花粉的贮藏和生活力测定
花粉的形态观察及生活力测定
实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料百合、金鱼草、菊花等花粉。
三、仪器及药品显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。
四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。
2实验二、花粉生活力测定
前 言
花粉生活力测定在育种 力 2．雄性不育系的鉴定
实验目的：
学习并初步掌握作物花粉生 活力测定的常用方法
测定方法:
（一）I-KI染色鉴定
（二）TTC染色鉴定
（三）花粉粒发芽鉴定
实验方法 I-KI染色鉴定：
正常的成熟花粉粒体积较大， 并含有大量的淀粉粒，遇I-KI 呈紫黑色，不正常的花粉粒体 系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。
实验方法 TTC染色鉴定：
具有生活力的花粉中含有 脱氢酶，它能催化引物使脱下 的氢与TTC结合，生成红色化 合物甲替。凡有生活力的花粉 呈红色，生活力弱的呈浅红色， 无生活力的不显色或成黄色。
实验方法
花粉粒发芽鉴定：
在人工培养基上进 行发芽试验，可以比较 准确地判断花粉的生活 力。
实验步骤
I-KI染色鉴定：
2 ．准备 TTC 染色和发芽试验的材料， 置培养箱保温； 3．调试显微镜，I-KI染色鉴定； 4．TTC染色鉴定、发芽率调查。
作业
实验三、作物花粉生活力测定 1．测定方法和原理： （一）I-KI染色鉴定：正常的成熟花粉粒体积较大，并含有大量的淀粉 粒，遇I-KI呈紫黑色，不正常的花粉粒体系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。 （二）TTC染色鉴定：具有生活力的花粉中含有脱氢酶，它能催化底物 使脱下的氢与TTC（氯化三苯基四氮唑）结合，生成红色化合物甲替。 凡有生活力的花粉呈红色，生活力弱的呈浅红色，无生活力的不显色或 成黄色。 （三）花粉粒发芽鉴定：在人工培养基上进行发芽试验，可以比较准确 地判断花粉的生活力。 2．实验结果： 材料 I-IK染色率% TTC染色率% 发芽率%
用镊子夹一个花药于载玻片 上滴上一滴1%I-KI溶液 用镊子将花药夹碎并把碎片 去干净盖上盖玻片置显微 镜下观察。
丁香花粉采集、贮藏及生活力测定
4.1不同品种丁香的花粉生活力不同
丁香品种间亲缘关系越近, 其花粉生命力的高低也接近[3]。所以
在杂交育种中, 应该选用生命力较高的丁香品种作为父本, 这样可以大大 提高授粉成功率, 从而进一步确保杂交的成功。 4.2不同采集部位的花粉生活力不同
采集部位越靠近花序上部花粉生活力越高，故应选用靠近花序上部 盛开较好的花粉进行杂交育种。
61/63
3 30/38 26/60 27/32
63/74 67/67 26/33
28/46 45/48 81.36
56/59
下 1 55/57 23/28 58/63 35/41 42/45 部 2 50/59 45/51 30/33 40/45 60/71 86.95
3 51/60 50/52 34/44 40/49 20/30
粉数
生活
种
力
类
（%）
1
2
3
4
5
上 1 11/12 8/9 32/33 12/14 13/18 部 2 12/20 14/16 29/38 8/20 29/37 73.80
3 25/42 9/12 13/16 10/14 6/12
白 中 1 54/71 35/46 2பைடு நூலகம்/27
丁 香
部
2
20/25
36/41
碘－碘化钾染色法。先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100ml的蒸馏 水中，即成碘－碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉球擦净的普通载玻
片上，然后加水一滴，使花粉散开，置于显微镜下观察不同的5个视 野，凡花粉粒被染成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活力的 花粉（遇碘变蓝是淀粉的特性）。
2实验方案
花粉贮藏及花粉生活力的测定
实验四花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术。
（为什么贮藏花粉？）一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料油松、辣椒、一串红、矮牵牛、油茶、油菜等植物的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、毛笔、干燥器、小指形管、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、滴管、玻璃棒、量筒、电炉、石棉网、冰箱；凡士林、无水氯化钙、蔗糖、琼脂、蒸馏水、硼酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、碘、碘化钾、氯化二苯基四氮唑（TTC ）。
