取精后至冷冻前的间隔时间对精子冷冻复苏效果的影响
冷冻对供精者精子多重缺陷指数的影响
１４ 统计学方法 ． ２０ ０ ６年 １ 至 ２０ １月 ０ ７年 ７月 间来广
验。 ２ ｔ Ｐ Ｓ１ ． 检
１１ 一般 资料 ．
东省人类 精 子库 的供精 者 ， 龄 ２ 年 ２～３ ５岁 （ 平均 ２ ８ 岁） 共 ２ ， ６例 ， 身体健康 ， 无遗传性疾 病家族 史 ， 无外伤
精 子 Ｉ６ ％ 。 ＞ ０
尾部缺陷率的比较 （ ２ ｎ＝ ６）
ｉ±ｓ
１２ 试 剂 甘油 一卵黄 一柠檬酸 钠精子冷 冻保护 剂 ．
由质量 分 数 １ ％ 甘 油、 ０ 卵 黄 、 ． ％ 柠 檬 酸 钠 、 ５ ２％ １１
１４ ． ％葡萄糖 、． ％ 甘 氨酸组 成 ，６ 灭 活 ３ ｉ， １０ ５℃ ０ｍ ｎ 调
ｐ Ｈ至 ７ ２ 分装后置超低温冰箱冻存待用 。 ．，
１ ３ 方 法 ．
１３ １ 多重精 子缺 陷指数 的计 算 ． ．
精液完全 液化后 ， 涂两张片空气 干燥 ， 然后 用等量 的体 积分数为 ９ ％ 的 ５
３ 讨 论
乙醇 和乙醚 固定 １ ｉ ， ０ ｍｎ 固定好 的涂 片行 精子改 良巴
及 性功能障 碍史 ， 体检 未 发现 睾 丸、 附睾 及输 精 管异 常。禁 欲 ４～ ， ７ｄ 手淫法取精 ， 精液射入一干净 的广 口
杯 ，７ 水 浴 充 分 液 化 后 ， 照 世 界 卫 生 组 织 ３℃ 按 （ Ｏ） 推荐 的方法行 精 液常 规分 析 。选 用精 液标 ＷＨ 准： 精液量 Ｉ２ ０ｍ 。 ＞ ． ｌ精子 密度 ≥６ ０／ ｌａ＋ｂ级 ０Ｘ１。ｍ ，
数 的计算 。
多种缺 陷同时存在时 ， 只记录其 中的一种。 目前 习惯用
精液冷冻储藏技术掌握精液收集处理和储存的方法
精液冷冻储藏技术掌握精液收集处理和储存的方法精液冷冻储藏技术是一项重要的生物技术，它可以帮助人们保存和储存精液。
无论是用于人类繁殖技术还是动物繁殖技术，精液冷冻储藏技术都发挥着重要的作用。
本文将介绍精液收集、处理和储存的方法。
一、精液收集方法精液的收集是精液冷冻储藏的第一步，它要求采用合适的方法来保证收集到高质量的精液样本。
1. 人类精液收集方法:人类精液的收集通常采用自慰法。
收集器宜选用干净的容器，确保不会对精液样本产生污染。
在收集的过程中，应保持良好的心态和放松的状态。
2. 动物精液收集方法：动物的精液收集可采用人工授精法、人工阴道法等多种方法。
具体方法需要根据不同动物的特点来确定。
二、精液处理方法精液的处理是为了去除其中的杂质，提高精液的质量。
1. 离心法：通过离心分离法，可以将精液中的不碳水化合物、细胞和其他杂质去除，提高精液的纯度。
离心的速度和时间需要根据精液的浓度和特性来确定。
2. 过滤法：通过过滤器过滤精液，使其中的颗粒和污染物被过滤掉，确保精液的干净和纯度。
三、精液储存方法精液储存是精液冷冻储藏技术的最后一步，它是为了确保精液的长期保存和保存质量。
1. 液氮储存：液氮储存是当前最常用的精液储存方法之一。
将处理好的精液样本放入液氮罐中，保持温度在零下196摄氏度，确保精液的长期保存。
2. 冷冻储存：冷冻储存是另一种常用的精液储存方法。
将处理好的精液样本放入冷冻管中，通过快速冷冻和在低温下保存，确保精液的保存质量。
总结：精液冷冻储藏技术是一项重要的生物技术，它可以帮助人们保存和储存精液，无论是用于人类繁殖技术还是动物繁殖技术。
在进行精液冷冻储藏之前，需要准确掌握精液收集、处理和储存的方法。
精液冷冻储藏技术的正确应用将对人类和动物的繁殖事业产生积极的影响。
实验十五精液的冷冻保存
实验十五精液的冷冻保存一.实验特点实验类型：综合型实验实验类别：专业基础课计划学时：2学时每组人数：3～4人二、实验目的要求精子具有受温度变化直接影响本身活动力和代谢能力力的生物学特性。
利用这一特性，将精液特殊处理后，保存在超低温下，精子代谢活动完全受到抑制，停止能量消耗，处于生命静止状态，长期保存下来。
一旦升温精子又能复苏并维持其原来的受精能力。
要求同学们了解精液冷冻保存的技术操作过程和精液冷冻保存原理，初步学会冷冻保存方法。
三．实验原理冰晶化是水在降温过程中的一定温度下，水分子重新按几何图形排列形成冰晶。
冰晶可造成精细胞（精子）内外的溶质浓度和渗透压增高，引起细胞内脱水、原生质变干、酸碱失去平衡、细胞膜和顶体以及整个组织和结构破坏等致死性伤害，最后导致精子发生不可逆的变化而死亡。
一般精液内含85%～95%的水分，精子内也含有及少量的水分，这些水分在降温过程中在-0.6～-60℃温度区内缓慢降温能形成冰晶。
降温速率越慢，所形成的冰晶越大，其中特别以-15～-25℃时冰晶形成最多。
在冷冻精液过程中只有避开这个有害温度区，才能得以长期保存。
快速升降温度的办法，难以达到完全玻璃化冻结条件。
为此，在制作冷冻精液的稀释液内，要加入一定量的甘油等抗冻害物质。
甘油具有极强的亲水性，可限制水分子形成冰晶而处于过冷状态，降低水形成冰晶的温度，即缩小精子的有害温度的上限。
此外甘油容易渗透精子内，可降低渗透压改变的不良影响及营养作用等，增强精子的抗冻害能力和无冻害生存环境。
精液在冷冻过程中不可避免地要形成冰晶，精子能否生存的关键在于冰晶的大小，冰晶越大对精液伤害越大，反之冰晶越小，伤害越小甚至无损伤。
因此，只要避免大冰晶形成，并使精子稳定在微晶的状态下，一旦升温精子又能复苏并维持其原来的受精能力。
四．实验材料和仪器精液、2.9%的柠檬酸钠溶液、50～100ml烧杯、滴管、10 ml试管、低温温度计、20～80目纱网、漏勺、灭菌纱布袋、液氮罐、液氮、载玻片、盖玻片、显微镜、保温箱。
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响作者：梅凤琦甄锦壮麦福劲何正枝来源：《中国医学创新》2020年第04期【摘要】目的：探討精液冷冻前优化处理方式对不同精子活力的精子冷冻复苏效果的影响。
方法：选取符合条件的标本50份，每份标本等分4份，以原液作为对照（A组），分别采用三种不同方式[洗涤法（B组）、上游法（C组）和密度梯度离心法（D组）]进行处理，再行精子冷冻复苏。
比较不同精子活力标本在不同优化方法处理后的精子冷冻复苏率。
结果：精子冷冻复苏率由高至低排序为A组>C组>D组>B组。
B组和D组精子冷冻复苏率均显著低于A组（P<0.05），C组与A组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
低活力（前向运动精子PR≤32%）标本中，各处理方式精子冷冻复苏率比较差异无统计学意义（P>0.05）。
