华农农药生物活性测定实验2014年

实验一 杀虫剂初步毒力测定

1、 实验原理：

初筛试验，又称初步综合杀虫毒力试验。这种试验不涉及毒杀方式和毒杀能力的大小，一般采用较高的浓度，尽量发挥综合毒效（包括胃毒、触杀、薰蒸等作用）。

一般农药初筛毒力测定方法，根据试虫对象不同，多采用浸渍法、喷雾法、喷粉法、饲料混药法等。每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。一般液剂在0.1-1%，粉剂1-10%。

2、 实验方法与步骤

1、 药剂配制：将A、B药剂配成0.1%的溶液备用。

2、 试虫移取：取小菜蛾3龄幼虫集中混匀后，用毛笔刷入培养皿，

每处理10头，重复一次。

3、 喷布质量检定：用9cm的白色园纸片来检查喷雾雾滴的大小和喷

布是否均匀一致，如不符合要求，可调节喷头及位置，使喷布质

量达到基本要求。

4、 处理方法：采用喷雾法，选用potter喷雾塔，喷布药液前，用清

水及欲喷洒的药液大量喷布。换药前需将受药盘及雾化室底部用

布充分擦净，然后大量喷布试验的药液。在接有小菜蛾的培养皿

中加入一定新鲜菜叶后，用移液管吸取3ml药液进行喷布，约10

秒后，待药液全部沉降，取出培养皿，做好标记，空白对照只喷

洒清水。待药剂干后，将试虫连同饲料置于恢复室内培养24小时

后检查结果。

3、 实验注意事项：

1、 目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药

性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好

采用人工饲养的试虫。

2、 环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气

良好。

3、 处理设计：每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均

要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。

4、 实验结果处理：

处理24小时，48小时后，检查死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并比较不同药剂的毒力大小。试虫死活标准，一般以能正常活动或飞翔的或能正常行动的作为活虫，其余中毒的均为死虫。

5、 思考题：

1、 将筛选药剂的毒力试验结果记入杀虫剂初步毒力试验记载表，

并写成报告。

2、 杀虫剂初步毒力测定在杀虫剂的筛选中有什么重要意义。

实验二 杀菌剂抑菌圈测定法

二．实验原理：

抑菌圈法又叫水平扩散法，此法最早曾广泛应用于抗菌素的效价测定，随后也被用于农业杀菌剂的毒力测定。其基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使其接触培养基或病原菌，经过适当时间的培养后，接触部分的周围由于抗菌物质或杀菌剂的渗透扩散作用，杀死病菌的营养体（菌丝体）、繁殖体（孢子）或抑制其在培养基上生长，而产生抑菌圈。

实验证明，在一定浓度范围内的药剂浓度与抑菌圈直径大小有一定的关系，即杀菌剂在一定范围内抑制菌圈直径或其平方与浓度的对数成直线函数关系，以抑菌圈直径或直径平方为纵轴，药剂浓度的对数为横轴，可绘成直线。如果被测的几种药剂所绘成的直线相互平行，则可根据一定浓度下抑菌圈大小进行不同药剂毒力大小的比较。抑菌圈法已被国际上通用的抗菌素效价测定方法。

四．实验方法与步骤：

1、 药液配制：使用无菌水，将四环素分别配制成0.05、0.10、

0.20、0.40、0.80μg/ml，定容至10ml。以无菌水为对照。

2、 芽孢悬浮液的制备：

3、 制备载菌培养基平面：将熔化的培养基（已灭菌）冷却到45-50℃

时，在无菌条件下，加入适量菌液（按0.5%加入）。混匀后，立即注入平板，每个平板注入培养基10.0 mL，凝固后备用。

4、 药剂处理：在载菌培养基平面上放置牛津杯，（或将配好的药剂

倒入灭菌的小培养皿内，用消毒镊子将已灭菌的滤纸片放入药液中浸泡1分钟后取出，放在消毒滤纸上，使滤纸片上多余的药剂被吸去，在无菌条件下，放入载菌培养基平面上）。共需要4只载菌培养皿，2只为一组，分成二组。在每只培养皿放6个牛津杯（或滤纸片），放置位置如下图所示，图中O代表牛津杯（或滤纸

片），1，2，3，4，5分别代表配制的0.05、0.10、0.20、0.40、

0.80μg/ml 5种药剂浓度，每个牛津杯内加入药液0.2ml，并作好

标记。

5、 培养：处理的培养皿，先放置在2-4℃的冰箱内4-6小时，待药剂在

培养基中充分扩散后，再放入28℃培养。

五．实验注意事项：

1、本实验要注意无菌操作，整个实验操作过程在无菌操作台上完成。

2、药液和培养基混合时注意培养基的温度（45-50℃，温度过高会烫死

病菌，过低培养基会凝固），并保证混合均匀。

3、检查结果时十字交叉量抑菌圈直径，取其平均值。（以毫米为单位）六．实验结果处理：

处理的培养皿，先放置在2-4℃的冰箱内4-6小时，待药剂在培养基中充分扩散后，再放入28℃培养，30-40小时后检查结果，用尺十字交叉测量抑菌圈直径（以毫米为单位），取平均值。将每个培养皿中的0.20μg /ml的抑菌圈直径（共8个）求出总平均值；求出每组（2个）培养皿中0.20μg /ml直径（共4个）的平均值。总平均值与各组平均值的差数即为该组培养皿的校正值。用校正值来校正本组其他浓度的抑菌圈直径（比总平均值小的加上校正值，比总平均值大的则减去校正值）。以药剂浓度对数为横轴，以抑菌圈直径为纵轴绘制曲线，如果各曲线平行，根据药量反应曲线上的中等浓度比较不同的的药剂的抑菌圈大小，以此来判定药剂毒力大小。

七．思考题：

1、将实验结果记载于抑菌圈测定结果记载表上，整理的结果在方格纸上或对数纸上绘成药量反应曲线。以药剂浓度对数为横轴，以抑菌圈直径为纵轴绘成曲线。如果各曲线平行，根据药量反应曲线上的中等浓度比较不同的药剂的抑菌圈大小，以此来判断药剂毒力。并完成实验报