四、实验原理花粉在低温（0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低（呼吸）、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（0.3g 碘＋1.3g 碘化钾溶于100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力（不太准，比如刚死的花粉）。
育种实验-花粉生活力的测定2011春
三、方法
（二）花粉生活力试验 经贮存的花粉,在使用之前必须作生活力的测定以鉴 定其量。 测定花粉生活力的方法主要有三种。
活体萌发法
离体萌发法
染色法
1、花粉发芽法
人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况 来鉴定花粉生活力的强弱。
（1）培养基的制作与接种
一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。 加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝 固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用头 发（接种针或解剖针）沾以少量花粉。条播（轻轻振动，使 花粉均匀地撒在培养基上），将载玻片放在垫有湿润棉花培 养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播 种日期，将培养皿放于(20_25℃)的恒温箱中培养。
表1 花 粉 生 活 力 观 察 记 载 表
种处 类理
花粉发芽率（或染色后具有生活力的花粉百分率） 时间 重复I 重复Ⅱ 重复Ⅲ 总 计
发 发 发 发 花 未 发 花 未 发 花 未 发 芽 芽 芽 芽 播 检 粉 发 芽 粉 发 芽 粉 发 芽 种 查 率 率 率 率 数 芽 数 数 芽 数 数 芽 数 % % % % 发 芽 法 染 色 法
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的 方法。
二、材料及用具
材料：梨的花粉。 用具：显微镜、盖玻片、载玻片、凹式载玻 片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、 玻璃棒、微波炉
试剂：I-KI溶液、蒸馏水、蔗糖、琼脂等。
三、方法
（一）花粉贮藏 从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放 在纸上或培养皿中，放于干燥的室内阴干，令其开裂， 花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞 以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。再把花 粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条 件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以 放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
金娃娃萱草花粉的贮藏以及生活力的测定
第1期
河北林业技
2019 年 3 月
金娃娃萱草花粉的贮藏以及生活力的测定
宋立功 1，孙晓光 2
1 材料与方法
1.1 材料 试验材料为金娃娃萱草花粉，采摘于河北农业
收稿日期：2019-02-22 作者简介：宋立功（1968-），男，农学学士，高级工程师，主要从事农业生态园管理工作。
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第1期
河北林业科技
2019 年 3 月
大学西校区图书馆南楼南侧。于 2015 年 5 月 5 号 上午 8：00~9：00 采取植株生长健壮，正处于盛花期 含苞欲放的金娃娃萱草的花蕾，用硫酸纸包好。 1.2 方法 1.2.1 适宜花粉染色剂的筛选
当前，国内外对于萱草属花粉生命力相关研究 报导并不多见。金娃娃萱草 （Hemerocallis fulva ‘Golden Doll’）是萱草人工栽培的园艺品种[5]，具根 状茎和肉质肥大的纺锤状块根，螺旋状聚伞花序， 花 7~10 朵。花冠漏斗形，花径约 7~8cm，金黄色。花
期 5~11 月（6~7 月为盛花期，8~11 月为续花期），单 花开放 5~7d。花期长，叶丛绿色期长，花径大，单花 时间长，株型矮壮。且早春叶片萌发早，翠绿叶丛甚 为美观。加之既耐热又抗寒，适应性强，栽培管理简 单，适宜在城市公园、广场等绿地丛植点缀。金娃娃 萱草由北美最早育出，非常适合在中国华北、华中、 华东、东北等地园林绿地推广种植，所以对于其花 粉生命力的研究具有很强的现实性。利用培养基发 芽法筛选出了最适宜其花粉萌发的培养基浓度、最 适宜的染色剂和染色时间，其目的是为金娃娃萱草 的遗传育种工作和扩大萱草属植物资源提供理论 依据。
花粉生活力测定
