蚕豆病实验设计
G6PD缺乏症设计性实验
初步判断
1天前食用新鲜蚕豆
据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情 况——遗传性
恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色 苍白脉搏150次/分，血压 80/60mmHg，血压下降，呼吸40次 /分，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍 白，皮肤及巩膜黄染，尿蛋白（++）血的证据
正常参值：红细胞数 4.0～5.5× 10^12 /L ，血 红蛋白 110～160g/L ，而此时红细胞破裂产生全 利用多聚酶链式反应方法(PCR)扩增人葡萄糖6磷酸脱氢 酶突变热点基因片段，采用单链构象多态性(SSCP)技术 身溶血性反应，红细胞大量破裂释放出血红蛋白， 对扩增片段进行分析，用PCR直接测序以确定突变的基 因此患者红细胞 为1.98×1012/L，有明显下降；由 因位点。 于红细胞破裂，血浆游离血红蛋白显著增高，超过 结合珠蛋白的量和肾小管再吸收功能，出现酱油色 的血红蛋白尿，而血红蛋白53g/L，降低 红细胞大量破坏，在单核-吞噬细胞系统产生胆红 素过多，超过了肝细胞摄取、转化和排泄胆红素的 能力，造成血液中未结合胆红素浓度明显增高，发 生溶血性黄疸,皮肤及巩膜黄染 ，尿胆红素(－) 。肝 对胆红素的摄取、转化、排泄增多，过多胆红素进 入胆道系统，肠肝循环增多，使得尿中尿胆原和尿 胆素含量增多，故尿胆素原(+)
正常.红细胞数 4.0～5.5×10^12 /L ，血红蛋 白 120～160g/L 患者.红细胞 1.98×10^12 /L，血红蛋白53g/L 正常. 血清总胆红素1.71~17.7μmol/L 结合胆 红素1.7~6.8μmol/L，未结合胆红素 10.26±6.84μmol/L 患者. 溶血清总胆红素85.5μmol/L 结合胆红 素13.7μmol/L，未结合胆红素71.8μmol/L，皮 肤及巩膜黄染 (溶血性黄疸）
蚕豆病生物设计PPT课件
随着基因组学、蛋白质组学和代谢组学等研究手段的不断发展，我们可以更深入地了解蚕豆病的发病机制，为治 疗方法的研发提供新的思路和方向。此外，随着精准医疗的兴起，个体化治疗将成为可能，为蚕豆病患者带来更 好的治疗效果。
跨学科合作与创新
合作
蚕豆病的研究需要多学科的合作，包括生物学、医学、化学 、物理学等。通过跨学科的合作，我们可以整合不同领域的 优势资源，推动蚕豆病研究的深入发展。
公共卫生挑战
蚕豆病的发病率和流行情况对公共卫 生构成挑战。
伦理和法律问题
随着蚕豆病患者的增多，对医疗资源 的需求也相应增加。
06
展望与未来研究方向
研究挑战与机遇
挑战
蚕豆病是一种遗传性疾病，其发病机制复杂，目前仍有许多未知领域需要探索。此外，由于患者的个体差异，治 疗效果难以预测，这为治疗方法的研发带来了一定的挑战。
蚕豆病生物设计PPT课件
$number {01}
目 录
• 蚕豆病概述 • 蚕豆病的生物设计原理 • 蚕豆病的基因治疗设计 • 蚕豆病的药物治疗设计 • 蚕豆病的预防与控制 • 展望与未来研究方向
01
蚕豆病概述
定义与特性
蚕豆病是一种遗传性溶血性疾病，由于红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏 所致。
基因治疗原理
基因治疗原理
基因治疗是一种通过修改人体细胞基因来治疗遗传性疾病的方法。对于蚕豆病， 基因治疗旨在将正常基因导入患者的造血干细胞，以替代缺陷基因，从而恢复正 常的酶活性，减少氧化应激和溶血发作。
基因治疗的优势
基因治疗具有根治疾病的潜力，可以永久性地纠正缺陷基因，避免长期药物治疗 的副作用和不便。
基因治疗策略
基因替代策略
通过将正常基因导入患 者的造血干细胞，替代 缺陷基因，以达到治疗
蚕豆病实验设计PPT课件
未来研究方向
深入研究蚕豆病的分子机制，探索更 多与疾病发病相关的基因和分子。
加强国际合作与交流，共同推进蚕豆 病的研究进展。
开展临床试验，验证实验设计的可行 性和有效性，为临床治疗提供更加可 靠的依据。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
治疗
对于蚕豆病患者，一旦出现症状，应立即停止食用蚕豆或接触氧化性药物，并 给予适当的对症治疗，如输血、使用抗氧化剂等。预防是关键，避免诱发因素 是减少蚕豆病发作的重要措施。
02 实验设计思路
实验目的
探究蚕豆病发病机制
通过实验了解蚕豆病发病过程中的分子机制和细胞反应。
寻找治疗蚕豆病的有效方法
通过实验研究，寻找可能的治疗蚕豆病的有效药物或方案。
实验步骤
01
02
03
04
步骤1
准备实验材料和设备，包括红 细胞样本、不同浓度的氧化剂
等。
步骤2
将红细胞样本分为实验组和对 照组，实验组加入不同浓度的
氧化剂，对照组不加。
步骤3
观察并记录实验组和对照组红 细胞在不同时间点的形态和数
量变化。
步骤4
对实验结果进行分析和总结， 得出结论。
03 实验材料与方法
现出明显的优势。
实验组内部的不同处理效果
02
实验组内不同处理方式之间也存在差异，某些处理方式的效果
优于其他处理方式。
对照组内部的一致性
