杜鹃花属植物基因组DNA RAPD-PCR反应体系的优化
中国特有植物血水草RAPD反应体系的优化
Abstract In order to establish th e opti m al reaction of RAPD PCR am plificat io n for E om econ chionantha H ance , 2+ th e follow in g param eters w ere opt i m ized : th e concentra tio ns of M g , tem plate DNA, d NTPs, pri m ers and Taq DNA po lym erase . T he opti m a l RAPD PCR react io n system w as as fo llow s a total vo lum e of 25 L conta in s 2 . 5 - 1 2+ - 1 L 10 Buffer , 1 . 8 mm o l! L M g , 2U T aq DNA po lym erase , 50 ng temp late DNA, 0 . 2mm ol! L dNTP s -1 and 1 . 6 mo l! L pri m er . The reaction program fitt ing to the RAPD PCR w as as fo llow s : in it ial denaturation at 94 ∀ for 2 m in, fo llow ed by 5 beforehand cyc les of 94∀ for 20 s , 36∀ for 30 s, 72 ∀ for 75 s; fo llow ed by 40 cyc les o f 94∀ for 20 s , 40∀ for 30 s, 72∀ for 60 s , and a fina l exposure to 72 ∀ for 20 m in , then stored in 4∀ . T h isRAPD PCR syste m has som e d is tin gu ising featu res inc lud ing clear m arker site , stable reaction system, re liable abundant polym orphism s , and better repeatability. It is suitable fo r the study on genetic diversity of E. ch ionantha. K ey w ord s RAPD; reaction syste m; opt i m izatio n ; Eom econ chionantha H ance RAPD( Random Amp lified Po lym orphic DNA )技 术是 20 世纪 90 年代初由 W illia m s和 W elsh 两个 研究小组几乎同时建立的检测随机扩增多态 DNA [ 1] 的分子生物学技术 。 RAPD 分子标记技术具有 周期短、 费用低、 多态性较高、 灵敏度高、 无辐射危 险等特点, 而且它能更全面地反映基因组的变异情 况, 是一种较理想的分子标记方法。目前, 该项技 术已广泛应用于种下水平遗传多样性的检测、 探讨 种间或属间的遗传关系、 种质资源鉴定与分类、 遗 传图谱的构建、 基因定位与分离、 突变体的鉴定及 育种材料等方面
禽波氏杆菌RAPD-PCR反应体系的建立与优化
ｖ ａ ｒ ｉ ｅ ｔ ｙ ｏ ｆ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｓ． Ｔ ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ＲＡ Ｐ Ｄ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｏｒ ｆ Ｂ ｏ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｌ ｌ ａ ａ ｖ ｉ ｕ ｍ， ｇ ｅ ｎ ｏ ｍｉ ｃ ＤＮＡｓ ｏ ｆ Ｂ ｏ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｌ ｌ ａ ａ ｖ ｉ ｕ ｍ ｗ ｅ ｒ ｅ ｅ ｘ — ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ａ ｓ ｔ ｅ ｍｐ ｌ ａ ｔ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ２ ０ ｒ ａ ｎ ｄ ｏ ｍ ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｅ ｄ ． Ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ａ ｌ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｔ ｐ ａ ｒ ａ ｍｅ ｔ ｅ ｒ ｓ ｏ ｆ ＲＡＰ Ｄ— Ｐ ＣＲ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ — ｉ ｅ （ １ ａ ｎ ｄ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ｅ ｔ ｔ ｉ ｎ ｇ ｇ ｒ ａ ｄ ｉ ｅ ｎ ｔ ｏｒ ｆ ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｅ — ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ． Ｔｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈ ａ ｌ ａ ｒ ｇ ｅ ｎ ｕ ｍｂ ｅ ｒ ｏ ｆ ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｒ ｉ ａ ｌ ｓ ． ６ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｒ ａ ｎ ｄ ｏ ｍ ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ ｓ