正常活力（前向运动精子PR>32%）标本中，B组精子冷冻复苏率显著低于其余三组（P<0.05），A 组、C组、D组三组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
结论：精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏率有影响，实际工作中，应根据精液的质量选择合适的精液冷冻前优化处理方式。
【关键词】精液冷冻精液优化处理精子冷冻复苏率Effect of Spermatozoa Selection before Freezing on Recovery Rate of Human Frozen Spermatozoa/MEI Fengqi， ZHEN Jinzhuang， MAI Fujin， HE Zhengzhi. //Medical Innovation of China， 2020， 17（04）： -116[Abstract] Objective： To investigate the effect of spermatozoa selection before freezing on the recovery rate of human frozen spermatozoa of different sperm motility. Method： A total of 50 specimens that meet the requirements were selected. Each sample was divided into 4 equal parts，and the stock solution was used as a control （group A）. Before sperm freezing and recovery， thespermatozoa selection was carried out in three different ways [washing （group B）， swimming-up （group C） and density-gradient centrifugation（group D）]. The recovery rate of frozen spermatozoa of different sperm motility with different treatment was compared. Result： The sperm recovery rate was ranked from high to low in group A > group C > group D > group B. The sperm recovery rate of group B and group D were significantly lower than those of group A （P<0.05），and there was no significant difference between group C and group A （P>0.05）. In low vitality （PR≤32%）， there was no significant difference in the sperm recovery rates between the treatments （P>0.05）. In normal vitality （PR>32%）， the sperm recovery rate in group B was significantly lower than those of the other three groups （P<0.05）， and there was no significant difference among group A， group C， and group D （P>0.05）. Conclusion： The spermatozoa selection before freezing has an effect on the recovery rate of frozen spermatozoa.In actual work， the appropriate semen pre-freezing treatment should be selected according to the quality of semen.[Key words] Frozen spermatozoa Spermatozoa selection Recovery rate of frozen spermatozoaFirst-author’s address： Shunde Wo men and Children’s Hospital of Guangdong Medical University （Maternal & Child Health Hospital of Shunde Foshan）， Foshan 528300， Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.04.028自精保存作为人类辅助生殖技术（ART）中一个重要组成部分，为男性患者进行ART前提供了精子解决方案[1]。
2021中国男性生育力保存专家共识(全文)
2021中国男性生育力保存专家共识（全文）男性生育力保存（male fertility preservation, MFP）是指通过冻存男性精子（包括精原干细胞）或睾丸组织以期预防未来生育风险, 并借助人类辅助生殖技术（assisted reproductive technology, ART）最终达到生育目的的技术和方法。
MFP既适用于拟实施ART的不育症患者, 也适用于有生育力保存需求的正常男性和有不育风险的男性人群, 旨在为有需求的男性提供生育力保存的服务, 为男性在接受可能影响生育能力的治疗或暴露前保存生育力, 同时最大限度降低ART 治疗过程中女方取卵或人工授精当日, 男方无可用精子的风险。
随着ART和男科学发展, 稀少（或微量）精子甚至单精子冻融已经取得重要进展, 临床证明安全可靠。
随着肿瘤患者的生存率显著提高, MFP越来越受到医生与患者的关注。
美国肿瘤学会已制定指南和专家共识, 要求肿瘤专业人员为患者提供生育力保存相关信息, 在启动肿瘤治疗前建议患者接受关于生育力保存的咨询, 实施生育力保存。
近年国内MFP领域取得重要进展, 已经建立超细麦管和超薄片法等冻融稀少（单）精子体系, 并出生了健康子代。