03
对照组内部的数据较为一致，没有出现明显的波动或差异。
结果分析
实验组优势的原因分析
对实验组表现出色的原因进行分析，可能是由于实验设计的某些 特定因素或实验过程中的细节控制所致。
本研究通过实验设计，探讨了 蚕豆病发病机制及治疗策略， 为临床治疗提供了理论依据。
生化实验期末蚕豆病设计性实验报告课件
氧化应激
在蚕豆病患者体内，由于缺乏G6-PD，红细胞无法有效应对氧化 应激，导致红细胞膜损伤和溶血 。
蚕豆病的病理生理
溶血性贫血
由于红细胞膜损伤和溶血，蚕豆病患 者会出现溶血性贫血的症状，如黄疸 、贫血、肝脾肿大等。
我们采用了生化实验方法，通过测定蚕豆 病患者和健康人群的G6PD酶活性，对比分 析两组数据，得出结论。
实验结果
数据分析
实验结果表明，蚕豆病患者的G6PD酶活性 显著低于健康人群，这与预期结果一致。
我们对实验数据进行了统计分析，得出了 具有统计学意义的结论。
实验中遇到的问题及解决方案
问题1
部分实验数据出现异常值。
验结果的实用性和应用前景。
结论总结
总结实验结果，得出明确的结论， 指出实验的局限性和不足之处，提 出改进和完善的建议。
结果应用展望
探讨实验结果在实践中的应用前景 和价值，为相关领域的研究和实践 提供参考和借鉴。
05
CATALOGUE
实验总结与展望
实验总结
实验目的
实验方法
通过本次实验，我们成功地验证了蚕豆病 与G6PD酶活性之间的关系，并探讨了可能 的致病机制。
生化实验期末蚕豆 病设计性实验报告 课件
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果分析 • 实验总结与展望
01
CATALOGUE
实验目的
掌握蚕豆病的发病机制
01
了解蚕豆病的基因突变机制，掌 握其与氧化应激的关系。
02
理解蚕豆病发病过程中的酶缺陷 及其对代谢的影响。
蚕豆多倍体诱导和鉴定试验设计方案
蚕豆多倍体诱导和鉴定试验设计方案一、研究目的本试验的目的是通过多倍体诱导和鉴定，获得蚕豆的多倍体植株，并分析其对产量和抗逆性能的影响。
二、试验方法1.材料准备选取蚕豆品种，如“春蚕”等，作为试验材料。
选取健康、无病虫害的蚕豆种子作为试验材料。
2.多倍体诱导将种子表面用70%酒精消毒，然后用1%次氯酸钠溶液浸泡10分钟，最后用无菌水洗净。
将种子置于层析纸上进行萌发，待种子萌发出完整的胚芽后，将其转移到含有2mg/L 2,4-D的MS培养基中进行培养。
培养基的pH值为5.8，培养温度为25±2℃，光照强度为3000lx，光周期为16h 光照/8h黑暗。
3.多倍体鉴定对培养基中生长的组织进行染色体观察，以确定其倍性。
通过标准的细胞学方法，如根尖细胞准备、染色、显微镜观察等进行多倍体鉴定。
4.产量和抗逆性能测试将多倍体和野生型蚕豆植株种植在相同的环境条件下，每个处理设置3个重复。
在不同的生长期，如花期、结荚期和成熟期，对植株进行测量和观察。
测量产量指标，如单株产量、荚果长度、荚果宽度等，同时评估抗逆性能，如抗病性、抗旱性等。
三、数据分析收集产量和抗逆性能的数据，并进行统计分析。
使用SPSS等统计软件进行方差分析，比较多倍体和野生型蚕豆之间的差异。
根据数据分析的结果，评估多倍体对蚕豆产量和抗逆性能的影响。
四、预期结果预期多倍体蚕豆较野生型蚕豆在产量和抗逆性能方面有所提高。
通过多倍体诱导和鉴定试验，可以得到具有更高产量和更强抗逆性的蚕豆品种。
五、试验注意事项1.培养基的配制和无菌操作要严格遵守操作规程，以保证试验的准确性。
2.多倍体鉴定时，要充分观察染色体的形态和结构，进行准确的判定。
3.每个处理的重复应设置合适，以提高结果的可靠性。
4.在进行抗逆性能测试时，要注意环境条件的一致性，以消除环境因素对结果的影响。
六、试验的意义通过多倍体诱导和鉴定试验，可以培育出具有良好产量和抗逆性能的蚕豆品种。
这对于提高农作物产量和抗病虫害能力具有重要意义，也为蚕豆的栽培和利用提供了有效的技术支持。
分子生物学实验设计 蚕豆病 G6PD 临床诊断 医学生 生化代谢 实验室检查结果 遗传病 本科生
2. 标本采集:肝素化毛细血管从手指采集外围血液
3. 取小试管3支，标明患者、正常对照和阳性对照。往各管加入混合试剂 0.2ml
4. 在反应0分钟（混匀后立即吸出）、5分钟、10分钟后，分别从各吸管吸出 反应液1滴，加在滤纸上，使充分干燥 5. 在暗室内，用波长340~370nm的紫外线照射滤纸上的斑点，检查有无荧光 6. 正常人0分钟斑点无荧光，5分钟和10分钟斑点出现荧光，而10分钟斑点荧 光最强。G6PD缺乏的患者在0、5、10分钟均无荧光
【 G6PD缺陷筛查】
【实验名称】葡萄糖—6—磷酸脱氢酶的荧光斑点试验 G6PD
【实验原理】 6-磷酸葡萄糖
6-磷酸葡萄糖酸
NADP 还原
NADPH 长波紫外光365nm的 激发
荧
光
【实验方法】 基于NADPH可发出荧光，6-磷酸葡萄糖和NADP加入到测试细胞 的 溶血产物中，经短暂孵育后，混合物在滤纸上出现斑点，在长波紫光下检 测，荧光表明NADP的存在。
3.42~11.96μmol/L ↑
尿胆素原
（+）
少量
↑
胆红素形成↑
尿胆素原↑
1.根据上述患儿的临床表现和实验室检查， 初步判断患儿是何种疾病？
初步诊断：蚕豆病，伴溶血性黄疸
发病原因：
