对于一些蛋白质会部分失去活性。
另外，在保存的蛋白质中需加入甘油、白蛋白、白明胶、二甲基亚砜等惰性稳定剂，由于它们能降低溶液的极性，造成疏水环境，有利于蛋白质的稳定。