蝉花HPLC指纹图谱的研究
中药指纹图谱的研究概况
中药指纹图谱的研究概况中药指纹图谱是一种综合的、可量化的色谱鉴定手段，主要通过获得具有指纹意义的特征组分，以达到对药材饮片或成方方剂内含物质群的整体进行控制的目的。
本文对指纹图谱的基本特性、在中药研究中的应用及发展前景进行了综述。
【关键词】指纹图谱中药研究综述1 中药指纹图谱的概念谢培山先生对中药色谱指纹图谱给出了以下定义[1]:中药色谱指纹图谱是一种综合的、可量化的色谱鉴定手段。
借以鉴别真伪、评价原料药材，半成品和成品质量均一性和稳定性。
其基本属性是“整体性” 和“模糊性”。
模糊性强调的是对照样品与待测样品指纹图谱的相似性，而不是完全相同，整体性是强调、比较色谱特征的“完整面貌”，而不是将其“肢解”，这样才能在不同环境的样品色谱中搜索和提取与该药材指纹图谱整体“面貌” 相关的特征，加以鉴别。
所以说色谱特征的整体性及模糊性是中药色谱指纹图谱(图像)分析的最基本的属性。
这种属性是来源于中药作为天然产物本身的“不确定性(uncertainty)”，因为‘Nature never repeats itself'，何况植物的后生代谢产物受环境影响带来的变异。
而带有不确定性的事物不能用解决确定性(certainty)事物的思维和方法来处理。
所以分析色谱指纹图谱强调的是“准确的辨认(accurate recognition)” 而不是“精密的计算(precise calculation)”;较图谱强调的是相似(similarity)而不是“相同(identical)”。
2 中药指纹图谱的基本特征中药指纹图谱是一种综合的可量化的分析手段，中药指纹图谱的三个基本特征是系统性、特征性和稳定性。
2.1 中药指纹图谱应具有系统性系统性是指指纹图谱反映了中药有效部位所含主要成分的种类或指标成分的全部。
2.2 中药指纹图谱应具有特征性特征性是指指纹图谱中反映的化学成分信息是具有高度选择性的，这些信息的综合结果，将能特异地区分中药的真伪与优劣，成为中药自身的“化学条码”，也称为专属性。
最新中药指纹图谱的研究进展
中药指纹图谱的研究进展药物分析学选论期末综述中药指纹图谱的研究进展姓名：学号：班级：中药指纹图谱的研究进展摘要：中药指纹图谱的质量控制是中药现代化的突破口和中药基础研究领域的热点，目前建立的方法主要有：①光谱法：紫外光谱法、红外光谱法、荧光光谱法等；②色谱法：薄层色谱法、液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等；③其他方法：x射线衍射法、核磁共振法、电化学法等。
关键词：中药指纹图谱、光谱法、色谱法Advances in the means research on fingerprint ofTraditional Chinese MedicineAbstract: Fingerprint of traditional Chinese medicine is a breakthrough in modern medicine and a hot area of basic research in traditional Chinese medicine field. the current established method: ①Spectroscopy: UV、IR、fluorescencespectrometry; ②Chromatography:TLC、LC、GC、CE；③Other means: XRD、NMR、Electrochemical.Key words: fingerprint of Traditional Chinese Medicine、Spectroscopy、Chromatography中药指纹图谱是指采用一定分析手段，对适当处理后中药材或中成药进行分析，得到标识该中药特性的共有峰的图谱。
它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，能基本反映中药全貌的一种综合的，可量化的鉴定手段。
使其质控指标由原有的对单一成分含量的测定上升为对整个中药内在品质，包括杂质的检测。
实现了对中药内在质量的综合评价和整体物质的全面控制，使中药质量达到稳定可控。
中药指纹图普研究
[6]Gulnur Toker. Comparative evaluation of the flavonoid content in officinal Tiliae flosand Turkish lime species for quality assessment[J]. Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2001, 26:111-121 26:111[7]Jamal Faghihi. Reproducibility of the high performance liquid chromatographic fingerprints obtained from two soybean cultivars and a selected progeny [J].Chromatography A, 2001, 915:61-74 915:61[8]李秀珍,高海,刘海静. [8]李秀珍,高海,刘海静. 鱼腥草注射液指纹图谱分析方法的 研究[J].西北药学杂志,2002,17(4):154研究[J].西北药学杂志,2002,17(4):154-155. [9]吴忠.仲景胃灵片GC指纹图谱研究[J].中药材,2001,24 [9]吴忠.仲景胃灵片GC指纹图谱研究[J].中药材,2001,24 (3):196(3):196-197 [10]王寅,乔传卓，尹茶. [10]王寅,乔传卓，尹茶.高效毛细管电泳法用于不同居群大青叶药 材的鉴别[J].中草药,2003,31（ 材的鉴别[J].中草药,2003,31（7）:547-549 :547[11] 王钢力，戴忠，鲁静，等.11种卷柏属药用植物HPCE指纹图 王钢力，戴忠，鲁静，等.11种卷柏属药用植物HPCE指纹图 谱的研究[J].中成药，2002，7(24):489谱的研究[J].中成药，2002，7(24):489-491