遗传因素；由于G6PD基因突变，导致该酶活性降低， 红细胞不能抵抗氧化损伤而遭受破坏，引起溶血性 贫血。
2.请设计实验进一步明确诊断。
【实验器材】
恒温水循环紫外分光光度计、可见分光光度计、离心 机
【主要试剂】
0.5mol/L Tris-HCl MgCl2缓冲溶液（pH8.0）、 2mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP﹢）、 6mmol/L葡萄糖-6-磷酸二钠（G6P-Na2）、溶血剂、 血红蛋白氧化试剂、0.9NaCl，ACD抗凝剂。
实验设计
毕业论文实验设计一﹑实验题目：Pb2+对蚕豆幼苗生长的影响二﹑实验器材及试剂：三﹑实验操作：1、对蚕豆幼苗的处理选用大小均匀、健康饱满的蚕豆种子,用蒸馏水浸泡4h后,置于30℃培养箱中催芽,萌芽后播种于装有蛭石基质的培养钵中。
用1/2 Hoagland培养液浇灌,待长出2片真叶后,选择长势一致的幼苗,移栽至装有2L 1/2 Hoagland 培养液的玻璃水槽中,放在自然光下每天间歇性通气4～6h进行培养,每3d 更换一次培养液。
一周后随机分配13组（编号0—12号）。
2、Pb2+对蚕豆幼苗生长的影响将0号的蚕豆幼苗，转移至含无离子水的新鲜1/2 Hoagland培养液中， 1-4号的蚕豆幼苗分别转移到含有10﹑20﹑50 和100 mg/L Pb2+的新鲜1/2 Hoagland培养液中( 用Pb(NO3)2配制)。
每2d 补充浇灌等量的含相应浓度的培养液。
于第7天采样测定各项生理生化指标。
3、生理生化指标的测定3.1 根系、茎叶部分的干重及根冠比分别取蚕豆根系部分和茎叶部分,用去离子水冲洗干净，采用烘干法，将其放在称量瓶中，在105℃下杀青0．5h之后置于75℃恒温处理48h，用1/1000 电子天平称其干重，并计算根冠比。
根冠比=根系干重/茎叶干重叶绿素含量的测定；丙二醛(MDA)含量测定；质膜透性测定；超氧化物歧化酶(SOD)活性测定；过氧化物酶(POD)活性测定；脯氨酸含量测定。
各项指标测定时至少做3个重复，取平均值。
3.2其它生理生化指标具体的测定方法3.2.1 叶绿素含量的测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
G6PD缺乏高铁血红蛋白法检查分子生物学设计性实验
高铁血红蛋白还原实验 ——G6PD缺乏症检查
4.孵育后混匀，取血0.1ml，加PH 7.4 磷酸盐缓冲 液10ml，混匀，2min后在波长635nm处测定吸光 度（设为SA） 5.空白对照，用未加亚硝酸纳葡萄糖的血液，同 样孵育后取0.1ml,加PH 7.4 磷酸盐缓冲液10ml， 2min后测定吸光度为B。然后加入亚硝酸钠葡萄 糖混合溶液1滴，混匀，5min后再测其吸光度为 ST，此为高铁血红蛋白对照
高铁血红蛋白还原实验 ——G6PD缺乏症检查
操作： 1.在试管中加入葡萄糖20mg，109mmol/L枸橼酸钠溶 液0.2ml,静脉血1.8ml,混匀。
2.离心15min，取出，调整血细胞与血浆的比例为 1： 1 后混匀。
3.取上述抗凝血1ml,加亚硝酸钠葡萄糖混合溶液和亚 甲蓝溶液各0.05ml，颠倒混合15次，使与氧气充分接 触，加塞后放37℃水浴或孵箱中3h。
蚕豆病发病机理：
1. 蚕豆病的遗传机理 2. 蚕豆病的诱发机制 蚕豆症是一种性染色体隐性遗传,意思是女 蚕豆病属先天性酶代谢缺陷遗传病，与体内红 性的一对 X性染色体都带有疾病基因才会发 细胞缺乏葡萄糖－ 6 －磷酸脱氢酶（ G－6－PD） 病，男性只有一个 X 性染色体，所以只要这 有关。在正常情况下，人体红细胞有一种具抗氧 个X染色体异常就会发病。只有一个异常X染 化作用的物质——谷胱甘肽。 G－6－PD缺乏者， 色体的女性没有症状，但是她们所生的男孩 谷胱甘肽尤其是还原型谷胱甘肽明显减少，致使 如果得到这个异常的X染色体，就会发病。 红细胞对氧化作用十分敏感。 食入新鲜蚕豆后，蚕豆中所含的巢菜碱甙物质， 可使血液中的氧化性物质增多，导致红细胞被破 坏，从而发生以黄疸和贫血为主要特征的全身溶 血性反应。
分 子 生 物 学 设 计 性 实 验
蚕豆病
0.18mol/L亚硝酸钠-0.28mol/L葡萄糖溶液， 0.4mmol/L亚甲基蓝溶液，生理盐水，静脉血（空腹 抽取加入抗凝剂），离心机，试管，水浴箱，紫外分 光度计
一、将抗凝血以1000r/min15离心沉淀15min，取出，调整血细 胞与血浆比例1:1再混匀 二、将 0.18mol/L亚硝酸钠-0.28mol/L葡萄糖溶液与 0.4mmol/L亚甲基蓝溶液等量混合，形成混合试剂 三、取三支试管，标明A B C按下顺序进行操作
血清胆红素升高，黄疸
案例
实验室检查：红细胞1.98*10 12次方血红蛋白53g/L血清总胆 红素85.5umol/L结合胆红素 13.7未结合71.8尿蛋白++潜血+ 尿胆红素-尿胆素原+尿液镜下 未见红细胞
初步诊断
进一步明确诊断方案
高铁血红蛋白还原法测定红细胞 G-6PD 的Байду номын сангаас性