这些技术的发展, 为实施ART的男性不育患者, 尤其是严重少、弱、畸形精子症患者带来福音。
但目前临床存在生育力保存适应证不明确, 冻存管理不规范以及临床结果良莠不齐等诸多问题。
因此, 为规范MFP的临床应用原则和路径, 设立标准化生育力保存工作流程, 为临床医师提供指导和参考, 更好为患者提供科学有效的生育力保存服务, 中国医师协会生殖医学专业委员会委托男科学组, 组织专家成立编委会, 再基于临床实践、文献综述、专家研讨等资料凝练总结, 形成本共识, 对MFP的适用范围、精子冷冻保存技术及管理、样本管理及伦理问题等提出建议。
一方法本共识广泛征集我国有关MFP的实际问题, 咨询辅助生殖机构和人类精子库专家与临床工作者, 系统检索知网、万方、PubMed以及Cochrane Library数据库（检索时间为建库至2020年1月31日）中的前瞻性队列、随机对照与基础研究, 尤其借鉴系统评价和荟萃分析研究结果, 结合我国目前自精保存的发展现状, 依据中华人民共和国原卫生部的《人类辅助生殖技术管理办法》与《人类精子库基本标准和技术规范》而形成。
冷冻精液配种及提高母牛冷配受胎率的注意事项
冷冻精液配种及提高母牛冷配受胎率的注意事项配种可分为自然交配和人工配种。
自然本交要严格控制公牛配种次数，每天最好1次。
人工配种，主要是指冻精配种。
一、冷冻精液的解冻及注意事项1.颗粒精液解冻取解冻液（2.9%的柠檬酸三钠）1～1.5毫升，放在消毒过的小试管内，将试管放在38～40℃的水浴容器内预热，然后投入1粒冻精颗粒，不停摇动，在精液溶化三分之二时，即可从水浴容器中取出使用。
需解2粒冻精时，要用2个试管分别解冻。
如需运输，须严加包装，且在10℃以下进行。
2.细管精液解冻将细管从液氮罐中取出，使带棉塞一端朝下，立即投入温水中（38～40℃）解冻使用。
精液解冻后应在两小时内用完，最好解冻后马上使用。
二、提高母牛冷配受胎率注意事项1.发情配种时间母牛排卵在发情结束后，从发情到排卵，一般30个小时左右，大多数母牛排卵发生在夜间，卵子在输卵管内可以存活12～24小时，有受精能力的时间约为6～12小时，活力强的精子进入母牛生殖道后，仅需8～15分钟就到达受精部位，而大部分精子要在5～6小时才能到达。
精子在母牛生殖道内保持受精能力一般为30小时（冻精时间缩短）。
因此，适宜的配种时间应在母牛发情末期，即卵泡发育到第3期（卵泡成熟时）输精效果最好。
2.输精次数只要掌握了母牛发情规律，1个情期内只输1次精即可，如果对输精时间的把握不大，也可采用1个情期内输两次精（间隔6～8小时）。
试验证明，在母牛1个情期内一次输精，不但节省人力和物力的消耗，而且也减少了对母牛的机械性刺激，减少污染机会。
3.输精部位母牛的输精部位要求在子宫体，过浅，精液容易流失;过深，容易损伤子宫粘膜，反而降低了受胎率。
4.精液品质输精前要对精液进行活力检查，精子活力达不到0.3、有效期精子达不到标准的（1份精液有效精子数不低于1000万个），一律不准使用。
5.无菌操作①精液颗粒制作时，凡是盛装精液的容器以及冷冻精液时接触精液的器具均要进行严格消毒，低温达不到灭菌的目的，因为一些细菌和精子一样可以耐受低温。
含雌激素的冷冻保护剂对冻存正常精子质量的影响
表 ２ 不 同 冷 冻 保 护 剂 冻 后 各 指 标 与 冻 前 比较 的 ｔ 值
（ ：， 讨雌 激素 在 精子 冻存 中的作 用， Ｅ）探 以指 导今后
的临床 实践 。
材 料与 方法
一
差异有 统计 学 意义 （ ＜００ ） Ｇ Ｐ ．１ 。 ４组 各参数 高于 Ｇ ２
组 ， 表 １ ３ 见 ～。
表 １ 冷 冻 前 后 精 子 的各 功 能 参 数 （ ｎ ２ ） ％，＝ ０
ｈｕ ａ， ＺＨＡ ０ ｎ—ｉ ＪＡ ｈｏ ｔｎ ｌ， Ｉ Ｓ ｏ—ｏ ｇ， Ｗ ＡＮＣ Ｈｏ ｇ－ ．Ｎｉ ｇ ｉ ｅ ｃａ ｉ ｅｓｔ Ｙｉ ｃ ａ ７ ００ ， Ｃｈｉａ ｎ ） ｎ ｘ ａ Ｍ ｄｉ ｌ Ｕｎ ｖ ｒｉ）， ｎ ｈｕ ｎ ５０ ４ ｌ ｎ
ｔ ｌＦ ｎ －ｕ ， ＷＡ ｎ － ￣ Ｌ ｅｇｈ ａ ＮＧ Ｈｏｇ） Ｒ ｐｏ ｕｔ ｅ ｌ ｆ ｔｅ Ａｆ ｉ ｅ ｓ ｉｌ ｔ Ｎ ｎｘａ Ｍｅ ｉ ｌ ｏ ｅ ｒｄ ｃｉ Ｃ ｎｅ ｏ ｈ ｆ ｌ ｔｄ Ｈｏ ｔ ｉ ｉ ｚ ｅ ｒ ｉａ ｐａ ｇ ｄｃ ｏ
合 剂 和 甘 油 及 甘 油 一卵 黄 一柠 檬 酸 钠 （ ＹＣ 作 为 Ｇ ）
精 子 冷 冻 保 护 剂 ，本 研 究 在 此基 础 上 加 入 雌 二 醇
－
４ ・ ０
国际生殖健康 ／ 计划生育杂志 ２ １ 年 １ ０１ 月第 ３ ０卷第 １ Ｊｎ Ｒ ｐｏ ｅｈ／ａ Ｐａ 。 ａｕｒ ０ １Ｖ １３ ， ｏ １ 期 ｔ ｅｒ Ｈ ａｈＦｍ ｌ Ｊ ａｙ １， ｏ．０ Ｎ ． Ｉ ｄ ｎ ｎ ２
旦 堕堡堕 芷 生 １ Ｊ 生宣垄 ０１ 月第３卷第１ Ｊ ｔｅ ＭＨａ ／ ｍＰｎ Ｊ ｕｙｏ１ ｏ ３，０１ 志２１年１ ０ 期 ｐ ｅ ｈ ａ ａ，ａ ａ ｌ Ｖ１ ０Ｎ． ｌＲｒ ｎ ｈＦ ｌ ｎ ｒ ． ２ ，
冷冻精液室温暴露时间对前向运动精子冷冻复苏率的影响
之后按照上述方法将实验组的精液标本重新放回液
成部分.由于场地 空 间 成 本 限 制,大 多 数 冷 冻 精 子
程中,不可避免的会 有 一 些 非 待 发 精 液 标 本 连 同 待
发精液标本一起暴 露 于 空 气 中,导 致 几 秒 至 几 分 钟
的短暂冻融.目前有关人精子冷冻保存发放过程中
连带 暴 露 导 致 短 暂 冻 融 对 复 苏 后 前 向 运 动 精 子
收稿日期:
２０２０
０８
０６ 修回日期:
２０２１
０１
２２
∗
通信作者:
２９１９２８１４８＠qq．
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中国计划生育学杂志 ２０２１ 年 ６ 月 第 ２９ 卷 第 ６ 期 Ch
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精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响随着人工授精及体外受精技术的广泛应用，精子的冷冻保存已成为重要的技术手段之一。
尤其是在一些特殊情况下，如临床疾病治疗期间需冷冻精液保留生育能力、动物种质资源的保存等，对于精液的储存和运输都提出了更高的要求。
然而，由于精液在凝固质地、离子平衡、代谢产物的积累等方面的特殊性，使其在冷冻保存过程中容易受到氧化应激等因素的影响，从而导致冷冻后的精子活力和受精能力的降低。