中药指纹图谱研究技术要点
中药指纹图谱研究技术要点中药指纹图谱是指中药材经适当处理后，采用一定的分析手段和仪器检测得到的，能够标示该中药及其制剂中的各种组分群体特性的共有峰的图谱。
通过指纹图谱整体特征峰的相对保留时间及含量或比例的制定和比对，可有效地控制中药材及中药产品质量，保证产品质量的相对稳定。
目前，指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效手段。
实施中药指纹图谱难免会有一个提高、完善的过程。
从技术上说，中药指纹图谱的建立是完全可行的，但在实际应用中，还要解决诸多问题。
中药指纹图谱研究的技术要点主要有以下几个方面。
■中药材来源及样品处理对制作指纹图谱的动、植物药材必须做到固定品种、药用部位、产地、采收期、产地加工和炮制方法。
对矿物药应固定产地和炮制、加工方法，这是制定合格指纹图谱的先决条件。
对供试样品的取样应注意样品的代表性与均匀性，以保持实验室取样与实际生产应用药材一致。
除此之外，还必须做到组方和用量固定，生产工艺稳定。
■检测方法作为一张合格的指纹图谱必须具有特征明显、专属性强、重现性好的特点，而且要求做到操作和应用方便。
目前最常采用的制备中药指纹图谱的检测方法有光谱法和色谱法。
光谱方法如紫外光谱和红外光谱在实际应用中能提供识别的信息较少，往往当同类化合物其取代基团发生变化时，对应的光谱却难以体现出来，建议尽量不要采用。
色谱法最大特点在于可进行复杂组分的成分分离，特别是新的高效、通用检测器的发展和引入，使得采用色谱法检测可得到足够多的图谱识别信息，是目前制备指纹图谱的主流方法。
尤其是薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)和高效液相色谱(HPLC)技术已成为3种公认常用的指纹图谱分析手段。
其中特别又以HPLC分离效率高、分析速度快、样品适应性广、检测器种类多、灵敏度高、稳定性、重复性好而备受推崇，成为制备指纹图谱的首选方法。
参照物的选择：以色谱法制备得到的特征指纹图谱识别信息，主要是色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值。
5_第五章_中药的指纹图谱研究-20130310
29
三、指纹图谱的计算机解析
（一）图谱信息获取 （二）图谱信息处理
（三）指纹图谱相似度评价
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（一）图谱信息获取
分析图谱：提取稳定且具有指纹意义的特征峰， 进行谱峰描述，给以编号。
要求：主要特征峰与相邻峰 R≥1.2 ，其他特征 峰也应达到一定分离。 峰顶到峰谷的距离至少应大于该峰高的 2/3，如 果达不到则两个峰可以合并为一个峰计算。
18
重现性
可操作性 稳定性
二、研究的主要程序包括
样品的收集 • 大于等于10批，取样不少于3次检验量
• 保证药材、饮片或提取物、半成品与制剂和相关产品指纹 图谱间的相关性可溯源性 供试品溶液的制备 • 使用对照品（参照物），以确定图谱中参照峰的位置和丰度 对照品（参照物）溶 • 通常为供试品中的主要成分，）应说明名称、来源和纯度 液的制备 指纹图谱试验研究 方法学考察 指纹图谱的建立和 辨认 • 条件优化，“量化” • 精密度、重现性、样品稳定性试验，5次以上， RSD≤3％，tR应在平均RtR±1分钟内 • 从色谱峰的整体性出发，10批次以上样品，确定共有指纹峰， “S”标示参比物峰，应记录2小时的色谱图
首先考察模式指纹图谱上的各共有峰能否 在样品图谱中找到（必须都能找到，这是 定性），然后再算出各共有峰的相对峰面 积，按以下标准评价：
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1、中药材
共有峰类别 样品图谱与模式指纹图谱比较 (单峰与总峰面积比) (面积比允许的差值)
≥20% 10%≤A%＜20% ＜10%
≤±20% ≤ ±25% 不作要求(但要标定 其相对保留时间）
4
基本属性：整体性和模糊性 。即：多个成 分以相对稳定的比例及位置顺序的完整性 特征；在共同特征的基础上个体之间又互 有差异的模糊性特征。
中药指纹图谱的研究和应用
中药指纹图谱的研究和应用
王利彦
【期刊名称】《青海医学院学报》
【年(卷),期】2003(024)003
【摘要】@@ 在中药现代化研究与发展战略的进程中,中药材、中成药质量已成为制约整个战略发展的首要问题指纹图谱技术是在现有的技术条件下对中药材、中成药进行严格质量控制的最好解决办法.