红细胞内6-磷酸葡萄糖脱氢酸酶（G-6PD）在磷酸戊糖旁路糖 代谢中能使6-磷酸葡萄糖变为6-磷酸葡萄糖酸，同时使（NADP+ 变成NADPH，NADPH可使氧化型谷胱甘肽（GSSG）变成还原 型谷胱甘肽（GSH）并使高铁血红蛋白（HbFe+++）还原成低铁 血红蛋白（HbFe++）。本试验用亚硝酸钠使HbFe++氧化为 HbFe+++（暗棕色）。如果红细胞内G-6PD含量正常，则有足量 的NADPH产生，它作为高铁血红蛋白还原酶的辅酶，在美蓝（递 氢体）参与下使HbFe+++很快还原成HbFe++。GSSG还原成 GSH：如果红细胞缺乏G-6PD则NADPH生成减少，HbFe+++还 原成HbFe++也减少，本试验即以高铁血红蛋白还原率来反映 NADPH生成状况而间接测知G-6PD是否缺乏。
关于蚕豆的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的通过本实验，探究光照对蚕豆发芽的影响，为植物生长提供科学依据。
二、实验原理植物在生长过程中需要光照，光照是植物进行光合作用的重要条件。
本实验通过对比不同光照条件下蚕豆的发芽情况，探究光照对蚕豆发芽的影响。
三、实验材料1. 蚕豆种子：100颗2. 容器：5个，每个容器放置20颗蚕豆3. 光源：LED灯4. 水培箱：1个5. 水培液：500毫升6. 温度计：1个7. 计时器：1个四、实验方法1. 将100颗蚕豆随机分为5组，每组20颗，分别放置在5个容器中。
2. 向每个容器中加入适量的水培液，使蚕豆完全浸没。
3. 将5个容器放置在水培箱中，保持温度在20-25℃。
4. 每天观察并记录蚕豆的发芽情况，包括发芽时间、发芽数量等。
5. 将3个容器放置在光照条件下，使用LED灯照射，保持光照时间为12小时。
6. 将另外2个容器放置在避光条件下，不进行光照处理。
7. 实验持续进行10天，每天记录数据。
五、实验结果与分析1. 实验结果（1）光照组：在光照条件下，蚕豆的发芽时间为第3天，发芽数量为18颗。
（2）避光组：在避光条件下，蚕豆的发芽时间为第5天，发芽数量为15颗。
（3）对照组：未进行任何处理，蚕豆的发芽时间为第4天，发芽数量为16颗。
2. 结果分析从实验结果可以看出，在光照条件下，蚕豆的发芽时间比避光条件下提前了2天，发芽数量也略高于避光组。
这说明光照对蚕豆的发芽具有促进作用。
分析原因如下：（1）光照条件下，蚕豆能够进行光合作用，产生能量，有利于种子萌发。
（2）光照可以促进植物激素的合成，如赤霉素、生长素等，这些激素可以促进种子发芽。
（3）光照可以降低植物体内的水分含量，有利于种子吸水膨胀。
六、实验结论本实验结果表明，光照对蚕豆的发芽具有促进作用。
在实际农业生产中，可以根据作物种类和生长需求，合理调整光照时间，以提高作物产量和品质。
七、实验注意事项1. 实验过程中要注意保持温度和湿度，以保证蚕豆的正常生长。
临床蚕豆病发病机理、临床表现、实验检查及泡状细胞与海因茨小体形成机制
临床蚕豆病发病机理、临床表现、实验检查及泡状细胞与海因茨小体形成机制蚕豆病是葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症的一个类型，表现为进食蚕豆后引起溶血性贫血及相关症状。
蚕豆病在我国西南、华南、华东和华北各地均有发现，而以广东、四川、广西、湖南、江西为最多，在北方极为少见。
3岁以下患者占70％，男性占90％。
成人患者比较少见。
发病机理葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症是参与红细胞磷酸戊糖旁路代谢的G-6-PD活性降低和（或）酶性质改变导致的以溶血为主要表现的一种遗传性疾病。
转录G6PD的结构基因位于X染色体长臂2区8带上（Xq28)，疾病为X连锁不完全显性遗传，男性G6PD缺乏半合子和女性缺乏全合子有显性表现，男性多于女性。
G6PD参与磷酸戊糖旁路代谢途径是红细胞产生NADPH的唯一来源，可将氧化型的谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽。
G6PD缺乏导致红细胞不能产生足够的NADPH，GSH显著减少，使红细胞对氧化的攻击敏感性增高，Hb的硫基遭受氧化损伤形成高铁血红蛋白和变性Hb,沉积在红细胞膜形成海因茨小体（Heinz body），使红细胞变形性明显下降，易被单核-巨噬细胞破坏发生血管外溶血，而细胞膜脂质的过氧化作用则是血管内溶血急性发作的主要因素。
疾病只发生于氧化应激情况下，共同表现为溶血，但是轻重不一，G6PD缺乏根据溶血诱因可分：慢性溶血性贫血、新生儿黄疸、蚕豆病、药物性溶血、感染性溶血。
其中以蚕豆病（favism)多见。
临床表现蚕豆病（favism）多见于10岁以下儿童，男性多于女性。
起病急，一般食用新鲜蚕豆或其制品后两个小时至几天（一般为1-2天，最长15天）突然发生急性血管内溶血。
溶血程度与食蚕豆的量无关，多数病人停止食用可自行恢复，严重病例需要输血及肾上腺激素，并采取措施避免急性肾衰竭。
疾病贫血程度和症状大多很严重。
症状有全身不适、疲倦乏力、畏寒、发热、头晕、头痛、厌食、恶心、呕吐、腹痛等。
巩膜轻度黄染，尿色如浓红茶或甚至如酱油。
蚕豆病 实验设计
临床表现
3. 生化代谢解释
实验室检查结果
患者临床表现及实验室检查结果 患 者
1 2
正常值 37 ℃ 12 （6.0-7.0）×10 （ 170-200） g/L 75次/分 12~18次/分 100~120/60~80mmHg
3
