2014-7-22正确采集临床微生物检验标本-蒋晓飞
正确留取微生物学标本[1]
![正确留取微生物学标本[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/3302021fc5da50e2524d7f50.png)
大肠埃细菌、克雷伯菌、 主要为肠道菌群或会阴部细菌逆行感染， 变形杆菌、淋病奈瑟菌 多见于女性，多为单一细菌感染，以大 肠埃希菌感染最常见。 大肠埃细菌、克雷伯菌、 变形杆菌、普罗威登菌、 沙雷菌、不动杆菌、假单 胞菌、葡萄球菌、肠球菌 多见于留置导尿管、肾盂造瘘术、尿路 结石、尿路重建、前列腺肥大、膀胱排 空能力受损的患者，容易发生多种微生 物的混合感染，易被误认为标本污染。
采血部位:多次采血应在不同部位的血 采血部位 多次采血应在不同部位的血 多次采血应在不同部位 管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。 管穿刺以排除皮肤菌丛污染的可能。 避免从血管插管内取血,因插管常被 要避免从血管插管内取血 因插管常被 污染其培养结果不能反映真实情况。 污染其培养结果不能反映真实情况。 在不同部位取血, 在不同部位取血 2 次分离出同样菌种 才是确定病原菌的有力证据。 才是确定病原菌的有力证据。选择肘 静脉等饱满、血流量大的血管， 静脉等饱满、血流量大的血管，避免 一次采血量不足二次再抽而增加污染 机会，严格无菌操作， 机会，严格无菌操作，采血部位严格 消毒。 消毒。
尿液标本的留取
正常人尿液是无菌的，而尿液细 菌培养最大的问题是杂菌污染。 正常人外尿道有大肠杆菌、葡萄 球菌等存在。而这些细菌又是尿 路感染中常见的病源菌。因此要 作好尿液细菌学检查，首先应注 意标本收集问题。
尿液标本的留取
尿液经尿道排出时会受到尿道内正常菌群 的污染,但定量培养时计数不会超过103 CFU /m l, 泌尿系感染时定量培养在104 ～ 105 CFU /m l 。 另外,由于绝大多数的泌尿系感染是由肠杆 菌科细菌引起,而此类细菌的硝酸盐还原实 验为阳性,故可参考尿十项检查中的硝酸盐 还原实验来推断是否有细菌感染。
耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从 耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是 评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法， 但有一定的痛苦．患者难以接受。主要用 于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标 本的采集。
怎样正确采集病原微生物标本要点
注意事项
1.生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵 循无菌操作规程以减少杂菌污染。 2.由于阴道正常菌群的存在而使细菌的分离鉴定 受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽 量减少或避免正常菌群的污染。 3.疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿 娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送 检。 4.沙眼衣原体和病毒均在宿主细胞内繁殖，取材 时拭子应在病变部位（移行上皮处稍内）停留十几 秒钟，并采集尽可能多的上皮细胞。
• 怀疑有亚急性心内膜炎或导管相关性菌血症时： • 1～2小时内采集三份血标本
正确的采血方法
采血时的皮肤消毒推荐采用三步消毒法： 1.首先用70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒钟以上。 2.然后用一根碘酊或碘伏棉签消毒皮肤（1%～2%碘酊 30秒或10%碘伏消毒60秒），从穿刺点向外以 1.5cm～2cm直径画圈进行消毒。 3.最后用70%酒精脱碘。 注意对碘过敏的患者，只能用70%酒精消毒，消毒60秒 钟，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。