何首乌基因组DNA提取及RAPD反应体系正交设计优化
何首乌基因组DNA提取及RAPD反应体系正交设计优化(作者：_________ 单位： ____________ 邮编： __________ )【摘要】目的确定适合何首乌RAPD-PC的基因组DNA 提取方法及最适宜反应体系。
方法通过改良的CTAB法提取何首乌基因组DNA研究其用于RAPD-PCR勺可行性。
利用正交设计方法L16 (45)，针对Tag酶，引物，dNTP镁离子，模板设计了5因素4水平的正交实验，优化RAPD-PC反应体系。
结果正交设计结果表明，可以得到几种不同的有效扩增反应体系组合。
根据实际需求，最适宜的RAPD-PC 反应体系为20 卩I，其中1X PCR buffer, Tag 酶1U，弓I 物 1 卩mol/L，镁离子2 mmol/L，dNTP 300 卩mol/L，模板40 ng。
结论改良的CTAB法和正交优化得到的反应体系适合用于何首乌RAPD 遗传多样性分析。
【关键词】何首乌；DNA提取；RAPD正交设计何首乌是我国传统医药中的名贵药材，何首乌块根及茎叶均可入药。
何首乌具有补肝肾、益精血、乌须黑发、养心安神等功效，主治血虚身痛、心烦失眠、劳伤多汗等症。
同时可用于保健和食品等多方面，何首乌块根富含淀粉，含量高达45.2%,药食两用。
RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技术是由美国学者Williams : 1］和Welsh :2］两个研究团队在1990年几乎同时发展起来的。
Williams等在发现RAPD多态性的同时还证明了RAPD标记的分离情况符合孟德尔遗传规律，因而明确了RAPD乍为分子标记用于研究生物遗传变异的理论基础。
RAPD分子标记建立在PCR基础之上。
通过使用一系列具有10个碱基的单链随机引物，对基因组的全部DNA进行PCR扩增以检测多态性。
RAPD^术因其操作简便、反应迅速、成本低和DNA用量少等优点而被广泛应用于药用植物种内或种间亲缘关系和遗传多样性方面的研究。
都支杜鹃ISSR扩增条件的优化
优化， 并在 优化后的基础上 筛选 出８条 效果较好 的引物 ， 在梯度 Ｐ Ｒ仪 中设置温度梯度 ， 到这些引物的最佳退 火 Ｃ 找 温度 。优化 结果表 明 ， 至少在 一定的范 围内底物浓度和 Ｔ ｑ酶含 量对 Ｐ Ｒ反应 结果影 响不 大， ａ Ｃ 相对 而言 ，Ｎ Ｐ浓 ｄＴ 度 和 Ｍｇ 浓度 对反 应结果的影响更加 显著 。优化后 的 ｌ ｌ Ｃ “ ５ｕ Ｒ反应体 系中包括 ２ ｇ 板 Ｄ Ａ、． Ｍ 引物、 Ｐ ０ｎ 模 Ｎ ０３ １５ｕ ｕ ｅ（ ２ ｆ ｅ ，． ａ ． ｌ ｆ ｒＭｇ ｒ ）０ ５Ｕ Ｔ ｑ酶 、． Ｃ２ ０ １ｍ ｄ Ｔ 。 Ｂ ｅ １ ５ｍＭ Ｍｇ ｌ 和 ． Ｍ Ｎ Ｐ 关键词 ：都 支杜鹃 ；ＩＳ ＳＲ；Ｐ Ｒ扩增 ；条件优化 Ｃ 中图分类 号 ：Ｑ ４ ９３ 文献标识码 ：Ａ 文章编 号 ：１７ ￣１ ｘ ２ １ ） １ ０ ７０ ６ ２ ２ （０ １ １ － ８ －４ ０
Ｕ １０Ｕ和 １２ 四个模板含量梯度分别为 ｌ ｇ ｌ ｎ 、 ｇ ４ ｇ 、． ．５Ｕ； ０ｎ 、５ ｇ２ ｎ 和 ０ｎ 。根据条带清晰程度确定反』 ０ 系 中各反 应物 的浓 度或 含量 。 根据 优化 后 的反应 体系 ， 用混合 模板 逐条筛 选 引物 ， 择条 带 清 晰且 重 复性 好 的 引物 ， 梯度 Ｐ ］ 选 在 Ｃ 中设 置 温度 梯度选 择各 引物 的最佳 退火 温 度 。ＩＳ 引物序 列 由加 拿 大 哥伦 比亚大 学 （ ｎｖｒｉ ｆ Ｉ ＳＲ Ｕ ｉｅｓｙｏ Ｂ ｔ Ｃ ｌｍ ｉ） 供 ， ｏｕ ｂａ 提 上海 生物技 术有 限公 司合 成 。
杜鹃花叶片总RNA的改良CTAB法提取
杜鹃花叶片总RNA的改良 CTAB 法提取前言随着现代分子生物学与基因研究的不断发展，RNA 的多样性和生物学重要性显然愈加突出。
随之而来的是针对 RNA 的提取、纯化、测序等方面的技术的不断创新与优化。
其中，RNA 的提取与纯化是科研人员在 RNA 研究中需要解决的首要问题。
在植物的 RNA 提取与纯化方面，最传统的方法是 TRIzol 方法。
但由于 TRIzol法在耗时、分离效率和纯化质量方面的局限，科研人员们需要不断进行改进和优化。
本文就是以此为背景，介绍了在杜鹃花的 RNA 提取与纯化中采用的改良 CTAB 方法。
1. 实验方法1.1 实验材料•杜鹃花叶片样品•低盐 CTAB 提取液（含 2% CTAB）•PVP（聚乙烯吡咯烷酮）•氢氧化钾•高盐 CTAB 溶液（含 2% CTAB）•氯仿•异丙醇•乙酸钠•蒸馏水•甲醛•RNase AWAY1.2 RNA 提取1.将杜鹃花叶片样品切碎，并在冰上捣碎，注意不要使样品受热。
2.取 100 mg 样品加入600 μL 低盐 CTAB 提取液中，150 μL PVP（10%w/v）和5 μL β-mercaptoethanol，混匀后将样品在 65 °C 水浴中振荡30 min。
3.加入500 μL 氯仿，并快速摇匀 10-15 秒，待其自然分层，收集上层液体。
4.加入等体积的以异丙醇和 CHCl3 三种体积比例为 1：24：1 的混合液，以破坏有机物-有机物自然分层带来的影响，快速摇匀 10-15 秒，待其自然分层，收集上层液体。