因此，精液冷冻前优化处理方式是提高精子冷冻复苏效果的重要方面。
传统的精液冷冻处理方法一般采用添加裂解保护剂来保护精子的膜结构和细胞器，但其复苏率受到多种因素的影响，如冷冻速率、解冻温度、复苏培养液的组成等。
因此，近年来研究人员对精液冷冻前的处理进行了不同的优化方案，以提高精子冷冻复苏效果。
首先，通过对精液前处理的研究，发现红外线照射能够促进精子的代谢率和能量产生，从而提高精子的储存能力和受精能力。
其次，添加一些天然营养物质，如维生素E和维生素C等也有助于保护精子的膜结构和减少冷冻过程中产生的自由基损伤，提高精子冷冻复苏效果。
其实，在控制冷冻速率的前提下，改变冷冻液的配置也是影响精子冷冻复苏效果的关键之一。
多项研究表明，加入一定比例的蔗糖、蛋白质等物质能够增加精子的复苏率和存活率，这是因为这些物质在冷冻过程中能够形成一层保护膜，保护精子膜的完整性，抵抗冷冻过程中的高压和低温应激。
综上所述，精液冷冻前优化处理方式对于提高精子冷冻复苏效果具有重要的影响。
在实践中，我们需要针对不同的情况，选择适合的冷冻液配置、添加物质和冷冻速度等参数，以确保精子的最佳保存和利用。
同时，加强对于精子的小胶囊、生物纳米粒等新型载体的开发和应用，也有望进一步拓展精子冷冻保存的适用范围，提高其应用效果。
冷冻精子、卵子，提前保存生育力
冷冻精子、卵子，提前保存生育力阳光一生，将陪你度过你健康、阳光、快乐人生的每一天前不久，据外媒报道，Facebook宣布，为公司女性员工增加一项新的福利，免费冷冻卵子，旨在帮助那些有意把精力放在工作上而又想不影响今后生育孩子的女性。
同时，苹果也计划向女员工提供该福利。
这就涉及到一个问题，即生育力的保存。
卵子冷冻刚刚开始，技术还不成熟人的生育能力是有限的，尤其是对于女性而言。
在某些意外的情况下，生育力还可能会被无情的缩短或终止。
卵子或精子的冷冻即是生育力保存的一种方法。
世界上第一家卵子库已经在美国芝加哥威斯康辛大学医学院建立。
我国目前虽然还没有卵子库，但卵子冷冻技术却并不落后于国外同行的脚步。
除在试管婴儿治疗中的卵子冷冻外，各大生殖中心也已开展，或准备开展自卵冷冻“业务”。
卵子冷冻无疑为那些有可能遭遇生育障碍的人提供了一份“平安”保险。
事实上，卵子冷冻在许多胚胎冷冻被禁止的国家成为生育能力保存的手段之一。
尽管这份保险姗姗来迟，尽管还有许多不尽人意的地方。
卵母细胞脆弱冷冻及复苏伤害较大任何医疗措施都是有风险的，冷冻卵子同样不能例外。
相对于胚胎冷冻技术，卵子冻存技术还不理想，这主要是由于人类卵母细胞较大且脆弱，冷冻与复苏都会对其带来很大伤害，从而降低了受孕成功率。
另外，用冷冻卵子获得的后代的健康，尚缺乏远期观察。
卵子不像精子那样容易获得，需要经阴道穿刺取卵，这就存在一定的手术风险。
为获得较多的卵子，取卵前还需要超促排卵治疗，用药过程中有可能发生与促排卵有关的并发症，如卵巢过度刺激综合征等等。
如上所述，卵子冷冻尽管是女性生育力保存的重要手段，但与我们的期望还有差距。
尤其是对于那些想推迟生育年龄，盲目将卵冷冻，以为想用时就能心想事成的女性朋友。
如果说，冷冻卵子可以规避以后不能生育的风险，那这种风险的规避也是有限的。
因此辅助生殖专家不提倡那种没有任何医疗指征，仅仅为了暂时不生育就盲目将卵冷冻的做法。
什么年龄干什么事，这句话是有一定道理的，最起码没有违背人类发展的自然规律。
养殖动物精液贮存技术
养殖动物精液贮存技术近年来，养殖业得到了快速发展，如何科学地保存养殖动物的精液已成为一个重要问题。
养殖动物精液贮存技术的应用，不仅可以有效提高养殖动物的遗传质量，还能促进种畜生产的可持续发展。
本文将就养殖动物精液贮存技术的相关内容进行探讨。
一、冷冻技术冷冻技术是目前最常用的养殖动物精液贮存方法之一。
它通过将养殖动物的精液在极低温度下进行冷冻保存，以达到延长精液的保存时间的目的。
冷冻精液贮存技术主要包括以下几个步骤：首先，采集养殖动物的精液。
采集过程需要采用无污染的材料和设备，确保精液的纯净性。
其次，精液经过初步处理后进行冷冻。
初步处理包括去除精液中的杂质和不活跃的精子，以提高存储效果。
接着，将处理后的精液进行冷冻保存。
冷冻过程需要密封容器和低温环境，一般使用液氮贮存。
最后，精液贮存时间结束后，通过解冻过程，将精液恢复到正常温度。
解冻过程需要慢慢升温，以避免精子损伤。
冷冻技术的优势在于可以延长精液保存的时间，并且冷冻后的精液不易受到污染。
但是，冷冻过程中会对精液造成一定的损伤，因此需要谨慎操作。
二、低温冷藏技术低温冷藏技术是另一种常用的养殖动物精液贮存方法。
它相比于冷冻技术，对精液的损伤更小，适用于一些对精液活跃性要求较高的养殖动物品种。
低温冷藏技术的操作步骤如下：首先，采集养殖动物的精液，确保采集的精液属于活跃状态。
其次，将采集到的精液放入低温环境中进行保存。
通常使用低温冷藏箱或者液氮罐进行存储。
最后，使用时需要进行适当的解冻，将精液恢复到正常温度。
低温冷藏技术相对于冷冻技术来说，虽然保存时间较短，但对精液的活跃性保护更好。
因此，在养殖一些对精液活跃性要求较高的动物品种时，低温冷藏技术是一种更好的选择。
三、液氮冷冻技术液氮冷冻技术是一种高效、可靠的养殖动物精液贮存技术。
它的主要特点在于低温下对精液进行冷冻保存，并且能够有效地延长存储时间。
液氮冷冻技术的操作步骤如下：首先，采集高质量的养殖动物精液，并进行初步处理，确保精液的纯净性和活跃性。
人类精子的保存方法
人类精子的保存方法
人类精子的保存方法有多种，其中包括以下几种常见的方法：
1. 冷冻保存：将精子收集后，经过处理和添加冷冻保护剂，然后进行冷冻保存。
一般保存温度为-196的液氮罐内，可以长期保存数十年甚至更久。
这种保存方法通常用于人工授精、体外受精等辅助生殖技术。
2. 冻干保存：将精子经过特殊处理，在低温下进行冻干，然后保存在低温环境下。
这种保存方法适用于需要长时间保存或运输的情况，可以在需要时重新激活精子。
3. 胚胎保存：对于辅助生殖技术中所需的受精卵，也可以先受精后培养发育成胚胎，然后进行低温保存。
一般保存温度为-196的液氮罐内，可以在需要时解冻并使用。
无论采用哪种保存方法，都需要严格控制温度和环境条件，以保证精子的保存质量。
此外，还应该遵守相关法律法规，进行合法保存和使用。
规模化牧场繁殖管理重点——精液处理和人工授精技术关键点
规模化牧场繁殖管理重点——精液处理和人工授精技
术关键点
冻精解冻温度，存在争议。
极不规范。
有说40℃ 3秒钟的，有38℃ 10秒钟的。
根据ABS公司成千上百次的科学试验的研究表明，最佳解冻程序是：
1、温度
不论常规精液还是性控精液的精液解冻温度均是：36℃，不得低于35℃，不得高于37℃。
