临床免疫学细胞因子测定及应用
免疫学临床应用
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。
①免疫学方法：ELISA、RIA等。
②细胞生物学方法 ③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
副作用：较轻
二、 免疫抑制剂
化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A有 明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙
免疫抑制药物的适应症和副作用
酶
（红色荧光）
放射免疫检测法（RIA） 酶免疫检测法（EIA） 免疫荧光检测法（IFA） 液相（ELISA）、固相（免疫组化技术）
免疫荧光技术
间接荧光法
直接荧光法
酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA法） • 间接法
• 双抗夹心法
• 竞争法
免 疫
2、抗原抗体反应的可见性
学 诊
抗原抗体按适当比例结合，形成肉眼可
免疫学检测技术及应用
检测未知抗原； 检测未知抗体。
Sensitivity of varior immunoassays
一、沉淀反应(precipitation)
可溶性抗原与相应抗体在电解质存在 条件下结合，出现沉淀物的现象。
沉淀反应的试验方法：环状法 絮状法 琼脂中沉淀法
琼脂中沉淀反应法：
• 双向免疫扩散(double immunodiffusion) • 单向免疫扩散(single radial
technique) （二）免疫酶技术(immunoenzymatic
technique) （三）同位素标记技术(isotope labelling
technique) （四）发光免疫测定(luminescent immuno-
assay, LIA) （五）免疫胶体金标记技术(colloidal gold
• Cell-Counting Kit-8（CCK-8）: CCK-8中含有WST-8， 较WST-1更新的四唑盐，检测原理与WST-1类似。 操作更简便，检测结果更稳定、溶解性更高、灵 敏度更高、保存时间更长。
（放射性核素摄取法）
2.细胞毒试验 (1) NK细胞的细胞毒活性测定
① 放射性核素释放法 放射性核素标记靶细胞(K562细胞) + 效应细胞
流式细胞仪
4.磁珠分离术： (1)直接法： 免疫磁珠(磁性微粒结合抗体) + 细胞
临床免疫学检验方法与应用
临床免疫学检验方法与应用免疫学是一门研究机体对抗病原体、维持免疫平衡的科学，其在临床诊断中起着举足轻重的作用。免疫学检验方法多种多样，能够准确地检测机体的免疫状态，有助于诊断和治疗各种疾病。本文将介绍几种常见的临床免疫学检验方法及其应用。
1. ELISA法
ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫学检验方法，通过酶标法测定抗体或抗原的存在量。ELISA法可用于检测HIV、乙肝、梅毒等疾病的抗体水平，也可用于测定药物浓度或病毒载量。由于ELISA法操作简便、灵敏度高，因此在临床诊断中得到广泛应用。
2. 免疫荧光法
免疫荧光法是一种通过检测抗体或抗原在细胞或组织中的荧光信号来进行免疫检测的方法。免疫荧光法被广泛用于自身免疫性疾病的诊断，如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。通过观察免疫荧光信号的强度和分布，可以判断患者的免疫状态和疾病程度。
3. 免疫印迹法
免疫印迹法（Western Blot）是一种通过检测抗体与特定抗原结合而形成的免疫复合物来进行检测的方法。免疫印迹法主要用于检测蛋白质的表达水平和鉴别不同蛋白质。在临床上，免疫印迹法常用于肿瘤标记物的检测和分析，有助于早期发现恶性肿瘤。
4. 细胞免疫学方法
细胞免疫学是研究机体免疫细胞及其功能的学科，其方法主要包括
细胞毒活性测定、淋巴细胞亚群分析、细胞因子测定等。这些方法在
免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应的诊断和治疗中起着关键作用。
5. 其他免疫学检验方法
除了上述几种常见的免疫学检验方法外，还有许多其他方法，如流
