AFP项目性能验证方案
孕早期血清学产前筛查的性能验证
孕早期血清学产前筛查的性能验证
张艳秋
（太仓市疾病预防控制中心，江苏 太仓 215400）
【摘要】目的：通过时间分辨荧光免疫法分析孕早期血清AFP和β-HCG，评估AFP和β-HCG的临床价值，建立完善的检测体系，有助于降低新生儿缺陷的发病率、致畸率。方法：使用美国PerKinElmer公司AFP/β-HCG 测定试剂盒进行精密度、正确度、线性范围三方面的性能验证。结果：AFP和β-HCG检测试剂盒的精密度、正确度及线性范围其与厂家提供的数据基本一致，该方法具有高精密度和正确度，能够满足临床样本检测的性能要求。结论：血清学指标联合超声进行产前筛查，胎儿染色体异常的检出率大大增高，应用于临床筛查。
【关键词】AFP/β-HCG；产前筛查；性能验证
【中图分类号】R714.5 【文献标识码】A 【文章编号】2096-5249（2022）30-072-04
出生缺陷严重影响着新生儿的生存和后续生活质量，也给家庭和社会造成了巨大的负担，所以临床上多采取产前筛查的方法预防新生儿缺陷的发生，做好产前筛查且明确诊断并及时终止妊娠能显著降低新生儿畸形率。但是由于产前筛查覆盖率偏低，筛查方案多样化，检测技术平台和风险评估软件不统一而带来筛查诊断效能低下。血清学产前筛查以无创、迅速、价格低等优点在产前筛查中占有极其重要的地位。唐氏综合征即21-三体综合征发病普遍，一直是各国医学工作者关注热点[1]，众多国内外研究发现，在检测出怀有21三体综合征的孕妇中，其血清AFP的浓度下降而β-HCG浓度升高。为了提高筛查诊断效能和保障母婴健康，全市统一孕早期血清学产前筛查方案，检测技术平台和风险评估软件。
AFP监测监测方案重点和工作要求
• 报告内容
– 发病地点、家长姓名、患者姓名、性别、出生日期、 麻痹日期、临床初步诊断等。
– 县级疾控机构应建立AFP病例专报记录本，登记接到报 告时间、报告人、报告单位、报告内容、记录人等内 容。
❖ 核实诊断；了解发病过 程、治疗过程；了解病 例周围儿童发病情况
❖ 详细填写个案调查表
参照《高危AFP病例调查报告和集聚的临床符合病例调查指南》
高危AFP病例（续上）
❖ 要求2
▪ 需要采集5份健康儿童的粪便标本，原则上要求是5 岁以下，近6周内没有接种过脊灰疫苗的儿童。
▪ 脊灰疫苗接种率调查：在病例所在村（或可能的感 染地点）开展脊灰疫苗接种率调查。采用入户调查 的方法，调查至少30名5岁以下儿童，若本村儿童 不足30名，要调查此年龄段的所有儿童。
非AFP
❖ 1. 脑部病变（如脑瘫、脑梗塞、脑出血、脑炎、脑积水等）不作为 AFP病例报告。
❖ 2. 慢性疾病（如进行性肌营养不良等）不作为AFP病例报告。 ❖ 3. 单颅神经损伤（如面神经麻痹、外展神经麻痹等）不作为AFP报
告。 ❖ 4. 有明确原因如车祸、高空坠落等无发热肌无力等情况不作为AFP
五、不合格标本AFP病例
电化学发光免疫分析仪检测甲胎蛋白的性能验证
Ｉｔ ａ ｎ ＬｂＭｅ， ｌ ０１Ｖ １ ２Ｎ ．０ Ｊ ｄＪ ｙ２１， ｏ． ， ｏ１ ｕ ３
・
论
著 ・
电化 学发 光 免疫 分 析 仪检 测 甲胎 蛋 白的性 能 验证
王 凡 ， 红 君 蒋
（ ． 南省 第一人 民 医院检 验 科 ， １云 昆明 ６ ０ ３ ；． ５ ０ ２ ２ 昆明 医学院 附属 昆华 医院检验 科 ６ ０ ３ ） ５ ０ ２
论 罗 氏 ２ １ ０ ０电化 学发 光 免 疫 分 析 仪 测 定 ＡＦ 的主 要 分 析 性 能 均 与 厂 家声 明一 致 ； 家提 供 的 参 考 区间 可 以接 收 ； 证 方 案 和 Ｐ 厂 验
实验 方 法 简便 、 行 。 可
关键词 ： 甲胎 蛋 白类 ； 性 能验 证 ； 电化 学发 光 免 疫 分 析 法