1.有发热等症状时； 2.在使用抗生素的情况下； 3.怀疑有亚急性心内膜炎时。
亚急性心内膜炎 • 病例:女性患者，怀疑为亚急性心内膜炎入院， 入院后当天连续送三次血培养均为阴性，但临 床上有明显的脓毒血症症状。微生物室注意到 三次血培养的抽血时间为4pm,6pm和9pm，与主 管医生沟通后，建议两小时内连续送三次血培 养。结果第二批血培养中有二次为阳性，均培 养出草绿色链球菌。
痰涂片检查是否标本合格
• 痰肉眼观察: 记录标本外观 唾液、带血、粘液样、水样、脓性的、粘液 脓性、脓性粘液样 • 显微镜检查：取脓性部分涂在玻片上 • 作革兰染色. 低倍视野下看涂片，记录5个视野下 平均细胞数。
痰涂片的判定
临床微生物标本的正确采集
二、临床各种微生物标
本的正确采集方法 （需氧）
标本采集的普遍原则
避免自身菌群的污染，只要可能的话，应该确 定一个代表感染过程的标本。 选择正确的解剖部位，采用适当的技术和设备 采集标本。 收集标本量要足够，量少可能导致假阴性结果。 每份标本上注明姓名，标本来源，采集部位， 时间和日期。 将标本放在设计用于提高可能病原体的生存、 无漏、无菌、无潜在安全性问题的容器内。
采血时机
在出现临床症状后应尽快抽血作培养，最好在 发热初期和高峰或寒战时。 原则上应选择在抗菌药物应用之前，对已应用 药物而病情不允许停药的患者也应在下一次用 药前采血。
采血部位
通常采血部位为肘静脉。 疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜 多次采血时, 应在不同部位进行。 不要从血管插管内采血。 切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本。
2.血液标本采集其他血流感染 的患者，需做血液细菌培养以明确病原。 及时、准确地从患者血液中分离出病原菌，才 能正确实施有效地抗菌治疗，从而有助于提高 治愈率和降低医疗费用。
目前血培养的问题
采血时机不合适 采血套数不够 采血量不足 只做需氧培养，不同时做厌氧培养 采血前或采血时正在使用抗生素治疗
采集前患者应用冷开水反复漱口， 拭子的选择：要求无菌、不含抑制剂； 预先沾湿拭子（非常重要）； 由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，将棉 拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧，涂抹数次以取 得标本。 对化脓性扁桃体炎或口腔念珠菌病，直取病灶部位， 拭子要避免接触口腔及舌粘膜。减少污染。 立即送检。室温保存。
3.尿液标本采集
尿培养送检指征
临床微生物标本规范化采集和送检中国专家共识
临床微生物标本规范化采集和送检中国专家共识牵头专家：胡必杰、倪语星、马小军、肖永红编写专家（按首字母拼音排序）：蔡绍曦、陈佰义、褚云卓、高晓东、顾兵、黄勋、李光辉、李卫光、刘思远、刘运喜、陆群、卢晓阳、吕媛、孙自镛、索瑶、汤灵玲、王辉、王明贵、王选锭、吴安华、徐英春、颜青、俞云松、战榕、张卫红、宗志勇中华预防医学会医院感染控制分会2017年1月目录总则 (3)第一节：血培养标本 (5)第二节：呼吸道标本 (8)第三节：尿液标本 (13)第四节：其它无菌体液标本 (15)第五节：胃肠道标本： (20)第六节：生殖道标本 (24)第七节：皮肤、软组织标本 (27)总则感染性疾病的正确诊治需要以正确的病原学检测作为指导，而正确的病原学检测其前提是采集和送检合格标本。
因此，必须规范微生物标本的采集和运送，避免因标本的不合格，产生错误的病原学检测结果而误导临床治疗。
一、微生物标本采集的基本原则1.在抗菌药物使用前采集标本。
临床疑似感染的患者，必须先采集微生物标本送检，再使用抗菌药物进行治疗。
2.无菌部位的标本更具有临床价值，有菌部位采集的标本需要清除正常菌群和定植细菌才有意义。
应尽量送检无菌部位的标本，尤其是血培养。
有菌部位标本应避免“正常菌群导致标本的污染”。
人体很多部位，如下呼吸道（痰液标本）、鼻窦、皮肤伤口等处的正常菌群极易污染标本。