式细胞仪、PCR法、化学发光法等。这些方法在特定疾病的诊断和治
细胞因子检测
细胞因子检测
细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质,在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动,•在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用。某些刺激因子也可导致一些细胞因子超量表达,或表达减少,从而参与疾病的发病及病理过程。
1、免疫学检测法其基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。•如免疫斑点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹法等均已用于细胞因子的检测。
2.、生物学测定法其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株(即靶细胞)•的促增殖作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位,如对IL-1、IL-2等细胞因子活性的检测。亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素的生物活性测定。
3、分子生物学测定法目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。通过检测细胞内细胞因子的基因组成或mRNA量,推算出细胞因子的合成量。
一、IL-1的检测(生物活性测定)
产生IL-1的细胞种类很多,其中最主要的为单核-巨噬细胞。IL-1可分为IL-1α(•也称酸性IL-1,pI=5.0)和IL-1β(中性IL-1,pI=7.0)。两者的分子量和生物活性相似,•只能用抗体检测方法才能区别,常用的生物学测定法对两者都适用。IL-1•的生物学活性广泛,其检测方法亦较多,包括有小鼠胸腺细胞增殖法、D10G 4.1细胞增殖法及L929细胞增殖法等。IL-1反应细胞增殖可以通过活性染料染色,显微镜直接计数,3H-TdR或125I-UdR的DNA掺入量或以活性细胞代谢率为指标来表示。本试验介绍L929细胞增殖MTT比色法。
细胞因子免疫学检验法
细胞因子免疫学检验法
关键词：细胞抗体试剂标准物质北京标准物质网
如前所述，细胞因子多为多肽、蛋白或糖蛋白，具备良好的抗原性，利用免疫学技术，我们已经可以方便地获得不同细胞因子的抗血清、多克隆抗体或单克隆抗体，甚至，几乎所有的主要细胞因子，均有成熟的商业化的抗体产品在市场上销售。我们可以利用这些抗体，基于抗原抗体特异性反应对细胞因子进行免疫学分析及定量。常用的免疫学分析方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫印迹法、流式细胞术等。结合荧光标记等方法，我们还可以实现在细胞原位对细胞因子含量分析的目的。
结合细胞培养和特异性单克隆抗体，开发出一种分析细胞受刺激后局部分泌细胞因子含量的技术，称为酶联免疫斑点法(ELISPOT)。该方法可以结合细胞培养及免疫学反应，检测出发生在单细胞表面的微小变化。与传统ELISA法相比，ELISPOT具有更高的灵敏度，可从几十万个细胞中检出一个分泌该细胞因子的细胞。ELISPOT通过读取视野中显色阳性的斑点代表分泌该细胞因子的细胞，最后计算分析出分泌该细胞因子的阳性细胞比率。ELISPOT已逐渐成为一种重要的细胞因子免疫学检测手段。
免疫学检测法的主要特点是基于抗原抗体反应，反应简单、快速，实验重复性好，大量商业化试剂盒也都是基于这种检测方法。但是，由于仅仅基于分子问免疫学反应，所测得细胞因子含量，并非等同于具备生物学活性的折叠正确的细胞因子，所以，在很多情况下需要借助于生物学检测法最终确定细胞因子生物学活性。
综上所述，细胞因子作为临床和基础研究的重要生物学分子和检测指标，其生物活性测定方法选择的核心依据是该细胞因子与特定靶细胞在特定培养条件下的反应性。结合免疫学方法对细胞因子含量的初步分析，并通过选取适当的体外细胞培养模型，我们才能获得相对准确的细胞因子的生物学活性指标。
临床检验主管技师 临床免疫学和免疫检验 第十六章 细胞因子与细胞黏附因子的测定