摘 要 ： 目的 验 证 电化 学发 光 免 疫 分析 法 （ Ｃ ｌ 检 测 甲 胎 蛋 白 （ Ｆ ） Ｅ ＬＡ） Ａ Ｐ 的基 本 分 析 性 能 ， 时探 讨 适 用 于 Ｅ Ｌ Ａ 检 测 系 同 ＣＩ 统 分 析 性 能 的验 证 模 式 。 方法 参 照 相 关 的 文 件 ， 别 用 Ｅ Ｌ Ａ 检 测 ＡＦ 分 Ｃ Ｉ Ｐ的 精 密度 、 确 度 、 准 临床 可 报 告 范 围和 参 考 区 间 。 结
性能验证方案(仅供参考)
性能验证(仅供参考)
1 生化
生化室项目需要验证的参数包括批内精密度，批间精密度，正确度，线性范围、参考区间，可报告区间等。适用时，还要考虑分析灵敏度（仅对那些在接近 0 的低值有临床意义的项目有必要进行确定，必要时，可引用说明书中给出的低值）和干扰试验。
1.1精密度
1.1.1标本准备及要求
质控品、已经检测过的病人标本或具有血清基质的定值材料。每个项目均需选择至少正常和病理两个浓度水平的验证材料进行验证。所用样本一定要稳定，其基体组成应尽可能相似于实际检测的病人标本，样本中的分析物含量应在该项目的医学决定水平附近。
1.1.2方案
1.1.
2.1方案 1：
对验证材料每天分析 1 批次，2 个浓度，每个浓度重复测定 4 次，连续 5 天。记录结果并计算均值、标准差和批内精密度(%)。
1.1.
2.2 方案 2：
批内精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法，同批次内检测混合的新鲜临床标本 20 次。记录结果并计算均值（X）、标准差（SD）
和批内变异系数 CV（%）。
批间精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的检测方法（或将室内质控品按照常规标本的方法一样测定，测定结果在遵照厂商参数不出控的前提下），同批次内检测混合的新鲜临床标本 20 次，同一批号室内质控品某一时间段（至少 20 天）的室内质控数据逐步累积最终得出均值、标准差。
1.1.3结果判断
从美国临床实验室室间质量评估允许误差表中查阅评价项目的允许误差范围，由实验数
据统计的批内不精密度和批间不精密度小于允许误差范围的 1/4 和 1/3 作为检测系统不精密度
AFP作业指导书2.0
甲胎蛋白（AFP）检测作业指导书
1.检验目的
AFP来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道。70－95%的原发性肝癌患者的
AFP升高，越是晚期，AFP含量越高。但尚未发现AFP含量与肿瘤大小、恶性程度等有关系。AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌。在转移性肝癌中，AFP一般低于350-400 IU/ml。AFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者。不推荐将AFP用于普通人群的癌症筛查。孕妇血清或羊水AFP升高提示胎儿脊柱裂,无脑症,食管atresia或多胎,AFP降低(结合孕妇年龄)提示未出生的婴儿有Down's综合征的危险性
2.检验原理：
采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。
·第1步：10μl标本、生物素化的抗AFP单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗AFP单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。
·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，
3.性能参数：
3.1 线性范围：线性检测结果见AFP方法学验证记录。
3.2精密度:批内n=20,批间n=20。
3.3准确度: 检测结果见临检中心/江苏省室间质评结果回报记录。
3.4 可报告范围: 0.605-60500 ng/ml，最大稀释倍数为50倍。
