油菜叶绿体DNA的提取和纯化
植物dna提取方法
植物dna提取方法
植物DNA提取是从植物细胞中分离和纯化DNA的过程。
以下是一种常见的植物DNA提取方法，称为CTAB法（Cetyltrimethylammonium Bromide）：
1.材料准备：
(1)植物样品（叶片、根部、花粉等）
(2)CTAB缓冲液（含CTAB、EDTA、Tris-HCl、NaCl等成分）
(3)Phenol/Chloroform/Isoamyl Alcohol 混合溶液
(4)高盐溶液（含NaCl）
2.样品研磨：将植物样品磨碎成细粉末状。
3.细胞破碎：将样品与CTAB缓冲液混合，加入适量的RNase，放
入65°C水浴中加热。
4.提取DNA：添加等体积的Phenol/Chloroform/Isoamyl Alcohol混
合溶液，混合离心，将上清液转移到新的离心管中。
5.沉淀DNA：加入等体积的高盐溶液，混合后冷藏，待DNA沉淀。
6.洗涤：将上清液转移到新的离心管中，加入70%乙醇洗涤，离心，
将上清液倒掉，再次洗涤。
7.溶解：使用TE缓冲液溶解DNA，或直接使用水溶解。
8.质量检测：使用分光光度计或凝胶电泳等方法检测DNA的浓度
和质量。
以上步骤仅为一种常见的植物DNA提取方法，实际操作中可能根据实验目的、样品类型和实验室条件等进行适当的调整和优化。
油菜色素的提取和分离
油菜中主要色素的提取和分离【实验目的】①通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；②通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理；③从油菜中提取出叶绿素、胡萝卜素、叶黄素等色素并加以分离。
【实验原理】油菜中含有叶绿素、胡萝卜素、叶黄素等多种天然色素，薄层色谱常用TLC 表示，又称薄层层析，属于固-液吸附色谱。
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在移动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。
是采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层, 利用吸附剂表面对不同组分吸附能力的差别达到分离的一种方法。
也是一种微量、简便、快速分离效果好的方法，一般用于柱色谱分离条件的探索和洗脱剂的选择；用于化合物的定性检验及用于化合物的纯度检验。
索式提取器由接收部分（圆底烧瓶）、提取部分（提取筒）、冷凝部分（冷凝管）三部分组成。
蒸馏时接收烧瓶中溶剂受热汽化后，沿蒸汽导管上升，在冷凝管内凝聚回流至提取筒内。
随溶剂不断进入提取筒并在此与物料充分接触，经过渗透、溶解、扩散的过程，溶出其中被提取成分而成为溶液。
同时溶液通过提取筒的活塞逐渐流入下面的接收烧瓶（此过程为渗漉），溶液在接收瓶中继续受热，溶剂蒸发、回流、渗漉，而溶液中的溶质（被提取部分）则留在接收瓶内。
随着提取的进行，接收瓶内溶液越来越浓，从而逐渐的将提取部分转移到接收瓶内。
本实验通过将采用索式提取器对油菜中的色素进行提取和薄层色谱法对色素进行分离，从而达到从油菜中提取出叶绿素、胡萝卜素、叶黄素等色素并加以分离的目的。
吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。
当待分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。
当洗脱剂流下时由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，于是形成了不同层次，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂的亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或将柱吸干，挤出后按色带分离开，再用溶剂将各色带中的溶质萃取出来。
高等植物叶绿体DNA的提取方法
高等植物叶绿体DNA的提取方法（Bookjans et al.提出，龚小松等改良。
）1、100g叶子被收集和储存在黑暗中24h，用自来水洗两次，再用蒸馏水洗两次；2、将叶子剪碎放在预冷的高速搅拌器里，再倒入400ml预冷的缓冲液 A（50mmol Tris，25mmol EDTA，1.25molNaCl，0.25mol 抗坏血酸(维生素C)，ph3.6），叶子被先被低速搅拌两次，5s一次，然后再被高速搅拌3-4次，10s一次。