因此，从这些部位采集标本，要尽可能降低这些部位正常菌群或定植细菌对标本污染的可能性。
有菌部位的标本不是最理想的微生物标本。
3.标本的标签和申请单信息要完整。
对于每一份标本，实验室都需要了解该患者和标本的详细信息以及医生的送检目的。
事实上，实验室对于标本所做的所有分析，都必须基于这些信息。
申请单的内容应包括：1）患者信息：姓名、性别、年龄、患者唯一编码（如住院号）等；2）申请科室或病区、申请医生；3）标本信息：标本类型、采集日期及时间、采集部位、采集方法；4）临床诊断；5）检测目的，尤其是一些特殊检测项目；6）是否已使用抗菌药物。
临床微生物标本采集规范
新生儿及对碘过敏的患者，只能用 75%酒精消毒60s，待穿刺部位酒精挥发干 燥后穿刺采血。
2.培养瓶消毒程序： （1）用75%酒精（不要用碘液消毒）消毒 血培养瓶橡皮塞，作用60秒。 （2）用无菌纱布或无菌棉签擦去橡皮塞 表面剩余的酒精，然后注入血液。
❖ 2. 有肉眼脓尿或血尿； ❖ 3. 尿常规检查白细胞或亚硝酸盐阳性； ❖ 4. 有不明原因的发热，无其他局部症状； ❖ 5. 留置导尿管的患者出现发热； ❖ 6. 膀胱排空功能受损； ❖ 7. 泌尿系统疾病手术前；
（二）尿培养标本采集方法
标本采集应在使用抗生素之前，避免消毒剂污染标本。
❖ 清洁中段尿 留取清晨清洁中段尿标本，先用肥皂 水仔细清洗会阴部，再用清水冲洗尿道口周围；将 前段尿排去，留取中段尿10ml左右于无菌容器内， 立即加盖送检，2h内接种。该方法简单、易行，是 最常用的尿标本收集方法，但是容易受到皮肤细菌 污染。
要求： ✓ 严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手按
压静脉，除非带有无菌手套。 ✓ 不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头，
采用真空采血装置能降低污染率。
（三）血培养标本采集和运送
1.采集时间
在使用抗菌药物之前
寒战和发烧开始出现2小时内，此时为采集血培养 标本进行病原菌培养的最佳时机。
疑似感染性心内膜炎或导管相关性感染时，患者 呈持续菌血症状态，需要在24小时内多次采集血培 养，以提高检出率
❖ 留置导尿管收集尿液：留置导尿患者应消毒导尿管上端外部 及尿管口，采取无菌操作方法，用注射器通过导尿管吸取尿 液。注意防止混入消毒剂，不能从尿液收集袋中采集尿液。 长期留置导尿管患者常规尿培养没有临床意义,应在更换新 导尿管后抽取，导尿管留置时间延长易导致定植菌大量繁殖。
临床微生物学检验标本的采集
答：不同类型的微生物对保存温度的要求不同。一般来说，细菌、真菌等可在4℃或-20℃冰箱中保存数天至数周；病毒等则需要 使用-80℃超低温冰箱进行长期保存。在选择保存温度时，应根据具体微生物类型和实验要求进行选择。
问题解答与经验分享
如何确保标本运输安全？
答：在运输前应仔细检查容器是否密封良好，并使用足够的吸收材料包裹容器以防意外泄漏。同时，在运 输过程中应确保标本处于适当的低温环境中，并标识清晰以便实验室准确接收和处理。
结果分析
考虑患者为败血症，革兰氏阴性杆菌为致病菌。结合患者临床表现和 实验室检查结果，制定相应的治疗方案。
案例二：尿路感染诊断思路探讨
1 2
病例介绍 患者女性，60岁，因尿频、尿急、尿痛就诊。查 体显示尿道口红肿，有脓性分泌物。
实验室检查 尿常规结果显示白细胞增多，细菌培养阳性。
3
诊断思路
根据患者临床表现和实验室检查结果，初步诊断 为尿路感染。进一步进行细菌鉴定和药敏试验， 以指导临床治疗。
保存时间 不同类型的微生物标本保存时间不同，应根据具体要求进 行保存。一般来说，细菌、真菌等可保存数天至数周，病 毒等则需要长期保存。
标本运输注意事项
保持低温
在运输过程中，应确保标本处于适当的低温环境中，以防止微生 物死亡或变异。
防止泄漏
运输前应检查容器是否密封良好，防止标本泄漏。同时，应使用 足够的吸收材料包裹容器，以防意外泄漏。
为临床诊断和治疗提供准确、可靠 的微生物学依据，指导合理用药。
微生物学检验目的
01
02
03
确定病原体种类
通过检验标本中的微生物， 明确病原体种类，为针对 性治疗提供依据。
评估病情严重程度
临床微生物检验标本的正确采集及注意事项.
