不同品种马铃薯茎尖脱毒培养技术研究

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李海亮 郑 秀芳 张芬琴 ：不 同品种 马铃 薯 茎尖脱毒 培养技 术研 究
培 养 基 编 号
培 养 基 配 方 （ｍｇ／Ｌ）
２ 实验 结 果
２．１ 消毒 方 法 对 外 植 体 的 影 响 组织 培养 中外植 体 消毒 多采 用第 一 种处 理方法 ，但 是在 本 实验 中采 用 此种 方法 消 毒后 ，接种 的茎
湿 ，置于常 温下进行 培养 ；当芽 长到 ２－３ｃｍ时 ，切取 芽段放 人烧 杯 内 ，加 少 许洗 衣粉 ，流水 冲洗 ２ｈ以 上 ，采 取 ２种 方 法进 行 消毒 处 理 ：７５％的酒 精 浸 ５ｓ，无菌 水 洗 两 次 ，再 用 ０．１％的升 汞浸 泡 ８￣１０ｍｉｎ， 无菌 水 冲洗 ６～７次 ；０．１％的 升汞 浸泡 ８ｍｉｎ，期 间更换 １次升 汞 ，无 菌 水 冲洗 ６－７次．在超 净 工作 台上 ， 用 解剖针 仔细 剥离直 到现 出圆滑 生长点 ，剖取茎 尖接种 于 ４种 不 同培养基 上 （如表 １所示 ） １．３ 培养 条件
茎 尖培养 （分生组 织培养 ）是 许多植 物脱 毒 的重要手 段 ［２］，大 部分 病 毒不能 感染 分生 组织 ，因此分 离茎 尖分 生组 织进 行人 工 培养 ，生 产无 病 毒植 株 ，再 以无 病毒 植株 为材 料 ，进 行 快速 繁 殖是 目前 国际 上 防治 马铃 薯病 毒病 、提高 马铃 薯产 量和 质量 的有 效方 法 ．本 文 以 ５个 品种 的马 铃薯 茎尖 为外 植 体 ， 研究 了不 同激 素及配 比对马铃 薯茎 尖诱 导愈 伤组织 和诱导 愈伤组 织分 化成苗 的影 响．
愈伤组织 培养 ７ｄ后开始 分化 出苗 ，此时开 始统计 的愈伤组 织分 化成 苗的情 况如表 ４、表 ５所示 ．由 表 ４可见 ：ＩＩＩ号 、ＩＶ号 培 养基 中愈 伤组 织 的分化 率较 高 ，分化 出苗所 需 时间 较短 ；Ｉ号 、ＩＩ号 培养 基 中愈 伤组织 的分化率较 低 ，分化 出苗所 需时 间较长．由表 ５ ｇＥ ：克 新 ６号愈伤 组织在 四种培 养基 中均分 化 出苗 ，其 他 三个 品种愈 伤组 织分 化 出苗率则 不高 ，克 星 １号 茎尖 愈伤 组织 只在 ＩＩＩ号 培养基 中分化 出 苗，在 其他培养 基 中均未分 化 ，而 黑美人 茎尖 愈伤组 织在 ４种 培养基 中均 未 出现 分化．
尖 ９０％以上 在 ２ｄ后 就褐 化直 至变 黑 ，经 多次试 验发 现直 接采 用 ０．Ｉ％ＨｇＣＩ消毒效 果 最好 ，因此本 文 中 所 采用 的消毒方 法为 第二种 ．一 般来 说 ，茎尖 培养 的外 植体 茎尖 越 大 ，越 易成 活 ，但 病毒 越 难祛 除．本 实验 中切取 ０．１￣０．５ｍｍ带 １－２个 叶原基 的茎尖作 为接种 材料． ２．２ 不 同培 养基诱导愈 伤组 织的 能力
１ 实 验 材 料 与 方 法
１．１ 实验 材 料 克新 １号 、克新 ６号 、大西 洋 、黑 美 人 、夏波丽 马铃薯薯 块 均 由甘肃 张 掖市农 科所提 供．
