(0805)《园艺植物生物技术》网上作业题及答案

（0805）《园艺植物生物技术》网上作业题及答案,0805,《园艺植物生物技术》网上作业题及答案1:第一批作业2:第二批作业3:第三批作业4:第四批作业5:第五批作业6:第六批作业1:[论述题]5、如何对转入植物基因组中的外源目的基因进行检测, 参考答案: )对转入的目的基因序列片段进行检测。

包括两种手段:一是PCR方法检测外源基答:(1因;二是用Southern杂交方法，以目的基因DNA为探针，检测植物基因组中与其同源的部分。

常见有Southern斑点杂交和Southern印迹杂交两种。

(2)转入目的基因的RNA转录水平检测。

包括两种方式:一是Northern杂交,通过总RNA或mRNA与探针的杂交来分析;二是RT-PCR，以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后经PCR扩增目的基因特异条带。

(3)外源基因表达蛋白的检测。

外源基因编码蛋白在转基因植物中能够正常表达并表现出应有的功能乃是植物基因转化的最终目的。

外源基因表达蛋白检测主要利用免疫学原理，主要采用ELISA检测、Western杂交检测。

ELISA检测程序包括抗体制备、抗体或抗原的包被、免疫反应及检出三个阶段。

Western杂交程序包括转基因植株蛋白提取、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质、蛋白质条带印迹、探针制备、杂交检出五个步骤。

2:[论述题]4、分子标记主要在园艺植物哪些方面应用,参考答案:答:(1)种质资源的遗传多样性分析及亲缘关系研究。

采用比较植物学特征并结合细胞学、孢粉学和同工酶学等方法进行评价和分类都有其局限性。

近十多年来发展起来的分子标记技术为种质资源的遗传多样性分析及亲缘关系研究开辟了广阔的前景。

(2)遗传图的构建和基第 1 页共 12 页因定位。

遗传图谱是遗传研究的重要内容，又是种质资源、育种及基因克隆等许多应用研究的理论依据和基础。

分子标记为构建高饱和度的连锁图提供了有力的工具。

(3)分子标记辅助选择育种，提高育种效率。

(4)核心种质筛选。

分子标记可以在DNA水平上直接反映种质资源的基因型和遗传结构，具有受环境影响较小、检测快速、多态性高等优点，在园艺植)品种鉴定与纯度分析。

分子标记是在基因水物核心种质构建中得到了越来越多的应用。

(5平上的品种鉴定和种子纯度检验无组织器官特异性，不受环境的影响，准确度高、重复性好。

3:[论述题]3、一个完整的组织培养室由哪些部分所构成,参考答案:答:(1)洗涤室。

洗涤室用于组织培养用的玻璃器皿、塑料器皿和其他实验用具清洗。

(2))储存室。

用于各类器皿和用具的存放与保管。

配备各种规格的货架、货柜、塑料框等。

(3培养基配制室。

培养基配制室主要用来完成培养基配制的各个环节的工作，如药品的称量、溶解，培养基的配制和分装等。

(4)灭菌室。

灭菌室用于培养基、玻璃器皿及接种工具的灭菌。

(5)接种室。

(6)培养室。

培养室要求卫生清洁、保温和隔热效果要好。

窗户用双层玻璃，以利于隔热保温，还可防止灰尘、昆虫及微生物的进入，达到清洁效果。

(7)研究室。

研究室用于对培养材料及培养结果进行观察、鉴定、记录和分析。

(8)温室或苗圃。

温室用来对培养的再生植株的驯化和移栽。

4:[论述题]2、cDNA文库的构建包括哪些步骤,参考答案:答:(1)、RNA提取及mRNA分离和纯化。

首先进行总RNA的提取，该步骤关键的因素是要抑制RNA酶的活性，建立一个无RNA酶的环境和抑制材料内部RNA酶的活性对于制备优质RNA十分重要。

总RNA的提取后进行mRNA分离和纯化，通过亲和层析的方法将mRNA同其他的RNA分离开来。

(2)、cDNA合成。

cDNA第一链合成可用人工合成的2-20个核苷酸长的oligo(dT)为引物或长度为6-10核苷酸，由4种碱基随机组成的DNA片段(混合物)，作为合成第一链cDNA的引物。