3、用四层粗棉布过滤匀浆，滤出液被分装到两个250ml离心管中800g 离心6min。
4、去上清，加入200ml 缓冲液 B（50mmol Tris，25mmol EDTA，1.25molNaCl，10mmo巯基乙醇，0.1%牛血清蛋白，ph8.0）悬浮，800g 离心 6min。
5、去上清，加入少量溶液 C（100mmol EDTA，150mmolNaCl，ph8.0）悬浮，转移到50ml的离心管中，再加入30ml提取液C，800g 离心 6min。
6、去上清，加入少量缓冲液D（50mmol Tris，25mmol EDTA，ph8.0）悬浮，充分悬浮后，再加入16ml的缓冲液D，4ml 10%的Sarcosy 溶液和200ul 5mg/ml 的蛋白酶K。
7、在37℃水浴中温浴3h以上。
8、当叶绿体被裂解以后，溶液用酚抽提两次，再用酚：氯仿：异戊醇抽提两次。
用1/2体积的7.5mol的醋酸铵和3倍体积的100%乙醇，-20℃过夜沉淀叶绿体DNA。
10000g离心15min收集叶绿体DNA，用70%乙醇洗两次，用500ul的TE buffer 熔解保存。
9、加入50ug/ml的RNase A，于37℃水浴中温浴30min，加入12ml蛋白酶K温浴1h。
10、再用酚和氯仿抽提两次以除去残留蛋白。
收集上清，用乙醇沉淀，-70℃30min 后，再次离心收集沉淀，用500ul的TEbuffer熔解备用。
用于RAPD分析的油菜总DNA的快速提取
西北农业学报 2001,10(3):32～34A cta A g riculturae Bor eali-occident alis Sinica用于RAPD分析的油菜总DNA的快速提取王灏,王道杰,谭小力,胡选萍,李殿荣(陕西省杂交油菜研究中心,陕西大荔 715105)摘 要:通过CT A B法、纯化法和简便法所提DN A质量效率和PCR-RA P D扩增效果的比较,优化和建立了无液氮处理,可用于RA PD分析的油菜总DN A的提取方法。
该方法能在油菜生长发育早期进行单株微量的提取,快速进行RA PD分析和品种鉴定。
关键词:油菜DN A;快速提取;RA PD分析中图分类号:S634.3文献标识码:A 文章编号:1004-1389(2001)03-0032-03A Simple and Rapid Method for the Preparation of PlantGenomic DNA by RAPD AnalysisWang Hao,Wang Dao-jie,T an Xiao-li,Hu Xuan-ping,Li Dian-rong(Hybrid Rapeseed Research Center of S haanxi Provin ce,Dali S haanxi 715105)Abstract:Based on experim ents and comparison of quality and RAPD results of g enom ic DNA w ith differ-ent ex traction method,including CTAB method,purification method and simple method,w as established a sim ple,rapid and low cost method on DNA ex traction from rapeseed leaves and shoots.It was especially suitable to DNA trace ex traction from rapeseed single shoot or young plant.With this method,materials need not to be treated w ith liquid nitrogen.Key words:Rapeseed DNA;Ripd ex traction;RAPD analysis DNA的快速提取是分子标记技术实用化的基础。
浅析DNA提取步骤及注意事项
浅析DNA提取步骤及注意事项DNA提取是分子生物学中的一个核心步骤，它涉及从生物样本中分离出DNA。
这个过程通常包括细胞裂解和核酸纯化两个主要阶段。
细胞裂解旨在破坏细胞膜和核膜，释放出DNA，而核酸纯化则是通过物理化学方法将DNA与其他细胞组分分离。
常用的DNA提取方法包括有机溶剂提取法、硅胶柱提取法和磁珠法。
在实际工作中，需要根据不同的样本类型和实验需求，选择不同的提取方法。
一、常见的DNA提取步骤（详细实验操作根据方法不同有所差异）1.细胞破碎：使用物理或化学方法破坏细胞膜和细胞壁，释放细胞内的DNA。