标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误, 不当标本可导致假阴性。
假阳性结果的出现。
因此正确采集临床微生物标本, 直接影响到微生物培养鉴定结果。
可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗,为临床科学用药和成功的感染控制提供依据,是正确、合理使用抗菌药物, 延缓细菌耐药, 减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步, 也是最重要的一步。
为此应正确采集各种细菌学标本。
一、血液标本的采集1、皮肤消毒程序:a.75%酒精清洁局部皮肤 30s 以上。
b. 待皮肤干后, 再用1%-2.%碘酊作用 30s 或 10%碘伏作用 90s 以上,从穿刺点中心部位向外画圈消毒,范围不应小于 3cm (直径 , 且不能用手指触摸消毒后的皮肤。
c. 皮肤碘酒干后 (约1min , 穿刺采集血液, 采血量成人 10-20ml ,婴幼儿 1-2ml 。
儿童 3-5ml 。
d. 培养瓶消毒程序:70%酒精擦拭血培养橡皮塞,作用 60s ;用无菌棉签清除橡皮塞表面残余酒精。
用注射器无菌采血后立即在床旁接种培养瓶,并迅速轻摇,充分混匀防止凝固,但又不可剧震以防溶血。
立即送检,切勿冷藏。
一般情况下可把血培养瓶放 20-22℃。
不放冰箱。
2、注意事项:a. 怀疑菌血症应尽早采血,体温上升(38.5℃采血可提高阳性率, 但也要防止因等待而延误时机。
b. 对已经使用抗菌药物,而又不能停药者,也应在下次用药前采血。
切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本, 也不能从静脉导管及动脉插管中取血。
c. 培养基与血液之比以 10:1为宜,以稀释血液中的抗生素,抗体等杀菌物质;有人主张对接受抗菌药物治疗的病人, 培养基与采血量之比可为 20:1或大于这个比例。
d. 近年研究表明, 将血液注入血培养基前, 更换针头反而易导致污染。
e. 每例至少采血两次,间隔 0.5-1h , 以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。
f. 疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人,以肘动脉或股动脉采血为宜,除在发热期采血外,并要多次采血(24h3-4次和增加采血量(可增加 10ml 。
临床微生物标本采集与送检规范(试行)
临床微生物标本采集与送检规范(试行）临床微生物标本采集与送检是目前临床实验室诊断质量保证中较为薄弱的环节，严重影响临床微生物学实验室对感染样本中致病菌的分离培养的阳性率和医院感染病原体监控，也影响临床诊断，合理选用抗菌药物，降低耐药菌的产生和提高感染的治愈率，而且对预测或及时发现医院感染的暴发流行、杜绝感染蔓延、研究医院感染的发病机制和环节、制定有效的医院感染控制措施等，均具有十分重要的意义。
严格实施正确的微生物标本送检和检验方法，是做好医院感染病原体监测的关键。
鉴此，希望临床各科能按照本操作规范采样送检.一、医院感染标本的采集和运送基本原则1．发现医院感染应及时采集微生物标本作病原学检查，我院总的医院微生物标本送检率应不低于40％。
2．尽量在抗菌药物使用前采集标本。
3．标本采集时应严格执行无菌操作，减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染。
4．标本采集后立即送至实验室,床旁接种可提高病原菌检出率。
5．以棉拭子采集的标本如咽拭子、肛拭子或伤口拭子，应立即送检。
6．盛标本容器须经灭菌处理,但不得使用消毒剂.7．送检标本应注明来源和检验目的，使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境，必要时应注明选用何种抗菌药物.二、常见医院感染标本送检方法1．血液与骨髓①通常采血部位为肘静脉.疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。
切忌在静脉点滴抗菌药物的静脉处采取血标本。
②采血部位的局部皮肤应严格消毒。
将采集的血液注入血培养基前，应更换针头或过火消毒针头.血培养瓶应在避光室温中保存,不必置冰箱保存。
③每次采血量成人5~10ml,婴幼儿l～5ml，培养基与血液之比以lO：1为宜，以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。