3.5 测量区间：血清/血浆: 0.605-1210ng/ml。
AFP检测——ELISA法
AFP检测——ELISA法
【申请单】
×××市人民医院检验申请单
姓名
性别年龄
门诊号住院号
诊断或症状
检验标本
检验目的
送检科室医师
送检日期年月日
【方法选择】
方法电化学发光法ELISA法RIA法
本次检查选择√
【材料准备】
1.人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量检测试剂盒。
2.受检者血清。
3.水浴箱/37℃恒温箱。
4.加样枪。
5.酶标仪。
【操作方法】
按试剂盒使用说明书或实验室制定的SOP进行操作，主要操作流程如下：
1.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
3.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如
此重复5次，拍干。
5.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
6.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
7.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
【结果计算】
以标准品浓度（ng/ml）为横坐标，OD值（450）为纵坐标，绘制标准曲线。根据待测样品的OD值，计算出待测样品中AFP的实际浓度。
甲胎蛋白(AFP)测定(化学发光法)
4 操作步骤
1 开机前检查
a 察看电源是否正常安全通电
b 推主机下部的前门，打开后检查洗净水与分注液的用量是否满足当日
用量废试样杯与废吸嘴是否丢弃
2 开机
a更换75%酒精，放置基质液
b 打开电脑主机及AIA-1800电源, 点击主业面进入root
c 试样吸嘴的设置及酶标识试剂，检体稀释液的设置，按主机操作版面
Reagent/Tip键，LED指示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩，将酶
标识试剂，检体稀释液设置在试剂托架上，将条形码
标识面朝前
d 试剂杯的设置，按主机操作版面的Cup Sorter键，LED指示灯
变为绿色，拉开分类器抽屉将试剂托盘设置在分类器托盘上，将分类器
抽屉推到底
3 开机日检
4 日检通过后，进行标本检测，在树形菜单上进入界面设置标
本检测项目，Assay键点击开始测定
5 测定完毕后，按主机操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip键，LED指
示灯变为绿色，打开试剂吸嘴护罩及分类器抽屉，收集试剂放入冰箱，
更换基质液，放置75%酒精
6 点击关机，待窗口消失，关闭AIA-1800电源，在关闭电脑及主电
源
5 质量控制：
每批试剂都要使用东曹公司标准品作质量控制，请参见AIA-1800仪器操作手册。
AFP监测方案范文
AFP监测方案范文
摘要：AFP（α-胎儿蛋白）是一种胎儿产生的蛋白质，通常在成人体
内是稀有的。通过监测血液中的AFP水平，可以帮助诊断和筛查一些疾病，尤其是胎儿异常和一些癌症。本文旨在提出一个有效的AFP监测方案，以
帮助医生和研究人员更好地利用AFP作为一种诊断和筛查工具。
引言：AFP是一种重要的生物标记物，已被广泛研究和应用于临床诊
断和筛查。然而，由于其多元性和复杂性，仍然需要一个有效的监测方案
来优化其应用并提高其准确性和敏感性。
1.样本采集
首先，在监测AFP之前，必须确保样本采集的准确性和一致性。血液
样本是最常用的样本类型，可以通过静脉采集或抽取。为了避免环境因素
对样本的影响，最好在早晨采集样本，并确保患者在采样前至少空腹8小时。
2.检测方法
