AKTA蛋白纯化系统操作指导
AKTA 制备型液相色谱蛋白分析仪 纯化蛋白步骤
AKATA 制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤首先是所有溶液抽滤，超声波(主要是去除溶液中的气泡)；开机(仪器自检)，点开Unicorn ，选default ,ok；clear all (即出现流程图界面)；首先将20%Mannul，点任意选项，出现操作对话框；Pump---flow=1.0 ，execute，(注意：必须先设定流速，使其形成通路；即有流速时再作其他操作)。
此时观察柱压，柱压切记≤0.3Mpa；如果柱压高，则要更长时间洗。
柱压基本稳定时，洗泵：pump---pumpwashpurifier----------A1 ON B1 ON execute；这项仪器自动完成；完成后自动恢复为上一步的状态；此时还应该注意柱压。
注意中间有多次平衡状态出现：一种状态进入另一种状态时，一般要平稳几个柱体积；此时可以洗上样环；待平衡时换液：pause，A1---------A液B1---------B液，continue，然后达到平衡态；洗泵：pump---pumpwashpurifier-------A1 ONB1 ON execute；此时A泵走A液，B泵走B液此时可以安装镍柱；待稳定下来准备上样：将流速降下来，flow=0.5 ，先是load (默认)状态下，将蛋白溶液用注射器打入上样环(上样环是2 ml 的，所以一般最多上样2 ml ，否则浪费；)；然后改为inject状态，execute ，待走出2.5 柱体积时重新改为load状态，平衡几个柱体积；如果中间需上样多次，load , execute;pause;加样后，continue;inject , execute; 同样图上显示≥2 ml 时改状态为load;非目的蛋白不会挂在柱子上，此时出现蛋白峰，在峰上时收穿透；平衡后，洗脱。
准备接收纯化出的蛋白，改流速flow=1.0 ，gradient；100%B8 min; execucte;待B%≥20% 时，设定 pump---outletvalve----feed,executefrac-----0.5 ml，execute;首先出现的是杂蛋白的峰，也可以接收。
蛋白纯化AKTA操作说明(二)
蛋白纯化AKTA操作说明（二）引言概述：本文档旨在提供关于蛋白纯化AKTA操作的详细说明。
蛋白纯化是生物化学和生物技术中常用的实验技术之一，能够用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。
AKTA操作是常用的蛋白纯化系统，本文将介绍该系统的操作步骤和注意事项，帮助用户顺利进行蛋白纯化实验。
正文：一、AKTA操作之仪器准备1. 确保AKTA蛋白纯化系统已经连接好电源，并打开主机电源开关。
2. 检查液氮罐中的液氮是否充足，并确保液位高于所需运行温度。
3. 打开冰盒，准备好所需的离心管、移液器和其他实验器材。
二、AKTA操作之列柱装配1. 按照实验要求选择合适的色谱柱和填料，并正确装配到AKTA系统中。
2. 使用力学手套松开色谱柱底部的螺丝，将填料注入色谱柱中，确保填料均匀。
3. 同时，注意将填料与色谱柱的连接口处用黑色硅胶密封，以免液体泄漏。
三、AKTA操作之流程设置1. 打开AKTA系统的软件界面，并选择“新建方法”。
2. 在方法设置界面中，设定蛋白纯化的各个步骤，如进样、洗脱等流程参数。
3. 根据实验需求，选择合适的梯度洗脱方案，并输入相应的洗脱液体浓度。
四、AKTA操作之样品处理1. 将待纯化的生物样品进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质。
2. 根据纯化需求，可进行某些特定试剂的添加，如酶切剂、亲和标记剂等。
3. 根据方法设置，将样品装入进样器中，并调整进样量和进样流速。
五、AKTA操作之运行实验1. 保存并加载所设置的方法，确保参数设定正确。
2. 启动AKTA系统，开始实验运行，并监控过程中的各项参数指标。
3. 及时记录实验数据，并根据需要进行样品采样、保存等操作。
总结：通过本文所述的蛋白纯化AKTA操作说明，用户可以了解到系统准备、列柱装配、流程设置、样品处理和运行实验等关键步骤。
合理而正确的操作，将帮助用户获得高质量的蛋白纯化结果。
同时，用户还需根据实际操作中的具体情况，进一步优化实验参数，以满足各自的研究需求。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的：为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性，保证实验结果的可靠性，制定本操作规程。
二、适用范围：本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。
三、操作流程：1.准备工作：(1)预热：打开系统电源，预热至设定温度（一般为室温）。