2、时间
精液解冻时间：30-45秒!不得低于30秒钟。
不能靠经验和数数，必须配备秒表。
36℃恒温水域杯和测温卡。
3、解冻至配种时间
常规精液取出液氮罐至输入牛子宫内的时间必须控制在10分钟以内；性控精液必须控制在5分钟之内。
不能靠经验和数数，必须配备秒表/定时器。
4、输精部位
正确的输精部位是子宫体，不论青年牛还是成母牛，不论是使用常规精液还是性控精液配种。
不提倡子宫角输精，大量研究表明子宫角输精不能提高受胎率，反而可能对子宫造成伤害。
输精部位：子宫体
5、输精
缓慢输入精液，5秒钟时间最好，不得短于3秒钟。
(网友补充到：轻插、缓输、慢退。
)
6、配种时机
传统上，我国配种员普遍采用上午发情，晚上配;晚上发情，第二天早上配。
美国规模化牧场普遍采用一天一次配种的方法，即利用涂蜡笔技术发现发情，当即配种，一天只配一次。
拥有22个万头牧场的现代牧业在老外的影响下，已经开始全集团推广一天配种一次的制度了。
配种员日常必备的工具：测温卡或电子温度计，秒表，指甲剪。
精液冷冻复苏后精子活动力结果分析
精液冷冻复苏后精子活动力结果分析王 军 岳锡宏新疆维吾尔自治区人口和计划生育科研所，新疆乌鲁木齐 830011[摘要] 目的 比较不同民族之间精液冷冻复苏后精子活动力有无差异。
方法将171名正常供精者（汉族74名、哈萨克族51名、维吾尔族46名）标本进行精液常规分析，按精液和冷冻保护剂等比例混匀，用程序降温仪通过三步降温法冻存于-196℃液氮中编号冻储。
取出样本管放置于37℃水浴复苏，再次进行精液常规分析。
结果 冷冻复苏后，汉族供精者精子前向运动百分率和总活动率分别为（27.50±4.51）%和（38.53±7.39）%；哈萨克族供精者精子前向运动百分率和总活动率分别为（17.20±3.67）%和（23.82±5.12）%；维吾尔族供精者精子前向运动百分率和总活动率分别为（15.79±6.63）%和（24.60±5.31）%。
经χ2检验，汉族和哈萨克族、维吾尔族供精者精子前向运动百分率和总活动率差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论 汉族与哈萨克族和维吾尔族精液冷冻复苏后精子活动力结果有差异，其原因有待进一步研究。
[关键词] 精子；冷冻复苏；前向运动百分率；总活动率[中图分类号] R692 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2013）11（b）-0013-021临床资料1.1 精液标本的采集171份精液标本来自2004年2月—2005年5月到新疆维吾尔自治区人口和计划生育科研所捐精的合格志愿者，汉族74例、哈萨克族51例、维吾尔族46例，年龄22～36岁，职业以在校学生为主，禁欲2～7 d，取精前清洗消毒手及外生殖器，手淫取精，射入干燥无菌专用取精器皿中，25～40 mi n室温液化。
1.2 精液的检测和冻存完全液化的精液，按照《W HO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》（第四版）进行精液分析[1]，对前向运动(ａ+ｂ)级精子>50%、精子密度>60×106/m L，精液量>2 m L的标本纳入供精冻储范围。
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响精液冷冻是一种常见的生育技术，在许多不孕不育患者中得到了广泛的应用。
由于精子在冷冻过程中易受到损伤，因此精液冷冻前的优化处理方式对精子冷冻复苏效果有着重要的影响。
本文将探讨精液冷冻前的优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响，并提出一些可能的改进方法。
一、精子冷冻的原理精子冷冻是指将新鲜精液中的精子通过特定的冷冻液处理后，降低到极低的温度，从而避免由于时间延长和环境因素的影响而导致精子死亡或功能丧失。
这样处理后的精子可长期保存，并在需要时通过复苏技术重新获得其活力和生育能力，以达到助孕的目的。
二、精液冷冻前的优化处理方式1. 精子分离和筛选在进行精液冷冻前，首先需要对精液进行分离和筛选，以去除掉畸形精子、无活力精子和其他污染物质。
这样可以保证只有高质量的精子被用于冷冻，提高冷冻后精子的复苏效果。
2. 添加保护剂在进行精液冷冻处理时，需要添加适量的保护剂以保护精子的细胞膜和生物结构。
这些保护剂可以在冷冻过程中减少冷冻液对精子的损伤，提高冷冻后精子的复苏效果。
3. 控制冷冻速率4. 优化冷冻液配方精液冷冻液的配方对冷冻效果有着重要的影响。
在进行精液冷冻前需要对冷冻液的配方进行优化，以提高冷冻后精子的复苏效果。
5. 标签和储存在进行精液冷冻后，需要对冷冻管进行标签记录，并将其储存在符合要求的冷冻条件下。
这样可以保证冷冻后的精子能够长期保存，以便在需要时进行复苏。
三、影响冷冻复苏效果的因素1. 冷冻液成分3. 冷冻液pH值冷冻液的pH值对精子的冷冻复苏效果也有着重要的影响。
不同的pH值可能会引起不同程度的精子损伤，因此需要对冷冻液的pH值进行严格的控制。
4. 冷冻储存条件冷冻储存条件的选择也对精子的冷冻复苏效果有着重要的影响。
不符合要求的冷冻储存条件可能会导致冷冻后的精子失去活力，降低其复苏效果。
四、改进方法3. 加强冷冻复苏技术加强冷冻复苏技术的研究和应用，提高冷冻后精子的复苏效果。
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响
精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响
随着现代生殖医学的发展，精液冷冻已经成为一项重要的技术手段。
然而，精液冷冻
复苏效果的稳定性和可靠性一直是精液冷冻技术研究的热点问题。
精液冷冻前优化处理方
式对精子冷冻复苏效果的影响成为当前研究的一个重要方向。
精液冷冻前的优化处理方式具体包括以下几个方面：收集和处理精液、加工分装、添
加低分子保护剂、添加高分子保护剂、添加复合保护剂等。
首先，收集和处理精液对精子冷冻复苏效果有重要影响。
合理收集和处理精液可使精
子质量得到有效保护，从而提高精液冷冻复苏效果。
同时，要注意避免收集到混合精液、
精液质量差的情况，否则会影响冷冻复苏效果。
其次，加工分装也是影响精液冷冻复苏效果的重要因素之一。
加工分装时可以选择较
小容量的冻管进行分装，这样有利于保护精子，防止精子变形和损伤，从而提高精液冷冻
复苏效果。
除了上述两点，添加低分子保护剂、添加高分子保护剂、添加复合保护剂也是优化处
