稻草秆腐解菌产酶条件优化及菌种鉴定

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秸秆腐熟菌剂的选择与应用1

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❖ 选择与使用秸秆腐熟菌剂目的是：通过此类产品中的微生物及其产生的酶来加速秸秆的腐解，以此实现秸秆还田快速腐解，提高土壤有机质和钾氮等养分含量，培肥土壤。
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❖ 本文就秸秆腐熟剂的选择和应用中涉及的产品菌种组成、质量要求、使用方式与效果评价等问题，以及目前我国腐熟菌剂的登记管理、生产现状与研发方向等进行简要阐述。
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❖ 为此，生产上应配施适量氮磷钾肥。如直接还田，每公顷用量为3750kg（250kg/亩）时，需配施 225kg（15kg/亩）碳酸氢铵。玉米秸秆还田时，除配施225kg碳酸氢铵外，还可配施225～300 kg（15 ～20kg/亩）过磷酸钙，硫酸钾10kg。
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❖ 目前，进行研究的分解纤维素的细菌种类远不如真菌多，但在土壤等环境中的数量却不少，我国土壤中所含的分解纤维素的细菌为104／g干土。分解能力较强的有食纤维菌（Cytophaga）、生孢食纤维菌（Sporocytophaga）、多囊纤维菌（Polyangium cellulosum）等。
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❖ 不同的土壤肥沃程度对纤维素分解菌的分布影响很大。贫瘠土壤中主要是真菌，较肥的土壤则以细菌为主。在有氧中温条件下，强烈分解纤维素的真菌是木霉属（Trichoderma）、青霉属（Penicillium ）和曲霉属（Aspergillus）的一些种，其中尤以木霉属受到充分重视。
处理秸秆的微生物种类
❖ 自然界中的许多菌类可以腐蚀和分解秸秆、树叶及树木等纤维物质，这些菌种包括一些霉菌（曲霉属、木霉属、青霉属等）、细菌、食用菌类及白腐真菌等。

常见秸秆腐熟菌剂及其使用方法

常见秸秆腐熟菌剂及其使用方法秸秆腐熟菌剂是采用现代化学、生物技术，经过特殊的生产工艺生产的微生物菌剂，是利用秸秆加工有机肥料的重要原料之一。

秸秆腐熟菌剂由能够强烈分解纤维素、半纤维素及木质素的嗜热、耐热的细菌、真菌和放线菌组成。

目前秸秆腐熟剂的产品执行GB2087—2006或者NY609—2002标准，对菌数、纤维素酶活都有具体要求。

秸秆腐熟剂在适宜的条件下，微生物能迅速将秸秆堆料中的碳、氮、磷、钾、硫等分解矿化，形成简单有机物，从而进一步分解为作物可吸收的营养成分。

同时，秸秆在发酵过程中产生的热量可以消除秸秆堆料中的病虫害、杂草种子等有害物质。

秸秆腐熟菌剂无污染，其中所含的一些功能微生物兼有生物菌肥的作用，对作物生长十分有利。

近几年由于国家十分重视秸秆资源的利用、在全国开展了有机质提升试点项目，大大促进了腐熟剂产业的发展。

目前已获登记的腐熟剂产品有46个，大多数以处理畜禽粪便与作物秸秆混合物为主，今后为了更好保证处理作物秸秆的效果，腐熟剂登记将分“适用畜禽粪便类”和“适用作物秸秆类”。

下面是我国已经在农业部获得登记的一些腐熟剂产品的使用方法，供农民或有机肥料企业参考。

一、腐秆灵(一）产品简介腐秆灵是广东省高明市绿宝科技有限公司引进先进生物工程技术开发生产的微生物菌种。

它含有数量可观的分解纤维素、半纤维素、木质素和多种微生物群，这些微生物既有嗜热、耐热的菌种，也有适应中温的菌种。

用它处理水稻、小麦、玉米和其它作物秸秆，可通过上述微生物作用，加速其茎秆的腐烂，使之转化成优质的有机肥。

(二）使用方法堆肥法先按每千克鲜秸秆用“腐秆灵”0.3〜0.4kg，兑水至35〜50L备用。

然后把秸秆平铺于地面，铺成宽约1.5m，高约15cm,长约3m的秸秆堆层，再取适量已兑水的“腐秆灵”均均匀淋或泼于秸秆上。

继续在原秸秆上铺第二层15cm厚秸秆，再淋一次已兑水的“腐秆灵”溶液。

以铺满十层为一堆，堆完后盖塑料布或糊上泥浆。

实验二生产菌株发酵条件的优化 - 副本

实验二生产菌株发酵条件的优化实验时间：10.23 10.25 实验班级：生物1601B 实验组号： 6实验报告人：同组成员：刘文白李仕清1、实验目的（1）了解发酵条件对产物形成的影响，用单因子试验找出筛选所得菌株的最佳发酵条件。

（2）掌握发酵培养基的配制原则，熟悉用正交试验优化发酵培养基的方法。

2、实验原理发酵条件对产物的形成有着非常重要的影响，其中培养基pH、培养温度和通气状况是三类最主要的发酵条件。

培养基pH 一般指灭菌前的pH，可通过酸碱调节来控制，由于发酵过程中pH会不断改变，所以最好用缓冲溶液来调节；通气状况可用培养基装量和摇床转速来衡量，另外，瓶口布的厚薄也会影响到氧气的传递，为了防止杂菌污染，瓶口布以8层纱布为好。

发酵培养基是指大生产时所用的培养基，由于发酵产物中一般含有较高比例的碳元素，因此培养基中的碳源含量也应该比种子培养基中高，如果产物的含氮量高，还应增加培养基中的氮源比例。