【总页数】2页(P180-181)
【作者】王利彦
【作者单位】青海医学院药理室
【正文语种】中文
【中图分类】R282
【相关文献】
1.LC-MS在中药指纹图谱研究中的应用 [J], 朱振兴;杨瑞芳
2.中药指纹图谱光谱技术及其在质量控制中的应用与研究 [J], 任非;智丽敏;付颖;张兰桐
3.中药指纹图谱色谱技术及其在质量控制中的应用与研究 [J], 任非;智丽敏;付颖;张兰桐
4.色谱法在中药指纹图谱研究中的应用 [J], 曹玲;王志刚;王连芝
5.质谱技术在中药指纹图谱研究中的应用 [J], 胡钟芳
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HPLC指纹图谱结合系统聚类分析法对灵芝孢子油质量的研究
从图 2 可见，上述 19 批灵芝孢子油可分为两大类，具体见
表 3。
3 分析
3.1 产地分析
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 min
图 1 19 批灵芝孢子油的 HPLC 指纹图谱 Fig 1 HPLC fingerprint of 19 batches of G. lucidum spore
的相对峰面积和相对保留时间无明显变化（RSD＜3％），表明
本方法精密度良好。
2.5.2 稳定性试验 取同一灵芝孢子油供试品溶液（p0701）
适量，按上述色谱条件分别于 0、2、4、8、16、24 h 进样测定。结
果，24 h 内各供试品共有峰的相对保留时间和相对峰面积无明
显变化（RSD＜3％），表明供试品溶液在 24 h 内保持稳定。
spore oil
类别
编号
第I类
j0701.2、l0712.2、l0705.2、l0710.2、l0706.2、l0711.2、l0710、l0711、l0709
第 II 类
j0701、l0704、l0705、p0701、l0601、l0713、j0702、l0706、l0712
图 2 显示，L、P、J 产地的样品在聚类树形图中混合在一起， 没有明确分开。提示不同产地之间灵芝孢子油的差别并不太
色谱柱：LiChrospher RP-18e（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流 动相：甲醇（A）-异丙醇（B），梯度洗脱（洗脱顺序见表 2）；流速： 0.8 mL·min-1；检测器漂移管温度：60 ℃；增益：135；压力：25 Psi。理论板数按甘油三油酸酯峰计算不小于 3 000。 2.4 测定方法
oil
2023-中药指纹研究技术
1. 引 用 参 数
① 保存时间(RT)② 峰高(Height)③ 峰面积(Area)④ 峰面积百分比〔Area%〕⑤ 相对保存时间〔Ratio of Retention Time, RRt〕⑥ 积分相比照值〔Ratio of Area, RA〕
2. 数 据 获 取 途 径
〔1〕图形/图像转化成ASCII数据〔2〕截片数据〔3〕色谱数据
3. 相 似 度 算 法
夹角余弦算法
相关系数算法
优 化 算 法
1. 软件开发原那么2. 市售/常用软件简介3. 相似度软件使用过程中应注意的问题
〔三〕、指纹图谱相似度评价软件
1. 软 件 开 发 原 那么
2. 气 相 色 谱 法
〔1〕影响色谱峰别离程度的因素 色谱柱的类型 载气流速 起始柱温 升温速率
〔2〕研究例如 样品：广藿香油指纹图谱研究过程
方案设计
检测方法 〔1〕色谱方法 广藿香油为广藿香药材经水蒸汽蒸馏而得到的挥发油，均为易挥发组分，拟采用气相色谱法〔GC〕。 〔2〕仪器： Agilent 6890 GC 〔3〕色谱柱的选择 可供选择的色谱柱：极性 非极性 中等极性 〔4〕进样方式确实定 手动 自动 顶空
中药指纹图谱检测方法的验证 〔1〕检测方法 测定方法、 仪器 、 试剂 、 测定条件 〔2〕 验证 专属性 〔空白试验〕 精密度试验〔RSD<3%〕 重复性与重现性试验〔S<0.95〕 稳定性试验〔S<0.95〕 系统适应性试验6. 指纹图谱的相关性
7. 建立中药指纹谱所面临的问题
8. 对 策
加强GAP药材种植基地建设加强中药种植与加工、炮制的标准化加强中药化学成分的根底研究 应用现代分析技术手段进行中药指纹图谱研究
指纹图谱技术在中药材质量控制中的意义与作用
中药的质量是其疗效的关键所在.长期以来，人们多是凭借经验，从药材的外观形态、气味以及一些简单的物理、化学现象来判断其真伪。
虽然起到一定的作用，但常常有很大的主观性和片面性.随着现代分子生物学技术的发展，中药材指纹图谱技术在中药材质量控制中显示了越来越广阔的应用前景。
(1)中药指纹图谱的概念和分类“指纹”(fingerpint）鉴定来源于法医学,每个人的指纹在微小的细节构造中各有不同，依据这些差异，通过“比对”方式，可以确定鉴别每个人的特征。