AFP的检测方法很多，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫
法（RIA）和化学发光法等。在选择适当的检测方法时，应考虑到其准确性、敏感性和成本效益。ELISA是一种常用的检测方法，其准确性和敏感
性较高，同时成本相对较低。
3.检测时机
AFP的检测时机非常关键，尤其是在筛查胎儿异常时。根据患者的病
史和临床表现，可以选择在怀孕初期（通常在12到16周）、中期（18
到22周）和晚期（24到32周）进行监测。不同时期的监测可以提供不同层次的信息，有助于早期发现和干预。
4.结果解读
对于正常人群，AFP水平通常很低。在特定疾病情况下，如胎儿脊柱裂和唐氏综合征，AFP水平会显著升高。因此，根据不同的疾病背景，建立相应的AFP参考范围和阈值非常重要。同时，结合临床病史和其他检查结果进行综合评估。
AFP监测方案
全国急性弛缓性麻痹（AFP）病例监测方案
为进一步落实《2003-2010年全国保持无脊髓灰质炎状态行动计划》，更好地发挥急性弛缓性麻痹（以下简称AFP）监测系统的作用，特制定本监测方案。
一、监测目的
1．及时发现输入性脊灰野病毒，采取措施防止病毒传播，保持无脊灰状态。
2．及时发现脊灰疫苗衍生病毒（以下简称VDPV）及其循环，采取措施控制病毒进一步传播。3．评价免疫工作质量，发现薄弱环节。
4．监测脊灰病毒变异情况，为调整疫苗免疫策略提供依据。
二、监测内容
（一）监测病例定义
1．急性弛缓性麻痹（AFP）病例
所有15岁以下出现急性弛缓性麻痹症状的病例，和任何年龄临床诊断为脊灰的病例均作为AFP病例。AFP病例的诊断要点：急性起病、肌张力减弱、肌力下降、腱反射减弱或消失。
常见的AFP病例包括以下疾病：
（1）脊髓灰质炎；
（3）横贯性脊髓炎、脊髓炎、脑脊髓炎、急性神经根脊髓炎；
（4）多神经病（药物性多神经病，有毒物质引起的多神经病、原因不明性多神经病）；
（5）神经根炎；
（6）外伤性神经炎（包括臀肌药物注射后引发的神经炎）；
（7）单神经炎；
（8）神经丛炎；
（9）周期性麻痹（包括低钾性麻痹、高钾性麻痹、正常钾性麻痹）；
（10）肌病（包括全身型重症肌无力、中毒性、原因不明性肌病）；
（11）急性多发性肌炎；
（12）肉毒中毒；
（13）四肢瘫、截瘫和单瘫（原因不明）；
（14）短暂性肢体麻痹。
2．高危AFP病例
年龄小于5岁、接种OPV次数少于3次或服苗史不详、未采或未采集到合格大便标本的AFP病例；或临床怀疑
为脊灰的病例。
AFP作业指导书
检验科免疫室
分析项目作业指导书
第页，共页
版本：A/0
生效日期：2008-02-01
4
甲胎蛋白(AFP )
妊娠周数14 15 16 17 18 19
例数382 1782 2386 975 353 146
ng/ml 27.9 30.9 36.1 40.4 48.3 146
IU/ml 23.2 25.6 30.0 33.5 40.1 45.5
各实验室应对各自地区人群的甲胎蛋白正常值波动范围进行调查，如有必要应自己测定一个参考值范围。
9.分析性能
精密度
10.干扰因素
该方法不受黄疸（胆红素<65mg/dl）、溶血（血红蛋白<2.2g/dl）、脂血（脂质<1500mg/dl）和生物素<60ng/ml等干扰。
接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。
不受类风湿因子干扰（1500U/ml）。
37种常用药物经试验对本测定无干扰。
AFP浓度高达1百万IU/ml（1.21百万ng/ml）也不出现钩状效应。
接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人会出现假阳性反应。
ElecsysAFP测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。
11.临床意义