第十六章细胞因子与细胞黏附因子的测定
细胞因子是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。
细胞黏附分子是介导细胞间及细胞与细胞外基质间黏附作用的分子，其化学本质为糖蛋白，可以细胞膜表面表达和可溶性两种形式存在。
二者分别在机体的免疫调节、炎症应答、创伤修复、肿瘤转移等生理和病理过程中发挥重要作用。
第一节生物学测定方法
常见的生物学测定法包括：
基于DNA检测的分子生物学测定法：细胞因子或细胞黏附分子DNA扩增法、RNA印迹法、原位杂交法、核酸酶保护分析等，可定性或定量分析细胞因子和细胞黏附分子的基因或mRNA。
生物活性测定法：根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测方法，主要用于细胞因子的测定。
一、促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法
（一）放射性核素掺入法：通过细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。该法的优点是结果客观，可常规用于大标本量的测定，但方法的特异性受依赖细胞株依赖程度的影响。此外，测定过程中需要使用放射性核素，废物的处理较繁琐。
（二）MTT比色法：不使用放射性核素，以细胞代谢变化作为增殖指征来检测细胞因子生物活性的测定方法。
二、细胞毒活性测定法
待测细胞因子做一系列稀释后加至指示细胞培养体系，以检测培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细胞数量与细胞因子的活性成正比。如TNF杀伤肿瘤细胞的测定。
三、抗病毒活性测定法
抗病毒活性测定法主要用于IFN等细胞因子的检测。
四、趋化活性测定法
具有趋化活性的细胞因子，也称趋化因子，诸如IL-8、IL-16、PANTES、MCP及MIP等，能诱导中性粒细胞、单核-巨噬细胞或淋巴细胞等定向迁移。其诱导细胞迁移的方式包括趋化性和化学增活性。趋化性是诱导细胞由趋化因子低浓度处向趋化因子高浓度处做定向移动的特性，可采用琼脂糖和Boyden盲端微孔小室趋化试验测定。化学增活性则指细胞因子增强细胞随机运动能力的特性，可采用琼脂糖小滴化学动力学试验测定。
临床医学检验技师初级(师)临床免疫学及检验(细胞因子测定及应用)-试卷1
临床医学检验技师初级（师）临床免疫学及检验（细胞因子测定
及应用）-试卷1
(总分：92.00，做题时间：90分钟)
一、 A1型题(总题数：38，分数：76.00)
1.细胞因子测定的临床应用是
（分数：2.00）
A.特定疾病的辅助诊断
B.评估机体的免疫状态，判断治疗效果及预后
C.临床疾病的治疗应用
D.临床疾病的预防应用
E.以上都是√
解析：解析：细胞因子测定的临床应用包括A、B、C、D四项。
2.下列关于免疫学测定细胞因子，哪项是正确的
（分数：2.00）
A.特异性高
B.操作简便
C.不能确定其生物学活性
D.不能确定其分泌情况
E.以上都是√
解析：解析：免疫学测定细胞因子的特点包括特异性高、操作简便、不能确定其生物学活性、不能确定其分泌情况。
3.下列关于分子生物学测定细胞因子的评价，哪项正确
（分数：2.00）
A.特异性高
B.敏感性高
C.测细胞因子基因√
D.操作简便
E.定量
解析：解析：分子生物学测定细胞因子就是从基因水平检测细胞因子情况。
4.细胞因子生物学检测是
（分数：2.00）
A.特异性高
B.定量
C.定位
D.测活性√
E.半定量
解析：解析：细胞因子生物学检测就是直接检测细胞因子特定的生物学活性来达到检测细胞因子水平的目的。
5.细胞因子是
（分数：2.00）
A.由免疫细胞合成
B.由非免疫细胞合成
C.小分子多肽
D.调节多种细胞生理功能
E.以上都是√
解析：解析：参考细胞因子的概念。
6.由活化的T细胞产生的是
（分数：2.00）
A.multi-CSF √
B.G-CSF
C.M-CSF
D.Epo
E.SCP
解析：解析：活化的T细胞能产生多种colony-stimula-ting factor(CSF)，即multi-CSF。
免疫检验第十四讲细胞因子检查
（三）细胞因子的联合检测
➢意义： 举例： T细胞、巨噬细胞和上皮样细胞分泌相应细胞因子 的