随着生物技术的发展,提出了DNA指纹图谱分析，主要是通过DNA指纹图谱，对人、动物、植物等生命体进行鉴别鉴定，乃至亲子鉴定等，扩大了指纹分析的含义，其意义主要表现在两个方面：一是成为指纹图谱。
指纹是以图像形式表现，而DNA指纹图谱是一些DNA片段所构成的条带图谱。
二是分析目的有所扩展,既可以像指纹分析一样作个体“唯一性”的鉴定，又可以鉴别确定整个物种的“唯一性”（多个个体之间的共性），还可以用作亲子鉴定,即判断个体之间的亲缘关系等。
中药指纹图谱则和DNA指纹图谱又有所不同。
1）中药指纹图谱的概念：中药指纹图谱（fingerprinting)借用DNA 指纹图谱发展而来，最先发展起来的是中药化学成分色谱指纹图谱，特别是高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。
HPLC具有很高的分离度，可把复杂的化学成分进行分离而形成高低不同的峰组成一张色谱图,这些色谱峰的出峰位置和高度（或峰面积)分别代表了不同的化学成分和及其含量，整个色谱图表征了该样品所含化学成分的多少和量的大小。
如前所述，中药指纹图谱不同于法医学中的DNA指纹图谱。
常规意义下的指纹强调的是绝对的“个体特异性”，据此可对任何犯罪嫌疑人指证和控罪。
恰恰相反,中药指纹图谱赖以鉴别中药的药材真伪和质量优劣所要强调的却是作为药用植物物种的“共有特征性”.更值得指出的是，常规意义的“指纹”分析的依据主要是来源于先天的遗传，而中药药用化学成分的指纹图谱分析依据却主要来源于该植物物种后天的代谢产物，且大多为植物的次生代谢物。
指纹图谱技术在中药鉴别中的应用价值
指纹图谱质控技术 是控制 中药质量 的先进技术 ，它促使 了 中药 生产更加 严格更加标 准 ，使 中药的质量 越发受 到 重视 ，这对于让 中药走 向全球 ，让 中药 造福人类 有非 常 巨大的长远 价值 和显著意义 。同时 ，色谱指纹 图谱技 术 也是推动中药现代 化 的关键 技术 ，虽 然 目前指 纹 图谱技 术在 中药研究领 域 中的应 用还不 是很完美 ，但 是大力 去 开展该技术的研究 与产业实践 ，结合 国际上现有的成果 ， 就能够不断完善指纹 图谱质量控制技术体系 。 ２ 指纹图谱技术在 中药鉴别中的应用 ２ ． １ 中药 Ｄ Ｎ Ａ指纹 图谱 对 于 中药 ，特 别是 对于植 物 药和动物药的鉴定 中，Ｄ Ｎ Ａ指纹 图谱技术发挥 了在品种 定源和基源鉴定分析 中的强大优势 ，当今 Ｄ Ｎ Ａ指纹 图谱
１ ９世 纪 末 ２ ０世 纪 初 ，指 纹 鉴 定 诞 生 于 当 时 的 法 医
２ ． ４ 中药色谱指纹图谱 中药色谱 指纹图谱法是通过利 用色谱方法和其他连 用技术建 立 的同种 中药 或制剂所 共
学和犯罪 学 。人 类 的指 纹 是 由各 种 不 连贯 的点 和线 纹 构成 ，从 而使得每个 人 的指纹都 拥 有绝对 唯一 的特点 ， 对于法 医学 和犯 罪学 来 说 ，中药 指 纹 图谱 技 术 不是 一 个概念 的重复 。对 于 中药 而 言 ，它 不 是 简 简 单单 的研
不同产地蟾酥药材HPLC指纹图谱及模式识别研究
解毒、止痛等功效，主治恶疮、瘵痈、癌肿、咽喉
肿痛、牙痛等局部结肿及其引发的疼痛［1］,近年被
用于治疗急性心力衰竭、慢性支气管炎、坐骨神经
[Keywords] Venenum Bufonis； HPLC ； fingerprint； similarip analysis； principal comp bufo gargaOzans Cantor 或黑眶蟾Bufo melanostictus Schneidar 耳后腺
Jiangsu Province Academy of Traditional Chinese Medicine， filiated Hospital ) Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Nanjing Universita f Chinese Medine，Nanjing 210028， China
5 "m),纯水通1%三氟乙酸(TFA)乙月青溶液为流动相梯度洗脱，流速l.OmLmPT1 ,柱温30 a ,检测波长296 nm,
结果：提取10个色谱峰为指纹图谱共有峰，并采用对照品指认了 3个主要色谱峰，其中以对照品蟾毒灵为参照峰， 采用指纹图谱相似度评价软件、SIMCA软件进行相似度分析和主成分分析。方法学考察实验表明，所建立的指纹图 谱方法重复性良好，简便可靠。不同来源的蟾酥药材相似度大于0.92,结论：本研究所建立的蟾酥药材指纹图谱方 法快速准确，灵敏度高，可为不同产地蟾酥质量控制和混伪品鉴别提供有效的手段，
［关键词］蟾酥；高效液相色谱；指纹图谱；相似度分析；主成分分析 ［中图分类号］R282. 74； R284 ［文献标识码］A ［文章编号］1673串890(2019)09O262串5 doi：10.13313/j. issn. 1673^890.20190331001
香附药材HPLC指纹图谱研究