体温 38℃ 12 红细胞1.98×10 /L 血红蛋白53g/L 脉搏150次/分 呼吸40次/分 血压80/60mmHg 面色苍白、瘦小 血清总胆红素85.5µmol/L 结合胆红素13.7µmol/L（尿胆红素（-） ） 未结合胆红素71.8µmol/L
尿胆素原（+）
G-6PD ↓ 早衰老死亡
肝细胞摄取生成
+ NADPH +H↓
单核吞噬系统
GSH ↓
分解为
红细胞过
生成
（未结合的）
血红蛋白 结合胆红素
血红素Βιβλιοθήκη 胆红素分泌进入肠管
胆素原
尿胆素原
血红蛋白尿
概念: 尿内含有大量游离血红蛋白，而无（少） 红细胞的现象。 形成机理：G6PD↓ 大量血红蛋白过早衰老 死亡 血浆血红蛋白↑ 超过珠蛋白 结合及近曲小管重吸收能力 血红蛋白尿
（3.4-17.1）µmol/L
1.7-6.8μmol／L 34.2µmol/L
（皮肤和巩膜黄染）
尿胆素原（+）
4 5
尿蛋白（++） 潜血（+）
现象解释
体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压 80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及 巩膜黄染，排尿呈酱油样色。 可以说明患者因为红细胞膜氧化破裂而发生急性溶血，导 致： 溶血性贫血，颜面惨白、气促、恶心、呕吐； 组织的坏死和细胞的破坏，引起炎症反应，引起发热； 大量的血红蛋白就会随着体液排到尿液中 ，所以尿呈酱油 样色； 急性溶血12小时后可出现溶血性黄疸。即红细胞遭到大量 破坏后释放出大量的血红蛋白,致使血浆中胆红素含量增多, 超过肝细胞的处理能力则出现黄疸。
关于蚕豆病
蚕豆病机制 G6PD的缺陷不能提供足够的NADPH以维 持还原型谷胱甘肽（GSH）的还原性（抗氧 化作用），在遇到蚕豆种某种因子后更诱发 了红细胞膜被氧化，红细胞膜上的磷脂分子 中的不饱和脂肪酸氧化生成过氧化脂质，损 害细胞膜，导致红细胞的大量破坏。
Hale Waihona Puke 实验室检查的生化代谢解释 在单核-吞噬细胞系统产生胆红素过多，超过 肝细胞的摄取、转化和排泄能力，造成血 清游离胆红素浓度过高。此时，血中结合 胆红素的浓度变化不大，重氮反应实验 （凡登白）间接反应阳性，尿胆红素阴性。 由于肝对胆红素的摄取、转化和排泄增多， 从肠道吸收的胆色素原增多，造成尿胆色 素原增多。
患者体型瘦小与该病症是否有关？ • 答：无关，
g6pd的缺陷不能提供足够的nadph以维持还原型谷胱甘肽gsh的还原性抗氧化作用在遇到蚕豆种某种因子后更诱发了红细胞膜被氧化红细胞膜上的磷脂分子中的不饱和脂肪酸氧化生成过氧化脂质损害细胞膜导致红细胞的大量破坏
年级、专业、班级：2010 级临床医学三四大班 年级、专业、班级： 实验课时间： 实验课时间： 实验室： 实验室： 组别： 组别： 组员排名：高吉，廖艳，宋雪，刘理东，周宇东， 组员排名：高吉，廖艳，宋雪，刘理东，周宇东， 彭婉嫕，王文芝， 彭婉嫕，王文芝，王宇 报告人： 报告人：王宇
分子基础
• G6PD缺乏症的分子基础是基因突变，G6PD基因 位于Xq28，由13个外显子及12个内含子组成，全 长20114bp，是一典型的看家基因。 • G6PD基因在基因组的位置， 如 • G6PD基因突变具有以下特点：多为单个碱基置 换的错义突变；大多数基因突变属于转化型突变， 常发生在CpG二核苷酸内的C-T的转换。
初步判断患儿是患蚕豆病
实验方案
蚕豆病的基因检测方法
一、检测目的基因G6PD基因定位于X染色体长臂2区8带ⅶ因子及红-绿色盲基因之间（Xq28）,长18Kb，中国人G6PD基因目前依法显得突变种类很多，但能引起题目中所诉临床症状的突变点可能是G1376Ｔ和G1388A点突变（G6PD基因含13个外显子和12个内含子，编码515个氨基酸。
G6PD cDNA1388、cDNA1376同属第12外显子，相距仅12个核苷酸，突变结果使459和463位的精氨酸分别被亮氨酸和组氨酸替代）二、检测方法（一）. ARMS检测法,具体步骤如下：1. 临床实验室检查：（1）确定贫血程度［3］；（2）根据急性溶血的临床体征和既往史进行有关溶血的实验室检查，以排除其他因素所致的溶血。
（3）G6PD活性测定，酶活性单位以每克Hb含多少国际单位来表示（IU/g），正常值为4～7 IU/g。
2.基因检测：DNA制备：按常规法，蛋白酶K消化，酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)抽提，无水乙醇沉淀DNA，TE溶解。
PCR引物设计：ARMS法试剂盒,引物序列为：上游引物1388L2：5′GACCTGACCTACGGCAACAGATAC3′下游引物1388M2：5′GGTGCAGCAGTGGGGTGAAATTAT3′1376M：5′TGAAAATACGCCAGGCCTCAA 3′1388L2和1388M2特异性扩增G6PD基因第12外显子cDNA1388（G→A）突变，扩增出361bp片段，而1388L2和1376M扩增cDNA1376（G→T）突变，扩增出345bp片段。
基因扩增：30 μl聚合酶链反应含基因组DNA 1.0 μg，10×反应缓冲液3.0 μl，dNTPs（2 mmol/L）3.0 μl，5′上游引物和3′下游引物各20 ng，内对照引物40 ng。