但必须注意培养基的渗透压，如果渗透压太高，又会反过来抑制微生物的生长，在这种情况下可考虑用流加的方法逐步加入碳氮源。

培养基组分对发酵起着关键性的影响作用。

工业发酵培养基与菌种筛选时所用的培养基不同，一般以经济节约为主要原则，因此常用廉价的农副产品为原料。

选择碳源时常用山芋粉、麸支、玉米粉等代替淀粉。

而用豆饼粉、黄豆粉等作为氮源。

此外，还应考虑所选原料不至于影响下游的分离提取工作。

由于这些天然原料的组分复杂，不同批次的原料成分各不相同，在进行发酵前必须进行培养基的优化试验。

发酵培养基中的原料多是大分子物质，微生物一般不能直接吸收，必须通过胞外酶的作用后才能被利用，所以是一些“迟效性”营养物质。

而微生物分泌的胞外酶有不少是诱导酶，为了使发酵起始阶段微生物能快速繁殖，可适当在培养基中添加一些速效营养物。

3、实验材料（1）菌种筛选得到的高产α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌（2）培养基①种子培养基肉汤培养基：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g，蒸馏水100mL，pH7.2～7.4，121℃灭菌20Min。

降解稻草纤维素真菌的初步研究

以Ａ４，Ａ５降解秸秆纤维素能力较强；Ａ２，Ｂ１降解秸秆半纤维素能力较强。Ａ４，Ｂ１菌株的稻草粉发酵２２２１３１３１２２３１降解液中还原糖质量分数分别达到９．４４０６７４ｍｇ稻草粉；Ａ２，Ｂ２菌株的稻草粉发酵降解液中木糖质量４１，９．Ｃ０２ｇ３１３１分数分别达到１．１，１．２ｇ稻草粉。可综合其各自发酵的优势，将其作为初始菌株进行进一步的优化。１２８０２１１ｍ／９ｇ关键词：稻草秸秆；霉菌；纤维素；半纤维素；还原糖；木糖中图分类号：Ｑ１８５文献标志码：Ａｄｉ０３６／ｓｎ１７ — ６６（）．１．．１ｏ：１．９９ｉ．１９４Ｘ２１００３ｊｓ６０１
ｒｓｅｔｅ．ｎ｝ｏｔｔｏｙｓｎｆｍｎａｉｒｔｏｔｉｓＡ２ｎ３１ｒｃ１２，１．１９ｍ／ｅｐｃｖｌＡｄｔｅｃｎｅｆｘｌｅｉｅｅｔｏｂｏｆｓａ３１ａｄＢ２ｅｈＩ．ｌ０ｉｙｌｎｏｒｔｎｈｒｎａ８２１ｇ２ｇ
１１培养基．．２
（１）菌源增殖培养基目。马铃薯蔗糖琼脂培养基（Ｄ）：马铃薯２０ｇＰＡ０，蔗糖２，琼脂２，水０ｇ０ｇ１００ｍ０Ｌ，ｐＨ值自然，１１℃ ，３ｎ灭菌（２０ｍｉ不加琼脂为液体培养基）。改良ＰＡ培养基：ＰＡ，２ＤＤ％稻草浸提液（０ｇ１稻草粉放人５０ｍＬ水中搅拌均匀，于８ ℃水浴中００

稻秆纤维素降解菌的分离筛选和降解性能研究

ｉｌｉｔｙｏｆＣｅｌｌｕｌｏｓｅ－ＤｅｇｒａｄｉｎｇＳｔｒａｉｎｓｆ０ｒＲｉｃｅＳｔｒａｗ
ＧｕＴｉｎｇ，ＳｈｅｎＷｅｉｓｈｏｕ，ＺｈｏｎｇＷｅｎｈｕｉ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＮａｎｊｉｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００４６，Ｃｈｉｎａ）
第１１卷第１期
南京师范大学学报（工程技术版）
Ｖｏ１．１ｌＮｏ．１
２０１１年３月ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＮＡＮＪＩＮＧＮＯＲＭＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧＡＮＤＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＥＤＩＴＩＯＮ）
Ｍａｒ，２０１１
稻秆纤维素降解菌的分离筛选和降解性能研究
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｒｅｅｈｉｇｈ－－ｅｆｉｃｉｅｎｔｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－－ｄｅｇｒａｄｉｎｇｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｓｃｒｅｅｎｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｅｄｓｏｉｌｏｆｐａｄｄｙｆｉｅｌｄｗｉｔｈｔｈｅｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ—ｉｎｄｕｃｅｄｍｕｔａｔｉｏｎ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｏｎｅｂａｅｔｅｒｉａｌｓｔｒａｉｎｎａｍｅｄａｓＹＢ２０ａｎｄｔｗｏｆｕｎｇａｌｓｔｒａｉｎｓＦ９ａｎｄＹＦ１５．ＴｈｅｓｔｒａｉｎｏｆＹＢ２０ｗａｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｓａＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓｓｐ，ｔｈｅｓｔｒａｉｎＦ９ａｎｄＹＦ１５ｗｅｒｅｂｏｔｈｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄａｓＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅｓｐ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｃｅｌｌｕｌａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｔｈｒｅｅｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ，ｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅ

本科生物医学工程选题

1.水稻HD3外源基因花粉逃逸能力2.接种AM真菌对黄芪生长及有效成分的影响3.丛枝真菌对食叶草生长发育影响4.红心火龙果全息蛋白质组提取方法优化5.拟南芥ANNAT4基因植物表达载体的构建6.四环素浓度对大豆植株生长的影响7.拟南芥GSNOR1基因的克隆及其序列分析8.应用植物凋落物分解评估溪流生态系统健康研究进展9.AMF复合菌剂对水稻育苗影响10.香蕉果皮发酵富钾液肥方法优化11.一株马铃薯晚疫病拮抗菌C1-17发酵条件优化12.甜菜M14品系愈伤组织的诱导研究13.氯氟吡啶酯对稻田土壤真菌多样性的影响14.城市厨余垃圾生产高品质园艺用土研究进展15.拟南芥IPUT1基因植物表达载体的构建16.一株类芽孢杆菌菌株对烟草生长表型的影响17.一株马铃薯晚疫病拮抗菌发酵条件优化18.大城市厨余垃圾资源化处理研究进展19.转基因抗虫水稻对土壤细菌的影响20.烯禾啶对肇东苜蓿生长的影响21.外源苯甲酸对紫苏种子发芽和幼苗生长的影响22.拟南芥GSNOR1基因植物表达载体的构建23.干旱胁迫下甜菜M14品系表型分析24.不同海拔梯度小叶章种群土壤真菌群落结构和多样性25.拟南芥IPUT1基因的克隆及其序列分析26.Cd胁迫下丛枝菌根真菌与印度梨形孢对土壤酶活的影响27.印度梨形孢产功能酶的初步研究28.不同果肉颜色火龙果全息蛋白质组提取技术优化29.水稻HD2外源基因对土壤微生物的水平转移30.拟南芥ANNAT4基因原核表达载体的构建31.鸡胚原代细胞培养生长曲线模型研究32.拟南芥SMXL1基因的克隆及其序列分析33.水稻食味品质遗传研究进展34.氮沉降对红松人工林土壤碳降解相关酶活性的影响35.北方水稻耐盐碱QTL定位分析36.植物激素对汉麻愈伤组织诱导的影响研究37.BvM14-RIN4基因真核表达载体的构建以及互作蛋白预测38.印度梨形孢提高植物抗逆能力的研究进展39.稻花香2号与龙粳31香味基因的差异性分析40.不同pH条件下耐酸真菌产功能酶初步研究41.龙粳31香味基因OsBadh2的定点敲除42.拟南芥BIN2基因的克隆及其序列分析43.拟南芥IPUT1基因原核表达载体的构建44.甜菜M14品系转录因子WOX8转录激活活性分析45.好氧反硝化细菌的筛选分离鉴定及其脱氮性能研究46.丛枝菌根真菌对大豆植株Cd转运和累积的影响47.汉麻愈伤组织的诱导和分化研究48.一个玉米蛋白酶抑制剂基因克隆与生物信息学分析49.利用花药培养技术创建稻花香2号与空育131杂交衍生的双单倍体群体50.产L-肉碱的菌种筛选及发酵条件的优化51.利用测序定位分析亚麻抗白粉病基因52.不同激素对甜菜愈伤组织诱导的影响53.益生菌发酵果蔬汁营养成分及功能特性的研究进展54.不同温度、时间、IPTG和菌种浓度对丁肝抗原蛋白表达量的影响55.重组鸡EED基因在大肠杆菌中高效表达的基因优化设计56.甜菜BvEXP-A10-like基因的克隆及分析57.拟南芥SMXL1基因原核表达载体的构建58.水稻产量相关性状遗传研究进展59.一株贝莱斯芽孢杆菌X3-2抑菌功能研究60.模拟氮沉降对土壤氨基糖影响的研究进展61.AMF提高植物抗铅胁迫的研究进展62.精喹禾灵对肇东苜蓿生长的影响63.重组人铁蛋白在大肠杆菌中高效表达的基因优化设计64.利用定点改变技术修饰空育131中的NPT1基因65.高产蛋白紫苏品种选育66.拟南芥BIN2基因植物表达载体的构建67.一株马铃薯晚疫病拮抗菌X3-2发酵条件优化68.不同海拔小叶章种群土壤酶活性69.红松人工林土壤碳氮转化酶对氮沉降的响应70.镉胁迫下异形根孢囊霉对汉麻抗逆性酶活性的影响71.甜菜原生质体制备工艺的优化72.甜菜根腐病源菌分离鉴定73.不同海拔梯度小叶章种群土壤理化性质74.一株马铃薯晚疫病拮抗枯草芽孢杆菌分离鉴定75.高寒地区厨余垃圾生产EM肥菌群变化分析76.沙棘真菌分离鉴定77.耐酸微生物抗重金属毒性的研究进展78.吡氟酰草胺对不同土壤微生物群落结构影响79.不同浓度TiO2对甜菜M14品系幼苗生长的影响80.甜菜愈伤组织诱导的激素筛选研究81.玉米芯腐熟剂--开创复合菌剂新未来（创新创业成果）82.氮沉降背景下森林土壤微生物多样性的研究进展83.玉米自交系Mo17蛋白酶抑制剂基因原核表达载体构建84.玉米丝氨酸蛋白酶抑制剂原核表达载体构建85.定向改良水稻第8染色体香味基因的TALEN载体的构建86.枯草芽孢杆菌分离鉴定87.半纤维素酶高产菌株的筛选88.利用测序分析亚麻自然群体的遗传结构89.长白山不同海拔梯度土壤理化性质的变化90.甜菜M14品系叶片愈伤组织的诱导91.一株耐锰真菌的分子鉴定及对重金属耐受能力的初步研究92.水稻HD1外源基因花粉逃逸能力93.AMF复合菌剂对水稻育苗影响94.香蕉果皮发酵富钾液肥方法优化95.一株马铃薯晚疫病拮抗菌C1-17发酵条件优化96.甜菜M14品系愈伤组织的诱导研究97.氯氟吡啶酯对稻田土壤真菌多样性的影响98.城市厨余垃圾生产高品质园艺用土研究进展99.拟南芥IPUT1基因植物表达载体的构建100.一株类芽孢杆菌菌株对烟草生长表型的影响101.一株马铃薯晚疫病拮抗菌发酵条件优化102.大城市厨余垃圾资源化处理研究进展103.转基因抗虫水稻对土壤细菌的影响104.烯禾啶对肇东苜蓿生长的影响105.外源苯甲酸对紫苏种子发芽和幼苗生长的影响106.拟南芥GSNOR1基因植物表达载体的构建107.干旱胁迫下甜菜M14品系表型分析108.不同海拔梯度小叶章种群土壤真菌群落结构和多样性109.