香附药材HPLC指纹图谱研究作者：蒋莉娟皮胜玲方铁铮姚江雄许招懂林丽美来源：《中国当代医药》2016年第01期[摘要] 目的建立香附药材HPLC指纹图谱，结合化学计量手段，对多批次药材进行质量控制。
方法以Kromasil 100-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以甲醇（A）-水（B）为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm；柱温25℃，对10批药材样品进行相似度分析、聚类分析和主成分分析。
结果建立了香附药材专属性的HPLC指纹图谱，标示了16个共有指纹峰，10批样品分为3大类。
结论将HPLC指纹图谱与化学计量手段相结合，可有效对香附药材进行真伪鉴别和质量评价，为提高其整体质量控制提供参考。
[关键词] 香附；高效液相色谱法；指纹图谱；相似度评价；聚类分析；主成分分析[中图分类号] R927.11 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）01（a）-0004-04S 香附为莎草科植物莎草（Cyperus Rotundus L.）的干燥根茎，具有疏肝解郁、理气宽中、调经止痛的功效，用于治疗肝郁气滞所致的胸胁胀痛、疝气疼痛、乳房胀痛、脾胃气滞、脘腹痞闷、胀满疼痛、月经不调、经闭痛经之症，为妇科常用药[1]。
《本草纲目》称之为“气病之总司，女科之主帅”，主产于山东、浙江、湖南、河南等地，以山东为道地药材。
香附主要含挥发油类成分，此外还有萜类、黄酮类、酚类、生物碱等化合物[2]。
现代药理研究显示，香附具有抗炎、抗血小板、降血糖、保护神经系统、抗过敏等作用[3]。
指纹图谱是基于对中药物质群整体作用的认识，借助于波谱和色谱等技术获得中药化学成分的光谱或色谱图，是实现鉴别中药真实性、评价质量一致性和产品稳定性的可行模式，具有信息量大、特征性强、整体性和模糊性等特点[4]。
本研究采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）对10批香附药材进行研究并建立指纹图谱，旨在为香附药材的质量控制提供科学依据。
中药指纹图谱研究
峰号 ⑴
⑵
⑶
⑷
⑸ 平均值 RSD(％)
1
0.75 0.759 0.76 0.763 0.774 0.761
1.14
2
0.177 0.175 0.179 0.177 0.177 0.177
0.80
3
0.359 0.36 0.359 0.362 0.359 0.360
0.36
4
0.231 0.223 0.22 0.224 0.224 0.224
平均值 0.768 0.175 0.360 0.229 0.224 1.459 1.000 7.848 0.255 1.273 0.294 0.577
RSD（％） 1.81 1.84 0.36 2.60 1.38 1.38 0.00 0.13 0.60 0.14 1.14 0.30
22
精密度与稳定性试验结果：
黑果菝葜(S.glauco-china Warb.)
土茯苓(S.glabra Roxb.)
17
2.色谱条件：
Kromasil C18柱（4.6×250mm，5μm） 流速:0.8ml·min-1 进样量:20μL； 检测波长:330mm； 流动相: 乙腈-甲醇-0.04％磷酸溶液
梯度洗脱程序（V/V,%）
我国的学者尝试用UV、IR、TLC、GC进行中药的 鉴别研究；
2021/9/13
3
1. 我国研究中药指纹图谱的历史
20世纪80年代~90年代： 《中国药典 》1995年版一部收载了TLC法鉴别中药
材及中成药。 《中国药典》2000年版一部中药薄层色谱鉴别引进
了“对照药材”，以完整的色谱图像作为鉴别的依据而正 式纳入国家药品标准。
⑶ 0.775 0.169 0.362 0.220 0.221 1.432 1.000 7.840 0.254 1.272 0.290 0.574
HPLC指纹图谱相似度研究
参考文献 1 王龙星 ,肖红斌 ,梁鑫淼 ,等. 一种评价中药色谱指纹图谱相似性
的新方法 :向量夹角法. 药学学报 , 2002, 37 (9) : 713 2 苗爱东 ,孙殿甲. Excel 2002 在中药指纹图谱相似度计算中的应
用. 药学进展 , 2003, 27 (1) : 51
STUDY O N THE S IM ILAR ITY BETW EEN HPLC F INGERPR INTS