AFP来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道。70－95%的原发性肝癌患者的AFP升高，越是晚期，AFP含量越高。
但尚未发现AFP含量与肿瘤大小、恶性程度等有关系。AFP含量显著升高一般提示原发性肝细胞癌。在转移性肝癌中，AFP一般低于350-400 IU/ml。AFP中度升高也常见于酒精性肝硬化、急性肝炎以及HBsAg携带者。
afp监测方案
AFP监测方案
1. 概述
AFP（Alpha-fetoprotein）是一种胚胎发育期间由胎肝分泌的一种糖蛋白，正常情况下在出生后会逐渐减少。然而，AFP在某些肿瘤中（如肝癌、睾丸癌和卵巢癌）的产生会显著增加。为了早期发现这些肿瘤并进行及时治疗，需要建立一套可靠的AFP监测方案。
在本文中，我们将介绍AFP监测方案的具体步骤和注意事项。
2. AFP监测步骤
2.1. 采样
首先，需要采集患者的血液样本进行AFP检测。血液样本可以通过以下几种方式获得：
•静脉采血：通过在患者的手臂上绑扎一根绷带，然后在患者的静脉上穿刺来获取血液样本。
•皮下注射：通过使用一根细长的针头将血液抽取到注射器中。
建议使用无菌的采血器材，并确保采样过程无菌，以避免样本受到外界污染。
2.2. 检测
采集的血液样本需要送往实验室进行检测。AFP测定可以使用多种方法，包括酶免疫法、放射免疫法和化学发光法等。选择合适的测定方法取决于实验室的设备和经济情况。
在进行检测之前，需要对血液样本进行预处理，以去除可能干扰测定结果的物质。预处理步骤可以包括离心、过滤和稀释等。
2.3. 数据分析
在获得测定结果后，需要进行数据分析来判断患者的AFP水平是否异常。一般来说，正常成年人的AFP水平应低于20ng/ml。如果患者的AFP水平超过这个范围，可能存在肿瘤的风险。
然而，AFP水平也可能受到其他因素的影响，如妊娠和肝炎等。因此，在进行数据分析时，需要综合考虑患者的病史以及其他临床表现来判断是否需要进行进一步的检查。
3. AFP监测注意事项
在进行AFP监测时，需注意以下几点：
AFP监测监测方案重点和工作要求
参照《全国AFP病例监测方案》
高危AFP病例
定义
❖ 年龄小于5岁、接种 OPV次数少于3次 或服苗史不详、未 采或未采集到合格 大便标本的AFP病 例；
❖ 临床怀疑为脊灰的 病例。
要求1
❖ 市、县级成立联合调查 小组，其成员除要有熟 悉AFP监测的流行病学 专家外，至少要有一名 熟悉AFP诊断的儿科或 神经内科医生。
❖ AFP病例的诊断要点：急性起病、肌张力减弱、 肌力下降、腱反射减弱或消失。
❖ AFP不是单一的疾病，可见于不同的病因和多种 疾病。AFP监测是一种症状监测，
❖ 我们流病人员不是很有审核的责任吗？医院应该 报，报上来我们审核发现不符合AFP的定义，我 们可以排除AFP，但必须在备注里标明排除原因
三、AFP病例的种类
（以下各项仅由省级填写）
省级实验室收到标本日期：200 / / 收到标本者姓名：
粪便标本运送情况： （1）冰未融化 （2） 冰已融化或未加冰
标本重量：（1）约 （克） （2）约 （克）
九、AFP病例随访
• 在麻痹发生60天后，要及时对所报告的AFP病例 进行随访。
• 要求由县或市级专业人员亲自访视病人并仔细检 查，认真填写随访表（方案附表表6），杜绝电话 随访和委托乡、村医生或他人随访。
甲胎蛋白(AFP)标准操作规程
甲胎蛋白（AFP）标准操作规程
1.【实验目的】
为了保证癌胚抗原（CEA）可测定结果的准确性，以及可靠性。
2.【职责】
2.1 实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2 本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负
责人、科主任。
3.【样品类型及实验前准备】
3.1 样本准备：