cDNA第二链合成可利用cDNA第一链末端(3'端)常常出现发夹环的特征进行第二链的合成或用大肠杆菌RNaseH(核糖核酸酶H)降解取代法。

(3)、将cDNA装配到载体上。

用于构建cDNA文库的载体主要有质粒、噬菌体和柯斯质粒，其中质粒载体可插入片段较小，而噬菌体和柯斯质粒可以插入较大的外源DNA片段。

(4)、文库滴度测定和扩增。

噬菌体文库在建成后要进行库容量检测和进一步扩增保存。

1 6个完整的cDNA文库至少应含有1×10个克隆才能保证其中含有每一个单拷贝的mRNA。

第 2 页共 12 页文库扩增便于多次使用或相互交流。

5:[论述题]1、植物培养基由哪些成分构成，具有何作用,参考答案:(1)、无机营养成分。

主要包括氮、磷、硫、钾、钙、镁、铁、锰、铜、锌、硼、钼及碳、氢、氧等大量元素与微量元素。

(2)、有机成分。

为了不同的培养目的往往要加入一些有机物如维生素类和氨基酸类等有机成分，以利培养材料的快速生长。

离体培养的植物材料常用的碳源是蔗糖。

(3)、生长激素。

植物组织培养细胞分裂的启动、愈伤组织的生长以及根、芽的分化或胚状体的发育等必须辅以适当种类和适当浓度的植物激素。

生长素的生理作用主要是促进细胞伸长和分裂。

在组织培养中常用于诱导根的分化和细胞分裂，与一定量的细胞分裂素配合使用，可诱导不定芽的分化、侧芽萌发与生长以及诱导胚状体产生。

细胞分裂素主要是促进细胞分裂，诱导愈伤组织，促进器官分化不定芽及解除顶端优势促进腋芽萌发。

(4) 琼脂、pH及其他成分。

琼脂是一种由海藻获得的多糖类物质，是固体培养最好的固化剂，本身并不提供任何营养。

离体培养的植物材料大多数要求弱酸性的环境，需要的pH在 5(0-6(0之间。

在培养基中往往因培养目的不同、植物材料不同，而加入一些成分，较常见的有活性炭、抗氧化剂、抗生素、诱变剂等。

1:[论述题]1、园艺植物组织培养的作用体现在哪些方面,参考答案:答:(1)、快速繁殖。

离体培养方法已成为一些园艺植物良种繁育的一种有力手段，可产生了明显的经济效益。

(2)、脱毒种苗培养。

(3)、提高育种效率，改良品种。

A、培育单倍体;B、胚与胚乳培养;C、与常规育种技术相结合，提高育种成效。

(4)、种质资源保存。

(5)、进行生理生化，细胞学，遗传学等领域的基础研究。

2:[论述题]2、理想的遗传标记应具备的特点,参考答案:答: (1)、多态性高，标记数目多，提供的信息量大。

(2)、共显性遗传，能区分纯合基因型与杂合基因型。

(3)、呈现中性，不影响目标性状表达，与不良性状无必然连锁。

(4) 、表现稳定，不受植株内外环境的影响。

(5)、经济方便，易于观察记载。

3:[论述题]3、转基因沉默的原因及对策,参考答案:答:转基因在受体植物中往往不能稳定表达，有时甚至完全不表达，出现转基因沉默现象。

转基因沉默的原因是多方面的，根据外源基因失活或沉默的分子机制，可将其分为三类:位第 3 页共 12 页置效应、转录水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)。

防止基因沉默的对策主要从以下方面实现:(1)转化载体中应尽量避免使用相同的启动子及重复序列并保证载体上的构建序列在同一个方向阅读以免产生异常或反义RNA，尽量使用植物偏爱密码子。