④怀疑菌血症应尽早采血，体温上升阶段采血可提高阳性率，但要防止因等待而延误时机.对已用抗菌药物而又不能停药者，可在下次用药前采血.⑤每例病人至少采血两次，间隔0．5～lh,以利于提高阳性率和区分感染菌与皮肤污染菌.⑥对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人,在病灶部位或髂前(后）上棘处严格消毒后抽取骨髓lml作增菌培养。
临床微生物标本规范化采集和送检
阴道
用扩阴器扩张阴道，用灭菌女性拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或后穹隆
分泌物
处分泌物。退出时不要触及皮肤，避免污染。
宫颈 分秘物
用扩阴器扩张阴道，先用无菌棉球擦除宫颈口分泌物，再用女性拭子 插入宫颈管2厘米，轻轻转动，并停留10到30秒。钭采样拭子置入无菌试管 内送检。
巴氏腺、 尿道旁
腺
用扩阴器扩张阴道，在宫颈内放置导管，通过导管插入培养拭子的尖 端并采集子宫内腔分泌物。防止接触宫颈黏膜，减少污染。拭子置于无菌 试管内送检。
申请单上应包括患者姓名、病历号、采集日期时间、诊断、相关旅行史等。 标本标识要求有唯一标识号或条码。标本上的标签中应包括患者姓名、病历号、 采集时间等。送检的新鲜标本应报告粪便的性状，标本表面或标本里面存在血液 也应注明。
四)标本运输
粪便标本应尽快送检，室温下运送标本时间不超过2小时。若不能及时送检，可加入pH 7.0磷酸盐甘油缓冲保存液或使用Cary-Blair运送培养基置于4℃冰箱保存，保存时间不超过 24小时。
五)实验室拒收标准
可对标本进行革兰染色，评价标本质量：如果存在上皮细胞，说明标本存在表面污染， 培养结果将受影响；如果只有白细胞，说明标本质量合格。
大多数生殖道感染为性传播性疾病（STD）,当疑为生殖道感染性疾病时，首先 了解是否有不洁性交史，然后根据症状确定检查方向。对于男性患者来讲，先检 查尿道是否有脓性分泌物，再依次是前列腺液、精液。对于女性患者，采集阴道 后穹隆处或宫颈分泌物作培养或涂片镜检。
一)临床采样指征： 具有外阴溃疡、瘙痒及灼热感，出现分泌物、赘生物等症状者。
标本采集应在停服铋剂或抗菌药物7天后进行
三)标签及申请单
申请单上应包括患者姓名、病历号、采集日期时间、诊断等，要明确注明标本采集的部 位，以及检测目的，如“幽门螺旋杆菌培养”。标本标识要求有唯一标识号或条码。标本 上的标签中应包括患者姓名、病历号、采集时间、采集部位等。送检的新鲜标本应报告粪 便的性状，标本外观。
第2章 临床微生物检验标本的采集PPT课件
真菌
念球菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌
厌氧菌
拟杆菌、产气荚膜梭菌
21
五、临床意义
❖ 血液感染是一种危重的全身感染，对其进行病原菌的检验， 提供病原学的诊断极为重要。
❖ 当少量细菌侵入血液循环，为一过性，不繁殖或很少繁殖， 不引起或仅引起轻微的炎症反应者称为菌血症，若有全身 性炎症反应的表现称为脓毒症。
34
❖ 真菌性脑膜炎：最常见于隐球菌脑膜炎，其他的 真菌性脑膜炎如白假丝酵母菌、球孢子性脑膜炎 日渐增多，特别是免疫功能低下和恶性疾病患者 易并发，如AIDS、恶性肿瘤，严重糖尿病、 SLE等患者易发生。
35
❖ 流行性乙型脑炎：是一种人兽共患的自然疫源性 疾病。传染源为患者和家禽、家畜及野生动物， 蚊虫为传播媒介，经蚊虫叮咬、吸血而传播，人 群对本病普遍易感，感染后多数人无症状而成为 隐性感染。但可获得持久免疫力，再次发病者极 少见。少数患者病情严重，病死率高，可留有后 遗症。
粪便标本送检，标本采集后应尽快送检，有条件 的提倡使用运送培养基。
60
❖ 消化道溃疡、幽门螺杆菌标本可取胃窦和胃体等 部位各一块胃黏膜活检标本，置入无菌生理盐水 中立即送检，或将标本放于运送培养基，于4℃ 保存，24h内送检。
61
二、检验方法
病毒 乙型脑炎病毒 柯萨奇病毒A 柯萨奇病毒B 脊髓灰质炎病毒
真菌及其他 新生隐球菌 白假丝酵母菌 钩端螺旋体
结核分枝杆菌
拟杆菌
新肠道病毒68～71
产单核细胞李斯特菌 不动杆菌
炭疽芽胞杆菌 葡萄球菌
肺炎克雷白杆菌 流感嗜血杆菌
狂犬毒
33
五、临床意义
❖ 细菌性脑膜炎：是中枢神经系统感染的常见类型， 其中以流行性脑脊髓膜炎为常见，有的呈暴发型， 病情严重，病死率较高；多发年龄在5～29岁， 冬春季多发，可用青霉素类、磺胺类、头孢霉素 类抗生素治疗。结核性脑膜炎最常见，近几年呈 回升趋势，为防治重点。
微生物标本的正确采集与临床课件
2019/8/2
闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹 腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭的脓肿常采用穿刺 或引流的的方法采样，应在用药前采集，应注意 脓液的气味、性状、颜色注意厌氧菌存在的可能。