拟南芥IPUT1基因的克隆及其序列分析110.Cd胁迫下丛枝菌根真菌与印度梨形孢对土壤酶活的影响111.印度梨形孢产功能酶的初步研究112.不同果肉颜色火龙果全息蛋白质组提取技术优化113.水稻HD2外源基因对土壤微生物的水平转移114.拟南芥ANNAT4基因原核表达载体的构建115.鸡胚原代细胞培养生长曲线模型研究116.拟南芥SMXL1基因的克隆及其序列分析117.水稻食味品质遗传研究进展118.氮沉降对红松人工林土壤碳降解相关酶活性的影响119.北方水稻耐盐碱QTL定位分析120.植物激素对汉麻愈伤组织诱导的影响研究121.利用花药培养技术创建稻花香2号与空育131杂交衍生的双单倍体群体122.产L-肉碱的菌种筛选及发酵条件的优化123.利用测序定位分析亚麻抗白粉病基因124.不同激素对甜菜愈伤组织诱导的影响125.益生菌发酵果蔬汁营养成分及功能特性的研究进展126.不同温度、时间、IPTG和菌种浓度对丁肝抗原蛋白表达量的影响127.重组鸡EED基因在大肠杆菌中高效表达的基因优化设计128.甜菜BvEXP-A10-like基因的克隆及分析129.拟南芥SMXL1基因原核表达载体的构建130.水稻产量相关性状遗传研究进展131.一株贝莱斯芽孢杆菌X3-2抑菌功能研究132.模拟氮沉降对土壤氨基糖影响的研究进展133.AMF提高植物抗铅胁迫的研究进展134.精喹禾灵对肇东苜蓿生长的影响135.重组人铁蛋白在大肠杆菌中高效表达的基因优化设计136.利用定点改变技术修饰空育131中的NPT1基因137.一株马铃薯晚疫病拮抗枯草芽孢杆菌分离鉴定138.高寒地区厨余垃圾生产EM肥菌群变化分析139.沙棘真菌分离鉴定140.耐酸微生物抗重金属毒性的研究进展141.吡氟酰草胺对不同土壤微生物群落结构影响142.不同浓度TiO2对甜菜M14品系幼苗生长的影响143.甜菜愈伤组织诱导的激素筛选研究144.玉米芯腐熟剂--开创复合菌剂新未来（创新创业成果）145.氮沉降背景下森林土壤微生物多样性的研究进展146.玉米自交系Mo17蛋白酶抑制剂基因原核表达载体构建147.玉米丝氨酸蛋白酶抑制剂原核表达载体构建148.定向改良水稻第8染色体香味基因的TALEN载体的构建149.枯草芽孢杆菌分离鉴定150.半纤维素酶高产菌株的筛选151.利用测序分析亚麻自然群体的遗传结构152.长白山不同海拔梯度土壤理化性质的变化153.甜菜M14品系叶片愈伤组织的诱导154.一株耐锰真菌的分子鉴定及对重金属耐受能力的初步研究155.水稻HD1外源基因花粉逃逸能力156.水稻HD3外源基因花粉逃逸能力157.拟南芥ANNAT4基因的克隆及其序列分析158.分子标记在水稻遗传育种中的应用159.云南樟叶精油微波法提取及抑制活性研究160.黑龙江中央站黑嘴松鸡国家级自然保护区不同森林类型土壤微生物功能多样性分析161.水稻HD4外源基因对土壤微生物的水平转移162.甜菜GRAS转录因子全基因组家族鉴定及生物信息学分析163.利用分离群体定位分析亚麻抗白粉病基因164.异丙甲草胺对肇东苜蓿生长的影响165.农业对源头溪流底栖动物群落结构与功能的影响166.烯草酮对肇东苜蓿生长的影响167.世界三大黑土区利用和保护措施的论述168.模拟氮沉降对三江平原小叶章湿地土壤微生物碳代谢的影响169.接种AM真菌对黄芪生长及有效成分的影响170.丛枝真菌对食叶草生长发育影响171.红心火龙果全息蛋白质组提取方法优化172.拟南芥ANNAT4基因植物表达载体的构建173.四环素浓度对大豆植株生长的影响174.拟南芥GSNOR1基因的克隆及其序列分析175.应用植物凋落物分解评估溪流生态系统健康研究进展176.高产蛋白紫苏品种选育177.拟南芥BIN2基因植物表达载体的构建178.一株马铃薯晚疫病拮抗菌X3-2发酵条件优化179.水稻基因gfr分子检测体系及其应用180.不同海拔小叶章种群土壤酶活性181.红松人工林土壤碳氮转化酶对氮沉降的响应182.镉胁迫下异形根孢囊霉对汉麻抗逆性酶活性的影响183.甜菜原生质体制备工艺的优化184.甜菜根腐病源菌分离鉴定185.不同海拔梯度小叶章种群土壤理化性质186.拟南芥ANNAT4基因的克隆及其序列分析187.分子标记在水稻遗传育种中的应用188.云南樟叶精油微波法提取及抑制活性研究189.黑龙江中央站黑嘴松鸡国家级自然保护区不同森林类型土壤微生物功能多样性分析190.水稻HD4外源基因对土壤微生物的水平转移191.甜菜GRAS转录因子全基因组家族鉴定及生物信息学分析192.利用分离群体定位分析亚麻抗白粉病基因193.异丙甲草胺对肇东苜蓿生长的影响194.农业对源头溪流底栖动物群落结构与功能的影响195.烯草酮对肇东苜蓿生长的影响196.世界三大黑土区利用和保护措施的论述197.模拟氮沉降对三江平原小叶章湿地土壤微生物碳代谢的影响198.BvM14-RIN4基因真核表达载体的构建以及互作蛋白预测199.印度梨形孢提高植物抗逆能力的研究进展200.稻花香2号与龙粳31香味基因的差异性分析201.不同pH条件下耐酸真菌产功能酶初步研究202.龙粳31香味基因OsBadh2的定点敲除203.拟南芥BIN2基因的克隆及其序列分析204.拟南芥IPUT1基因原核表达载体的构建205.甜菜M14品系转录因子WOX8转录激活活性分析206.好氧反硝化细菌的筛选分离鉴定及其脱氮性能研究207.丛枝菌根真菌对大豆植株Cd转运和累积的影响208.汉麻愈伤组织的诱导和分化研究209.一个玉米蛋白酶抑制剂基因克隆与生物信息学分析。