功能：IL-1、 IL-2、IFN-γ和GM-CSF Th1/Th2细胞平衡状态：IL-2、IL-4、IL-10和 IFN-γ
二、特定疾病诊断的辅助指标
（一）细胞因子检测在特定疾病诊断中的意义
➢感染性疾病、免疫炎症、移植排斥反应：TNF、IL-1、IL6、IFN-γ ➢肝脏损伤的两种炎症介质：TNF、IL-6 ➢活动性结核：IL-4 ↑，IFN-γ及IL-2 ↓ ➢结核性胸膜炎： IFN-γ及IL-2 ↑,IL-4 ↓ ➢类风湿关节炎： TNF、IL-1、 IL-6、IL-8、MCP-1 ↑ ➢溃疡性结肠炎：IL-15 ↑ ➢哮喘：IL-5 ↑
刺激细胞增殖或集落形成的活 性维持细胞生长和存活的特性 抑制细胞生长或破坏细胞的效
应促进细胞趋化或抗病毒作用
生物学活性测定方法学评价
敏感性较高 特异性不高 操作繁琐 易受干扰
免疫学测定法
➢ELISA ➢流式细胞分析法 ➢酶联免疫斑点试验（enzyme linked immunospot, ELISPOT）
生物学测定法分类
1.基于DNA检测的分子生物学测定法：
➢ DNA扩增法 ➢ RNA印迹法 ➢ 原位杂交法 ➢ 核酸酶保护分析
2.生物活性测定法
生物活性测定法原理
关于细胞因子检测
关于细胞因子检测
【关键词】细胞因子检测
一、白细胞介素(IL)检测
1.白细胞介素1β(IL-1β)检测
IL-1又称淋巴细胞激活因子，是急性期免疫反应的主要调节因子，对T 细胞激活，诱导IL-2产生起着基本的作用；而这些作用大多数是IL-1β直接产生的。
[参考值]
0.13～0.25 μg/L (ELISA)
[临床意义]
(1)组织损伤或感染，如Crohn’s病、败血症；某些自身免疫性炎症反应(如类风湿关节炎)、结核、风湿等血中IL- 1β升高。
(2)神经系统炎症或损伤时脑脊液中IL-1β升高。
(3)胸膜腹膜炎渗出液中IL-1β升高。
(4)在再生障碍性贫血患者，单核细胞产生IL-1能明显下降。
(5)老年人或癌症患者外同血中单核细胞产生IL-1能力也低于正常人，因而在感染后不易出现发热等临床症状。
[注意事项]
(1)不抗凝静脉血检测，也可是脑脊液或渗出液；
(2)采集标本必须用不含致热原、内毒素的清洁试管；
(3)标本不应有溶血、脂血、黄疸。
2.白细胞介素2(IL-2)检测
白细胞介素2(IL-2)是白细胞介素中的一种。主要由活化T细胞产生，是具有多向性作用的细胞因子(主要促进淋巴细胞生长、增殖、分化)。它对机体的免疫应答和抗病毒感染有重要作用。
[参考值]
3.5～6.5μg/L (ELISA)
[临床意义]
(1)IL-2主要刺激T细胞生长；诱导细胞毒作用；对B细胞的生长及分化有一定的促进作用；可明显加强对单核.巨噬细胞的抗原递呈能力、杀菌力、细胞毒性。IL-2随年龄增长有降低趋势。
(2)增高见于自身免疫性疾病(如SLE、类风湿关节炎等)、再生障碍性贫血、多发性骨髓瘤、心血管病、肝病、肿瘤、排斥反应等。
细胞因子的检测和应用详解演示文稿
TaqMan技术
P O CH2 o
5’端标记报告荧光
没有杂交 ，距离近 而发生荧 光能量转 移
OH 3’端标记淬灭荧光
TaqMan
聚合酶
样本中原始模板的数量与荧光强度超出选定阈
值时的扩增循环数（Ct)成反比
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“分子信标”技术
• 生长因子（grow factor）GF
• 趋化因子
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细胞因子检测
细 靶趋
ELISA
胞 增 殖
细化
胞 杀 伤
活 性
诱 导 产 物
变细 抑胞 制病
流 式 细 胞 技 术
术受 体 检 测 技
DNA RNA 检测
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生物学检测法
(1)细胞增殖法 • 依赖细胞株：许多细胞因子具有细胞生长因子
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靶细胞滤液
3~5μm孔径的微孔滤膜
受检的趋化因子
３７℃ 温育数小时 取膜固定、干燥、着染、脱色
将透明后的滤膜置油镜下检测细胞在 膜内通过距离，求其趋化单位
滤膜微孔小室法
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趋化因子或待测 液