痰培养阳性结果分析
第二种情况：患者有典型的呼吸道感染症状，按 细菌报告选用的抗生素治疗无效，改为凭经验联 合用药
这类患者痰细菌检验时有如下特征：痰涂片：大 量白细胞，吞噬或伴行的是革兰阳性球菌（形似 葡萄球菌）、革兰染色阴阳不定的小球菌或杆菌 （形似厌氧菌）、出芽的念珠菌，偶见革兰阴性 杆菌；痰培养：生长大量阴性杆菌，痰涂片所见 的大量细菌不生长或少量生长，痰涂片镜检与痰 培养结果不一致。
2019/8/2
2019/8/2
2019/8/2
临床对细菌室可能的抱怨
理由 报告发出时间太慢； 阳性率太低，临床符合率差； ………
结论：细菌室水平太差，还是凭经验用药！
临床对细菌室可能的抱怨
—报告发出时间太慢
分析原因：细菌生长慢，生长需要适宜的条件。
细菌一般以二分裂法进行无性繁殖，在适宜条件下，多数 细菌分裂一次需要20-30分钟，结核分枝杆菌需18-20小时 才分裂一次。对数期（鉴定、药敏常用该期的培养物）一 般在培养后8-18小时。
已使用抗菌药，病原菌受到伤害，不能正常生长。 实验室条件有限，苛养菌漏检，常规培养不能检测厌氧菌、
结核杆菌、衣原体、支原体、病毒等. 解决方法：拒收制度；规范操作；改进技术；加强沟 通………
临床微生物检验标本的正确采集
临床微生物检验标本的正确采集摘要：目的探讨微生物实验室不合格标本的原因及相应的质量控制措施。
方法抽取微生物检验样品28653份，由3名具有中级以上职称的有经验人员评价采集的样品是否合格，并跟踪分析不合格样品的原因。
结果28653份样品中，不合格462份，不合格率为1.61%(462/28653)。
包括痰液、尿液、血液、分泌物、粪便和无菌体液，分别有278、95、46、33、8和2种，分别占60.17%、20.56%、9.96%、7.14%、1.74%和0.43%。
不合格的主要原因是痰液不规范、标本被污染、采集时间不当。
结论应严格管理微生物检验标本采集和送检的各个环节，加强对护士的培训，实施有效的质量管理措施，加强科室间的合作，提高微生物检验的准确性和有效性。
关键词：微生物；测试样品；不合格；原因微生物检验是临床预防和治疗感染的重要组成部分。
随着微生物检验技术的发展和完善，实验室工作人员的综合能力得到了显著提高，实验室的内在素质也得到了显著提高[1]。
为了提高实验室结果的可靠性和准确性，应在检查之前、期间和之后进行系统的质量保证[2]。
目前，在检验过程中，发现大量临床不合格的检验前微生物样本，显著降低了检验结果的质量和及时性，直接影响疾病的诊断和治疗。
因此，非常有必要在检验前对不合格的微生物检验样品进行深入分析，并给予有效的质量控制[3]。
现将微生物检验样品不合格原因及相应质量控制措施分析报告如下。
1数据和方法1.1 总说明2018年3月至2019年8月共采集样本28653份，样本类型包括痰液、尿液、分泌物、粪便、血液。
1.2方法由三名具有中级以上职称的经验丰富的检验人员对送检样品进行评价，判断是否合格，并对不合格原因进行跟踪、分析和记录。
评价依据包括采集时间、采集方法和标本外观等。
2结果2653份标本中，不合格462份，不合格率为1.61% (462/28653)。
包括痰液、尿液、血液、分泌物、粪便和无菌体液，分别有278、95、46、33、8和2种，分别占60.17%、20.56%、9.96%、7.14%、1.74%和0.43%。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
（二）各种微生物检验标本采集要点
一）血培养标本
• 败血症是一个非常严重的问题. • 血液中的微生物在3分钟内到达每个器官 • 阳性的血培养报告应被视为潜在的医疗紧 急状态警报。
– 发展为败血症的比率高达40%~90%。
• 血培养阳性的患者应尽可能快地给予适当 的抗感染治疗。
菌血症的结局 Outcome of Bacteremia
口腔、呼吸道
血液标本
痰标本
皮下感染 浅表伤口
尿液标本
皮肤、黏膜污染！来自尿道、会阴部标本采集
4. 5. 要收集足够量的标本。 量少可能导致假阴性结果。 信息要完整。 信息内容：病人姓名、年龄、性别、住院号、 科别、标本类型（标本来源）和培养项目。 医生信息
6. 注意安全 • 采集：采取标准防护措施 • 运送：不可造成标本外漏及容器破损并迅速送 到实验室 • 储存及操作：避免标本中污染菌生长并保持病 原菌活性 7. 立刻送检
发热高峰后1-12小时
Thomson et al. 1991. ASCP. Mayo Clinic Study
血培养采集时间的重要性 #2 % 第一次血培养阳性 vs 体温峰值
Riedel et al. 2008 JCM 46:1381-.