菌种鉴定

菌种鉴定篇一：菌种鉴定中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC是我国唯一的国家级工业微生物菌种保藏管理中心，有近三十年菌种分类鉴定的历史，拥有先进的生物科学仪器和从事分类鉴定的专业化人员队伍。

CICC承担全国工业微生物菌种的委托鉴定工作，所提供的菌种鉴定与评价技术服务获得“国家工商总局（SCIC）经营许可”，为国内科研机构、大专院校和生产企业等提供微生物菌种鉴定服务，涉及细菌、酵母、放线菌和丝状真菌等多类微生物。

菌种鉴定手段包括形态学观察、生理生化特性鉴定、 BIOLOG碳源自动分析鉴定、分子生物学鉴定、API细菌数值鉴定、功能性分析及功能基因、RAPD、SSCP、TLC薄层层析、全细胞脂肪酸分析鉴定、（G＋C）mol％测定、DNA/DNA同源性测定等。

鉴定项目序号服务项目菌种类别1 纯菌种鉴定（包含形态、理化、分子）细菌、酵母、放线菌、丝状真菌2 功能基因鉴定（pheS、gryA、atpD等）乳杆菌、芽胞杆菌、双歧杆菌3 产品微生物解析――4 产品污染菌种鉴定――5 菌群分析及纯种分离――6 细胞壁化学组分分析（氨基酸）细菌、放线菌7 细胞壁化学组分分析（糖）细菌、放线菌8 DNA（G+C ）mol％含量细菌、放线菌9 DNA/DNA杂交细菌、酵母、放线菌、丝状真菌 10 脂肪酸分析细菌、放线菌11 其它――鉴定手段（1）常规鉴定常规鉴定内容有形态特征和理化特性。

形态特征包括显微形态和培养特征；理化特性包括营养类型、碳氮源利用能力、各种代谢反应、酶反应和血清学反应等。

（2）BIOLOG碳源自动分析鉴定BIOLOG鉴定系统以微生物对不同碳源的利用情况为基础，检测微生物的特征指纹图谱，建立与微生物种类相对应的数据库。

通过软件将待测微生物与数据库参比，得出鉴定结果。

该系统已获美国FDA认可，已逐步应用于食品和饮品企业、环保、海洋生物/水产品、制药、农业微生物、生物治理、化妆品、临床等领域的微生物鉴定试验中。

白腐菌Funaliatrogii以稻草进行固体发酵产漆酶的研究

表现为很快失去韧性，强烈收缩，最终呈破裂或颗粒状，在腐朽的最后阶段表现为残留木材变形、易碎、块状、褐色。木材腐朽真菌中只有１％左右的真菌引起褐色腐朽，绝大多数０
为多孔菌，要以纤维素酶作用于生长基质。腐朽典型的特征是菌丝主要在木材细胞的次主软
纤维素和木质素）均被降解，木材逐渐丧失韧性，软而多孔或多层，通常比原木的颜色浅。
腐朽后期，木材呈线状或片状。白腐真菌是木材腐朽真菌中最大的类群，包括子囊菌、担子菌和半知菌的大多数种类，通过分泌纤维素降解酶和木质素降解酶来分解木材的主要结构。褐色腐朽中木材只有纤维素和半纤维素被降解，木质素不能被分解，被降解后的木材通常而
白腐菌Ｆｎｌｏｉｕａａｒｇｉｉｔ以稻草进行固体发酵产漆酶的研究
魏玉莲，李冠华，
（．中国科学院沈阳应用生态研究所森林与土壤生态国家重点实验室，辽宁沈阳１０６；１１１４２．中国科学院研究生院，北京１０４）００９
摘
要：研究了硬毛粗毛盖孔菌Ｆｎｌｏｉ以稻草为培养基质进行固体发酵产生ｕａｉｔｇｉａｒ
ｕＬ，样品１０ｇ０Ｌ。酶活的定义：在一定条件下，每分钟催化１ｍｏ的底物所需要的酶量定ｌｇ义为１酶活力单位（。本文中活性以每克干物质所产生的漆酶来表示（ｇｓ。个ｕ）Ｕ／ｄ）

一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定

一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定2董鹤娟1’2，丁轲蚍～，恒子钤2，彭春平2，罗伟光hf1．河南省动物疫病与公共安全院士工作站，河南，洛阳471003；2．河南科技大学宏翔发酵饲料实验室，河南，洛阳471003)摘要：为了获得产纤维素酶的芽孢杆菌，从河南省不同地方采集玉米地、秸杆垛的土壤样品58份，利用刚果红平板法分离产纤维素酶的芽孢杆菌，采用3，5．二硝基水杨酸法测定纤维素酶活，结合菌落特征、显微形态、生理生化试验和16S rDNA序列进行鉴定。