细胞悬液
临床免疫学细胞因子测定及应用
第十五章细胞因子测定及应用
本章考点
1.细胞因子的概述
2.测定方法及应用
细胞因子在机体的免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。检测这类因子不仅是基础免疫研究的有较手段，亦是临床上探索疾病发病机制、判断预后和考核疗效的指标。
第一节细胞因子的概述
（一）概念
细胞因子是由免疫细胞产生的一大类能在细胞问传递信息，具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽。
（二）共同特性
（1）化学性质大都为糖蛋白。
（2）细胞因子可以旁分泌、自分泌或内分泌的方式发挥作用。
（3）一种细胞可产生多种细胞因子，不同类型的细胞可产生一种或几种相同的细胞因子。
（三）类型
细胞因子分类按其作用大致可分为免疫调节因子和免疫调控因子两大类。主要的细胞因子有：白细胞介素、干扰素、生长因子、趋化因子家族、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、转化因子家族以及其他细胞因子等。
1.白细胞介素：白细胞介素（IL）是指免疫应答过程中白细胞间相互作用的细胞因子，名称后加阿拉伯数字以示区别。现在已取得克隆化的基因、明确产物性质和活性的白细胞介素成员有15个IL在免疫细胞的成熟、活化、增生和免疫调节等一系列过程中均发生重要作用，此外IL还参与机体的多种生理及病理反应。
（1）IL-1、IL-2的性质及生物活性
1）IL-1的性质：IL-1的产生细胞：几乎所有的有核细胞均可产生IL-1，主要以巨噬细胞为主，IL-1分子有IL-1α和IL-1β两种不同分子形式。所有的有核细胞表面，都有IL-1受体（IL-1R），也分为IL-1R 和IL-2R两类。
免疫细胞功能检测技术
免疫细胞功能检测技术
免疫系统是人体的重要防御机制之一，能够识别病原体并消灭它们，维护身体的健康。免疫细胞功能检测技术是一种用于评估免疫系统功
能的测试方法，可以帮助人们更好地了解自身的免疫状况和疾病风险。本文将介绍免疫细胞功能检测技术的原理、应用和未来发展趋势。
一、免疫细胞功能检测技术原理
免疫细胞功能检测技术通过测定机体内免疫细胞的功能状态，评估
免疫系统的健康状况。其中，常见的技术包括流式细胞术、酶联免疫
吸附法（ELISA）、细胞因子检测等。
1. 流式细胞术
流式细胞术是一种通过流式细胞仪检测细胞表面标记物的技术，常
用于检测免疫细胞的表型和活性。通过标记细胞表面的特定抗原和荧
光染料，流式细胞术可以定量测定细胞表面标记物，并进行多参数分析。
2. 酶联免疫吸附法（ELISA）
ELISA是一种常用的免疫细胞功能检测技术，可用于定量测定体液
中特定抗原或抗体的浓度。通过将待测样品与特定抗原或抗体反应，
并加入酶标记的二抗，在底物作用下形成可见的颜色反应，从而定量
测定抗原或抗体的浓度。
3. 细胞因子检测
细胞因子是一类在免疫反应中发挥重要调控作用的分子信号物质，
如干扰素、白细胞介素等。细胞因子检测技术可以通过ELISA等方法
测定体液或细胞培养上清中细胞因子的浓度，为炎症反应的评估和免
疫状态的监测提供重要信息。
二、免疫细胞功能检测技术应用
免疫细胞功能检测技术在免疫学研究和临床医学中有着广泛的应用。以下是该技术在不同领域的应用举例：
1. 免疫系统疾病诊断
免疫细胞功能检测技术可以帮助医生诊断免疫系统疾病，如自身免
细胞因子检测-应用手册
儿科
细胞因子与儿科疾病
儿科的常见疾病主要分为四大类:呼吸系统感染、消化系统疾病、免疫系统疾病和皮肤系统疾病。
Thl细胞因子主要包括ILT2、TNF-a. TNF-P . IFN-y等，参与细胞免疫应答，可激活炎症部位的巨噬细胞，增强宿主对病毒及胞内病原体的抵抗力，诱发迟发型超敏反应;Th2细胞因子包括IL-4、IL-5、IL-6、ILTO及ILT3等，促进B细胞的激活，介导体液免疫应答，可抑制自身免疫，并协助嗜酸性粒细胞活化及IgGl、IgE的生成。Thl/Th2互为调节和抑制，Thl/Th2细胞因子平衡紊乱是多种疾病的发生和预后的重要因素。
1.呼吸系统疾病
儿童处于生理性免疫功能低下状态，易患呼吸道感染性疾病。儿童呼吸道感染分为三种：上呼吸道感染、反复呼吸道感染和下呼吸道感染。下呼吸道感染是对多种呼吸疾病的总称，包括支气管炎、支气管哮喘、肺炎等儿科常见病。