3.1.1人血清，采集在肝素（钠或锂）的血浆或羊水样本可以在ARCHITECT AFP
检测中使用。其它抗凝血剂没有对是否适用于ARCHITECT AFP检测进行验证。
按照生产商有关血清或血浆采集管的处理指导进行。
3.1.2羊水必须在无菌的条件下，由适当的经过训练的人员，采取对胎儿以及母
体安全相关的适当预防来进行采集。明显血污的样本应该依据使用Kleihauer – Betke技术检查胎儿血液细胞的存在，和/或依据电泳，免疫电泳或其他可用技术检查胎儿血色素。为胎儿血液污染的羊水样本可能出现异常高AFP值，这可能导致检测结果的曲解。
3.1.3血清或血浆样本应该进行无菌采集，这是一种避免溶血的方式。对于母体
血清或血浆分析，血液样本应该在羊水诊断开始前进行采集。有证据表明，在羊水诊断后，在母体的血清或血浆中，出现了AFP的水平增加。
3.1.4如果检测时间超过24小时，则将血清或血浆从凝集物，血清分离器或红
细胞中取出。检测前，样品可以在2－8℃下最长7天时间。如果检测用时超过7天，则将样品贮存于－20℃或更低温度下。
为了对结果进行优化，样本应该无纤维，血红细胞，或其他微粒物质。使用前，对含有纤维，血红细胞，或其他微粒物质的样本进行离心分离，以确保结果的一致性。
(整理)江苏省AFP监测方案
附件1：江苏省急性弛缓性麻痹（AFP）病例监测方案
为进一步落实《2003-2010年全国保持无脊髓灰质炎状态行动计划》，更好地发挥急性弛缓性麻痹（以下简称AFP）监测系统的作用，特制定本监测方案。
一、监测目的
1．及时发现输入性脊灰野病毒，采取措施防止病毒传播，保持无脊灰状态。
2．及时发现脊灰疫苗衍生病毒（以下简称VDPV）及其循环，采取措施控制病毒进一步传播。
3．评价免疫工作质量，发现薄弱环节。
4．监测脊灰病毒变异情况，为调整疫苗免疫策略提供依据。
二、病例定义与分类
（一）监测病例定义
1．急性弛缓性麻痹（AFP）病例
所有15岁以下出现急性弛缓性麻痹症状的病例，和任何年龄临床诊断为脊灰的病例均作为AFP病例。
AFP病例的诊断要点：急性起病、肌张力减弱、肌力下降、腱反射减弱或消失。
常见的AFP病例包括以下疾病：
（1）脊髓灰质炎；
（2）格林巴利综合征（感染性多发性神经根神经炎，GBS）；
（3）横贯性脊髓炎、脊髓炎、脑脊髓炎、急性神经根脊髓炎；
（4）多神经病（药物性多神经病，有毒物质引起的多神经病、原因不明性多神经病）；
（5）神经根炎；
（6）外伤性神经炎（包括臀肌药物注射后引发的神经炎）；
（7）单神经炎；
（8）神经丛炎；
（9）周期性麻痹（包括低钾性麻痹、高钾性麻痹、正常钾性麻痹）；
（10）肌病（包括全身型重症肌无力、中毒性、原因不明性肌病）；
（11）急性多发性肌炎；
（12）肉毒中毒；
（13）四肢瘫、截瘫和单瘫（原因不明）；
（14）短暂性肢体麻痹。
2．高危AFP病例
年龄小于5岁、接种OPV次数少于3次或服苗史不详、未采或未采集到合格大便标本的AFP病例；或临床怀疑为脊灰的病例。
afp监测方案
AFP监测方案
引言
AFP（Alpha-fetoprotein）是一种胎儿发育过程中产生且在出生后逐渐减少的
一种蛋白质。在正常情况下，在成人体内几乎找不到AFP的存在。然而，AFP水
平的异常升高可能表明存在一些疾病，如肝癌、睾丸癌或胃肠道肿瘤等。因此，监测AFP的水平对于早期诊断和治疗这些疾病非常重要。本文将介绍一个AFP监测
方案，以帮助医生和研究人员进行有效的AFP监测。
AFP监测方案
步骤1：患者选择
在开始AFP监测之前，需要选择合适的患者群体。通常，AFP监测适用于以下情况的患者：
•高风险肝癌患者：曾经患过肝癌的患者或具有肝癌家族史的患者；
•睾丸癌患者：曾经患过睾丸癌的患者或具有睾丸癌家族史的患者；
•胃肠道肿瘤患者：曾经患过胃肠道肿瘤的患者或具有胃肠道肿瘤家族史的患者。
步骤2：抽取血样