结果表明：从分离出的42株产纤维素酶菌株中筛选出一株产纤维素酶较高的菌株B．LY02，纤维素酶活力可达0．5351 U／mL。

该菌株呈短杆状，革兰氏染色阳性，能形成芽孢。

基于16S rDNA序列同源性比较分析表明该菌株与Bacillus lic henifo rmis s tr ain CICCl0095的亲缘关系最近，基因序列的同源性为96．5％，因此鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌。

关键词：纤维素酶；芽孢杆菌；分离；鉴定我国是粮食大国，纤维素资源极为丰富，每年仅农作物秸秆产量就高达7．0亿吨，约占世界的20 ％[1—2】。

但是秸杆的成分主要是较难降解的纤维素，所以目前秸杆仅有极少部分用于反刍动物饲料，绝大多数都被燃烧，不仅造成了资源的浪费，而且还会带来环境污染[3—4】。

另一方面，由于我国大规模发展畜牧业，人畜争粮的现象已很严重。

所以研究将秸杆中的纤维素降解成畜禽可利用的多糖、蛋白质或其他营养成分已成为当务之急。

目前最可能利用的手段就是筛选高效纤维素酶分解菌，我们认为秸杆纤维素的降解不是单一菌种能够解决的，因为秸杆的降解需要p．葡聚糖酶、内切p一葡聚糖酶和 p一葡萄糖苷酶等多种纤维素酶共同参与才能完成【4]。

已有的研究主要集中在真菌方面，如里氏木霉、绿色木霉、白腐菌、米曲霉等is一71，对细菌方面研究的较少。

而且真菌存在活性不稳定和生物安全隐患等问题，但是芽孢杆菌具有产酶能力强，耐高温、强酸，环境适应能力强等特点，所以很适宜作为秸杆发酵用菌种。

稻草秸秆厌氧干发酵产沼气的工艺参数优化

ｓｒｗ，ｔｅｅｐｒｍｅｔｒｏｄｃｅｎａｌｂｓａｅｆｒｅｔｔｏｎｔｕｉｇｆｕａｔｒｄｔｒｅ —ｌｖｌｏｔｏｏａｘｅ・ｔａｈｘｅｉｎｓｗｅｅｃｎｕｔｄｉａｃｌｅｍｎａｉｎｕｉｓｎｏｒｆｃｏａｈｅｓｎｅｅｒｈｇｎｅｐｒｌｉ
ｔｅｒｗｔｒｌｃｂｎ—ｎｔｏｅａｉ５：，ｓｌｏｃｎｒｔｎｏ５，ｆｒｎａｉｎｔｍｐｒｔｒ５，ａｄｐ７５ｈａｍａｅａａｏｉｒｉｇｎｒｔ２ｒｏ１ｏｉｃｎｅｔｉｆ％ｄａｏ２ｅｍｅｔｔｏｅｅａｕｅ３ ℃ ｎＨ．．
ｔｍｐｒｔｅａｄｐｈｄｍｏｅｓｇｆｃｎｌｍｐｃｓｏｈｉｇｓｙｅｄａｔａｅｙｅｄｅｅａｕｒｎＨａｒｉｎｉａｔｙｉａｔｎｔｅｂｏａｉｌｎｄｍｅｈｎｉｌ．Ｏｐｉｍｒｃｓｏｄｔｎｒｉｔｍｕｐｏｅｓｃｎｉｉｓｗｅｅｏ
（Ｓ，ｅｍｎａｉｍｐｒｔｒＴｎＨｖｕａｉｅｅｔｍａｔｏｅｂｏａｒｅｔｉｎｉｈｃｒｅｔｉｎＴ）ｆｒｅｔｔｎｔｅｕｅ（）ａｄｐａｅｈｄｄｆｒｎｐｃｓｎｔｉｇｓｆｎａｏ，ｎｗｉｆｎａｏｏｅａｌｆｉｈｅｍｔｈｅｍｔ
关键词：稻草秸秆；沼气发酵；工艺参数优化
ＯｐｔｍｉｉｇＰｒｃｓｒｍｅｅｓｆｒＢｉｇｓＤｏｅｓＰａａｔｒｏｏａｙＦｅｍｎｔｔｏｏｃｒｗ

复合菌系RSS-4腐解稻秆过程中的菌系动态变化

ＤｙａｉｒａｉｎｏｉｒｂａｍｍｕｉｅｆｎｍｃＶａｉｔｆＭｃｏｉｌＣｏｏｎｔｓＯｉ
ａＣｏｐｅｉｒｂｉｌＳｙｔｍＳ－ｏＤｅｏｐｏｅＲｉｅＳｔａｍｌｘＭｃｏａｓｅＲＳ４ｔｃｍｓｃｒｗ
细茵ＤＧＧＥ图谱中的条带１９ｌ以及真茵ＤＧ、、Ｏ等ＧＥ图谱中的条带８９１、、３等为优势菌株，它们贯穿于稻秤腐
解的整个过程；茵中的条带１细２以及真茵中的条带４在腐解的前期起作用，而后迅速消失；细茵中的条带３、
１等以及真茵中的条带３１１、０等在腐解的后期才出现而起作用；而细菌中的条带２以夏真茵中的条带１５等、
ｃｂａｓｓｍＲＳ４ｔｄｃｍｏｅｒｅｓａａｔｄｅｉｅｔｄｔｎｌｕｅｃｌｖｔｎｍｔｏ（ＰＭ）ａｄｏｌｅｒｉｙｔＳ－ｏｅｏｐｓｃｔｗｗｓｓｉｄｗｔｔａｉｏａｐｒｕｔａｏｅｄＴＣｉｒｕｈｈｒｉｉｉｈｎ
ＳＥｅｌｎ，Ｉｉ・ｎ，ＩｉＣＥｕ－ｎＵＮＤ－ｅ，ＩＮｉ，ｉＪｎＨＮＤ — ｇＬＵＪｆｇＬ，ＨＮＨｉｕ，ＧＡａｗｉＪＧＸｎＬｕｏａｅＬｊＡ
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直接降解稻草秸秆的菌株筛选及其发酵过程研究