Sun Q inglei, L in Yunliang, Zhu He, W ang Xiao, Cheng Chuange, L iu J ianhua ( Shandong Analysis and Test Center, Shandong Academy of Science, J inan 250014, China) ABSTRACT HPLC curves was treated as vector of hyperspace, the sim ilarity between them was calculated by using the cosine value of the angle between them. The sim ilarity of HPLC fingerp rints from the general abstract of 7 kinds of honeysuckles were used to test the method, and the calculate results showed that the method was a good way to evaluate the sim ilarity between HPLC fingerp rints, and it can be app lied to control the quality of Chinese traditional medicine. KEYWO RD S fingerp rint chart, HPLC, vectorial angle method, sim ilarity
HPLC-DAD同时测定金蝉花中8种核苷类成分的含量
HPLC-DAD同时测定金蝉花中8种核苷类成分的含量吕慧慧;杨安伦;张浩【摘要】目的建立同时测定金蝉花中腺嘌呤、胞嘧啶、肌苷、尿嘧啶、尿苷、β-胸苷、腺苷和2-脱氧腺苷8种核苷类成分的HPLC测定方法.方法采用Inertsil ODS-SP Extend C18(250 mm×4.6 mm,5.0μm)色谱柱,流动相:甲醇-水梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长260 nm,柱温25℃,进样量10 μL.结果腺嘌呤、胞嘧啶、肌苷、尿嘧啶、尿苷、β-胸苷、腺苷和2-脱氧腺苷8种核苷类成分分别在0.081～1.62、0.074 ～ 1.48、0.098 ～1.85、0.068 ～ 1.36、0.071 ～ 1.42、0.051 ～ 1.01、0.058 ～ 1.16、0.068 ～1.34 μg内呈良好的线性关系(R2≥0.999 0),平均加样回收率分别为97.8％、98.3％、101.5％、98.9％、99.1％、97.3％、100.6％、98.9％,RSD＜3.00％.结论该方法简单、重现性良好,准确可靠,可用于金蝉花药材的快速质量评价.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2015(018)012【总页数】4页(P1466-1469)【关键词】金蝉花;核苷类成分;HPLC【作者】吕慧慧;杨安伦;张浩【作者单位】浙江省中医院,杭州310018;浙江省中医院,杭州310018;浙江中医药大学,杭州310053【正文语种】中文HPLC-DAD method for simultaneous determination of 8 nucleosides in cordyceps cicadae LÜ Hui-hui1*,YANG An-lun1,ZHANG Hao2 (1.Zhejiang Provincial Hospital of TCM,Hangzhou 310018,China;2.Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,China)Key words：Cordyceps cicadae;Nucleosides;HPLC金蝉花[1](Cordyceps cicadae)为麦角菌科真菌大蝉草(Cordyceps cicadae Shing)寄生于蝉科昆虫的若虫上形成的虫菌复合体，又名蝉花、蝉茸、虫花、蝉虫草、蝉茸菌，其性味甘寒，具散风热、定惊镇痉、明目之功效，属于虫草类药材，主产于浙江、四川等地。
气相色谱指纹图谱用于连翘的质量控制
气相色谱指纹图谱用于连翘的质量控制袁 敏1 曾 志31 宋力飞2 杨 挺1 刘乡乡2 曹 骋1 曾和平11(华南师范大学化学系分析测试中心,广州510631)2(广州香雪制药股份有限公司,广州510530)摘 要 建立连翘挥发油的指纹图谱测定分析方法,为含连翘中药制剂制定指纹图谱奠定基础。
采用水蒸汽蒸馏法提取不同产地连翘的挥发油,用毛细管气相色谱技术测定其指纹图谱(G C 2FPS ),并选用模糊聚类法分析比较。
该方法灵敏度高,谱图有较好的重现性,样品稳定性好,11种连翘色谱峰重叠率>97%。
聚类分析法使谱图分析更为快速、准确,适用于连翘的质量控制。
关键词 连翘,指纹图谱,毛细管气相色谱,模糊聚类 2002205216收稿;2002212202接受本文系广东省科技计划重大专项及重点项目(A301020101)、广东省自然科学基金资助项目(011442)、广东省教育厅高校自然科学研究项目(0124)及广东省中医药局科研项目(401039)1 引 言中药连翘为木犀科植物(For sythia suspense (Thunb.)Vahl )的干燥果实。