反应条件为97℃变性7分钟，在85℃下加1.5U GD Taq酶后，进入热循环。
循环条件为：94℃30秒，59℃45秒，72℃50秒，共25个循环，72℃继续保温7分钟。
蚕豆病疾病研究报告
蚕豆病疾病研究报告疾病别名：蚕豆病所属部位：全身就诊科室：内科,血液科病症体征：黑尿，蛋白尿，腹痛疾病介绍：什么是蚕豆病？蚕豆病是怎么回事？俗称蚕豆病，是遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症是最常见的一种遗传性酶缺乏病，俗称蚕豆病，全世界约2亿人罹患此病，我国是本病的高发区之一，呈南高北低的分布特点，患病率为0.2-44.8%，G6PD缺乏症发病原因是由于G6PD基因突变，导致该酶活性降低，红细胞不能抵抗氧化损伤而遭受破坏，引起溶血性贫血症状体征：蚕豆病有什么症状？以下就是关于蚕豆病有哪些症状的详细介绍：G6PD缺乏症的临床表现与一般溶血性贫血大致相同。
分新生儿黄疸、蚕豆病、药物性溶血、感染性溶血、非球形细胞溶血性贫血等临床类型。
本病临床表现的轻重程度不同，多数患者，特别是女性杂合子，平时不发病，无自觉症状，部分患者可表现为慢性溶血性贫血症状。
常因食用蚕豆、服用或接触某些药物、感染等诱发血红蛋白尿、黄疸、贫血等急性溶血反应。
因G6PD缺乏诱发的严重的急性溶血性贫血因红细胞破坏过多，如不及时处理，可引起肝、肾、或心功能衰竭，甚至死亡。
化验检查：蚕豆病要做什么检查？以下就是关于蚕豆病检查的详细介绍：(1)血象：①血红蛋白急剧下降。
重者降至10克/升以下。
②红细胞最低降至0.51012/升以下。
③网织红细胞明显增高>0.20。
④外周血涂片可见有核红细胞增多。
⑤白细胞升高，可达(10～20)109/升，甚至呈类白血病反应;⑥血小板计数正常或增高。
(2)骨髓象：①红细胞系、粒细胞系均明显增生，年龄越小粒细胞系增生愈明显。
②红细胞系以中晚幼红细胞增生为主。
(3)尿检查：①尿呈酱油色、浓茶色、红葡萄酒色、洗肉水色、黄色等。
②尿隐血试验阳性率可达60%～70%。
③尿检验可见蛋白、红细胞及管型，尿胆原及尿胆素均阳性。
④血清游离血红蛋白增高。
结合珠蛋白减低。
⑤葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定减低。
鉴别诊断：蚕豆病的诊断方法有哪些？蚕豆病要做什么鉴别诊断？以下就是关于蚕豆病鉴别诊断的详细介绍：该病通过性联不全显性遗传，G-6-PD基因在X染色体上，病人大多为男性，男女之比约为7∶1，在生吃蚕豆后数小时至数日(1～3天)内突然发热、头晕、烦躁、恶心，尿呈酱油样或葡萄酒色，一般发作2～6天后能自行恢复，但重者若不及时抢救，会因循环衰竭危及生命。
分子生物学实验设计 蚕豆病 G6PD 临床诊断 医学生 生化代谢 实验室检查结果 遗传病 本科生共2
果 遗传病 本科生
16、云无心以出岫，鸟倦飞而知还。 17、童孺纵行歌，斑白欢游诣。 18、福不虚至，祸不易来。 19、久在樊笼里，复得返自然。 20、羁鸟恋旧林，池鱼思故渊。
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
拉
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
蚕豆根瘤菌肥剂筛选试验
蚕豆根瘤菌肥剂筛选试验一、试验材料与方法1. 试验材料蚕豆品种：本实验选取了当地高产的蚕豆品种进行试验。
土壤：使用与蚕豆生长环境相适宜的土壤作为实验基质。
蚕豆根瘤菌肥剂：选取了市面上常见的蚕豆根瘤菌肥剂进行试验。
2. 试验设计本试验采用完全随机区组设计，设3个处理组，每个处理组设3个重复，实验共分为9个小区。
具体处理组如下：处理一：蚕豆根瘤菌肥剂A处理；3. 试验方法1）土壤处理：将土壤均匀铺在实验盆中，每个处理组的土壤量相等，以保证条件的一致性。
2）播种管理：选取生长健壮的蚕豆种子，按照一定的行距和株距进行播种。
3）施肥处理：按照处理组分别施加蚕豆根瘤菌肥剂A、蚕豆根瘤菌肥剂B和蚕豆根瘤菌肥剂C。
4）生长调控：在蚕豆生长期，进行适时的浇水、除草和病虫害防治工作。
5）样品采集：在蚕豆生长成熟后，对蚕豆的生长情况进行观测，并对结果进行分析统计。
二、试验结果经过一段时间的生长观测与数据统计分析后，获得了以下试验结果：1. 生长状态观察经过一段时间的生长观测后，发现不同处理组的蚕豆生长状态存在明显差异。
在蚕豆根瘤菌肥剂A处理组，蚕豆生长旺盛，植株高大，叶色翠绿；在蚕豆根瘤菌肥剂B处理组，蚕豆生长状况一般，植株略显疲弱，叶色略显黄化；在蚕豆根瘤菌肥剂C处理组，蚕豆生长较差，植株矮小，叶色发黄。
2. 产量观察经过收获后，对蚕豆的产量进行统计分析后发现，蚕豆根瘤菌肥剂A处理组的蚕豆产量最高，平均产量为X千克/亩；蚕豆根瘤菌肥剂B处理组次之，平均产量为X千克/亩；蚕豆根瘤菌肥剂C处理组的蚕豆产量最低，平均产量为X千克/亩。
由此可见，蚕豆根瘤菌肥剂A对蚕豆产量的提升效果最好。
通过对土壤的理化性质进行分析后发现，蚕豆根瘤菌肥剂A处理组的土壤有机质含量最高，土壤酸碱度最为适宜，土壤微生物群落丰富；蚕豆根瘤菌肥剂B处理组次之，土壤有机质含量较高，土壤酸碱度较为适宜，土壤微生物群落较丰富；蚕豆根瘤菌肥剂C处理组的土壤有机质含量较低，土壤酸碱度不稳定，土壤微生物群落贫乏。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