5.加入等体积的高盐 CTAB 溶液，反复混匀后放置冰上 5min，混匀后60 °C 水浴提取 30 min。
6.加入等体积氯仿：异丙醇混合液，与高盐 CTAB 化学混合物快速摇匀10-15 秒，并待其自然分层，取上层十分慢慢地加入等体积异丙醇，并缓慢转动离心管以促进 RNA 的沉淀。
沉淀时间应在 -20 ~ -70°C 之间为宜。
白僵菌RAPD-PCR反应体系优化
白僵菌RAPD-PCR反应体系优化魏晓鹏;李会平;黄大庄;唐秀光【摘要】为了建立一套适宜于白僵菌(Beauveria bassiana)退化研究的RAPD-PCR反应体系及反应程序,通过采用L16( 45)正交试验及退火温度和循环次数的单因素优化对反应体系中的各因素进行优化组合.结果表明:20μL PCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为,10×Buffer 2 μL,MgCl2(25 mmol/L)2.4 μL,4种dNTP(各2.5mmol/L)0.8 μL,随机引物(10 μmol/L)1.4 μL,TaqDNA聚合酶(5U/μL)0.4 μL,模板DNA( 10 mg/L)1 μL.反应条件为,94℃预变性2 min,94℃变性30 s,38℃退火40 s,72℃延伸1 min,循环次数40次,72℃延伸5 min.%An experiment was conducted to establish an optimal PCR (polymerase chain reaction) reaction system and procedure for the degradation of Beauveria bassiana. Single factor test and L16(45) orthogonal experiment were used to optimize the combination of factors for the reaction system. The optimum factor combination was obtained with 20 μL reaction volume containing 2 μL l0×Buffer, 2.4μL MgCl2(25 mmol/L) , 0. 8 μL four types of dNTPs (each 2. 5 mmol/L) , 1.4μL random primer (10 μmol/L) , 0.4 μL Taq polymerase (5 U/ μL) , and 1 μL template DNA (10 mg/L). Reaction conditions were as follows; predenaturing at 94 degrees C for 2 min, followed by 40 cycles of denaturing at 94 degrees C for 30 s, annealing at 38 degrees C for 40 s, extension at 72 degrees C for 1 min, and final extension at 72 degrees C for 5 min.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2012(040)001【总页数】3页(P73-75)【关键词】白僵菌;RAPD-PCR;正交组合【作者】魏晓鹏;李会平;黄大庄;唐秀光【作者单位】河北农业大学保定 071000;河北农业大学保定 071000;河北农业大学保定 071000;河北农业大学保定 071000【正文语种】中文【中图分类】Q939.53近年来，随着国家大力倡导林业生产的可持续发展，在林业病虫害防治中，生物防治越来越受到重视。
蝴蝶兰RAPD反应体系的建立
蝴蝶兰RAPD反应体系的建立刘秀清;章铁;孙晓莉【摘要】The screening test on the concentration of template DNA,Taq DNA polymerase, random primers, Mg2+ and dNTPs were conducted to set up a stable reaction program of RAPD for Phalaenopsis aphrodite. The results showed that an optimized RAPD program was set up as 25 μl of the total volume including 1.5 μl template DMA(20 ng/ μl) , 0.4 μl Taq DNA polymerase (5 U/μl) , 1μl random primers (20 μmol/L), 2.5 μl Mg2+ (25 mmol/L) , 0.5 μl dNTPa (10 mmol/L) ,2.5 μl 10×PCR Buffer, 16 μl d dH2O.%为建立一个稳定的蝴蝶兰RAPD反应体系,对RAPD反应体系中模板DNA、Taq DNA聚合酶用量、随机引物浓度、Mg2+浓度和dNTPs浓度等各项参数进行筛选比较.结果表明,最佳反应体系为:25μl反应体系中,其中含模板DNA(20 ng/μl)1.5μl,Taq DNA聚合酶(5 U/μl)0.4μl,随机引物(20μmol/L)1 μl,Mg2+(25 mmol/L)2.5μl.dNTPa (10 mmol/L)0.5μl,10 × PCR Buffer2.5μl,ddH2O 16 μl.【期刊名称】《西南农业学报》【年(卷),期】2012(025)002【总页数】4页(P661-664)【关键词】蝴蝶兰;RAPD;反应体系【作者】刘秀清;章铁;孙晓莉【作者单位】合肥(国家)林业辐照中心,安徽合肥230031;合肥(国家)林业辐照中心,安徽合肥230031;安徽农业大学果树重点实验室,安徽合肥230036;安徽农业大学果树重点实验室,安徽合肥230036【正文语种】中文【中图分类】Q523;S68蝴蝶兰(Phalaenopsis aphrodite)又称蝶兰，属单子叶植物纲，兰科、蝴蝶兰属，是一种多年生腐生植物［1～2］。