（三）TTC法：（染色法） TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花 粉呼吸过程中脱氢酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)的氧化状是无色的，被氢还原时成红色的TTF。 具有活力的花粉呼吸作用较强，由于呼吸作用产生的氢能 使TTC还原成TTF，因此花粉便染成红色；而无生命的花 粉没有呼吸代谢活力，TTC不被还原，因而不着色。所以， 可根据花粉染不染成红色来判断有无生命力，从而测定花 粉生活力。
（二）联苯胺法：（染色法）
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利 用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色， 依据颜色可知花粉有无活性。实验中甲液成分为联苯胺， α-萘酚、碳酸钠，乙液成分为过氧化氢。
H2O2 + 酚
（无色）
过氧化氢酶
醌 + H2O
（红色、玫瑰红色）
1、配制药液 a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液； b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液； c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。 以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用 d.使用时将这三种溶液等量配成“甲液”，放入棕色滴瓶中 备用， e.将过氧化氢用蒸馏水稀释成0.3%的溶液作为“甲液”，随 配随用。 2、观察 取花粉少许撒入凹型载玻片，然后在花粉上滴“甲液”一滴， 片刻后，再滴入“乙液” 一滴，仔细搅匀，盖上盖玻片。 经3～5分钟后，再放在显微镜下检查。 有生活力的花粉呈红色或玫瑰红色，不着色者为无生活力的 花粉。为了确定具有生活力的花粉百分率，要连续观察3～5 个视野，求其平均值，将观察结果填入表内。
配置培养基（ 100ml水+1g+琼脂+0.01g硼酸+ 5-20g糖 ） 煮沸溶化 用玻棒分装与凹玻片中 播撒花粉 置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时 保持湿度 在显微镜下镜检计数
实验：园艺植物花粉生活力测定
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
爵床属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桤木(桦树家族成员)的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
松树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内， 花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶中，瓶口上塞以棉 花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。 把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在相对湿度较 低（一般0～40%）、低温（0～4℃）黑暗的条件 下贮藏。 用室温、正常空气湿度贮藏的花粉作对照。
五、方法步骤：
（二）药品配制
三、说明：
父母本花期不一致时，花粉需要经过 一段时间的贮藏；从外地采集花粉做父本 时，花粉要经过运输、邮寄过程。
因此在杂交前应检验花粉的生活力， 以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作 的失败。
四、实验原理：
1.碘-碘化钾染色法
正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则
较少。正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花粉的贮藏和生活力测定
实验三花粉的贮藏和生活力测定一、目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。
因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。
二、花粉及用具材料：桃或苹果树的花粉。
用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。
三、方法（一）花粉贮藏从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。
再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
（二）花粉生活力试验1、花粉发芽法人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。
加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。
轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。
杜鹃红山茶花粉保存及其生活力测定