设计实验进一步明确诊断
红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 活性测定（紫外法）
实验原理
●要检测G6PD的活性，可以检测NADPH生成量
实验原理
●已知：NADPH在340nm的紫外线照射下产生
荧光 即可以每隔2分钟在340nm波长下测定孵育液中 NADPH吸光度 以10min吸光度值的变化（△A340）计算 NADPH的产量。
5-磷酸核糖影响：
1：核酸的合成 2：体内己糖和戊糖的代谢 3：3—7碳原子糖类物质的相互转化
NADPH影响：
1：体内以NADPH作为供氢体合成多种活性物质如胆 固醇 脂肪酸 和一些非必需氨基酸 2： NADPH可作为羟化酶的辅酶，参与体内生物转化 作用 3： NADPH参与吞噬细胞的杀菌作用 4：维持GSH的正常水平 GSH可以保护体内蛋白质或 酶免遭氧化 使蛋白质或酶处于活性状态
Hb
谷胱甘肽阻止氧化血红蛋白，从而保护红细 胞膜的完整性，如若缺乏，此时的红细胞易于 破裂 。
铁卟啉类化合物的降解产物 80%以上来自衰老红细胞破坏所释放的血 红蛋白的分解 自由通过生物膜产生毒性作用
G6PD缺乏
NADPH严重缺乏
谷胱甘肽难以保持还原状态 NADPH—高铁血红蛋白还原酶活性低 红细胞膜完整性破坏 红细胞裂解 血红蛋白大量溢出 胆红素生成量增加 Hb大量氧化成MHb，Hb含量减少
A340 6.22
2.血红蛋白含量的计算 血红蛋白氧化为高铁血红蛋白以后，在 540nm处，其毫摩尔吸光细数（ε）为44，故溶血液中血红蛋白 的含量计算公式为： 血红蛋白含量（mmol）=
A540 44
3.G6PD比活性（U/g Hb）的计算 G6PD比活性单位（U/g Hb）
=
A340 1 1 44 100 10 1000 6.22 10 0.02 A540 64500 11
案例分析
1、恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，脸色苍白， 皮肤及巩膜黄染（伴有溶血性黄疸） 2、心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无 叩击痛，神经系统检查未及异常（症状不严重）
案例分析
3、血象 红细胞 1.98×1012/L（↓）﹤4.0～5.5﹥×1012/L 血红蛋白53g/L（↓） （110-150G/L ） 血清总胆红素85.5µmol/L（↑）1.71-17.1μmol/L 4、尿常规 尿液下未见红细胞（红细胞膜已不完整） 尿胆素原呈阳性
ห้องสมุดไป่ตู้
3、NADPH的测定 取石英比色杯两只，标为“测定”及 “空白”，按下表操作： 试剂 蒸馏水（uL） 0.5mol/L Tris-HCl MgCl2缓冲溶液（uL） 6mmol/L G6P-Na2 (uL) 2mmol/L NADP+ (uL) 体积 2040 300 300 300
混匀后放入带恒温水循环（25℃）的紫外分光 光度计中，预热10min 然后在“测定”中加入溶血液60uL,“空白”中加入 溶血剂60uL，混匀
实验器材和试剂
（3）6mmol/L葡萄糖—6—磷酸二钠(G6P－Na2)：称取 21.5mg G6P－Na2· 2H2O，溶于10mL蒸馏水中。4 ℃可保 存20天左右。
（4）溶血剂：取巯基乙醇0.1mL，10% EDTA 2.0mL， 6mmol/L NADP＋ 0.4mL，加蒸馏水至总体积200mL。 （5）血红蛋白氧化剂（Drabkin试剂）：称取K3Fe(CN)6 0.2g，KCN 0.052g，NaHCO3 1.0g，加蒸馏水至1000mL， 置棕色瓶内避光保存，可保存20天。 （6）0.9% NaCl，ACD抗凝剂。
85.5µmol/L
13.7µmol/L 71.8µmol/L
3.4—17.1µmol/L
总量的20% 总量的80%
结果导致 红细胞膜的破坏 胆色素代谢异常
红细胞膜的破坏
G6PD
NADPH
维持谷胱甘肽的还原性
磷酸戊糖途径
磷酸戊糖 核酸生物合成原料
红细胞膜的破坏
MHb GSH
NADPH—高铁血红蛋白还原酶
实验原理
还原型谷胱甘肽使高铁血红蛋白还原为血红蛋白
MHb 2G-SH NADP+ Hb G-S-S-G NADPH
●即可以检测血红蛋白的含量
实验器材和试剂
1.实验器材 恒温水循环紫外分光光度计，可见分光光度计，离心机。 2.试剂 （1）0.5mol/L Tris-HCl MgCl2缓冲溶液（pH8.0）：称取 Tris12.1g,MgCl2· 6H2O 4.06g,加入160mL蒸馏水溶解，用 HCl调pH至8.0，然后加入蒸馏水至200mL。 ＋ （2）2 mmol/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP )：称取 ＋ NADP 21.3mg，溶于10mL蒸馏水中。4 ℃可保存20天 左右。
A340 49.85 A540
=
【参考范围】正常值：大于2.8U/gHb
生化角度
从生化代谢解释患儿的临 床表现和实验室检查结果
实验室检查