星星草RAPD-PCR反应体系建立与优化
星星草RAPD-PCR反应体系建立与优化滕兆岩;王艳丽;石小燕;沙伟【期刊名称】《生物技术》【年(卷),期】2007(17)1【摘要】目的:寻找一个可用于星星草(Puccinellia tenuiflora(Griseb.)Scribn.et Merr)RAPD-PCR的最适宜的反应体系。
方法:利用正交设计法对影响PCR扩增效果的一些因素诸如TaqDNA聚合酶的用量、Mg2+浓度、dNTP以及引物浓度等指标进行筛选和优化。
然后,通过引物对该优化结果进行验证。
结果:正交设计结果表明,最适宜的PCR反应条件:20μl PCR反应体系中包括10×buffer2μl、模板DNA20ng、dNTP1.6mmol/L、TaqDNA聚合酶0.35U、引物1.0mmol/L、Mg2+1.8mmol/L。
验证结果表明,该体系扩增出的条带多且清晰。
结论:该研究得出的体系是适合RAPD-PCR的最适宜的反应体系,为今后星星草遗传多样性的研究奠定了基础。
【总页数】3页(P48-50)【关键词】星星草;遗传多样性;RAPD;正交设计;PCR反应体系【作者】滕兆岩;王艳丽;石小燕;沙伟【作者单位】齐齐哈尔大学生命科学与工程学院【正文语种】中文【中图分类】Q94-336;S544.9【相关文献】1.西蓝薹RAPD-PCR反应体系的建立与优化 [J], 尹彩霞;张继栋;李向阳;刘自珠;张华;张金艳;乔爱民2.异地板蓝根基因组DNA指纹图谱建立及RAPD-PCR反应体系优化 [J], 姜颖;杨欣;于英君3.花椒RAPD-PCR反应体系的建立与优化 [J], 宋丽;刘友平4.河鲈RAPD-PCR反应体系的建立与优化及引物筛选 [J], 董艳艳;胡文革;路李鹏;陈登稳;杨迪;王艳萍;韩晶5.禽波氏杆菌RAPD-PCR反应体系的建立与优化 [J], 杨萍萍;赵雪;刘冠华;贺晓华;朱瑞良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
【国家自然科学基金】_rapd反应体系_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28
科研热词 rapd 体系优化 遗传多样性 草珊瑚 茶树 苏铁属 胡卢巴 秭归空心李 种质资源 温敏雄性不育 油松 正交设计 栓皮栎 条件优化 指纹图谱 引物筛选 实验兔 天山雪莲 反应体系 再生体系 兴安落叶松 优化 亲缘关系 亚麻 scar标记 rapd标记 rapd-pcr issr
2012年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26
科研热词 推荐指数 rapd 5 优化 2 马粪海胆 1 遗传多样性 1 苦丁茶冬青 1 胡杨 1 百合 1 球毛壳nd35 1 灰叶胡杨 1 检测 1 性别鉴定 1 巢蕨 neottopteris nidus 1 峨眉黄连 1 实时荧光定量pcr 1 定殖 1 均匀设计 1 咖啡 1 反应体系 1 单因素设计 1 分子标记 1 体系优化 1 rapd标记 1 rapd体系优化 1 issr 1 dna提取 1 dna 提取 1
2008年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28
科研热词 推荐指数 rapd 5 优化 4 反应体系 3 dna提取 3 鼠尾草属 1 高山红景天 1 随机扩增多态dna反应体系 1 随机扩增多态dna 1 金钗石斛 1 茴香 1 肉苁蓉 1 群体遗传多样性 1 秦巴山区 1 珍珠黄杨 1 正交设计 1 枸杞属 1 杜鹃花 1 李 1 方差分析 1 改进ctab法 1 山丹百合 1 基因组dna提取 1 基因组dna 1 反应条件优化 1 东北刺人参 1 rapd反应体系建立 1 rapd反应体系 1 rapd体系 1
山西省杜鹃花属植物亲缘关系的RAPD分析
山西省杜鹃花属植物亲缘关系的RAPD分析张哲玮;邢国明【摘要】采用RAPD分子标记技术,对山西省2种野生杜鹃和6个省内常见园艺品种进行亲缘关系分析.从50条引物中筛选出4条多态性丰富的引物,对8种杜鹃花共11个样本的DNA进行PCR扩增,其产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测.结果表明,共扩增出44条谱带,其中,多态性谱带28条,多态位点率63.64％.用NTSYS软件计算出遗传相似系数(GS)在0.238 8～0.970 2,平均值为0.540 6,说明各样本间遗传基础差异较大;当GS为0.78时,可将供试样本分为3大类群,第1类为照山白,第2类为迎红杜鹃、羊踯躅、刺毛杜鹃和马银花,第3类为满山红、锦绣杜鹃和皋月杜鹃;第2,3类群的聚类结果表现出样品在形态学上虽有差异,但在基因水平上却有很高的同源性.RAPD标记技术从分子水平展示了杜鹃花属8种植物的亲缘关系,可为今后山西省野生杜鹃的育种和开发提供依据.【期刊名称】《山西农业科学》【年(卷),期】2018(046)010【总页数】4页(P1591-1594)【关键词】杜鹃花属;RAPD;亲缘关系;聚类分析【作者】张哲玮;邢国明【作者单位】晋中市林业局,山西晋中030600;山西农业大学,山西太谷030801【正文语种】中文【中图分类】S685.21杜鹃花科（Ericaceae）杜鹃花属（Rhododendron L.）植物在全球约有960种[1]，许多种类色彩鲜艳，是园艺观赏的重要品种，部分种类的花、叶、根具有药用和工业价值[2]。
山西省野生杜鹃花属植物仅有照山白（Rhododendron micranthum）和迎红杜鹃（Rhododendron mucronulatum）[3]，对野生杜鹃的引种选育既可丰富山西省杜鹃花的多样性，还可综合开发带来经济效益。