主要产于山西、陕西、河南等省。
具有清热解毒、抗病毒及保肝消炎功效。
其挥发油的主要成分是α2水芹烯、蒎烯、对2聚伞花烯和芳樟醇,其中对2聚伞花烯和芳樟醇显示抗菌、抗病毒作用1。
但对于中医理论指导下的中药,尤其是复方制剂,任何单一活性成分都不能确切反映中医用药所体现的整体疗效。
某疾病的发生是多个病理过程的综合反映,对于特定疾病的某几个病理环节,中药复方的化学成分可能都有作用,或通过代谢以后的产物才发挥作用。
因此,以一个或几个成分为指标判断中药提取工艺的优劣缺少中医用药理论基础,而宏观地综合分析将成为必然。
色谱技术测定指纹图谱具有综合、宏观、“模糊”的非线性特点。
在药效、毒理临床试验已经确认品种安全有效的前提下,可用指纹图谱技术确定产品的真伪2。
近年来,高压液相色谱(HP LC )3、核磁共振(1H NMR )、薄层色谱(T LC )、气相色谱(G C )及随机扩散增多态DNA 技术(RAPD )在中药指纹图谱鉴定做了不少工作,为中药分析提供了有效的分析手段。
重楼HPLC指纹图谱研究的开题报告
重楼HPLC指纹图谱研究的开题报告一、选题背景及意义重楼是一种中药材，具有清热解毒、止痛镇静、止血等功效。
重楼具有广泛的临床应用，如治疗高血压、心脑血管疾病、糖尿病等。
随着现代科技的发展，重楼药材的质量控制需要更加精确和科学化，而传统的质量控制方法主要依赖于药材外观、性状、质地等宏观指标和化学成分的测定。
这种方法不够精确和全面，难以保证产品质量的稳定性和一致性。
因此，探索一种新的质量控制方法，成为重楼质量控制的重要课题。
指纹图谱是现代药物分析的一种重要方法，指纹图谱能够综合反映药材的多种成分信息，是一种全面、准确、快速、可复制的药材质量评价方法。
HPLC是指纹图谱检测中常用的一种方法，具有高灵敏度、高分辨率、定量准确等特点。
因此，采用HPLC指纹图谱研究重楼的综合性成分信息是一种有前途的质量控制方法。
二、研究目的及内容本研究旨在建立重楼HPLC指纹图谱，并对图谱特征进行分析，探讨重楼质量评价方法，为重楼的质量控制提供科学依据。
具体内容包括：1. 建立适用于重楼的HPLC分析方法，制备重楼样品。
2. 利用HPLC分析方法建立重楼药材指纹图谱，确定共有峰和相对保留时间。
3. 采用多元统计方法对重楼HPLC指纹图谱数据进行分析，提取指纹图谱相关特征。
4. 对建立的指纹图谱进行验证和稳定性研究，探讨建立指纹图谱的可重复性和稳定性。
三、研究方法1. 仪器及试剂HPLC系统、色谱柱、UV检测器、样品制备设备、高纯水、甲醇、乙腈、乙酸等试剂。
2. 样品制备将重楼样品粉碎、均质，经过筛选、粗提等步骤制备成样品。
3. HPLC分析采用建立的HPLC分析方法对重楼样品进行分析，建立指纹图谱。
4. 多元统计分析对HPLC指纹图谱数据进行多元统计分析，提取指纹图谱的相关特征。
5. 验证和稳定性研究对建立的指纹图谱进行验证和稳定性研究，探讨建立指纹图谱的可重复性和稳定性。
四、预期成果1. 建立适用于重楼的HPLC分析方法，制备重楼样品。
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０ ． １ ％ 磷酸水溶液为流动相梯度洗脱时 ， 得到的色谱图
中色谱峰峰形和分离度都较好且出峰最多 ， 所 以选择
乙腈 一 ０ ． １ ％磷酸水溶液 为流动相 。 ３ ． ２ 方法学 考察结果
２ ． ３ 供试品溶液的制备
取各批次蝉花粉末（ 过三号
３ ３ 指纹图谱的建立 ． ３ ３ ． ． １ 样品测定结果 以色谱峰保留时间为参数 ， 对 １ １ 批蝉花药材进行指纹 图谱测定 ， 将各批蝉花指纹图
谱 与 对 照 品色 谱 图进 行 比较 ，确 认 各 批 蝉 花 样 品 中 腺 苷 色谱 峰 的归属 ， 并 以腺苷 为 参 照峰 ， 计 算 各 共 有
和相对峰 面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ 。
对保 留时间的 Ｒ Ｓ Ｄ值分别在 ２ ． ３ ９ ％一 ２ ． ７ ７ ％， 均小于 ２ ． ８ ％， 相对峰面积的 Ｒ Ｓ Ｄ值分别在 ２ ． ９ ８ ％ ～ ３ ． ９ １ ％， 均小 于４ ％， 符合指纹图谱要求 ， 表明方法重复性良好。
３ ， ２ ３ 稳 定性试验 ． 稳定性试 验结果 显示 在 ２ ４ ｈ内各
２ ． ４ 方法学考察
于３ ． ４ ％， 符合指纹图谱要求 ， 表明方法精密度良好。 精密吸取一批蝉花供试品溶液
３ ． ２ ． ２ 重 复性 试验 重 复性试验 结果 显示各 共有 峰相
２ ． ４ ． １ 精 密度试验
２ ０ ｐ ￣ Ｌ ， 按２ ． １ 项下所得到的最优色谱条件进行检测 ， 连 续进样 ６ 次， 记录色谱图， 计算各共有峰相对保留时间