１．２ 实验 方 法 用 ｌ％的硫 脲和 ５ｍｇ／１的 ＧＡ３浸种 ５ｍｉｎ，以便 打破休 眠 ；然 后将薯 块埋 入盛 有细沙 的盆 内 ，喷水保
第 ２７卷第 ２期 （２０１１）
河 西学 院学报
Ｖｏ１．２７ Ｎｏ．２ （２０１１）
不 同品种马铃 薯茎尖脱毒培 养技术研究
李 海 亮 郑 秀 学 院 ，甘肃 张 掖 ７３４０００）
摘 要 ：本 文以不 同品种 马铃 薯为 实验材料 ，研 究了不 同配比的培养 基对马铃 薯茎尖 出愈 率
和愈伤组织分化 的影响．实验结果表 明 ：最佳诱导愈伤组 织培 养基 为 ：Ｍｓ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ
ＧＡ ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ； 最佳 诱 导 愈 伤 组 织 分 化 成 苗 培 养 基 为 ：ＭＳ＋ １．０ ｍｇ／Ｌ ＢＡ ＋０．１ ｍｇ／Ｌ Ｉ从 ，但
诱 导 分 化 成 苗所 需时 间 较 其他 的较 长．
关键 词 ：马铃薯；脱毒 ；组织培养 ；茎尖培养
中图分类号 ：Ｑ８１３．１ 文献标 识码 ：Ａ
文章编 号 ：１６７２—０５２０ （２０１１）０２—０ｏ４４—０６
马铃薯 （学 名 ：Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）营 养丰 富 、适 应 性广 、增 产 潜力 大 ，是 一种 重要 的经 济 作物 ， 马铃薯 属无性 繁殖 系 ，长期 的无 性 繁殖 造成 病毒 累积 ，品质 退化 、产 量下 降．目前 已在 马铃薯 中发 现 了 多种病 毒 和类病 毒 ，其 中危 害较 严重 的有 Ｙ病 毒 （ＰＶＹ）、卷 叶病毒 （ＰＬＲＶ）、Ａ病毒 （ＰＶＡ）及 Ｘ病 毒 （ＰＶＸ）ｃ”．
培 养基 的 配方 见表 １，基本 培 养基 为 ＭＳ培 养基 ，ｐＨ值 为 ５．８－６．０，蔗糖 、琼 脂 含 量分 别 为 ３０ｇ／Ｌ
收稿 日期 ：２０１０－ｌ１—０４ 基金 项 目 ：河 西 学 院校 级 专项 基金 ． 作者简介 ：李海亮 （１９８２一），男，甘肃 天水人 ，讲师 ，硕 士，主要从 事植 物生理 学研 究．
表 ２ 不 同培 养基诱 导愈伤 组织 的能力
由表 ２可 见 ，ＩＩＩ号 和 ＩＶ号 培养 基诱 导愈 伤组 织率 较 高 ，分 别 为 ７３．３％和 ６０％，Ｉ号培 养基 诱 导率 最低 ，仅 为 ４６．７％．ＩＩＩ号 培养 基诱 导所 需时 间最短 ，１４ｄ即诱导 出愈伤 组织 ，ｌ号最 慢 ，需 ２１ｄ时间 ；Ｉ 号 和 ＩＶ号 培养基 上所接种 的部 分材 料基 部长 出不定 根．由表 ３可 见 ，克新 １号和夏 波丽 在 ＩＩＩ号培 养基 中诱 导 出愈率最高 ；克新 ６号 和黑美人 在 ＩＶ号培 养基 中诱 导 出愈率 最 高 ；大西洋 在 ＩＩ号 培养 基 中诱 导 出愈 率最高． ２．３ 不 同培养基 对愈 伤组 织分化 出苗 的影响