接下来，需要抽取患者的血样进行AFP的测量。血样可以通过静脉采集或指尖采血的方式获取。静脉采集可以获得更多的血样，但指尖采血对于患者来说更为方便和痛苦较小。确保使用无菌的针头和试管来避免污染和误差。
步骤3：AFP测量
获取血样后，可以使用不同的方法来测量AFP的水平。常见的方法包括：
•酶联免疫吸附测定法（ELISA）：将血样与特定的抗体结合，然后使用酶标记的二抗来检测AFP的水平。
•胶体金法：使用胶体金颗粒标记的抗体来与AFP结合，并通过观察颜色的变化来确定AFP水平。
•荧光免疫染色法：利用荧光标记的抗体与AFP结合，并使用荧光显微镜来观察和测量AFP的水平。
步骤4：数据分析和解释
测量得到的AFP水平需要进行数据分析和解释。对于每个患者，根据其风险因素和基线AFP水平，可以设置不同的阈值来确定正常范围和异常范围。一般来说，
AFP监测方案
全国急性弛缓性麻痹（AFP）病例监测方案
为进一步落实《2003-2010年全国保持无脊髓灰质炎状态行动计划》，更好地发挥急性弛缓性麻痹（以下简称AFP）监测系统的作用，特制定本监测方案。
一、监测目的
1．及时发现输入性脊灰野病毒，采取措施防止病毒传播，保持无脊灰状态。
2．及时发现脊灰疫苗衍生病毒（以下简称VDPV）及其循环，采取措施控制病毒进一步传播。3．评价免疫工作质量，发现薄弱环节。
4．监测脊灰病毒变异情况，为调整疫苗免疫策略提供依据。
二、监测内容
（一）监测病例定义
1．急性弛缓性麻痹（AFP）病例
所有15岁以下出现急性弛缓性麻痹症状的病例，和任何年龄临床诊断为脊灰的病例均作为AFP病例。AFP病例的诊断要点：急性起病、肌张力减弱、肌力下降、腱反射减弱或消失。
常见的AFP病例包括以下疾病：
（1）脊髓灰质炎；
（3）横贯性脊髓炎、脊髓炎、脑脊髓炎、急性神经根脊髓炎；
（4）多神经病（药物性多神经病，有毒物质引起的多神经病、原因不明性多神经病）；
（5）神经根炎；
（6）外伤性神经炎（包括臀肌药物注射后引发的神经炎）；
（7）单神经炎；
（8）神经丛炎；
（9）周期性麻痹（包括低钾性麻痹、高钾性麻痹、正常钾性麻痹）；
（10）肌病（包括全身型重症肌无力、中毒性、原因不明性肌病）；
（11）急性多发性肌炎；
（12）肉毒中毒；
（13）四肢瘫、截瘫和单瘫（原因不明）；
（14）短暂性肢体麻痹。
2．高危AFP病例
年龄小于5岁、接种OPV次数少于3次或服苗史不详、未采或未采集到合格大便标本的AFP病例；或临床怀疑
为脊灰的病例。
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甲胎蛋白(AFP) 检测方法学性能验证评价报告
验证内容：正确度、重复精密度、中间精密度、线性范围、临床可报告范围及参考区间的确认验证人员：王绮华、杨俊
一检测系统信息
项目：甲胎蛋白(AFP)
仪器名称: 雅培全自动免疫分析仪
仪器型号: I2000SR
试剂及厂商：雅培公司
检测方法：化学发光微粒子免疫检测法
二厂商提供的相关参数
三验证过程
1 正确度
1.1 目的：评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。通过实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的准确性。
1.2 评价方法：参加卫生部临检中心的室间质评，本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标准，最近一次参加卫生部室间质评卫生部质控值。
1.3 结果判断方式：<1/2 CLIA’88
正确度验证试验数据记录表
2 精密度
2.1 重复精密度
2.1.1 目的：考察仪器检测方法的随机误差
2.1.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20个结果，判断这20个独立结果间的
一致程度
2.1.3 评价方法：选择新鲜混合血清标本（病人高值、低值）各20份，测量前先定标，再做