L1肺炎
肺炎是儿科的常见病症，肺炎的发生、发展与病原体数量、毒力以及机体失控的炎症反应有关，Thl/Th2细胞因子失衡在肺炎支原体肺炎的发生发展中起重要作用。
常见的呼吸道病毒为腺病毒(AV),流感病毒(IFV)、副流感病毒(PIV)及呼吸道合胞病毒(RSV)等，病毒感染的严重程度和病毒的致病力、机体的免疫应答力相关。免疫系统的激活和细胞因子或炎性介质的产生在炎性反应的激活以及组织损伤机制中起非常重要的作用，呼吸道病毒感染可引起免疫系统和多种炎症反应因子发生紊乱，表现为Thl/Th2细胞因子失衡。病毒性肺炎急性期患儿血清中IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、TNF-a 水平升高，ILTO、IFN-y 水平降低；经药物治疗有效后，TNF-a水平下降，IL-10、IFX-y水平升高，Thl/Th2平衡逐渐恢复O
细胞因子测定及应用
第十五章细胞因子测定及应用（一）A1 型题（标准型）
1．细胞因子测定的临床应用是（）
A. 临床疾病的预防应用
B. 评估机体的免疫状态，判断治疗效果及预后
C. 临床疾病的治疗应用
D. 特定疾病的辅助诊断
E. 以上都是
2．免疫学测定细胞因子哪项是正确的（）
A. 特异性高
B. 不能确定生物学活性
C. 操作简便
D. 不能确定其分泌情况
E. 以上都是
3．分子生物学测定细胞因子评价哪项正确（）
A. 特异性高
B. 操作简便
C. 测细胞因子基因
D. 敏感性高
E. 定量
4．细胞因子生物学检测的特点是( )
A. 特异性高
B. 可定量分析
C. 可测定细胞因子生物活性
D. 定位
E. 可半半定量分析
5．关于细胞因子下列说法正确的是（）
A. 由免疫细胞合成
B. 由非免疫细胞合成
C. 小分子多肽
D. 可调节多种细胞生理功能
E. 以上都是
6.由肾细胞产生的细胞因子是：（）
A.G-CSF
B.GM-CSF
C.M-CSF
D.Epo
E.LIF
7．细胞因子检测最简单、重复性好的方法是（）
A. 生物学检测法
B. 免疫学检测法
C. RT-PCR 法
D. 原位杂交法
E. 分子生物学检测法
8.生物学检测法哪项是正确的（）
A. 维持细胞生长
B. 刺激细胞增殖
C. 保持细胞活性
D. 抑制细胞生长
E. 以上都是
9．3H-TdR掺入法属于下列哪种检测方法（）
A. 免疫学定性
B. 免疫学定量
C. 生物学检测
D. 原位PCR
E. 原位杂交
10．细胞毒测定可用于测定（）
A. IFN-α
B. IFN-β
C. IFN-γ
D. TNF
E. 3H-TdR
细胞因子的免疫应用及研究进展
细胞因子的免疫应用及研究进展
摘要：细胞因子( cytokine) 是一类由各种免疫细胞和非免疫细胞产生的具有生物活性的多肽或糖蛋白。通常所说的细胞因子包括淋巴细胞因子、单核细胞因子及其他细胞产生的细胞因子。细胞因子具有强大的免疫调节和免疫激活作用,有关细胞因子方面的研究已成为当今基础免疫学和临床免疫学研究中十分活跃的领域,并取得了令人瞩目的成绩,特别是近年来由于分子生物学技术的发展,使得细胞因子的研究和应用进入了一个全新的阶段。本文主要对其应用做一个综述。
关键词：细胞因子、免疫、应用
1.细胞因子的特性
尽管细胞因子种类繁多,功能复杂广泛,但其也有一些共同的特点,主要表现为: ①多为糖蛋白,分子质量一般为10～25ku,有的为8～10ku。②通过与受体的特异性结合而发挥其相应的生物学效应。这类结合的细胞因子亲和力较高,在极低浓度下亦显示出生物学活性。③一般在局部发挥效应,这种效应既可针对产生该细胞因子并且具有受体的细胞———即自分泌(autocrine)作用,也可针对邻近的细胞———即旁分泌(paracrine)作用。④分泌期短,一般仅为数天,且其半衰期也很短。⑤一种细胞因子可作用于多种靶细胞,并显示出多种生物学功能,即具有多效性;同时多种细胞因子也可作用于同一种细胞发挥相似的生物学作用。⑥细胞因子之间通过合成分泌的相互调节、受体表达的相互调控、生物学效应的相互影响而组成一个相互协同又相互制约的复杂的免疫反应协调网络,共同维持机体免疫系统的平衡。⑦细胞因子具有强大的免疫调节作用,是机体发挥免疫功能不可缺少的成分。
细胞因子检测标准
细胞因子检测标准