理方式的重要手段。
添加低分子保护剂可以有效保护精子细胞膜，增加精子的冷冻复苏率；添加高分子保护剂可以改善精液流变学特性，防止精子聚集、粘附和凝聚；添加复合保护
剂可以综合利用低分子和高分子保护剂的优点，进一步提高精液冷冻复苏效果。
进口冷冻猪精使用的效果和体会
进口冷冻猪精使用的效果和体会
兰海恩;黄敏瑞;吴柱月;潘天彪;唐中林;覃倩
【期刊名称】《广西畜牧兽医》
【年(卷),期】1999(15)5
【摘要】@@ 长期以来,许多地方大都直接引进种猪,这个办法耗资巨大,且有引进疾病的危险,如乙脑、伪狂犬病、传染性萎缩性鼻炎、猪繁殖和呼吸综合症(PRRS)等,都是外来种猪带来的.我们1998年采用引进猪冷冻精液来进行人工授精,藉以提高猪群质量,现报道如下.
【总页数】2页(P15-16)
【作者】兰海恩;黄敏瑞;吴柱月;潘天彪;唐中林;覃倩
【作者单位】广西畜牧研究所,530001;广西畜牧研究所,530001;广西畜牧研究所,530001;广西畜牧研究所,530001;广西畜牧研究所,530001;广西畜牧研究所,530001
【正文语种】中文
【中图分类】S8
【相关文献】
1.进口德系西门塔尔及荷斯坦牛冻精使用效果观察 [J], 热孜亚·买买提;蒋小怀;曾黎;乌兰·卡格德尔;吐尔逊别克·阿得力别克;热依拉·普拉提
2.取精后至冷冻前的间隔时间对精子冷冻复苏效果的影响 [J], 陈碧;张维;马天仲;荆霞;张云山;彭彩玲
3.精浆对猪精子冷冻效果影响的研究 [J], 刘彪;逯心玉;孔庆然;苏兴盼;何文腾;胡魁;
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4.不同浓度C3H8O3、VE猪精冷冻液保存效果分析 [J], 潘懿;李军华
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精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响分析
临床探索精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响分析*陈晓文，郑文玲，梁光林，李永强，杨文滔 （茂名市人民医院生殖中心，广东茂名 525000）摘要：目的：探讨精液冷冻前优化处理方式对精子冷冻复苏效果的影响。
方法：选择2019年1月至2020年12月于茂名市人民医院生殖中心就诊并进行人类辅助生殖技术（ART）治疗的80例男性患者的精液标本，每份标本等分4份，以原液作为对照（A组），其他三组分别采取不同方法处理，B组采取洗涤法，C组采取上游法，D组采取密度梯度离心法，之后进行精子冷冻复苏。
比较四组精子总数、前向运动精子活率、膜完整率、DNA完整率，比较四组精子低活力与正常活力的精子冷冻复苏率。
结果：四组标本优化前精子总数、膜完整率、DNA完整率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；复苏后，四组精子总数均降低，C组、D组低于A组、B组，且B组、C组、D组膜完整率、DNA完整率均升高并高于A组，同时C组、D组高于B组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
80份标本中精子低活力20份，正常活力60份。
A组精子冷冻复苏率最高，C组、D组稍低，但C组与A组、D组比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；D组精子冷冻复苏率低于A组，B组低于A组、C组、D组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：不同精液冷冻前优化处理方式均会降低精子总数及前向运动精子活率，但可提高细胞膜完整率及DNA完整率，其中洗涤法明显降低精子冷冻复苏率，而上游法优化效果好但回收率低，密度梯度离心法回收率高但优化效果一般，应根据实际情况选择适宜的处理方式。
关键词：精液冷冻；洗涤法；上游法；密度梯度离心法；精子冷冻复苏率；精子总数；精子活力指数自精保存即将精子进行低温冷冻，是人类辅助生殖技术（ART）的重要组成部分，为患者进行ART前提供了精子解决方案。
考虑到男性不育患者多因为年龄、环境污染物、重金属、致癌物、生殖系统疾病等因素导致精子细胞、DNA完整性受到影响，因此需对精液进行优化处理，去除大部分非精子物质，获得活力与形态更好的精子，利于供精人工授精（AID）和供精体外受精（IVF-D）治疗[1]。
不同时间拆卵对胚胎异常受精和发育的影响
不同时间拆卵对胚胎异常受精和发育的影响目的：受精障碍或受精率低下(<30%)是体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization-embryo transfer, IVF-ET)中困扰辅助生殖技术工作者的常见问题之一。
目前,在我国不孕症患者求医问药完全自费的国情下,一旦发生此问题将会极大加重患者的经济和心理负担。
随着生殖医学的不断发展,如何防范受精失败或受精率低下已引起生殖医学工作者的热切关注。
短时受精的出现为胚胎学家及早观察卵母细胞是否激活,及尽早进行补救提供了前提条件。
但是在过早地对受精胚胎进行机械性脱落颗粒细胞是否会影响其受精卵的正常受精或是影响其胚胎的后期发育潜能还不明确。
因此本研究的目的是探讨这种机械性操作是否会影响受精卵的正常受精过程,或者是否会影响其胚胎的后期发育和妊娠结果。
方法：收集2010年1月至2013年2月期间在盐城市妇幼保健院生殖医学中心接受常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗,年龄在22-38岁之间,获卵数大于5枚的165例不孕症患者。
在取卵后4小时,将每位患者的卵母细胞与精子共培养4小时,然后随机分为2组(A组和B组),A组为选择获卵数1/3-1/2左右的受精卵在加精4小时后轻柔的脱去卵母细胞周围的颗粒细胞直至能清晰的观察到卵母细胞的第二极体(Second Polar Body, PB2),若PB2>50%,则认为IVF受精成功；若PB2<50%,再观察2小时极体排出情况,在受精6小时后如果PB2<50%,那就对只有一个极体的卵母细胞进行补救措施。
而B组为拆除卵母细胞颗粒细胞所剩余的受精卵,在加精4小时后不拆除颗粒细胞而直接移入另一个新鲜胚胎培养基中待16小时后(次日)再进行剥离颗粒细胞观察原核情况。