Ａｂｓｒ ｃ Ｔ ｏ ｈ ｏｌｎ ｏ ａ ｌａ ａａｅ ｗｈｃ ｅｅ５ ｄｇａ ｅ ｅ ｄｉｇ ， ｓｅ ｐ ｒ ｎａ ｔｒ ｌ， ｔａ ｔ ｏ ｋ ｔｅｐ ｌ ｆ ｍｅｌ ｚ ｌａ， ｉｈ ｗ ｒ ｒｆ ｄ ｓｅ ｌ ｓ ａ ｘ ｅｉ ｔｌ ｅ Ｃ ｉ ｔ ｎ ｍｅ ｍａｅｉ ａ
花粉 的试 管萌 发实 验 ， 果表 明蔗糖 对 菊花花 粉 的萌发 有促 进 作 用 。此外 ， 怀 军 Ｊ王 钦 丽 ］唐 前 瑞 ［ 、 结 周 、 、 ５
张建 英 等 分别对 不 同植物 花 粉进行 了发 芽实 验 ， 并对 花 粉 的保存 及 其 生 活力 测定 各 方 面进 行 了论 述 。 目 前， 杂交育 种技 术不 断发展 ， 粉 的生活 力对 于杂 交成败 至关 重要 ， 花 因此 ， 开展 杂交 育种 之前 认真 检测 父本 在
Ｐｏ ｌ ｎ Ｐｒ ｓ ｒ ａ ｉ ｎ ａ ｄ Ｖｉ ｂ ｌｔ ｓ ｆ Ｃａ ｅ ｌ ａ ａ ｅ ｌｅ ｅ ｅ ｖ ｔｏ ｎ ａ ｉｉｙ Ｔｅ ｔ ｏ ｍ ｌｉ ｚ ｌ ａ ａ
Ｌ ｕ Ｙｕ ｉ ｇ ｉ ｌｎБайду номын сангаас
Ｐ ｎ Ｗｅ ａ ｎ
Ｚｈ ｎ ａ ｇ ｉ ａ ｇ Ｆ ｎ ｑｕ
Ｋ ｅ ｒ Ｃ ｍｅｌ ｚ ｌａ，ｐ ｌ ｎ，ｇ ｒ ｎ ｔ ｎ ｒｔ ，ｐ ｅ ｅｖ ｙ ｗｏ ｄｓ ａ ｌ ａ ａａｅ ｉ ｏｌ ｅ ｅｍｉａｉ ａｅ ｒｓｒｅ ｏ
园艺植物花粉的贮藏和生活力的测定(精)
2.培养法
（1）原理
正常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培 养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观 察计算其萌发率，以确定其活力。
（2）方法步骤
①将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在凹玻 片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。 ②在25℃左右的恒温箱中培养，5~10min后在显 微镜下检查5个视野，统计其萌发率。
6.置于干燥器内（干燥器底部放入适量的碳酸钙 或氯化钙）
7.将干燥器放于冰箱内（温度接近0℃而又是黑暗 的条件）贮藏备用。
（二）花粉生活力的测定 1.染色法—I-KI
（1）实验原理：碘遇淀粉变兰色，正常的花粉淀粉含量高 而不正常的花粉含量少，正常的染成兰色颜色较深； 生活力弱的染成淡兰色；无生活力的染色呈黄褐色 （2）方法步骤：在载玻片上放有少量测定花粉，然后在花 粉上滴一滴染色液，用玻棒将之混匀后，在显微镜下 镜检，每片观察5个视野，统计出具有生活力的花粉的 百分率
2-2南瓜的雄花和雌花
三、方法和步骤
（一）花粉的收集和贮藏 1.收集花粉的植株必须是健壮，并具有标准的特 征特性。 2.收集前一、二日将开放的花蕾（或花序）进行 套袋，以免其他花粉混入。
3.采集时应该选择将开放的花朵。
4.用镊子（镊子宜先用酒精浸洗，以免不同的花 粉混入）将花药取下。
花 粉
5.装入已消毒而且干燥的花粉瓶内
在载玻片上放有少量测定花粉然后在花粉上滴一滴染色液用玻棒将之混匀后在显微镜下镜检每片观察5个视野统计出具有生活力的花粉的百分率正常的成熟花粉粒具有较强的活力在适宜的培养条件下便能萌发和生长在显微镜下可直接观察计算其萌发率以确定其活力
实验二
园艺植物花粉的贮藏和生活力的测定
一、实验目的
植物花粉的贮藏与花粉生活力测定
为保持花粉的生活力，最好将装好的花粉放入冰箱内或放入装有无水氯化钙的干燥器中，如没有以上设备，也可把装有花粉的小瓶放入盛有石灰的箱子里，保持湿度25%以下，放在阴凉、干燥黑暗处，这样可短时期内贮藏。
原理：花粉在贮藏期间的稳定性与花粉壁外层的性质和贮藏期花粉原生质的代谢有关。贮藏期内花粉可溶性糖类和有机物消耗少，则能在较长时期内保持生活力。影响花粉生活力的外界因子主要是相对湿度、温度和气体环境及花粉本身的含水量。在贮藏花粉时需要创造一个干燥、低温、低氧的环境，使得花粉处于几乎不活动或休眠的状态。
六、花粉生活力的测定
直接测定方法
1. 将花粉直接授在同种植株的雌蕊柱头上，并做好隔离工作，然后观察结实情况；如发育正常收到种子，即证明花粉有生活力。
2. 花粉在柱头上发芽 （1）将花粉直接授在清洁的同种植株的雌蕊柱头上，并做好隔离工作，隔1至3天采集已授过花粉的柱头，用FAA固定液或60℃温水中固定15分钟以上。（2）染色制片 将固定的花柱取出，用1%的苯胺兰水溶液（将1克苯胺兰溶于100毫升蒸馏水中）染色24小时，把花柱撕开，放在载玻片上，盖上盖玻片，用大拇指轻压、镜检、观察、若花粉有生活力，即可见染成蓝色的花粉管深入柱头组织，若花粉无生活力则看不到花粉管深入柱头组织现象。
间接测定法（此法是借人为创造条件使得花粉发芽来鉴别是否有生活力）
1. 培养基法 100毫升蒸馏水加入1至2克琼脂加热溶解，在加入葡萄糖或蔗糖制成5%、10%、15%、20%浓度的培养基趁热分别倒入培养皿中，冷凝后呈固体培养基，然后用解剖针粘取少量的花粉，均匀撒在培养基上。将播种好的培养基放在20~25℃恒温箱中，24小时或更长一点时间即可镜检观察其发芽情况。
紫玉兰花粉的生活力测定及贮藏方法
紫玉兰花粉的生活力测定及贮藏方法
刘会超;贾文庆;郭艳艳
【期刊名称】《贵州农业科学》
【年(卷),期】2011(039)007