细胞因子检测的标准通常涉及以下几个方面：
1.样本采集和处理：采集血液、组织或其他体液样本时，应使用无菌技术并遵循标准操作程序。样
本应妥善保存和运输，以避免污染和细胞因子的降解。
2.检测方法：细胞因子检测通常使用免疫测定法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术、免
疫荧光法等。这些方法的选择应基于实验目的、样本类型和分析的细胞因子类型。
3.仪器和试剂：使用高质量的仪器和试剂对于确保准确的检测结果至关重要。应定期维护和校准仪
器，并使用经过验证的试剂。
4.质量控制：实施严格的质量控制措施，包括使用内部对照、重复样本检测和外部质量评估计划，
以监测检测过程的准确性和可靠性。
5.数据解释：细胞因子浓度的解释应基于适当的参考范围或对照样本。结果应与其他临床和实验室
数据相结合，以提供有关患者状况的全面信息。
6.报告和记录：检测结果应准确、清晰地记录在适当的文档中，并应在需要时向患者或医生报告。
记录应包括样本信息、检测方法、结果和质量控制数据。
请注意，细胞因子检测的具体标准可能因实验室、地区和国家的不同而有所差异。因此，在进行细胞因子检测时，应遵循所在地区或国家的相关法规和标准，并参考相关指南和建议。
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第十五章细胞因子测定及应用
本章考点
1.细胞因子的概述
2.测定方法及应用
细胞因子在机体的免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。检测这类因子不仅是基础免疫研究的有较手段，亦是临床上探索疾病发病机制、判断预后和考核疗效的指标。
第一节细胞因子的概述
（一）概念
细胞因子是由免疫细胞产生的一大类能在细胞问传递信息，具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽。
（二）共同特性
（1）化学性质大都为糖蛋白。
（2）细胞因子可以旁分泌、自分泌或内分泌的方式发挥作用。
（3）一种细胞可产生多种细胞因子，不同类型的细胞可产生一种或几种相同的细胞因子。
（三）类型
细胞因子分类按其作用大致可分为免疫调节因子和免疫调控因子两大类。主要的细胞因子有：白细胞介素、干扰素、生长因子、趋化因子家族、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、转化因子家族以及其他细胞因子等。
1.白细胞介素：白细胞介素（IL）是指免疫应答过程中白细胞间相互作用的细胞因子，名称后加阿拉伯数字以示区别。现在已取得克隆化的基因、明确产物性质和活性的白细胞介素成员有15个IL在免疫细胞的成熟、活化、增生和免疫调节等一系列过程中均发生重要作用，此外IL还参与机体的多种生理及病理反应。
（1）IL-1、IL-2的性质及生物活性
1）IL-1的性质：IL-1的产生细胞：几乎所有的有核细胞均可产生IL-1，主要以巨噬细胞为主，IL-1分子有IL-1α和IL-1β两种不同分子形式。所有的有核细胞表面，都有IL-1受体（IL-1R），也分为IL-1R 和IL-2R两类。
IL-1的生物活性：局部免疫调节作用：①与抗原协同作用；②促进B细胞生长和分化及抗体形成；③促进单核-巨噬细胞等APC的抗原递呈能力；④与IL-2或干扰素协同增强NK细胞活性；⑤吸引中性粒细胞，引起炎症介质释放；⑥刺激多种不同的间质细胞释放蛋白分解酶并产生一些效应。全身性作用：①有较强的致热源作用；②对IL-1的生成具有反馈调节作用；③合成和分泌大量的急性蛋白；④使骨髓细胞库的中性粒细胞的释放和活化；⑤与CFS协同促进骨髓造血祖细胞的增殖能力。
2）IL-2的性质：IL-2的产生细胞：IL-2主要由T细胞（CD4+）受抗原或丝裂原刺激后合成。IL-2分子量为l5KD，是含有113个氨基酸残基的糖蛋白，具有一定的种属特异性。IL-2受体：T细胞，NK细胞，B细胞及单核巨噬细胞表面均可表达IL-2R。
IL-2的生物活性：①刺激T细胞生长；②诱导细胞毒作用；③促进B细胞生长分化；④增强巨噬细胞抗原递呈能力、杀菌力及细胞毒性。
2.干扰素