最终对比两组之间的总受精率、2PN受精率、PB2受精率、1PN受精率、0PN受精率、多精受精率、总卵裂率、Ⅰ级胚胎率、Ⅱ级胚胎率、Ⅲ级胚胎率、Ⅳ级胚胎率以及可利用胚胎率和优质胚胎率、临床妊娠率、胚胎植入率、单胎率、双胎率、异位妊娠率、流产数和胚停数。
实验四精液的冷冻保存
实验四精液的冷冻保存一、目的要求练习公猪、公牛精液冷冻保存的方法，要求学会：1、稀释液和解冻液的配制方法；2、精液的稀释、降温、平衡及制冻的技术；3、冷冻精液的解冻技术。
二、材料公猪精液、公牛精液、新鲜牛奶、新鲜鸡蛋、葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠（二水）、蒸馏水、量筒、玻璃注射器、烧杯、三角烧瓶、滴管、冰壶、保温杯或小液氮罐或泡沫盒、冰、液氮、0.25mL塑料吸管、冷冻架、温度计、水盆、纱布、棉花，抹镜纸、75%精棉球、镊子、捞筛、液氮罐、载玻片、小玻棒、石腊油、显微镜、水浴锅、铝锅、电炉、标记笔等。
三、方法与步骤（一）公猪精液的冷冻保存方法本次实验为精液的颗粒冷冻，制冻采用吊盆法。
在液氮中（－196℃）保存。
1、稀释液及解冻液的配制（1）稀释液的配制①用天秤分别称取葡萄糖4g、蔗糖1.2g，放入干净的烧杯中，然后加入蒸馏水57mL。
搅拌混合均匀，加盖，置于水浴锅中隔水煮沸消毒10min，取出冷却备用。
②将新鲜牛奶用3～4层纱布滤入干净烧杯。
并加盖隔水煮沸消毒10min，取出冷却后，用消毒过的玻棒除去奶皮备用。
③分别用消毒过的量筒量取葡萄糖、蔗糖液28.5mL、牛奶15mL和甘油1.5mL置于另一消毒过的烧杯中，然后再用消毒过的注射器吸取蛋黄5mL加入其中，反复抽打，使其混合均匀，便成稀释液。
（2）解冻液的配制用天秤分别称取葡萄糖1.5g、柠檬酸钠（二水）0.75g置于干净的烧杯中，再加蒸馏水50mL，加盖隔水煮沸消毒10min，取出冷却后，加入安那咖注射液1ml便成解冻液。
2、精液的稀释（1）将采得的精液检查其性状，包括颜色、混浊度、密度。
活率及PH等顶目，并将结果记载于表中，要求活率达0.7以上的，始供稀释用。
（2）将精液与稀释液同置于室温中10min，使二者的温度一致，便按1：l的比例分别量取所需量置于消毒过的三角烧瓶中，轻轻混合均匀，镜检精子活率。
3、降温平衡将稀释好的精液放在装有冷水的烧杯中，再移入维持7℃的冰壶里平衡30～60min，然后镜检精子的活率，要求活率不低于0.6，始供制冻。
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取精后至冷冻前的间隔时间对精子冷冻复苏效果的影响作者：陈碧张维马天仲荆霞张云山彭彩玲来源：《中国医学创新》2016年第11期【摘要】目的：探讨取精后至冷冻前的间隔时间对精子冷冻复苏率的影响，规范精液标本冷冻技术操作，进一步提高冻存标本的复苏率。
方法：选取2015年3月在门诊行精液分析的30例参数正常精液标本，同一例精液一式3份，分别在精液取出后15、30 min及60 min后行精液冻存，即按所有样本按孵育时间的不同分为A（15 min）、B（30 min）、C（60 min）三组，每组30例。
分析三组标本冷冻前后前向运动（PR）精子数、存活率及精子畸形率，比较各组精子的冷冻复苏率。
结果：A组的PR精子冷冻复苏率（55.35±13.94）%及B组的（51.55±15.94）%均高于C组的（38.13±14.24）%，比较差异均有统计学意义（P0.05），但A组略高。
三组精子存活率及正常形态精子百分率比较差异无统计学意义（P>0.05）。
结论：精子取出后应尽快完成冷冻，有助于提高精子冷冻复苏效果。
【关键词】精子；低温保存；精子参数；精子冷冻复苏率【Abstract】 Objective：To investigate the effect of the time of sperm incubation pre-freezing on the cryosurvival of human sperm and to optimize the protocol of direct fumigation for the freeze-thawing of human sperm.Method：Thirty semen samples from healthy donors in March 2015 were collected as the objects，which were divided into three groups according to the difference of the incubation time pre-freezing at room temperature before the cryopreservation：15 minutes group （group A），30 minutes group（group B） and 60 minutes group（group C）.The sperm motility parameters，sperm vitality and survival rate of the semen samples before freezing and post-thawed were detected by computer-assisted semen analysis.Result：The survival rate of progressive sperm motility was（55.35±13.94）% in group A and （51.55±15.94）% in group B，which were remarkably higher than （38.13±14.24）% in group C，the differences were statistically significant（P0.05），but the group A was higher.There were no significant differences in sperm vitality among the three groups（P>0.05）.Conclusion：The short time incubation of sperm pre-freezing can evidently improve the progressive motility of post-thaw sperm.【Key words】 Sperm； Cryopreservation； Sperm parameter； Survival rate of post-thaw spermFirst-author’s address：Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhanjiang 524001，Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.11.001精子冷冻技术的发展，使患者因各种因素需要冷冻自身精子用于后续辅助生殖技术（Assisted Reproductive Technology，ART）治疗成为可能，如取精困难、梗阻性无精症患者在门诊穿刺检查时获得的精子、隐匿精子症等患者要求冷冻的自身精子。