物理方法包括研磨、冻融循环等，化学方法包括使用去污剂（如SDS-十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K。
2.去除蛋白质和其他杂质：常用的方法包括酚氯仿抽提法、盐析法和使用硅胶柱层析法。
这些方法可以去除蛋白质、RNA和其他细胞组分，从而净化DNA。
3.DNA纯化：通过乙醇沉淀或使用硅胶柱等方法进一步纯化DNA，去除残留的杂质。
4.DNA浓缩：使用乙醇沉淀法或离心浓缩等方法将提取的DNA 浓缩到适宜的体积和浓度。
5.质量检测：通过紫外光谱吸收值（OD260/OD280比值）、凝胶电泳和qPCR等方法评估DNA的纯度和浓度。
二、特殊样本的提取方法对于特定类型的样本，如植物组织和血液，可能需要特别设计的提取方法。
例如，植物DNA提取中常用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide)法，该方法利用CTAB与核酸形成复合物，在低盐溶液中沉淀，而在高盐溶液中解离，从而分离DNA和多糖。
血液样本中的DNA提取则可能采用非离子变性剂NP40和蛋白酶K的组合来裂解细胞和去除蛋白质。
注意事项：在进行DNA提取时，应注意避免核酸酶污染，确保样品新鲜并妥善保存，避免反复冻融，以保证DNA完整性，以及严格按照协议操作以保证结果的一致性和可重复性。
优化提取条件、样本预处理、温度控制和充分混匀或使用专用试剂盒等策略可以提高提取的效率和质量。
提取西藏油菜总DNA的一种方法
紫外分析仪结果 亮斑较模糊 亮斑暗但有拖尾 点样孔处较亮 亮斑清晰但有拖尾
A5
0 052
0 028
1 86
亮斑清晰明亮
A6
0 062
0 034
1 7
亮斑暗淡点样孔处较亮
注 : 原 溶 液 DNA 浓 度 = OD260nm 50ng / l
稀 释 倍 数 ( 300)
锭 2 ,l 放入微波炉中中火 2m in , 取出后轻轻摇晃, 防 止灌胶时出现气泡, 插入样板梳将胶板前端稍微抬起 从灌胶口把胶灌入, 待胶流到低端后放平、 静置 10~ 15m in , 使胶充分凝聚。 DNA 样品 6 , l于 1 4 % 琼脂糖凝胶 U = 80v , t= 1 5h , 1 TAE 缓冲 液电泳检测 ( 电泳仪为 DYY - 6C 型 , 电泳槽为 DYCP - 31D 型 ) , 胶板于数码凝 胶图象 处理系统 ( GIS- 2008 型 ) 上观测, 显示为在点样孔附 9
1 材料与方法
1 1 植物材料 材料采集以生态学和遗传学的采样原则, 选择具 有 典型 代 表 性, 无病 虫 害 生 长 正常 的 白 菜 型 油 菜 ( B rassicaCam pestris) 新鲜幼叶 ( 西藏大 学农牧学院农 场 )。 1 2 试剂配制 10% SDS 存放。 1MT ris- HC l( pH 7 5) 放、 预冷使用。 0 5 MEDTA ( p H 8 0) 18 61gN a2 EDTA 灭菌、 4 存放、 预冷使用。 5MN aC l 2 92gNaC l溶于 80m l水, 定容至 100 m ,l 高压灭菌。 3MKA c 2 94gKAC 溶 于 80m l 水 中, 定 容 至 100m ,l 4 存放、 预冷使用。 3MN aAc 2 46gNaAC 溶于 80m l水中 , 用 HAC 调 p H值 5 2 , 定容至 100m ,l 高压灭菌、 4 存放。 1 TE 溶 液 1MT ris - H C l 10m ,l 0 5MEDTA H 2 O 溶于 80m l水, 约加 2gN aOH 调 p H8 0 , 定容至 100m , l 高压 12 1gT ris 溶于 80m l水, 加浓盐酸, 调 pH 7 5 , 定容至 100m , l 高压灭菌、 4 存 10gSDS , 加 热助 溶于 100m l 水 , 室 温
植物DNA的提取
实验九 植物DNA 的提取实验内容采用CTAB 法从植物叶片中提取基因组DNA ，并进行纯度分析和琼脂糖凝胶电泳。
目的要求掌握CTAB 法从植物叶片提取DNA 的原理和方法。
实验原理1、原理核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。
核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类，在真核细胞中,前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质及核仁里。