【摘要】为了探明紫玉兰花粉生活力测定方法以及适宜的贮藏方法,采用离体培养法、醋酸洋红染色法、碘-碘化钾染色法和TTC氯化三苯基四氮唑)染色法等方法研究了花粉寿命长短与环境条件的关系.结果表明:4种测定方法中只有离体培养法适用于紫玉兰花粉生活力测定;培养基中添加不同浓度的蔗糖和硼酸对花粉的萌发有促进作用,紫玉兰花粉萌发的最适培养基为2%蔗糖+ 0.001%硼酸,萌发率达90.57%;在贮藏5d的情况下,花粉最适宜的贮藏条件为-80 ℃,不干燥.
【总页数】4页(P188-191)
【作者】刘会超;贾文庆;郭艳艳
【作者单位】河南科技学院,河南,新乡,453003;河南科技学院,河南,新乡,453003;河南科技学院,河南,新乡,453003
【正文语种】中文
【中图分类】S567.19
【相关文献】
1.万载龙牙百合花粉生活力测定及贮藏方法研究 [J], 李润根;却志群;刘芳玲;吴学渊;娄小翠
2.刺槐花粉生活力测定方法及贮藏特性 [J], 王存纲;晋佳路;
3.不同现代月季品种的花粉生活力测定及贮藏方法比较 [J], 王红梅;张邱艳;张操
4.10个菊花品种花粉生活力测定和贮藏方法研究 [J], 李亚军; 黄河; 牛雅静; 李霞
5.牡丹花粉生活力测定方法及其贮藏研究进展 [J], 李婷;乔琦;李剑峰;郭幸飞;侯小改
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不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析
3.醋酸洋红法
【原理】正常花粉呈圆球形,物质积累较多,对醋酸洋红的吸附作 用与亲和力强,通常易被染成深红色,发育不良的花粉常呈畸形, 不积累物质或积累很少,用醋酸洋红染色呈淡红色或无色。
2.氯化三苯基四氮唑（TTC）法
【原理】 具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或 NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成 红色的TTF（三苯基甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸 作用较弱，TTC的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后
的颜色变化判断花粉的生活力。
花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降 低代谢强度，延长花粉的寿命。花粉寿命的长短， 因植物种类不同而异。在自然条件下，大多数植 物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或 几个星期。
花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异 以外，还与温度、湿度有密切的关系。通常 高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命 力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分， 也不利于保存。
用镊子取出花药（每个园艺植物取20个花蕾的 花药）置于培养皿（纸盒-花粉量多）中，写上 标签，进行必要的加温处理（培养箱温度25℃ 使其散粉。
（3）花粉的储藏
散粉然后将花粉收集于2ml的离心管（花粉瓶） 中，用封口膜密封盖子，写上标签置于冰箱 （-20℃）内储藏备用。（或者不同温度25℃， 5℃、0℃、-20℃、-40℃和-86℃下贮藏）。 注意采集花药开裂前后的新鲜花粉，对不成 熟的幼嫩花药的花粉，成熟过头的花粉被雨 露粘湿的花粉，有疑问的花粉杂质要除去。
花粉生活力测定
实验九花粉生活力测定一、实验目的1．学习和了解植物花粉生活力测定方法及原理。
2．初步掌握稻、麦的花粉生活力测定方法。
二、内容说明农业常规育种工作中，为了进行人工辅助授粉和杂交授粉，尤其是杂交育种工作，为解决亲本花期不一致和远距离杂交的问题，通常需要早期采集和储藏花粉。
不同类群植物花粉在自然条件下的寿命，花粉的储藏条件，以及花粉生活力的测定有所区别，这一是由花粉本身的特征决定的，二是由贮藏条件决定的。
一般来说，禾谷类作物花粉的寿命较短，自花授粉植物花粉的寿命尤其短，如小麦在花药开裂后30min，花粉即由鲜黄色变为深黄色，此时己有大量花粉丧失活力。
在许多特殊条件下，花粉生活力的差异对于研究花粉-柱头的相互作用，作物改良与育种操作，基因库的保持，不亲和性与受精关系，生理调节对花粉萌发的影响和基因流等，均有非常重要的实践意义。
因此，对于外地采集来的花粉的短暂贮藏、花粉的生物学研究、自交或远缘杂交分析结实率或不结实原因、鉴定雄性不育系时，花粉生活力的测定显得很重要。
花粉生活力有很多表述法，为了方便起见，现将各种表述方法列表如下(表9-1)，以供参考。
表9-1 花粉生活力的各种表述法花粉生活力的测定方法较多，通常可分为萌发测定和不萌发测定两大类，常用的有：（1）形态鉴定法是一种简便的鉴定新采集花粉的方法。
可通过直接观察花粉在形态上有明显差异来鉴定花粉有无生活力。
发育不正常的花粉，内含物不充实而空秕，形状也不规则，大小参差不齐。
而正常花粉内含物充实饱满，形状规则，大小整齐。