ＳｃｅｎｉｒｉｒｃｌｃｍｐｓｎＲｉｅＳｔａａｎｖｓｉａｔｏｆｔｒｅａｔｏｏｅｓｒｅｎｇｏｆｈｅＳｔａｎＤｉｅｔｙＤｅｏｔｏｉｇｃｒｗｎｄＩｅｔｇｉｎｏｓＦｅｍｎｔｉｎＰｒｃｓｉ
ｓｒｗｒｓｄａｎｅｎｅｏｃｐｆｃｅｎｉｇｓｒｉｓｓｔｂｅｆｄｅａｎｉｅ￣ｔａｓｐｏｏｅＲｉｅｓｒｗｐｗｄｅｇｒｐａｅｗａｔａｗｅｅｕｅｓｉｄｘａｄｎｗｃｎｅｔｏｒｅｎｔａｎｕｉｌｏ’ ｏ’ ｇｒ・ｒｗｗａｒｐｓｄ．ｃｔａｏｓａｒｄｉ＜ｒａａｌｔｓ
维普资讯
安徽农业科学．ｕｎｌｆｎ【＾ｉ２０，４２）１４５４ＪｒａｏＡｆｉｉ．０６３（０：４ — １５ｏ１Ｊ５
责任编辑姜丽责任校对胡剑胜
直接降解稻草秸秆的菌株筛选及其发酵过程研究
的瘤胃微生物也很难对其中的纤维素降解完毕，因此这些秸秆难于被禽畜利用，营养价值低秸秆中的这３而种组分的降解是相互影响的，且降解难度几乎不相ｊ：二虽然也有下学者考虑首先用适当的方法把３成分分离开来，再对每种
一
１．酶活力的测定。将稻草发酵液每天取出３，００ｇ．１３瓶３０ｘ
离心２ｉ，取上清液作为粗酶液。羟甲基纤维素酶０ｒｎａ
（Ｍ）滤纸纤维素酶（Ｐ的活力测定参照文献ｆ，１聚ＣＣ、Ｆ）５６；木糖酶活力ｆＮ定参照文献ｆ１ｌ３，７。１．纤维素、纤维素与木质素含量的测定。参照王玉万．２３半的方法并略加改变。即用浓度为Ｊ％的ＨＳ替浓度，８０代为３７％的浓盐酸配制地衣酚试剂；用３％ＳＳ代替ｖＤａＳｅｔ法配制的中性洗涤剂。ｏｓ方

纤维素分解菌的分离筛选和产酶条件优化

长、维素酶复合物的分子量十分庞大、纤单个酶组分没有水解纤维素的能力等原因一直是阻碍纤维素酶大规模生产应用的瓶颈问题．为此，试验利用本
收稿日期：００— ７—１２１０９修回日期：００９— ８２１ —０２
术，利用工农业废弃物等发酵生产人类急需的燃料、饲料及化工产品，即化工原料的 “ 色化 ” 具有极绿，
１２１选择富集培养基：维素粉５ｇＮＮ．．纤，ａＯ
１ｇ，２ＮａＨＰＯ４・７Ｈ２０．ＫＨ２Ｏ５ｇ，ＰＯ４０．９ｇ
的挑战，找再生能源替代不可再生能源是应对这寻
一
纤维素刚果红鉴别培养基从不同分离源分离筛选出对纤维素具有良好分解效果的纤维素分解菌，对并其酶活力进行了测定，选出１株纤维素酶活力较筛
关键词：纤维素分解菌；离；分筛选；ＭＣ酶活；纸酶活Ｃ滤
中图分类号：Ｑ２Ｔ９０文献标识码：Ａ文章编号：０９９２２１）６— ０７４１０ —７０（００００３ —０
资源和环境问题是人类在２ｌ世纪面临最主要
ＭＳ４・ＨＯ０５ｇＫ１．，母膏０５ｇｇＯ７２．，Ｃ５ｇ酵０．，水解酵素０５ｇ将上述物质溶解后，蒸馏水定容．．用
到１０．０ｍ１０

复合微生物菌剂发酵制备生物腐植酸的条件优化及其结构特性

师杨杰，靳红梅，管益东，等.复合微生物菌剂发酵制备生物腐植酸的条件优化及其结构特性[J].农业环境科学学报,2023,42（9）：2120-2129.SHI Y J,JIN H M,GUAN Y D,et al.Optimization of fermentation conditions and structural characteristics of biological humic substances prepared using compound microbial agents[J].Journal of Agro-Environment Science ,2023,42（9）：2120-2129.复合微生物菌剂发酵制备生物腐植酸的条件优化及其结构特性师杨杰1，2，靳红梅1，3，管益东2，龙玉娇1，3，朱燕云1，3，朱宁1，3*（1.江苏省农业科学院农业资源与环境研究所，农业农村部长江下游平原农业环境重点实验室，南京210014；2.南京信息工程大学环境科学与工程学院，南京210044；3.江苏省有机固体废弃物资源化协同创新中心，南京210095）Optimization of fermentation conditions and structural characteristics of biological humic substancesprepared using compound microbial agentsSHI Yangjie 1,2,JIN Hongmei 1,3,GUAN Yidong 2,LONG Yujiao 1,3,ZHU Yanyun 1,3,ZHU Ning 1,3*（1.Institute of Agricultural Resources and Environment,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Key Laboratory of Agro-Environmentin Downstream of Yangtze Plain,Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Nanjing 210014,China;2.School of Environmental Science and Engineering,Nanjing University of Information Science and Technology,Nanjing 210044,China;3.Jiangsu Collaborative Innovation Center for Organic Solid Waste Resource Utilization,Nanjing 210095,China ）Abstract ：To explore the processing conditions of biological humic substances （BHS ）from agricultural wastes,this study screened microbial strains with a lignocellulosic humification function and compounded highly effective microbial agents,investigated the effect of fermentation conditions on the production of BHS,and explored the structural characteristics of the obtained BHS product.In this study,14humification functional strains were screened using wheat straw as the main substrate.Among them,the BHS yield of Trichoderma harzianum DLT21,Trichoderma tomentosum DLS32,Schizophyllum commune JLD3,and Trichoderma koningiopsis DLS12was significantly higher than that of other strains.The four strains had good compatibility and complementary lignocellulose degrading enzymes.The收稿日期：2023-04-21录用日期：2023-07-28作者简介：师杨杰（1998—），女，硕士研究生，研究方向为有机废弃物高效转化与利用。