质控，质控结果在控制范围内，连续重复测定20次，计算SD，CV，得到重复
性精密度。
2.1.4 标本来源：高、低值标本均为混合血清。
2.1.5 结果判断方式：<1/4C LIA’ 88 6.25%
重复性精密度验证试验数据记录表
2.2 中间精密度：
2.2.1 目的：考察目前实验室检测方法中间精密度。
2.2.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20天，取得20个结果，判断这20个
独立结果间的一致程度。
2.2.3 评价方法：取一个月的室内质控值（高值、低值）计算CV、SD，得到批间精密度。
2.2.4 结果判断方式：<1/3 CLIA’ 88 8.33%
中间精密度验证试验数据记录表
3 线性范围（Linearity range, AMR）
3.1 目的：在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围
检测结果的准确性。
3.2 标本要求：
高值标本可使用病人混合血清。一般地样本的高值推荐在AMR上限的90％，低值推荐在AMR下限的10％，但这不是绝对的规则。最好有5个或以上的系列浓度的实验样品，数据点数不得低于4个，浓度范围遍布整个预期可报告范围。
3.3 评价方法：
a) 以50ul为一个体积单位，将高值标本与低值标本以3：1、2：2、1：3的体积比例混合，
加上高低值标本共5个标本按照由低到高测定，记录结果。
b) 线性统计：以直接测定结果计算得出的相应浓度为X，以通过稀释测定结果为Y，回归方
法学统计，得到a、b及r值。
3.4 结果判断：
①若a在0.97-1.03范围内，r2>0.95，作b与0有无显著性差异的t检验，如果P>0.05，则可直接判断线性范围在实验已涉及浓度。
②若a不在0.97-1.03范围内，b较大，舍去高值或低值组数据，另做回归统计，直至缩小的分析范围其回归方程的a和b的判断符合要求，则该范围为线性范围。
线性范围验证试验数据记录表
4 临床可报告范围（Clinical reportable range ,CRR）
4.1 目的: 分析各稀释浓度的线性关系，确定最高稀释倍数，从而确保高值样本报告的准确
性。
4.2 原理：未经过任何处理的病人检验标本，通过检测系统检测得到的可靠结果范围。
4.3 方法：结合本实验室制定的AFP的可报告范围（CRR）及该项目的检测范围，从而确定
该项目的最大稀释倍数，予以验证。
临床可报告范围试验数据记录表
4.4 结论：
AFP临床可报告范围0.4-1000ng/ml，最大稀释倍数50倍，当结果>1000ng/ml时，用肿瘤标志物稀释液进行50倍稀释，结果乘以稀释倍数，若50倍稀释结果仍超出报告>50000ng/ml。
5 灵敏度:
6 干扰物质
干扰物质对本项目的影响大小沿用厂商参数，详细内容见本项目SOP。
7 参考区间（Reference intervals）:
7.1 目的：选择20份体检合格的健康人标本，在检测系统上进行测定，对结果进行统计并与仪器说明书提供的参考区间进行比较。
7.2 方法：收集20 例正常健康人血清标本及时检测，要求其年龄，性别等均匀分布，对参考范围进行验证，只允许10%的数据超过所验证的参考范围，否则需建立参考范围。
验证范围：<13.4ng/ml
7.3 标本的要求
1) 体检合格健康的筛选者
2) 脂血、溶血均勿用
7.4 结果判断方式：R≥90%即合格
生物参考区间数据及验证记录表
7.5 结论：
若本实验室所检测的20个标本其检测结果个均在验证区间<13.4ng/ml内，故本实验室参考区间验证通过。
四总结(Summary)
甲胎蛋白试剂盒在雅培I2000免疫分析仪检测系统的精密度、正确度、线性范围、可报告范围及生物参考区间通过验证。通过以上各项性能验证室验的结论，雅培I2000免疫分析仪检测系统达到检测要求，保证检验结果准确可靠，可以满足临床需求。