因内部含有较多淀粉粒而遇1%I-IK溶液呈深紫色反应，遇水易涨而破裂。
一般适用于不育系及远缘杂交后代花粉形态和育性的鉴定。
（2）染色鉴定法（FCR法）用不同的化学试剂如双乙酸荧光素(fluorescein diacetate)、联苯胺茶酚等快速鉴定花粉生活力。
双乙酸荧光素是一种荧光染料，其本身不产生荧光，无极性，可以自由地透过完整的原生质膜。
实验一花粉收集
实验一花粉收集、贮藏及花粉生活力测定一、实验目的1.掌握鲜花粉收集、储藏的方法及原理。
2.观察花粉在人工配制的培养基上的萌发情况，认识花粉萌发形成花粉管的外形和伸长过程，为理解植物的生殖过程奠定基础。
二、实验原理花期不遇，给杂交工作造成困难，有的树木和园林植物可通过延长花期解决，有的不得不进行花粉储藏，花粉贮藏对某些园林植物杂交育种具有重要的意义。
通过花粉贮藏，它可以使一些迟开花的园林植物和早开花的园林植物进行杂交，或到较远的地方给母本授粉，花粉的贮藏与运输可以打破杂交育种中双亲时间上和空间上的隔离，扩大育种的范围。
花粉在贮藏期间的稳定性，与花粉壁外层（外壁）的性质和贮藏期间花粉原生质的代谢有关。
在贮藏期间代谢调较少可溶性糖类和有机酸的花粉能够在较长期间保持其活力。
花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降低代谢强度，延长花粉的寿命。
花粉寿命的长短，因植物种类不同而异。
在自然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或几个星期。
如一般木本植物花粉寿命很长，如在干燥凉爽的条件下，柑橘花粉能存活40～50d，椴树45d，苹果10～70d，樱桃30～100d，麻栎一年，叶培忠教授试验发现杉木的花粉可存活17年之久；而在草本植物中，如棉属花粉采下后24h存活只有65％，超过24h很少存活；多数禾本科植物的存活时间不超过一天，如玉米1～2d，水稻花粉在田间条件下3min就有50％丧失生活力，5min后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。
一般在自然条件下自花授粉植物花粉寿命比常异花、异花授粉植物为短。
花粉的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉的寿命要比二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三胞花粉，寿命都是比较短的。
花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异以外，还与温度、湿度有密切的关系。
通常高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分，也不利于保存。
据亚达姆斯试验，苹果花粉在干燥状态下，可保存3个月；如放在2～8℃，湿度80％的条件下，经过5个星期即失去生活力。
一种桉树花粉的贮藏方法及其贮藏花粉的生活力测定方法[发明专利]
![一种桉树花粉的贮藏方法及其贮藏花粉的生活力测定方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/e89587cf915f804d2a16c13a.png)
专利名称：一种桉树花粉的贮藏方法及其贮藏花粉的生活力测定方法
专利类型：发明专利
发明人：陆钊华,徐建民,吴世军,李光友,张霞
申请号：CN201610136982.6
申请日：20160310
公开号：CN105766893A
公开日：
20160720
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种桉树花粉的贮藏方法，包括以下步骤：(1)花粉的收集和干燥；(2)低温贮藏。
贮藏花粉的生活力测定方法，用于检验贮藏前、后的花粉活力，包括以下步骤：(1)配制培养基：20％蔗糖+6％琼脂+100mg/L硼酸；a、硼酸母液称取0.1g硼酸，水溶解后定容至100ml；b、培养基的配制称取20g蔗糖，6克琼脂加10ml硼酸母液，再加水定容至100ml，备用；(2)贮藏花粉的预处理；(3)培养；(4)镜检观察。
本发明与现有技术相比的优点是：本发明可使桉树花粉的保活期由原来的3?5天延长至5年，还可达30％的生活力。
可以在任何季节提供桉树母树授粉需要的花粉。
解决桉树杂交育种中的亲本树花期不遇等关键技术问题。
本发明操作方法简便，适合桉树花粉贮藏应用。
申请人：中国林业科学研究院热带林业研究所
地址：510520 广东省广州市天河区广汕一路682号中国林科院热林所
国籍：CN
代理机构：北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司
代理人：董芙蓉
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实验三花粉的贮藏和生活力测定
一、目的和要求
在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。
因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。
二、花粉及用具
材料：桃或苹果树的花粉。