35 30 25 20 15 10 5 0
菌 菌 菌 菌 菌 菌 球 球 球 杆 杆 胞 萄 萄 肠 肠 肠 单 沟 雷 伯 菌
皮肤正常菌群 1.凝固酶阴性葡萄球菌 2.类白喉 3.金黄色葡萄球菌 4.草绿色链球菌 5.芽孢杆菌属 6.秕糠马拉癣菌 7.念珠菌 8.分枝杆菌（偶尔） 泌尿道正常菌群 1.凝固酶阴性葡萄球菌 2.类白喉 3.草绿色链球菌 4.分枝杆菌 5.拟杆菌属及梭杆菌属 6.消化链球菌属
标本采集
穿刺部位
血培养阳性套数
a.阳性套数/总套数——区分污染与真正菌血症有用的工具:多 套生长，且为同一种细菌，常为真正的菌血症； b.同时抽取多套中只有一套生长，且为常见污染菌——通常 为污染；一段时间内抽取多套中只有一套生长，且为常见 污染菌——常提示污染或一过性菌血症； c.建议一次至少同时抽取2套
导管采不同套数，1套报阳时的阳性预测值
不适合做细菌培养 不适合做细菌培养 不适合做细菌培养 送交深部组织或抽吸物 送交深部组织或抽吸物 送交深部组织或抽吸物 送交深部组织或抽吸物 送交深部组织或抽吸物 送交深部组织或抽吸物
标本采集
2.
选择合适的部位采集用于厌氧菌培养的标本，见下表。 活检或针头抽吸物是最佳的选择，一般不要用厌氧菌 拭子标本。 决不要把厌氧菌培养的标本冷藏，相反， 要在室温下保存。
表1微生物标本接受或拒绝标准及处理方式
项目 拒绝标准 处理方式 对于非损伤方法获得的标本（尿、痰、 咽标本），要再送一个新的标本。 对于损伤程序获得的标本（针抽吸物、 体液或组织），要和取样医生协商后， 再处理标本。在报告上注明问题，并记 录所采取的措施。
标 无标签，不处理 本
不合适的或泄漏的容器，不处 通知送检者并要求再送一个标本。在患 理 者报告上注明问题和所采取的措施。 没 有 提 供 标 本 所 适 宜 的 条 件 与送检者联系，阐明检测要求，指出不 （ 如 厌 氧 送 检 的 却 用 需 氧 送 符合之处。并要求一个能满足检测条件 检），不处理 的标本。 将标本臵于适宜的保护剂中和正确的保 同一天内同一检测条件的重复 存温度下。通知送检者，指出重复的情 标本（血除外），不处理 况。在报告上注明问题所在。
死亡-菌血症 17%
死亡-疾病 15%
死亡-菌血症 9%
死亡-疾病 7%
痊愈 68%
痊愈 84%
接受不适当的抗感染治疗
接受适当的抗感染治疗
Adapted from Phillips et al., 1990
1.什么时候采集血培养标本？ 2.采多少血量合适？ 3.怎么采集血培养标本？ 4.怎么看血培养报告？
698,2002
garbage in garbage out !
二、如何正确采集临床微 生物检验标本
（一）正确采集临床微生物检验标本 的普遍原则
标本采集
1. 选择正确的解剖部位,采集合适的标本。
标本类型 替代方法或建议
结肠造口术排出物 呕吐物 Foley导管头 坏疽损伤（拭子） 褥疮（拭子） 牙周损伤（拭子） 直肠周围脓肿（拭子） 静脉曲张性溃疡（拭子） 烧伤，伤口（拭子）
可接受材料 抽吸物（用注射器和针头） 血液，骨髓 培养艰难梭菌的大便 外科组织 经气管抽吸物 经耻骨弓上抽吸的尿 子宫内膜抽吸物 不可接受材料 鼻咽拭子 前列腺液或精液 大便或直肠拭子 恶露 痰 经膀胱或导管排泄的尿 子宫颈拭子
利用厌氧菌血培养瓶提高检出
怀疑厌氧菌感染时，特别无菌体液标本，如:血 液、骨髓、胸腹水、腹透液等采用无菌操作注入 厌氧菌血培养瓶中进行增菌可提高检出率。 此时培养项目应为：厌氧血培养+鉴定。
（1）.细菌的菌种 （2）.血培养的套数 （3）.同一套内阳性的瓶数 （4）.生长时间 （5）.每瓶血培养生长的细菌量 （6）.临床和实验室指标 （7）.标本来源
细菌的种类
细菌种类是最重要的判断真正菌血症与污染菌的依据