２ ． ５ 指纹 图谱 的建立［ ２ － ５ ］ ２ ５． １ 样 品测 定 分别取 １ １ 批蝉 花 药材 的供 试 品溶
液， 按２ ． １ 项下所得的色谱条件进行检测 ， 记录色谱图。 在相同色谱条件下， 以色谱峰保留时间为参数 ， 将各蝉 花指纹图谱与对照品色谱图进行比较， 确认各批蝉花
筛） 适量 ， 精 密称 定 ， 至具 塞锥 形 瓶 中 ， 精 密 加入 甲醇 ５ ０ ｍ Ｌ ， 密塞， 摇匀 ， 超声提 取 ３ 次， 每次 ３ ０ ｍｉ ｎ ， 过滤 ， 合 并 滤液 ， 滤液减 压浓 缩 ， 残渣 加适 量蒸馏 水 溶解后 ， 转 移至 ５ ０ ｍＬ容量 瓶 中 ， 蒸馏 水定 容 ， 摇匀 ， ０ ． ４ ５ ￣ ｚ ｍ微孔
浙 江中 医药 大学学报 ２ ０ １ ３年 ５月第 ３ ７卷第 ５期
６ ０１
浙 江中医药大学学报 ２ ０ １ ３年 ５ 月第 ３ ７ 卷第 ５ 期
藩盘 己 ． ～ 蒜 ｚ 勺 Ｌ Ｊ Ｃ手 旨 薄 圆臻 卷
谱纯（ 美国 Ｔ Ｅ Ｄ Ｉ Ａ公 司） ， 其他试剂均为分析纯 ， 水为
国家药典 委员会 ， ２ ０ ０ ４ Ａ版 ） 对 １ １ 批蝉 花药 ２ ． １ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ色谱条件考察 采用大连依利特 Ｈ ｙ ｐ ｅ ｒ ｓ ｉ ｌ 评 价系统 （ Ｂ Ｄ Ｓ Ｃ １ ８色谱 柱 （ ２ ５ ０ ｍ ｍ ｘ ４ ． ６ ａ ｒ ｍ， ５ ｍ） ； 进行 全波长 扫
描， 选择最佳波长 ； 柱温 ３ Ｏ ℃； 流速 ０ ． ５ ｍ Ｕ ｍ ｉ ｎ ； 进样量 ２ ０ ￣ ｚ Ｌ ； 考察甲醇一 水、 乙腈一 水、 乙腈— 磷酸水等不同流动
相 的分离效果 。 ２ ． ２ 对照 品溶 液 的制备 取腺苷 对 照品适 量 ， 精密 称 定， 加适量蒸馏水溶 解后 ， 转移至 １ ０ ｍ Ｌ容量瓶 中， 蒸 馏
娃 哈哈纯净 水 。 ２ 方法 Fra bibliotek有峰。
２ ， ５ ， ３ 相似度分析
根据 ｌ ｌ 批蝉 花供试 品溶 液 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ
图谱给出的相关参数 ， 采用中药色谱指纹图谱相似度
材的 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ数据进行处理 ， 与对照指纹图谱相匹配 ， 分 析１ １ 批药材的指纹图谱相似度。
３ 结果
３ ， １ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ色谱条件考察结果
实验采用 Ｐ Ｄ Ａ检测
器对检测波长进行考察，图谱表明在 ２ ４ ８ ｎ ｍ检测波长 下， 指纹图谱 中色谱峰较多 ， 信 息较 丰富 ， 所 以选择 ２ ４ ８ ｎ ｍ为 检 测波 长 ； 流 动相 考 察 结果 显 示 当以 乙腈 一
水定容 ， 摇匀 ， 制成每 ｌ ｍ Ｌ 含５ ０ ． ０ ５ ｐ ￣ ｇ 的溶液 ， ０ ． ４ ５ ￣ ｚ ｍ
样 品中腺 苷色谱峰 的归属 ， 并 以腺苷 为参 照峰 ， 计算各 共有峰面积 。
２ ， ５ ． ２共有峰 的标定 将 各批 蝉 花 样 品 的 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ指纹
２ ． ４ ． ２ 重复性 试验
取一批 蝉花药材 ５ 份， 按２ － ３ 项 下
方法操作制备供试品溶液 ， 按２ ． １ 项下所得的色谱条件 进行分别进样 ， 记录色谱图， 计算各共有峰相对保留时
间和相对 峰面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ 。
共有峰相对保留时间的 Ｒ Ｓ Ｄ值分别在 ２ ． ３ ３ ％ 一 ２ ． ５ ７ ％， 均小于 ２ ． ６ ％， 相对峰面积的 Ｒ Ｓ Ｄ值分别在 ２ ． ７ ８ ％～ ３ ． ３ ９ ％， 均小于 ３ ． ４ ％， 符合指纹图谱要求 ， 表明方法稳定
３ ． ２ ． １ 精密度试验 精密度试验结果显示各共有峰相 对保 留时间的 Ｒ Ｓ Ｄ值分别在 ２ ． ０ ９ ％～ ２ ． ７ ７ ％， 均小于
３ ％， 相 对 峰 面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ值 分 别在 ２ ． ９ １ ％～ ３ ． ３ ２ ％， 均 小
滤膜滤过， 收集续滤液 ， 作为供试品溶液。
性 良好 。
２ ， ４ ． ３ 稳定性试 验 精密 吸取一批蝉花供试 品溶液 ２ ０ ￣ ｚ Ｌ ， 按２ ． １ 项下所得的色谱条件进行分别在 ０ ｈ ， ２ ｈ ，
４ ｈ ， ６ ｈ ， ８ ｈ ， ２ ４ ｈ 进样， 计算 各共 有峰相 对保 留时 间和相
对 峰面积 的 Ｒ Ｓ Ｄ 。