在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。
在浓氯化钠溶液(1～2mol ／L)中，DNA 核蛋白的溶解度很大，RNA 核蛋白的溶解度很小；而在稀氯化钠溶液(0.14mol ／L)中，DNA 核蛋白的溶解度很小，RNA 核蛋白的溶解度很大。
因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA 核蛋白和RNA 核蛋白从样品中分别抽提出来。
分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白等杂质除去，常采用的去除蛋白的方法有3种：①用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间，而DNA 溶于上层水相。
用两倍体积95％乙醇溶液将DNA 钠盐沉淀出来。
如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀，得到的是游离的DNA 。
②用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA 。
③用苯酚处理，然后离心分层，DNA 或溶于上层水相，或存在于中间残留物中，蛋白变性后则停留在酚层内。
吸出上面水层，将其注入两倍体积的95％乙醇溶液中，得到白色纤维状DNA 沉淀。
反复使用上述方法多次处理DNA 核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA 制品。
为了彻底除去DNA 制品中混杂的RNA ，可用RNA 酶处理。
生物材料中含有的脂肪物质和大部分的多糖，在用盐溶液分离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去。
在DNA 提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：①化学因素，核酸的结构在pH 值4.0—11.0间较稳定，pH 值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。
植物DNA提取实验方案
植物DNA提取实验方案目的：1、了解真核生物基因组DNA提取的一般原理。
2、掌握DNA提取的方法和步骤。
原理：提取DNA的一般原理，是将分散好的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：异戊醇提取的方法去除蛋白质，得到的DNA经过乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。
用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质从而减少了蛋白质对DNA的污染。
然后用CTAB处理在特定的盐浓度下CTAB使基因组DNA处于溶解状态而蛋白质仍为沉淀。
经细胞破碎液获得的DNA粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理其中酚是高效的蛋白变性剂可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉然后用氯仿、异戊醇处理一方面可达到去蛋白的目的另一方面还可去除残留的酚。
一、材料植物的根、茎、叶。
最好选择叶子部分做实验。
二、设备移液管，冷冻高速离心机，台式高速离心机，陶瓷研钵，1.5mL 离心管。
三、试剂1、CTAB或Nacl溶液 4.1克NaCl溶解于80ml水缓慢加入10克CTAB加水至100ml。
2、其它试剂 氯仿、异戊醇24 1酚 氯仿 异戊醇25 24 1异丙醇TE10%SDS蛋白酶K20mg/ml5mol/LNaCl。
四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干用蒸馏水洗两次然后用超纯水洗一遍吸干剪碎称0.5-0.25克。
2、将所取材料放入预冷的研钵研钵提前要灭菌研成粉末后置于7ml离心管内可以换为将样品放置到7ml离心管中800ul后用玻棒捣碎。
3、加入2.4ml65℃预热的CTAB充分混合后65℃水浴90min以上冷却到室温加入等体积氯仿异戊醇24 1轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀-20℃度放置20min4℃离心5000g×5min去上清。
提取植物dna的方法及其原理