RAPD（Random amplified polymophic DNA）是由WILLAMS等提出的一种检测DNA多态性的分子标记技术[4]，其特点是所需DNA用量少、对DNA的纯度要求不高、不涉及放射性同位素、程序简单、灵敏度高、多态性丰富[5-7]，在植物种质资源品种鉴别、亲缘关系分析方面应用广泛。
大字杜鹃种质资源遗传多样性与亲缘关系的RAPD分析
２Ｃ ｌ ｇ Ａ ｒ ｕ ｕｅＹ ｎ ｉｎ ｎ ｅｓｙＹ ｎｉｉ ３ ０ ２ Ｃ ｉａ ． ｏｌ ｅ ｆ ｇｉ ｌ ｒ， ａ ｂ ｉ ｒｉ， ａ ｊ ｌ １ ３ ０ ， ｈｎ ） ｅ ｏ ｃｔ ａＵ ｖ ｔ ｉ Ｊｎ
Ａｂ ｔａ ｔ Ｒ ｎ ｏ ｍｐｆｄｐ ｌ ｏｐ ｉＤ Ａ （Ａ Ｄ ｍｏ ｃ ｌ ｒ ｒ ｗ ｒ ｓ ｄｔ ｅｅｔｈ ｓｒ ｃ： ａ ｄ ｍ ａ ｌｅ ｏ ｍ ｒｈ Ｎ Ｒ Ｐ ） ｌ ｕ ｒ ｋ ｓ ｅｅｕ ｅ ｄ ｔｃ ｔｅ ｉ ｉ ｙ ｃ ｅ ａ ｍａ ｅ ｏ
ｓ ｌｒ ｔｏ ； ｌｓｅ ｎ ｌｓ ｅ ｕ ｓｓ ｏ ｄ ｔａ ｉ Ｒｈ ｃ ｌｐ ｅ ｂ ｃ ｍ ｘｍ．ｐ ｐ ｌｔ ｎ ｒ ｉ ａｉ ｍｅｈ ｄ ｃｕ ｔｒａ ａｙ ｉ ｒｓ ｌ ｈ ｗｅ ｈ ｔ ｘ ｍｉ ｔ ｙ ｓ ｔ ｓ ． ｈｅ ｐ ｎ ａ ｈ Ｍａ ｉ ｏ ｕａｉ ｓｗｅｅ ｓ ｏ
ｆｒ ｈ ｎ ｂ ｉ ｕ ｔｉ Ａｎ ｌ ｎ ｌ ｔ ｅ ｏ ｒｅ ， ａ ｂ ｎＵ ｉ ｒｉ ， ａ ｊＪｌ ０ ２ Ｃ ｉ ； ｏ ａ ｇ ａ Ｍｏ ｎ ｎ ｉ ｄＰａ ｓ ｕｃ ｓ Ｙ ｎ ｉ ｎ ｅｓｙ Ｙ ｎｉ ｉ １ ３ ０ ， ｈｎ Ｃ ａ ｍａ ａ ｎＲ ａ ｖ ｔ ｉ ３ ｎ ａ
姬文秀 ，金东淳ｚ ，李虎林
（． １ 延边 大学 长 白山 动 植物 资 源 研 究 中 心 ，吉 林 延吉 １３ ０ ￣２ 延 边 大 学 农 学 院 ， 吉林 ３０２ ． 延吉 １ ３０ ３ ０ ２）
基于四段基因序列的野牡丹科植物PCR反应条件优化
Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
基 于 四段 基 因序 列 的野 牡 丹 科植 物 Ｐ Ｃ Ｒ 反 应 条 件 优 化
中进 行 Ｐ Ｃ Ｒ扩 增 验 证 。结 果 表 明 ： 优 化后 的反 应 条件 在 野牡 丹科 植 物 中具 有 较 高 的 稳 定 性 和 良好 的 通 用性 。
说 明优 化 后 的反 应 条 件 可 以进 行 后 续分 子 系统 学研 究 。
关键词 ： 野牡丹科植物 ； 基 因 片段 ； ＰＣＲ反 应 条 件 ； 优 化
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｋｏ ｎ ｇ ｙ ｕ ｌ ３ １ ａ ｎ ｄ Ｄａ ｏ ｈ ｕ ａ ｘ ｉ ａ ｎ ｇ ａ ｒ ｅ ｔ ｙ ｐ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｕ ｌ ｔ ｉ ｖ ａ ｒ ｓ ｉ ｎ Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ． Ａｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｙ ａ ｒ ｅ ｉ ｍｐ ｏ ｒ ｔ ａ ｎ ｔ
ＬＩ Ｕ Ｈｕ ａ － ｍｉ ｎ ｇ， ＤＯＮＧ Ｚｈｉ － ｂ ｏ， Ｓ ＵＩ Ｘｉ ａ ｏ － ｋ ａ ｉ ， ＷＡＮＧ Ｃｈ ｕ ｎ － ｌ ｅ ｉ ， ＷＡ Ｎ Ｇ Ｙａ ｎ ｇ， ＺＨＯＵ Ｙｕ ｎ － ｚ ｅ， Ｓ ＵＮ Ｘｉ ａ ｏ － ｄ ａ ｎ
（ Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｌｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｈａ ｒ ｂ ｉ ｎ， Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ １ ５ ０ ０ ８ ０ ）
杜鹃属ISSR-PCR反应体系优化
1.3.2 ISSR-PCR 体系优化。以 UBC811 为引物，对“毛
叶杜鹃”叶片基因组 DNA 进行 PCR 扩增。对影响 PCR
反应的 Taq DNA 聚合酶、Mg2+、引物、模板 DNA 浓度进
行正交试验设计 L9（34）（表 1），按表 1 编号加样后，每
管加入 2.0μL 的 10×PCR buffer，用灭菌后的 ddH2O 补足 20μL。每个处理重复 1 次。
图 2 单因素调整试验 PCR 产物电泳图 注：1~9 为表 2 的处理组合编号。MDL2000。CK 为对照。
2.2 ISSR-PCR 反应体系稳定性检测
根据体系优化试验结果，用引物 UBC 810 对 5 个
杜鹃种进行 PCR 扩增，电泳结果显示（图 3）：扩增谱
带清晰，背景弥散轻，多样
性丰富，表明所建立的杜
ISSR 分析[J].北方园艺,2018（, 24）:79-84.
[11]李国帅,曹福祥,彭继庆,等.野生小果油茶 ISSR-PCR 反应体系的
建立与优化[J].中南林业科技大学学报,2014,34（4）:36-43.
[12]王惠君,王文泉,卢诚,等.中药艾总 DNA 的提取及 ISSR-PCR 反
参照潘丽梅等[6,8-10]的设定扩增程序为：94℃预变
性 4min；94℃变性 45s，退火 1min，72℃延伸 2min，40
个循环；72℃延伸 8min，4℃保存。
采用 2%琼脂糖凝胶电泳分离 PCR 扩增产物，用
紫外与可见分析装置观察并拍照记录。根据电泳的正
交试验结果，对各处理进行综合评定。
[15]赵丽华,李名扬,王先磊,等.石榴种质资源遗传多样性及亲缘关系
的 ISSR 分析[J].果树学报,2011（1）:66-71.