a.血培养中下列细菌总是代表真正的菌血症：金黄色葡萄球 菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、其他肠杆菌科细菌、铜绿 假单胞菌、白色念珠菌、化脓链球菌、无乳链球菌、产单 核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、淋奈瑟菌、流感嗜血杆 菌和脆弱拟杆菌、念珠菌属细菌和新生隐球菌 b.下列细菌大部分代表污染血培养： 棒状杆菌属细菌、除炭疽外的芽孢杆菌属细菌、丙酸痤疮杆 菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌、草绿色链球菌、梭菌 （产气荚膜梭菌及其他梭菌） c.其中棒状杆菌属细菌、除炭疽外的芽孢杆菌属细菌、丙酸痤 疮杆菌很少代表真正的菌血症 d.6～12%的血培养可多种细菌，通常为高危病人。
3.尽可能避免污染 正常菌群的“背景干扰”（如皮肤、粘 膜、呼吸道）可影响对培养结果的解释 或可因过度生长，掩盖病原菌的存在。
标本采集
非无菌部位 眼 耳 呼吸道 肠胃道 泌尿道 皮肤 毛发 无菌部位 血液 骨髓 脑脊液 胸水 腹水 关节液
眼部正常菌群 1.凝固酶阴性葡萄球菌 2.嗜血杆菌属 3.金黄色葡萄球菌 4.草绿色链球菌
对于成年患者，培养的血量从2ml增加到30ml时，病原菌量成线性增加。当 培养血量为40ml或更多时，虽然病原菌量不成线性增加，但仍旧是增加。
CLSI 47A
体积
% 阳性血培养结果 vs. 采集的套数
80%
100
89%
99%
%
90 80
20 ml/套
真阳性 70
60 50 40 30 20 10 0
•全程质量控制
全部检验流程中各分析阶段 实验室检验错误
理解检验的需求性 检验申请的必要条件 病人准备 标本采集 标本处理
32-75% 分析前
4-32% 分析中
标本分析
9-55% 分析后
报告单的生成 报告单修正 报告判读
b.Med 3:541-551,1983 Clinical Chenistry 48:5,691-
60
阳 性 预 测 值
50 40 30 20 10 0 １套阳性/采集１套 １套阳性/采集２套 １套阳性/采集３套
55% 20% 5%
阳性预测值
%
Tokars, J. I. Clin. Infect. Dis. 39:333–341
三）尿液标本
1. 收集方法
中段尿 无菌导尿管收集 耻骨上方穿刺抽取
二瓶套 三瓶套 四瓶套
二瓶套
三瓶套
四瓶套
一）血培养标本
3. 血标本在需氧和厌氧瓶中的分配
推荐以一个需氧瓶和一个厌氧瓶作为常 规血培养的组合。 当采血量不能满足推荐采血量时，应首 先满足需氧瓶的需要。
4. 减少污染的措施
1.皮肤消毒 2.经皮肤还是经静脉导管采集标本 3.血培养瓶的准备 4.采血团队的作用 5.采用市售采血试剂盒
一）血培养标本
皮肤消毒的方法
血培养瓶口应以75%酒精的消毒剂处 理。
以采血点为中心，由内向外以70%酒精用 力涂抹皮肤。 碘伏由内向外用力涂抹皮肤，等待2-3分 钟。如使用碘酊，等待30秒，让碘液干燥 以发挥杀菌效果。 70%酒精由内向外涂抹除去碘酒液，以 免碘酒液污染血培养液。
血培养容器
1.血量：肉汤比例：1：5～～1：10 2.同一套内增加血培养瓶数不能增加阳性检 出率，避免污染效果也不好（后面详述） 3.需氧培养和厌氧培养：
血培养套的概念
凝固酶阴性葡萄球菌不同瓶数构成血培养套的 阳性检出率
40 35 30 25 20 15 10 5 0
81/235 （34.5%） 127/486 （26%） 64/303 （21.1%）
1套
1st
2nd 2套
3rd 3套
Mayo Clinic Study
用于培养的血液体积
磅
<19 19-30 31-60 61-90 >90 体重 千克 <9 9-14 15-27 28-41 >42 体积 (ml)/ 穿刺 1 3 5 10 20 总量/ 2次穿 刺 2 6 10 20 40 1% 全血体 积 2 ml 6-10 ml 10-20 ml 20-30 ml >40 ml % 总血 液体积 1% 1-3% 1-2% 1-2% 1-2%
正确采集临床微生物检验标本
复旦大学附属华山医院 检验科细菌室 蒋晓飞
一、正确采集临床微生物检验标 本的意义
• 临床微生物检验的目的： 微生物检验的目的：提供病原学诊断的依据； 找到合适的治疗感染的药物 微生物检验必须要能找到病原菌、培养出病原 菌，不能是污染菌 因此要求送检的标本内必须有尽可能多的病原 菌，培养还要求病原菌是活的，尽可能减少污 染菌