（1）性质与类型：干扰素是由多种细胞产生的具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的可溶性糖蛋白，根据其产生细胞的不同分为3类：α型、β型、γ型，根据干扰素的产生细胞、受体和活性等综合因素分为2种类型：Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型干扰素又称抗病毒干扰素，其生物活性以抗病毒为主；Ⅱ型干扰素又称免疫干扰素或IFNγ，主要由T细胞产生，主要活性是参与免疫调节，是体内重要的免疫调节因子。
（2）诱发机制：正常情况下组织或血清中不含干扰素，只有在某些特定因素作用下才能诱使细胞产生干扰素。Ⅰ型干扰素的主要诱生剂是病毒及人工合成双链RNA，某些细菌和原虫感染及某些细胞因子也能诱导产生。Ⅱ型干扰素在免疫应答中受到抗原或丝裂原活化后由CD8+T细胞和CD4+T细胞产生，NK细胞亦可合成少量IFNγ。
（3）生物学活性：干扰素的生物活性有较严格的种属特异性，即某一种属细胞产生的干扰素，只能作用于相同种属的细胞。主要有抗病毒作用、抗肿瘤作用、免疫调节作用。
3.肿瘤坏死因子
（1）性质和类型：人肿瘤坏死因子（TNF）有两种分子形式，即TNFα和TNFβ。TNFα由细菌脂多糖活化的单核巨噬细胞产生，可引起肿瘤组织出血坏死，也称恶病质素；TNFβ由抗原或丝裂原刺激的淋巴细胞产生，具有肿瘤杀伤及免疫调节功能，又称淋巴毒素。
（2）生物效应：TNF对多种肿瘤细胞均有杀伤或抑制作用，敏感性因肿瘤细胞类型而异；TNF呈剂量依赖性地抑制病毒介导的细胞病变的发展，对RNA病毒和DNA病毒均有抑制作用；TNF能够增强T细胞产生以IL-2为主的淋巴因子，提高IL-2R的表达水平，促进T细胞增殖；还能促进B细胞增殖、分化和产生抗体；TNF有中性粒细胞和单核细胞趋化作用，并使之活化和脱颗粒，释放炎症介质；TNF可刺激成骨细胞内的碱性磷酸酶活性，诱导成骨细胞吸收骨质、使软骨细胞进行软骨更新，抑制软骨形成。
（3）应用研究：由于TNF的抗肿瘤和免疫调节功能，TNF疗法的研究已被许多国家开展。动物实验和临床经验表明，TNF对某些肿瘤具有明显的抑制作用，但副作用大，建立合理的用药方案及治疗措施，可望降低用量，减轻副作用，达到最佳治疗效果。
4.造血生长因子：红细胞生成素（EPO）：红细胞生成素（EPO）是一种糖蛋白，分子量约30～39KD，主要由肾小管内皮细胞合成，也可由肝细胞和巨噬细胞产生。EP0是一种强效的造血生长因子，活性单一，只作用于骨髓巨核前体细胞，可刺激红祖细胞及早幼红细胞形成成熟的红细胞集落，EP0的产生受机体内血容量和氧分压的调节。
5.细胞因子受体：多数细胞因子受体属于几个大的多基因家族，每个家族的成员具有独特的结构特征，相互之间在进化上可能有一定关系。细胞因子受体家族的划分不是绝对的，有的受体可归于多个家族。细胞因子受体除镶嵌于细胞膜表面的形式外，还有分泌游离的形式，即可溶性细胞因子受体。
第二节细胞因子测定方法及应用
一、测定方法
检测细胞因子的方法主要有生物学检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法。
（一）生物学检测法
生物学检测又称生物活性检测，是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。由于各种细胞因子具有不同的活性，例如IL-2促进淋巴细胞增殖，TNF杀伤肿瘤细胞，CSF刺激造血细胞集落形成，IFN保护细胞免受病毒攻击，因此选择某一细胞因子独特的生物活性，即可对其进行检测。
生物活性检测法又可分为以下几类：
1.细胞增殖法：许多细胞因子具有细胞生长因子活性，特别是白细胞介素，如IL-2刺激T细胞生长、IL-3刺激肥大细胞生长、IL-6刺激浆细胞生长等。利用这一特性，现已筛选出一些对特定细胞因子起反应的细胞，并建立了只依赖于某种因子的细胞系，即依赖细胞株（简称依赖株）。这些依赖株在通常情况下不能存活，只有在加入特定因子后才能增殖。例如IL-2依赖株CTLL-2在不含IL-2的培养基中很快死亡，而加入IL-2后则可在体外长期培养。在一定浓度范围内，细胞增殖与IL-2量呈正比，因此通过测定细胞增殖情况（如使用3 H-TdR掺入法、MTT法等）鉴定IL-2的含量。除依赖株外，还有一些短期培养的细胞，如胸腺细胞、骨髓细胞、促有丝分裂原刺激后的淋巴母细胞等，均可作为靶细胞来测定某种细胞因子活性。
2.靶细胞杀伤法：是根据某些细胞因子（如TNF）能在体外杀伤靶细胞而设计的检测方法。通常靶细胞