杜鹃花叶片总RNA的改良CTAB法提取
杜鹃花叶片总RNA的改良CTAB法提取概述杜鹃花作为一种具有重要观赏价值和经济价值的植物，其叶片总RNA提取方法的研究具有重要的实际应用价值。
叶片总RNA提取是进行基因测序、转录组分析、基因表达分析等分子生物学研究的关键步骤之一。
然而，由于不同植物组织、不同品种之间含有不同的次生代谢产物、多糖、脂类等干扰物质，因此，杜鹃花叶片总RNA提取的方法需要针对其特殊的组织结构和化学组分进行改良。
本文介绍了一种改良的CTAB法提取杜鹃花叶片总RNA的方法，并对该方法的优化步骤进行详细说明。
该方法不仅能够提取高质量的叶片总RNA，同时也可以降低RNA提取过程中DNA和蛋白质的污染，为后续的酶切、PCR扩增、RT-PCR反应等分子生物学实验提供了可靠的材料基础。
实验材料和设备实验材料1.杜鹃花叶片（新鲜样品），切碎后冷冻保存2.液氮3.TRIzol试剂（Invitrogen，美国）4.75% 乙醇5.0.1% DEPC水6.DNase І酶（Takara，日本）7.RNase inhibitor（Takara，日本）8.离心管（1.5 ml）设备1.冰箱2.离心机3.恒温振荡器4.烘箱5.声波细胞粉碎仪6.超净工作台实验步骤RNA提取1.将新鲜杜鹃花叶片还原为粉末状，加入1 ml TRIzol试剂中，随后剪碎5-8次，使其充分混合，转移至1.5 ml离心管中。
如果需要处理多个样品，则一定要保证每个样品与试剂的体积比例一致。
2.加入0.2 ml冰冷的氯仿（CHCl3），轻轻混合15-20秒，并静置5分钟。
3.将离心管离心10分钟（12000 r/min，4 ℃）。
4.将上清液转移至新的离心管中，加入1 ml的75% 乙醇即可。
加入乙醇时要注意不要将样品底部物质带入管中。
5.前置处理以消除样品中残留的基质和纤维素。
加入2 ml 75% 乙醇，在室温下轻轻摇晃，离心5分钟，10 ℃下用0.1% DEPC水稍微清洗一遍沉淀。
牛皮杜鹃RAPD反应体系的优化
牛皮杜鹃RAPD反应体系的优化宫宇;刘宪虎;李美善;许明子;张春影;吴琼【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2010(038)012【摘要】[目的]建立牛皮杜鹃RAPD反应体系.[方法]以野生牛皮杜鹃的叶片为材料,采用改进CTAB法提取基因组DNA,并对影响RAPD扩增反应的各因素进行优化.[结果]适合牛皮杜鹃的RAPD反应体系为:在20 μl PCR反应体积中加模板DNA 10 ng,Mg2+ 浓度1.5 mmol/L,引物OPC05 15 pmol/μl,dNTP 0.15mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U.[结论]该研究为牛皮杜鹃的遗传多样性分析提供了有益的参考.【总页数】3页(P6134-6135,6196)【作者】宫宇;刘宪虎;李美善;许明子;张春影;吴琼【作者单位】延边大学农学院农学系,吉林龙井,133400;延边大学农学院农学系,吉林龙井,133400;延边大学农学院农学系,吉林龙井,133400;延边大学农学院农学系,吉林龙井,133400;延边大学农学院农学系,吉林龙井,133400;延边大学农学院农学系,吉林龙井,133400【正文语种】中文【中图分类】S685.21【相关文献】1.杜鹃花属植物基因组DNA RAPD-PCR反应体系的优化 [J], 段国峰;肖千文2.大字杜鹃RAPD反应体系的优化 [J], 姬文秀;金东淳;李虎林;鲁艺3.基于均匀设计优化牛皮杜鹃嫩叶直接再生芽苗及植株再生体系 [J], 李玉梅;姜云天;孙智慧4.均匀设计法优化牛皮杜鹃腋芽丛生芽苗及高频植株再生体系研究 [J], 王艳萍;顾地周;卢存福5.正交试验设计在建立杜鹃花RAPD-PCR反应体系中的应用 [J], 张丽;周兰英;肖千文;吴开志因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
麂角杜鹃ISSR-PCR反应体系的优化
麂角杜鹃ISSR-PCR反应体系的优化赵芯;金则新;李建辉;谈探【摘要】采用改进的SDS法提取麂角杜鹃基因组DNA,利用单因素试验测试模板DNA、Mg2+、dNTP、BSA、引物、Taq酶等条件因子对麂角杜鹃ISSR-PCR扩增结果的影响.试验表明,麂角杜鹃ISSR分析的最适PCR反应条件为,10 μl PCR反应体积中含:1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol/L Tris·HCl,pH值9.0,50 mmol/L KCl,0.1% Triton X-100),5 ng模板DNA,1.0 mmol/L MgCl2,0.4 mmol/L4×dNTP,1 mg/ml BSA,5 pmol引物,0.25 U Taq酶.利用所建立的优化反应体系对浙江省大明山4个麂角杜鹃种群共84个个体进行遗传多样性分析,结果显示其总的多态位点百分率为88.07%,Nei指数为0.309 9,Shannon信息指数为0.464 0,表明麂角杜鹃种群遗传多样性处于较高水平.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2009(000)002【总页数】3页(P43-45)【关键词】麂角杜鹃;ISSR-PCR;反应体系;优化【作者】赵芯;金则新;李建辉;谈探【作者单位】台州学院生态研究所,浙江临海,317000;台州学院生态研究所,浙江临海,317000;台州学院生态研究所,浙江临海,317000;台州学院生态研究所,浙江临海,317000【正文语种】中文【中图分类】Q943麂角杜鹃(Rhododendron latoucheae)隶属杜鹃花科杜鹃属，为常绿灌木或小乔木，常3枝轮生，花朵美丽，具有极高的观赏价值，为良好的园林绿化树种。