检查项目 红细胞 血红蛋白 检查值 1.98×1012/L 53g/L 正常值 4.0—5.0×1012/L 120—160g/L
血清总胆红素
结合胆红素 未结合胆红素
轻度 蚕豆病
并伴溶血性黄疸
蚕豆病简介
蚕豆病是一种6-磷酸葡萄糖脱氢酶
（G-6-PD）缺乏所导致的疾病，表 现为在遗传性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 （G-6-PD）缺陷的情况下，食用新 鲜蚕豆后突然发生的急性血管内溶血。 多见于儿童，男性患者约占90%以上。
临床表现
早期有恶寒、微热、头昏、倦怠无力、 食欲缺乏、腹痛，继之出现黄疸、贫 血、血红蛋白尿，尿呈酱油色，此后 体温升高，倦怠乏力加重，可持续3 日左右。与溶血性贫血出现的同时， 出现呕吐、腹泻和腹痛加剧，肝脏肿 大，肝功能异常，约50%患者脾大。 严重病例可见昏迷、惊厥和急性肾衰 竭，若急救不及时常于1～2日内死亡。
以“空白”调“0”,1min后开始测340nm吸光度（A340），每 2min纪录吸光度一次，至10min止，比较每2minA值的变化情况， 若相近则表明酶促反应平稳。以10minA值的变化（△A340）计 算NADPH的产量。 4.溶血液中血红蛋白含量的测定 取试管一支，按下表操作： 试剂 Drabkin(mL) 溶血液(mL) 体积 0.3 3.0
实验操作流程
1、洗涤红细胞 取静脉血2.0mL，放入含0.4mLACD抗 凝剂的试管中，混匀。吸取0.2mL抗凝血放入试管中，加 入4mL预冷的生理盐水，轻轻摇匀，2500r/min离心5min, 倾去上清，重复三次。 2、溶血液的制备 向红细胞沉淀中加入溶血剂2.0mL，震 荡1min，4℃放置10min以上。
磷酸戊糖途径中生成多余的核糖转变为6-磷酸果糖和3-磷酸甘 油醛进入糖酵解途径，G6PD缺乏使得糖代谢受到影响。脂酸 可以合成甘油三酯，其主要功能是储存和氧化能量，机体难以 合成甘油三酯则消耗原有储备的甘油三酯，使得机体消瘦。同 时体内的一些生物活性物质功能发生障碍，如胆固醇不能直接 氧化但能转化为胆汁酸、类固醇激素 、维生素D3，参与物质 代谢调节，胆汁酸具有促进脂类消化和吸收的作用；维生素D3 主要参与体内血钙和血磷的调节。生物转化作用可以对体内大 部分非营养物质进行代谢转化，或使有毒物质的毒性减低或消 除，增强这些非营养物质的水溶性和极性，从而易于从胆汁或 尿液中排除。 GSH可以保护体内蛋白质或酶免遭氧化 使蛋白 质或酶处于活性状态，蛋白质一方面可以作为营养物质提供能 量一方面又发挥着其它重要的生物功能，而酶使得生物体内的 化学反应有条不紊的进行。
具体分析
皮肤及粘膜黄染
血清总胆红素超过17μmol/L即为高胆红素血， 一般若在17～34μmol/L，临床无明显黄疸， 为隐性黄疸，超过34μmol/L则可见皮肤、粘膜 黄染。
血尿
急性溶血时大量红细胞被破坏，其成分从尿液 中排除故出现血尿。
具体分析
体温升高
大量溶血，即血红细胞大量破坏，大量的无菌性坏 死物质入血，机体动员白细胞吞噬吸收坏死物质， 导致无菌性炎症，可引起发热，亦称为吸收热。
2012级本科分子生物学实验设计
临床十二大班 9人组
案例
患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前 食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样 色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类 似情况。 体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分， 血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白， 皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常， 肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异 常。实验室检查：红细胞 1.98×1012/L，血红蛋白 53g/L，血清总胆红素85.5µmol/L，结合胆红素 13.7µmol/L，未结合胆红素71.8µmol/L，尿蛋白（++）， 潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见 红细胞。
综上所述：
蚕豆病使得该男孩体内发生糖，蛋白质， 脂类物质的代谢障碍，一些重要的生物活 动受到影响，加之因疾病带来的一些身体 上和精神上的折磨，这些因素使得他的身 体比同龄孩子削瘦。
呼吸加快及心律升高
由于急性溶血导致循环血量减少，红细胞减少， 血红蛋白减少，氧气供应相对不足，故机体通过加 快呼吸频率，以及加快心率维持心输出量的相对稳 定以维持机体代谢的供氧。
患者体型瘦小与该病 症是否有关，为什么？ （选答）
患者体型瘦小与该病症有关
G6PD
蚕豆病是因为体内缺乏G6PD， G6PD主要影响 体内的磷酸戊糖途径 该途径主要生成两种重要的 物质即5-磷酸核糖和NADPH
混匀，室温放置15min，以Drabkin试剂调零，读取540nm 的吸光度（A540）。
注意事项