(2)洗涤缓冲液：根据实验要求，制备所需的洗涤缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(3)净化缓冲液：根据实验要求，制备所需的净化缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(4)样品：根据实验要求，制备所需的样品。
2.系统配置：(1)连接仪器：将系统中的各个模块连接好，包括色谱柱、注射器、检测器等。
(2)配置方法参数：根据实验要求，在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。
3.样品处理：(1)样品加载：将样品注入到加载注射器中，通过样品加载阀注入到色谱柱中。
(2)洗脱：根据实验要求，设置梯度洗脱条件，将混合物中的目标蛋白纯化。
4.系统清洗：(1)注射器清洗：每次实验结束后，将注射器从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
(2)色谱柱清洗：每次实验结束后，将色谱柱从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
5.系统关闭：(1)关闭电源：关闭系统电源，断开电源线连接。
(2)清洗系统：将系统中的各个模块用水冲洗干净，保持干燥。
(3)整理工作台：将使用过的耗材整理归位，清理工作台。
四、操作注意事项：1.操作前应仔细阅读操作手册，了解仪器的基本原理和操作要点。
2.操作时要穿戴实验室个人防护用品，避免吸入或接触有害物质。
3.在操作过程中，要严格按照实验要求进行，避免操作失误。
4.定期检查系统的运行状态，保证系统正常工作。
5.操作完成后，要及时清洗和整理仪器，保持仪器的干净和完好。
五、风险控制与安全措施：1.使用过程中，注意避免溶液飞溅引起的伤害，避免溶剂和化学品的吸入或接触。
2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。
蛋白纯化AKTA操作说明(一)2024
蛋白纯化AKTA操作说明（一）引言概述：蛋白纯化是生物技术研究中常用的一种重要技术手段，通过纯化目标蛋白，可以实现对其结构、功能和相互作用的进一步研究。
AKTA是一种常用的蛋白纯化设备，本文将介绍如何进行AKTA操作以获得高纯度的蛋白样品。
本文分为五个大点：设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤、数据处理和总结。
正文：一、设备准备：1. 查看设备状况：检查AKTA设备的各个组件是否齐全，并确保设备正常工作。
2. 设备消毒：使用适当的消毒剂对AKTA设备进行消毒，确保实验过程的无菌。
二、准备实验材料：1. 缓冲液：根据实验需要选择不同的缓冲液，并准备足够的量。
2. 标记抗体：根据实验需要选择适当的标记抗体，并准备足够的量。
3. 标记亲和树脂：根据实验需要选择适当的标记亲和树脂，并准备足够的量。
4. 标准品：准备适当浓度的标准品作为纯化过程中的参考。
三、样品制备：1. 细胞裂解：采用适当的方法对细胞进行裂解，获得含有目标蛋白的裂解液。
2. 预处理：根据裂解液的性质，进行适当的预处理，如去除杂质、调整pH值等。
3. 样品加载：将预处理后的样品加载到纯化系统中，确保样品的均匀分布。
四、纯化操作步骤：1. 初始化设备：打开AKTA软件，选择纯化方法，并设置相关参数。
2. 样品加载：将样品加载到设备中，并根据实验要求选择适当的柱子和纯化方案。
3. 洗脱：使用缓冲液进行洗脱，去除非目标蛋白和杂质。
4. 目标蛋白回收：使用适当的缓冲液洗脱目标蛋白，并将其收集到已经标记好的收集管中。
5. 清洗设备：使用适当的缓冲液对设备进行清洗，防止交叉污染。
五、数据处理和总结：1. 数据记录：记录纯化过程中的各项数据，如流速、吸光度和洗脱峰。
2. 数据分析：对纯化结果进行分析和比较，评估纯化效果。
3. 总结经验：根据纯化结果总结操作经验，以优化蛋白纯化的流程和效率。
总结：本文介绍了蛋白纯化AKTA操作的基本步骤。
通过设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤和数据处理，可以获得高纯度的蛋白样品，为后续的蛋白研究提供了可靠的基础。
AK蛋白纯化系统操作
A K蛋白纯化系统操作 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。
(完整word版)蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一种方式4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、 AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍A KTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
• Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）• Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
AKTA-go 蛋白纯化仪操作规程
AKTA-go 蛋白纯化仪操作规程1、开机长按仪器主电源至环形绿灯常亮，打开电脑电源，待仪器自检完毕，双击桌面上UNICORN 7.4图标，进入操作界面，待仪器显示屏显示Ready ，系统连接完毕。
2、准备工作液和样品所有工作溶液的样品必须经过0.45μm的滤膜过滤，少量样品也可高速离心后取上清使用。
缓冲液使用前用过超声脱气10min;3、清洗及管道准备（1）将需要用到的泵头（一般为A、B、sample）从蓝盖瓶中取出，插入到超纯水中，在system control窗口点击工具栏内的manual,选择execute manual instructions --- pump --- pump wash --- A、B、sample 选on --- insert --- Execute ,用纯水洗泵，洗完自动停止。
（2）将A泵管插入到平衡缓冲液中，B泵插入到洗脱缓冲液中，sample 泵插入到平衡缓冲液中，按照上一步骤洗泵，洗完自动停止。
（3）检查管路中是否还有气泡，如果有气泡需要手动排气，在system control窗口点击工具栏内的manual,选择execute manual instructions ---Flow path--- inlet，依次选择泵，进行手动注射器抽液，两个泵都抽出连续的液体。
（4）将sample 管道插入待上样的样品中；4、安装层析柱（1）在system control窗口点击工具栏内的manual,选择execute manual instructions --- pump--- Flow 输入一个慢流速1或者0.5m L/min，insert;（2）选择Alarm---Alarm pressure (输入柱子的耐受压力，可在说明书中查看)；点击execute;（3）待Injecttion Valve 5号管位流出液体后，将管路接入柱子的上端，稍微拧紧后将柱子下端的堵头卸掉接入管道。
蛋白质纯化系统AKTAPurifer10操作规程
仪器操作规程-蛋白质纯化系统 AKTA Purifer 10
一、标准操作规程
1.检查各部件连接是否正常（电源开关，仪器部件，流动相，色谱柱等）。
2.打开AKTA purifierTM10蛋白层析仪和计算机电源。
3.双击UNICON 5.11图标，进入实时方法编辑、实时运行、结果分析界面。
4.编辑新方法:
1)编辑方法：点击文件，点击新建方法，编辑方法（运行时间，流动相选择，流速，
检测波长等）。
2)保存方法：点击文件，点击另存方法为（输入文件名）。
3)运行方法：选择文件，点击右键，点击RUN，进行方法运行。
4)平衡色谱柱，一般约1—2个柱体积。
5)手动单针进样：在Load状态，将样品注入进样环，完毕后，点击Inject状态。
6)批处理进样：编辑方法，选择A—905自动进样器，进入scouting界面，利用向
导进行批处理编辑，保存批处理文件，点击批处理运行图标。
7)数据处理：点击第四个谱图分析图标，进入数据处理界面，打开要处理的文件，
点击积分向导图标进行数据处理（还可点击界面顶部的手动积分进行手动处理）。
保存数据处理方法。
5.运行已有方法：在实时分析界面点击文件，打开方法文件，点击RUN即可。
6.清洗色谱柱，在方法文件中调出自动清洗方法，点击RUN即可。
二、注意事项
1.流动相的溶剂须使用色谱纯，水为超纯水，缓冲盐需用0.45um的滤膜过滤。
2.清洗泵后的保护液为20%乙醇，一周更换一次。
3.如经常使用仪器，在线过滤器中的滤芯需每周超声清洗一次。
三、送样要求
初级纯化过滤后的样品。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
实用文档.ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机翻开仪器的主电源，翻开电脑电源。
待仪器自检完毕〔CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁〕。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂〔如乙腈、甲醇〕，需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm〔输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到〕，insert，execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1〕等待柱子平衡好了〔观察电导COND，pH的数值和变化趋势〕就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2〕用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入〔进样量不得低于样品环的体积的2倍〕推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3〕用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