提取植物dna的方法及其原理嘿，朋友们！今天咱就来聊聊提取植物 DNA 这档子事儿。
你说这植物 DNA 啊，就像是植物的小秘密宝库，藏着好多好多关于它们的信息呢！要提取植物 DNA，首先得准备好一些工具和材料。
就好像你要去挖宝藏，得有把趁手的铲子不是？咱得有新鲜的植物样本呀，这可是关键。
然后呢，还得有一些化学试剂，就像打开宝藏大门的钥匙。
那具体咋操作呢？第一步，把植物样本好好处理一下，就跟给它洗个澡似的，把杂质啥的都去掉。
然后呢，把它放到一个合适的容器里，加入那些神奇的化学试剂。
这时候啊，就好像给植物来了一场奇妙的化学反应之旅。
这原理呢，其实也不难理解。
植物细胞就像一个个小房子，DNA就住在里面。
那些化学试剂呢，就负责把房子的墙壁啊啥的打破，让DNA 能跑出来。
这就好比你要从一个坚固的城堡里把宝贝取出来，得动点小脑筋，用点小技巧才行。
接下来，经过一系列的操作，DNA 就慢慢浮现出来啦！哇，你能想象那种感觉吗？就好像你找到了藏在深处的宝贝一样惊喜。
你想想看，通过提取植物 DNA，我们能知道好多植物的秘密呢！比如它们的遗传信息，这就像是植物的“家族谱”。
我们可以了解它们是怎么一代代传承下来的，多有意思啊！而且哦，这提取植物DNA 可不只是在实验室里玩玩的。
在农业上，这可是大有用处呢！可以帮助农民伯伯们培育出更好的品种，让庄稼长得更壮，收成更多。
这不就像是给农业加了一把助力的小火箭嘛！在医学上也有它的用武之地呢！说不定能通过研究植物 DNA 找到一些治病的新方法。
哎呀呀，这可真是太神奇啦！总之呢，提取植物 DNA 就像是打开了一扇通往植物神秘世界的大门。
让我们能更深入地了解这些绿色小伙伴们。
朋友们，不妨自己也动手试试，去探索一下植物 DNA 的奇妙世界吧！怎么样，是不是很心动呀？别犹豫啦，赶紧行动起来吧！。
油菜中主要色素的提取和分离1
油菜中主要色素的提取和分离1、实验目的1）通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；2）通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理；3）从油菜中提取出叶绿素、胡萝卜素、叶黄素等色素并加以分离。
2、实验原理油菜，又叫油白菜，苦菜，是十字花科植物油菜的嫩茎叶，原产我国，颜色深绿，属十字花科白菜变种。
油菜中含有蛋白质、脂肪、维生素、尼克酸等营养成分，还含有胡萝卜素、叶绿素、叶黄素等色素。
叶绿素a和叶绿素b为吡咯衍生物与金属镁的配合物；胡萝卜素是一种橙色天然色素，属于四萜类，为一长链共轭多烯，有α、β、γ三种异构体，其中，β异构体含量最多。
叶黄素为一种黄色色素，与叶绿素同存在于植物体中，是胡萝卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在乙醚中溶解度较小。
根据它们的化学特性，可将它们从油菜叶片中通过连续回流提取出来，并通过薄层色谱方法将它们分离开来。
胡萝卜素、叶绿素、叶黄素的结构式如图1：索氏提取器如图2，其工作原理是：完成一次溶剂提取后，溶液被加热，挥发的溶剂经过冷凝管冷凝，重新进入提取的环境，开始新的一次提取过程；如此循环下去，直至停止提取。
这比直接用溶剂回流提取省溶剂，也剩下了很多后期图2氏提取器样品袋去除溶剂的时间；但是要求提取物有比较好的稳定性。
薄层层析是快速分离和定性分析微量物质的一种极为重要的实验技术，具有设备简单、操作方便而快速的特点。
它是将固定相支持物均匀地铺在玻片上制成薄层板，将样品溶液点加在起点处，置于层析容器中用合适的溶剂展开而达到分离的目的。
用此法分离时几乎不受温度的影响，可采用腐蚀性显色剂，而且可在高温下显色，特别适用于挥发性小或在较高温度下易发生反应的物质，同时也常用来跟踪有机反应或监测有机反应完成的程度。
柱色谱（柱上层析）常用的有吸附色谱和分配色谱两类。
吸附色谱常用氧化铝和硅胶作固定相；而分配色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。
天然DNA的提取原理及提取技术讲解
CTAB法提取植物DNA得操作步骤
2
加等体积得氯仿/异戊醇(24:1),盖上瓶塞,温与
摇动,使成乳状液。
3
将锥形瓶中得液体倒入离心管中,在室温下4
000r/min离心5min,静置,离心管中出现3层,小心
地吸取含有核酸得上层清液于量筒中,弃去中间
层得细胞碎片与变性蛋白以及下层得氯仿。
CTAB法提取植物DNA得操作步骤
4
根据需要,上清液可用氯仿/异戊醇反复提取多
次。
5
收集上层清液,并将其倒入离心管中。慢慢加