目前国内外对麂角杜鹃的基础性研究仅限于其有效成分方面[1]，利用ISSR分子标记研究麂角杜鹃种群遗传多样性迄今未见报道。
简单重复序列区间(inter simple sequence repeat，ISSR)，由Zietkiewicz等[2]于1994年创建，它结合了RAPD和SSR的优点，具有RAPD操作简单、所需DNA量少、不需预知研究对象的基因组序列等优点，同时又具有SSR的稳定性，因此，近年来已广泛应用于品种鉴定、种质资源和遗传多样性的研究[3-4]。
长白山杜鹃花基因组DNA提取及RAPD体系的建立
5.枣树基因组DNA提取方法及RAPD体系的建立 [J], 王海燕;王玉国;芦三矿生
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【总页数】4页(P254-257)
【作 者】庄得凤;曹后男;周兰;徐颖;何伟;黄岳
【作者单位】延边大学农学院园艺系,吉林,龙井,133400;延边大学农学院园艺系,吉林,龙井,133400;延边大学农学院园艺系,吉林,龙井,133400;延边大学农学院园艺系,吉林,龙井,133400;延边大学农学院园艺系,吉林,龙井,133400;延边大学农学院园艺系,吉林,龙井,133400
【正文语种】中 文
【中图分类】S685.21;Q78;Q503
【相PD扩增体系的建立 [J], 毛娟;赵长增;赵丽娟;雷艳红
2.长白山林下参基因组DNA提取及RAPD体系的优化 [J], 冯薪硕;朴敬淑;吕龙石
3.芝麻高度不育材料基因组DNA提取及RAPD反应体系的建立 [J], 赵莉;孔小卫;汪强;林勇翔;田东丰
长白山杜鹃花基因组DNA提取及RAPD体系的建立
庄得凤;曹后男;周兰;徐颖;何伟;黄岳
【期刊名称】《湖北农业科学》
【年(卷),期】2008(47)3
【摘 要】采用改良的CTAB法提取杜鹃花的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析.筛选出的杜鹃花RAPD反应的最佳体系为25μL反应体系中包括模板DNA20～200ng.引物10pmol,dNTPs100μmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.5U,Mg2+2.5 mmol·L-1,10xbuffer缓冲液2.5 mmol·-1,其余部分用无茵超纯水补充.PCR扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性1 min,37℃退火1min,72℃延伸2min,40次循环;72℃最终延伸7min.应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为长白山杜鹃花品种鉴定、分类的研究提供了一定基础.
牡丹杂交品系SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选
牡丹杂交品系SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选苏美和;赵兰勇【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2012(28)19【摘要】通过研究牡丹杂交新品系的遗传多样性,解决其在牡丹品种分类体系中位置的问题。
利用正交设计,从Mg2+、dNTPs、引物浓度、DNA聚合酶和不同模板DNA浓度5种因素4个水平来优化牡丹杂交品系SRAP-PCR反应体系,对引物进行筛选。
建立牡丹杂交品系SRAP-PCR反应最佳体系(25μL)为:2.0mmol/L Mg2+、1.5U Taq酶、0.25mmol/L dNTPs、2ng/μL模板DNA、0.25μmol/L 引物;运用试验结果从100对引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物30对。
优化体系的建立及引物的筛选,可为利用SRAP标记技术研究牡丹杂交品系的遗传多样性及亲缘关系提供技术基础和理论依据。
【总页数】5页(P189-193)【关键词】牡丹杂交品系;SRAP标记;正交试验;体系优化;引物【作者】苏美和;赵兰勇【作者单位】山东农业大学林学院【正文语种】中文【中图分类】S3【相关文献】1.基于毛细管电泳技术的牡丹SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选 [J], 史倩倩;王雁;周琳;黄国伟2.辣椒SRAP-PCR反应体系优化及杂交群体多态性引物筛选 [J], 张佳琦;吕庆芳;董黎梨;李映志;叶春海3.新疆野核桃SRAP－PCR反应体系的优化及引物筛选 [J], 张捷;李勤霞;张萍;余甜4.国兰杂交品种(系)SRAP-PCR反应体系优化及引物快速筛选 [J], 龚理;黄添毅;王芳;陈倩淑;吴少华;李永裕5.国槐SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选 [J], 孙荣喜;宗亦臣;郑勇奇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
沙棘属植物RAPD-PCR反应条件的优化