(2) 使用去甲基化试剂。

(3)转基因的侧翼接上核基质结合序列(MAR)会在一定程度上避免位置效应，提高基因表达。

(4)将外源DNA整合到染色体的特定位点上。

4:[论述题]4、在植物病毒检测中将涉及到单克隆抗体的制备，简述制备的基本步骤, 参考答案:答:(1)免疫注射。

用病毒抗原免疫注射实验用小白鼠。

(2)细胞融合。

取免疫小白鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行共培养，使两者融合，获得杂交瘤细胞。

(3)克隆化。

采用稀释)、筛选。

采用血清学方法，用已知的抗原病毒对单法，取单细胞在培养板中进行培养。

(4细胞培养液中的抗体进行检测，保留抗体分泌阳性的单细胞系。

(5)抗体生产。

可用一定浓度的杂交瘤细胞注射小白鼠腹腔，使其产生腹水，取腹水离心后获得含抗体的腹水。

或将所获的杂交瘤细胞株在盛有培养液的培养瓶中进行培养，获得含单克隆抗体的培养液。

5:[论述题]5、简述热处理脱病毒的原理和方法。

参考答案:答:热处理脱毒的原理是利用病毒类病原与植物的耐热性不同，将植物材料在高于正常温度的环境条件下处理一定的时间，使植物体内的病原失去活性或钝化病毒，使病毒在植物体内的增殖和扩散速度减缓，而植物的生长受到较小的影响或在高温下生长加快，这样植物的新生部分不带病毒，取该无病毒组织培育即可获得无病毒植株。

热处理的方法包括(1)温汤浸渍处理。

温汤浸渍处理(或热水处理)是将带病毒的植物材料置于一定温度的热水中浸泡一定的时间(通常不少于30 min)，直接杀死病原菌，适合于休眠器官及接穗等的处理。

(2)高温空气处理。

一般将待处理品种嫁接在较耐高温的砧木上，在37?左右条件下进行一定时间的处理。

高温空气处理后植株新梢顶端不带病毒，但是这种处理不能使病毒完全失活，停止处理一段时间，病毒即可扩散至整个植株。

因此，处理后应立即取新梢嫁接才可获得脱病毒植株。

6:[论述题]6、转基因食品评价的内容包括哪些方面,参考答案:答: (1)、有毒物质。

转基因食品不应比其他同种可食食物含有更多的毒素，必须确保转入外源基因或基因产物对人畜无毒。

(2)、过敏源。

主要分析基因的来源、目标蛋白与已知过敏源的序列同源性、目标蛋白与已知过敏患者血清中IgE能否发生免疫反应，另外还要考虑第 4 页共 12 页营养物质和抗营养因子的含量等。

(3)营养问题。

外源基因可能对食品的营养价值产生无法预期的改变，其中有些营养降低而另一些营养增加。

(4)对抗生素的抵抗作用。

遗传工程体中引入的抗生素抗性基因是否有可能转移到胃肠道的微生物或上皮细胞中，并成功地结合和表达，从而对抗生素产生抗性，影响到人或动物的安全。

1:[判断题]1、pUC质粒载体可以容忍插入比λ噬菌体载体更长的外源DNA片段。

参考答案:错误2:[判断题]2、RAPD标记是指简单重复序列标记，主要检测真核生物的基因组中普遍存在着二核苷酸、三核苷酸或四核苷酸的简单串联重复序列尤其是(CA)重复序列。

参考答案:错误3:[判断题]3、原生质体分离所使用的各种酶液配好后应进行高温高压灭菌处理。

参考答案:错误4:[判断题]4、Western杂交是针对转基因生物外源目的基因RNA转录水平的检测。

参考答案:错误5:[判断题]5、White首先建立了世界上第一例人工合成培养基。

参考答案:正确6:[判断题]6、分子标记是遗传标记的一种形式。

参考答案:正确7:[判断题]7、花粉培养可以获得单倍体植株。

参考答案:正确8:[判断题]8、基因组文库和cDNA文库的概念是等同的。

参考答案:错误9:[判断题]9、抗体与抗原的结合是特异性的，一种抗体分子只能与其对应的抗原结合。