入1～2倍体积预冷得70%乙醇。可瞧到纤维状
得沉淀(主要为DNA)。离心,即得到DNA粗制品。
CTAB法提取植物DNA得操作步骤
6 上述DNA粗制品含有一定量得RNA与其它杂 质。若要制取较纯得DNA,可将粗制品溶于TE缓 冲液中,加入10mg/mL得RNase溶液,使其终浓度 达50μg/mL,混合物于37℃水浴中保温30min除 去RNA。
上得差别,通过加入离子变性剂,去污剂使蛋白质或 多糖变性,核蛋白解聚。
CTAB SDS
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持安静
除蛋白质
氯仿/异戊醇抽提(氯仿可使蛋白质变性并有助于液
相与有机相得分离;异戊醇则有助于消除抽提过程中 出现得气泡)。
使用变性剂变性 (SDS、异硫氰酸胍等) 高盐洗涤(当溶液中得中性盐得浓度大于1mol/L 时,
有待纯化DNA带得琼脂糖凝胶电泳块,装入透析 袋中; 2 透析袋中加入适量经稀释得电泳缓冲液,并 置于稀释得电泳缓冲液中电泳1-2h,使DNA脱离 琼脂糖凝胶;
DNA得纯化技术
琼脂糖凝胶电泳洗脱法 3 再反向电泳30s-1min,使附着在透析袋膜上得
一种油菜及其近缘植物干种子基因组DNA提取方法
A DNA Extraction Method from Rapeseed and
Closely Related Plants Seeds 作者： 范惠玲[1];白生文[2];侯丽娟[1]
作者机构： [1]河西学院农业与生态工程学院,甘肃张掖734000;[2]河西学院生命科学与工程学院,甘肃张掖734000
出版物刊名： 河西学院学报
页码： 54-59页
年卷期： 2021年 第2期
主题词： 油菜;芸芥;白芥;干种子;DNA提取
摘要：种子DNA提取是种子分子生物学研究最基础和最关键的步骤之一.为了建立一种能够从油菜及其近缘植物干种子中制备高丰度、高纯度DNA的方法,本试验分别以三大类型油菜(Brassica rape)、芸芥(Eruca sativa M.)和白芥(Sinapis alba L.)的干种子为材料,用一定量的抽提液来研磨种子,提取基因组DNA,并通过测定不同OD值和琼脂糖凝胶电泳分别检测DNA样品液的纯度、浓度和完整性.结果表明,DNA带型清晰,未发生降解;DNA样品OD260/OD280的值在1.792~1.905之间,均值为1.861,即纯度较高;OD320的值介于0.000~0.002之间,均值为0.0008,即DNA样品中悬浮物的量较少;所有DNA样品液的OD260/OD230的值均大于2.0,即DNA样品没有被碳水化合物、盐类所污染. PCR扩增产物的条带清晰可辨,能够实现多态性片段的分离.总之,本试验的材料易得,操作简便、实用,易于实施,在油菜种质资源分析、种子纯度鉴定乃至种子分子机理探索等方面具有重要意义.。
安徽省宣城市三校2022-2023学年高三第二次诊断性检测生物试卷含解析
2023年高考生物模拟试卷考生请注意：1．答题前请将考场、试室号、座位号、考生号、姓名写在试卷密封线内，不得在试卷上作任何标记。
2．第一部分选择题每小题选出答案后，需将答案写在试卷指定的括号内，第二部分非选择题答案写在试卷题目指定的位置上。
3．考生必须保证答题卡的整洁。
考试结束后，请将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。
每小题只有一个选项符合题目要求）1．为研究低温和细胞分裂素对茄子光合作用有关指标的影响，实验人员设计了如下实验方案（实验过程中光照和二氧化碳浓度适宜），结果如下表。
下列有关分析中错误的是组别处理甲常温＋喷施蒸馏水18.69 9.19 0.153乙常温＋细胞分裂素溶液20.17 12.58 0.168丙低温＋喷施蒸馏水10.74 2.75 0.053丁低温＋细胞分裂素溶液12.01 4.03 0.064A．低温会导致叶绿素含量和气孔导度降低B．细胞分裂素处理会导致叶绿素含量和气孔导度增加C．细胞分裂素可缓解低温对光合作用速率的抑制D．常温下喷洒高浓度的细胞分裂素能进一步提高茄子的光合作用速率2．细胞代谢能在常温常压下迅速有序地进行，其中酶起着重要作用。