秸秆纤维素降解细菌的筛选及其产酶条件的研究

秸秆纤维素降解细菌的筛选及其产酶条件的研究孙军德;陈南【摘要】用稀释平板法在羧甲基纤维素平板培养基和纤维素刚果红平板培养基上,从土壤中分离出1株纤维素酶活力较高的耐热细菌H-5,初步鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis).对该菌株的液体发酵产纤维素酶的条件经行了研究,结果表明:菌株H-5产纤维素酶的最适培养温度为40℃,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(FPase)最高可达27.14U和22.17U.最佳培养时间为3d,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(Fpase)最高可达26.38U和20.14U,最适初始pH值为6～6.5,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(FPase)最高可达24.08U和21.96U,最适摇床转速为150 r·min-1,内切酶活力(CMCase)和滤纸酶活力(FPase)最高可达25.34U和20.67U.【期刊名称】《沈阳农业大学学报》【年(卷),期】2010(041)002【总页数】4页(P210-213)【关键词】纤维素降解细菌;筛选;产酶条件;耐热性【作者】孙军德;陈南【作者单位】沈阳农业大学土地与环境学院,沈阳,110866;沈阳农业大学土地与环境学院,沈阳,110866【正文语种】中文【中图分类】Q939.11.8随着资源的日趋紧缺，环境污染的日益加重，剩余纤维素类物质的利用受到越来越多的关注。

纤维素类物质具有可再生、价格低廉、资源丰富、分布广泛等特点[1]，可广泛用于生产酒精、沼气、牲畜饲料、肥料等领域[2]。

利用纤维素酶对纤维素进行生物降解是利用纤维素类物质最快速、经济、环保、有效的途径。

纤维素酶是能够对纤维素进行降解并生成葡萄糖的一类酶的总称[3]。

目前，纤维素的生物降解主要由微生物中的细菌和真菌完成。

其中细菌主要产中性纤维素酶和碱性纤维素酶[4]，较真菌产纤维素酶具有更好的耐碱耐热性。

除了传统的内切、外切纤维素酶外，产纤维素酶细菌还会分泌一种纤维小体到细胞外，它由多种纤维素酶和半纤维素酶组成，具有较高水解纤维素的能力[5]。

详解秸秆发酵添加剂的种类、作用和应用,破解秸秆饲料化难题

摘要/Abstrate[目的]为提高农作物秸秆饲用价值的研究提供参考。

[方法]查阅有关研究秸秆发酵饲料添加剂的文献，综述秸秆发酵饲料添加剂的种类、功能、机制、问题及展望。

[结果]目前我国草食动物的饲料原料严重不足，用农作物秸秆填补饲料原料的缺口是符合我国国情的必然选择。

但秸秆的粗纤维含量高，粗蛋白含量低，直接饲用营养效果不佳。

而发酵是可以提高秸秆粗纤维消化率和粗蛋白含量的有效方法之一，目前用于秸秆饲料发酵的制剂有微生物制剂、酸制剂、酶制剂及其复合菌剂等。

[结论]在广大科研人员的努力下，我国秸秆饲料添加剂的类型将更丰富、效果会更好，秸秆饲料化会取得更大的成果。

背景我国秸秆资源丰富，2019年我国秸秆产量达到8.5亿t，其中2.07亿t被废弃或焚烧，只有1.96亿t被饲用，未得到有效利用。

目前我国饲草年缺口约5.42亿t，饲料短缺和价格上涨超过了农民的承受能力，从而限制了畜牧业可持续发展。

秸秆饲用是我国草食动物养殖之无奈选择，同时也是符合国情的必然选择。

秸秆饲料化目前面对的难题，一是木质素降解困难，秸秆是由纤维素（30%～50%）、半纤维素(15%～35%)和木质素（10%～30%）通过共价键、氢键和蜡键等多种分子作用力连接组成的不溶于水的高分子化合物，秸秆中木质素在最外层，其次是半纤维素，最里层是纤维素，纤维素被木质素和半纤维素紧密包裹，草食动物难以消化吸收；二是秸秆中的粗蛋白含量低，难以满足草食动物粗蛋白需要量。

生物发酵技术与动物营养领域的联系越来越紧密，在秸秆发酵时添加一定量特定的高活性微生物，微生物及其产生的酶和代谢产物，可以实现体外降解秸秆中的木质素、提高粗蛋白含量、体内吸收利用的现代畜牧业养殖模式。

目前被广泛用于秸秆发酵中降解木质素、提高秸秆消化率的高活性微生物有真菌制剂、细菌制剂、酶制剂，与细菌相比，真菌抗干燥能力强，菌丝能够机械穿插难降解的木质素蜡质层，胞外酶的分泌使其对纤维素、半纤维素和木质素都有很强的分解作用，是降解秸秆效率最高的微生物菌群，也是目前研究最多的降解秸秆的菌种。