沙棘属植物RAPD-PCR反应条件的优化张辉;张建清;苏雪;张超强;杜斌【期刊名称】《西北师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2005(041)003【摘要】采用L16(45)正交试验设计研究了沙棘属植物RAPD-PCR反应中DNA 模板浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度和Taq酶含量等5个因素对于PCR扩增效果的影响,并对照温度梯度探讨了退火温度等热循环参数,确定适合沙棘属植物的最佳扩增体系为:模板DNA 1.0 mg·L-1,引物3.0 μmol·L-1,dNTPs 0.1 mmol·L-1,Mg2+ 2.5 mmol·L-1,Taq聚合酶8.33～16.67 nkat;扩增程序中最适退火温度为35～36 ℃.【总页数】4页(P63-66)【作者】张辉;张建清;苏雪;张超强;杜斌【作者单位】西北师范大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730070;西北师范大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730070;西北师范大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730070;西北师范大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730070;西北师范大学,生命科学学院,甘肃,兰州,730070【正文语种】中文【中图分类】Q946-33【相关文献】1.杜鹃花属植物基因组DNA RAPD-PCR反应体系的优化 [J], 段国峰;肖千文2.苎麻属植物RAPD-PCR反应体系的双重正交法优化 [J], 蒙祖庆;刘立军;汪波;彭定祥3.药用植物雷公藤RAPD-PCR反应体系优化研究 [J], 邢建宏;庞铄权;刘希华;梁一池4.蒲公英总DNA的提取及其RAPD-PCR反应条件的优化 [J], 李喜凤;杜云锋;张红梅;郝哲;许闽;白雁5.猪链球菌RAPD-PCR(RAPD)反应条件的优化 [J], 刘翊中;高真贞;刘博涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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国传 统名 花 ，不 仅 可供 观 赏 ，而且 木 材 可作 为雕 刻 材料 ，具 有 很 高 的经 济 价 值［ 。杜 鹃花 科 植
物 大 多 数 具 有 极 高 的 药 用 价 值 ，其 典 型 的 特 征 活
性成 分为黄酮 类 和 挥发 油 ，它 们 大多 具 有抗 菌 消 炎 和止 痰平 喘化痰作 用 。 ］ 杜鹃花属 虽然早 在 １ ５ ７ ３年被 瑞典植 物学家 建 立 ，但 到． 为止 杜 鹃属 的 分类 问题依 然 十 分 复 目前
于转 移分析 等 优点 ，。 由 于 杜 鹃 花 植 物 种 类 繁 多 ， 绝 大 多
数野 生或半 野 生 ，取 材 困难 ，部 分 种类 材 料尤 其 稀少 ，为了高 效科 学 和后 续 试 验 的需 要 ，我们 对
其基 因组 Ｄ ＡＰ － Ｃ ＮＡ Ｒ Ｄ Ｐ Ｒ反 应 体 系进 行 了必 要
Ｋｅ ｏ ｄ ：Ｒｈ ｄ ｄ ｎ ｏ ； ＲＡＰ Ｐ ｙｗ ｒ ｓ ｏ ｏ ｅ ｄｒ ｎ Ｌ． Ｄ－ ＣＲ； Ｒｅ ｃ ｉｎ ｓ ｓ ｅ ａ ｔ ｙ ｔ ｍ ｏ
杜鹃花 属植物 （ ｈ ｄ ｄ ｎ ｒ ｎ 属 于杜 鹃花 科 Ｒ ｏ ｏ ｅｄ ｏ ） （ ｒ ａｅ ｅ 杜 鹃 花 亚 科 （ ｏ ｏ ｅ ｄｏｄ ａ ） Ｅ ｉ ｃａ ） ｃ Ｒｈ ｄ ｄ ｎ ｒ ｉ ｅ 。杜 ｅ 鹃花属 植物 大多 是 世界 上 著 名 的观 赏花 卉 ，是 我
维普资讯
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学 （然 学 ）０２２ 报自 科 版２８８ Ｏ，（
杜鹃花属植物基 因组 Ｄ ＡＰ — Ｃ ＮＡ Ｒ Ｄ Ｐ Ｒ反应体 系的优化
段 国峰 肖千 文。 ，
（．山西 农 业 大学 园 艺学 院 ， 山西 太 谷 ００ ０ ；２ １ ３８ １ ．四川 农 业 大学 林 学 园艺 学 院 ，四 川 雅 安 ６ ５ １ ） ２ ０ ４
摘 要 ：试 验 通 过 系统 比 较 研 究 ，确 立 了 杜 鹃 属 植 物 Ｒ Ｄ－Ｃ 的 最 佳 反 应 体 系， 即 ２／ 应 体 系 中 ：模 板 ＡＰ Ｐ Ｒ ０ 反 Ａ
ＤＮＡ （ ０ｇ・Ｌ一 １ ）１ ５ Ｉ； １ ． ０×Ｐ ｕ ｆｒ２ Ｉ；Ｔａ ＣＲ ｂ ｆｅ ｑ酶 （ ． ・ Ｌ一 Ｏ ５Ｕ ）０ ３ Ｉ； 引物 （ ． ￣ ｌ・Ｉ一 ． Ｏ ８／ ｍｏ ）４ Ｌ； Ｍｇ ２ （ ５ｍｍｏ Ｃ１ ２ ｌ・Ｌ ）１ ８ Ｌ；ｄ ． ＮＴＰ （ ＡＴＰ、ｄ ＴＰ、ｄ ｓ ｄ Ｃ ＴＴＰ、ｄ ＧＴＰ各 含 １ ０ｍｍｏ ）０ ６ Ｌ。 经试 验 验 ． ｌ・【 ．
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证 ，该反 应 体 系重 复性 高 ，扩 增 务 带 亮 度 均 匀 ， 弥散 现 象 少 。
关键 词 ：杜 鹃 属 植 物 ；ＲＡＰ ）Ｐ Ｉ＿ ＣＲ；反 应体 系
中 图 分类 号 ：￥ ６ ． ６ ４５
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文 章编 号 ：１ ７ － １ １ （ ０ ８ ２０ ３ － ３ ６ １８ ５ ２ ０ ）０ — １ ６０
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