自精冻存成为生殖中心实验室常规实施的技术。
近年来，精子冷冻技术得到了快速发展，常用的方法包括程序降温法与快速冷冻法[1-2]，在临床应用时仍需进一步完善。
对临床实验室而言，需要在保证最大限度冷冻精子质量的同时，力求实验方法快速、简便、有效。
研究表明，液氮一步熏蒸法可显著提高冻存精子的质量[3]。
世界卫生组织《人类精液检查与处理实验室手册》（第5版）指出，室温下正常精液标本大都在15 min内完全液化，很少超过60 min[4]。
因而推荐精液液化后应立即进行分析，最好在30 min内完成，不要超过1 h。
而取精后至冷冻前的间隔时间没有明确的规定，不同的生殖中心时间不同。
目前未见相关文献报道。
此次研究旨在通过探索精液取出后至冷冻前的时间对精子冷冻复苏率的影响，优化一步熏蒸法，以规范精液标本冷冻技术操作，进一步提高冻存标本的复苏率。
1 资料与方法1.1 一般资料选取于2015年3月在本院行精液分析患者的30例精液标本，患者年龄25～35岁（平均31岁），禁欲2～7 d，手淫法取精。
精液量2～5 mL，15 min内均完全液化。
同一例精液一式3份，分别在精液取出后15、30 min及60 min后行精液冻存，即按所有样本按孵育时间的不同分为A（15 min）、B（30 min）、C（60 min）三组，每组30例，每例标本精液量为0.5 mL。
冷冻前精子浓度均≥15×106/mL，前向运动（progressive motility，PR）精子≥32%，正常形态精子≥4%。
1.2 试剂与仪器冷冻保护剂使用Quinn’s Advantage TM Sperm Freezing Medium，液氮罐为MVE XC47/11-10型，标本在液氮蒸气中直接熏蒸降温。
精子冷冻储存容器选用 Greiner bio-one 生产的1 mL低温冻存管（REF：123278）。
1.3 方法1.3.1 精子冷冻对精液按不同时间进行冻存，逐滴把一份精子冷冻培养基（Quinn’s Advantage TM Sperm Freezing Medium）加进一份液化好的精液样本。
每加一滴培养基时要不断混合以确保精子细胞与冷冻培养基能彻底平衡。
混合后室温平衡10 min。
将冷冻管平放在离液氮面10～20 cm高度20～30 min，把冷冻管放在铝架上，然后移至液氮罐保存。
1.3.2 精子解冻从液氮罐取出冷冻管，立即置于35 ℃水浴直至完全溶解。
把解冻后的精子溶液倒进试管，缓慢一滴一滴地在30 s内把3份精子冲洗培养基与精子溶液彻底混合以确保精子冷冻培养基已被稀释。
300 g离心10 min，弃去上清，加入精子冲洗培养基定容至0.5 mL，重悬精子后进行精液分析，主要检测PR精子。
1.4 观察指标及评价方法按照《WHO人类精液检查与处理实验室手册》第5版进行精液常规分析及精子形态学分析，主要包括精液量、精子浓度、PR精子百分率、正常形态精子百分率及存活率等。
同时比较精子冷冻复苏率。
1.4.1 精子存活率（vitality assessment of human sperm，VA）精液标本20μL与5 g/L的伊红Y溶液1：1混匀，并覆盖盖玻片，30 s后在400倍光学显微镜下观察。
必须立即观察这些玻片，活精子不着色（白色）；死细胞被染成红色。
计算精子存活率。
重复计数2次，两次结果应满足95%的可信区间检验，报告结果取平均值。
1.4.2 正常形态精子百分率精液标本涂片，使用改良巴氏法染色，油镜下观察，计数200个精子中正常形态精子所占比例，重复计数2次，两次结果应满足95%的可信区间检验，结果取平均值。
1.4.3 精子冷冻复苏率精子冷冻复苏率=冻后PR精子百分率/冻前PR精子百分率。
1.5 统计学处理采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计学分析，计量资料用（x±s）表示，组间均数比较用Friedman秩和检验，两两比较用Wilcoxon法，以P2 结果2.1 冷冻前各组PR精子百分率、存活率及正常形态精子百分率的比较 A组、B组及C组PR精子百分率随着时间的延长逐步降低，但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。
B组及C 组存活率略有下降，但差异无统计学意义（P>0.05）。
各组正常形态精子百分率较接近，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
2.2 复苏后各组PR精子百分率、冷冻复苏率、存活率及正常形态精子百分率的比较 A组与B组复苏后PR精子百分率比较差异无统计学意义（P>0.05），而A组与C组、B组与C组复苏后PR精子百分率比较差异均有统计学意义（P0.05），而A组与B组PR精子复苏率均高于C组，差异均有统计学意义（P0.05），见表2。
3 讨论随着辅助生殖技术的发展，给越来越多的不孕症患者带来福音。
不孕症夫妇中大约30%是男方因素导致不育而就诊的，卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术是治疗男性不育的有效方法[5]。
张丹等[6]对比射出精液、经皮附睾穿刺和经皮睾丸穿刺取精子、供精行ICSI助孕的结局，认为不同来源的精子对受精率、卵裂率、优质胚胎率及最终妊娠结局没有影响。
精子的成熟度、精子的冷冻可能并不影响最终的妊娠率。
目前对小鼠冷冻精子的胚胎发育和表观遗传学的研究发现，与新鲜精子组相比，冷冻精子的胚胎的表观遗传重组动态进程并没有改变[7]。
目前精子冷冻方法主要有慢速冷冻和玻璃化冷冻，两种冷冻方法之间精子活动率下降及DNA损伤无显著差异[8]。
在国内一些人类精子库已开展肿瘤患者的精液冻存[9]，拓宽了不孕不育的治疗范围，给越来越多不孕症患者带来福音。
作为辅助生殖技术发展的基础，精子冻存技术的完善对于保存男性生育力尤为重要。
不同的精液标本、精子本身质量、冷冻保护剂、冷冻方法及解冻方法对精子冷冻保存后的活力影响较大。