用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。
三、方法
（一）花粉贮藏
从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。
再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
（二）花粉生活力试验
1、花粉发芽法
人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种
一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。
加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。
轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并
贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
（2）观察记数
在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已
经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视
野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，
求其平均数，即得出花粉发芽百分率。
花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉
直径为准。
2．染色法
（1）过氧化物酶测定法
原理：具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。
此酶能利用过氧化物使各
种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活力。
+2H2O
对二萘氧基联苯胺（紫红色）
a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液；
b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液；
c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。
以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用，使用时将这三种溶液等量配成试剂
Ⅰ，放入棕色滴瓶中备用，在使用前准备好0.3%的过氧化氢水溶液作为试剂Ⅱ。
使用时，先在载玻片上加少量待测花粉，然后在花粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各
一滴，仔细搅匀，盖上盖玻片，经3～4分钟后，再放在显微镜下检查，有生活
力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的花粉为黄色或无色，为了确定具有生活力
的花粉百分率，要连续观察3～5个视野，求其平均值，将观察结果填入表内。
（2）碘-碘化钾染色法
原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。
据此，可用化学物
质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。
通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。
步骤和方法：取花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察，凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。
（3）氯化三苯基四氮唑（TTC）法
原理：凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的花粉则无此反应，因此当TTC渗入有生活力的花粉时，花粉中的脱氢酶在催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成三苯基甲（TTF）而呈红色。
试剂配制：
I．磷酸盐缓冲液在100ml的蒸馏水中，溶解0.832克Na2HPO4·2H2O和0.273克KH2PO4，调整pH值为7.17。
Ⅱ．TTC溶液称取0.02～0.05克TTC,溶解在10ml的磷酸盐缓冲液中,放入橡色滴瓶内,置于暗处。
TTC为有毒物质,操作时应注意安全。
步骤和方法：取少量花粉放在载玻片上，在花粉上滴1～2滴TTC溶液，用镊子使其混匀后，盖上盖玻片。
将此载玻片上置于恒温箱中（35～40℃）约15～20分钟，在显微镜（100倍）下观察。
凡有生活力的花粉粒呈红色，其次呈淡红色，失去生活力的和不育的花粉粒表现无色。
四、作业
1．绘出花粉发芽前后形态图。
2．统计几种测定方法花粉发芽率。
3．将发芽法与染色法测定的结果作一比较，分析其差异原因。
表2-1 花粉生活力观察记载表
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