下列叙述错误的是A．酶是所有活细胞都含有的具有催化作用的有机物B．H2O2分解实验中，加热、Fe3+、酶降低活化能的效果依次增强C．有些酶需要通过内质网和高尔基体进行加工、运输D．人体的各种酶发挥作用所需的最适条件是不完全相同的3．在农业以及畜牧业的生产中，许多措施体现了对生态学原理的应用，下列叙述正确的是（）A．农田除草降低了种间竞争，提高了能量传递效率B．利用性引诱剂杀死某害虫的雄虫可降低该害虫的K值C．10万“鸭子军队”出征巴基斯坦灭蝗属于生物防治，可有效避免环境污染D．增加人工林生物种类和数量可提高其营养结构的复杂程度和恢复力稳定性4．科研人员从肿瘤细胞中发现了蛋白S，为了研究其功能做了如下实验：将DNA模板和RNA聚合酶混合一段时间后加入原料，其中鸟嘌呤核糖核苷酸用32P标记，一起温育一段时间后加入肝素（可以与RNA聚合酶结合），然后再加入蛋白S，结果如下图所示。
油菜品种DNA提取方法优化
油菜品种DNA提取方法优化高飞;张田;宋玉英;史桂琴【摘要】根据种子纯度检验的行业特点,改进了油菜幼苗的研磨方法,发现在液氮预冷的离心管中使用玻璃棒掏碎的方法更适合油菜品种的样品粉碎.该方法既显著提高了油菜幼苗的研磨效率,又保证了DNA提取的量,能有效地避免传统研磨方法提取DNA为空管的现象,同时具有安全、无污染的特点,从而提高了检测的准确性和工作效率.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2010(029)001【总页数】4页(P27-30)【关键词】油菜;研磨方法;DNA提取【作者】高飞;张田;宋玉英;史桂琴【作者单位】陕西省种子管理站,西安,710021;陕西省种子管理站,西安,710021;陕西省种子管理站,西安,710021;陕西省种子管理站,西安,710021【正文语种】中文【中图分类】S565.4油菜(Brassica campestris L.)为十字花科，芸苔属，一年生草本，是我国最主要的油料作物。
杂交油菜在我国种植面积已达85%以上，为确保种子销售之前得到正确的鉴定结果，避免不合格种子流入市场，必须加强对杂交种的质量控制。
目前纯度鉴定主要采取异地种植鉴定［1］和室内蛋白质电泳检测［2］，长期以来品种真实性和纯度的检测仍以传统的大田小区种植为主，但此法所需周期长、成本高，而且易受环境因素和检测人员水平的影响，只能进行后控检测［3］。
蛋白质电泳检测多态性相对较低以及易受电泳条件影响，所以蛋白检测在指纹图谱中应用受到一定限制［4，5］。
分子标记具有信息含量丰富，检测不受季节、环境的影响等优点［6］，是目前最先进的遗传标记系统。
油菜进行发芽鉴定一般5～6 d，这时幼苗较小，DNA提取如果用传统的研钵研磨，样品损失较大、提取效率也低，还容易出现空管现象，不利于该方法在检测行业中的推广。
虽然DNA提取方法已经被很多人优化及简化，但是人们往往把精力集中到了如何优化及简化DNA提取的步骤［7～10］，而很少有关于DNA研磨方法改善的报道。
油菜总DNA的提取CTAB法
油菜总DNA的提取(CTAB法)本文共分为三部分：一．操作流程二．试剂配方三．注意事项一．操作流程植物样品的采集与保存通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集的过程中应尽可能使组织材料保持水分，在取样时通常将样品存放在2ml离心管或者4cm*5cm大小的薄膜袋中，然后将它们统一放置在密闭的冰盒中，这样可使组织材料3～5 d 仍然保持新鲜。
对于采集回来的样品如要长期保存，应经液氮处理后贮存在-80℃冰箱或直接储放于液氮中，且在与提取缓冲液接触前，应防止冰冻的样品在空气中融化，否则酚类易被氧化。
植物样品的研磨将每个需要研磨的单样（有时需要混样后再磨）迅速放入研钵中，直接用配套的棒槌进行干磨，当植物组织完全磨碎后，再根据样品量的多少加入2%的CTAB，通常2cm2的油菜叶片加入量为700ul，再用棒槌稍微研磨成匀浆，倒入2ml离心管中保存以备下一步使用。
植物样品的水浴将离心管中的植物组织匀浆装到离心管盒里，然后放到65℃的水浴锅里进行水浴1小时，前30分钟每隔几分钟摇晃一次，后30分钟每隔10分钟摇一次，原则是充分摇匀。
加“24:1”溶液将水浴好的匀浆放置冷却至室温，加入等体积的“24:1”溶液，手动轻轻上下摇晃15至20分钟。
然后12000rpm离心12分钟。
吸上清将离心好的离心管按顺序摆放在操作板上，将上清溶液吸到新的离心管中，通常吸取量为400ul，但也可以调整，基本原则是不能将位于上清液下面的残留组织吸到新离心管中。
总DNA的析出向上清液中加入1/10体积的醋酸钾溶液，然后加入等体积的冰乙醇，再轻轻摇晃几下，将冰乙醇与上清液充分混匀，放入-4℃的冰箱中静置30分钟左右。
总DNA的离心将静置后的离心管在12000rpm下离心3-5分钟，再倒掉上清液，加入76%的乙醇后静置5-6小时，加入76%的乙醇静置5-6小时的洗涤过程可重复操作1-2遍。
晾干将76%乙醇倒掉，然后将含有DNA的离心管置于室温进行自然晾干。