AK蛋白纯化系统操作精选文档
A K蛋白纯化系统操作精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
ATKA 蛋白质纯化系统操作规程
Esc按Esc一次返回一级菜单，或重复地回到主菜单。
5.主菜单概要(Main menu overview)
反复按Esc键可从任何子菜单进入主菜单平面。
Templates.该菜单出现在自检后启动时，用于运行应用模板和方法模板。Program Method用于编辑用户专用方法。
SetParameters用于对检测紫外(UV)、电导、PH、温度、和运转泵及混合器设置参数。
Check用于检测系统内部参数，例如序列号、泵运行时间、和灯亮度。
Manual Run用于手工运行系统。
关机步骤
结束运行(Finishing the run)
在Method Complete即时按OK结束运行。
Method Complete
Press OK to continue
在结束前中断运行，按End，用选择yes来确认后面的信息，并按OK。
5.当使用危险化学品时，在维护和维修前应确保整个系统已用蒸馏水彻底冲洗过。
ATKA prime蛋白质纯化系统
型号：AKTAprime
厂家：GE
价格：13万元
主要功能：用于蛋白质的分离纯化
操作规程
开机骤
启动系统并进行系统自检如下：(Selftest自检)
1．打开系统后面板的主电源开关。系统开始进行自检。
2．首先将显示系统名称和软件版本号。然后在自检期间显示AKTA prime信息。如果检测到错误，则在显示器上显示出错误信息。
3．自检约需30-40秒钟。当启动无误地完成时，显示屏显示模板菜单Template模版并准备好使用。系统可以立即使用。但是直到使用一小时后才能达到全部技术指标。
4．操作用户界面(Operation the user interface)
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA卵白纯化系统把持之马矢奏春创作AKTA卵白纯化系统是以后卵白纯化工作经经常使用到的一组设备,自动化水平很高.AKTA系统依据分歧的配置,可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备.以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA卵白纯化系统的一般把持.1、认识AKTA.AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统.该色谱系统的分离装置有三个主要组件,在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）.它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列.在AKTAexplorer 100,流速范围0.01-100 ml/min,压力高达10 Mpa（泵名为P-901）.在AKTA explore10,流速范围0.001-10 ml/min,压力高达25 Mpa （泵名为P-903）.• Monitor UV-900,同时监控190－700 nm 范围内高达 3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器.（针对部份AKTA PURIFIER机型,尚有UPC-900监测器可供选择,光源为汞灯光源,一次可以监控一个波长,装置滤光片后,可以在选择的波长范围内进行切换.）• Monitor pH/C-900,在线电导和pH 监测的组合监测器.Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图暗示（Fig 2）.组成部件,如混合器、柱及分歧的阀装置在右边部份.翻开装阀的门可全部看到.柱被挂在装阀的门的外侧.分离装置由UNICORN 软件控制.软件装置于一自力的电脑主机之中,在电脑与色谱系统之间的通信由数据收集装置CU950进行控制.2、一般把持2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮,翻开色谱系统,然后翻开电脑电源.待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮其实不闪烁）.双击桌面上UNICORN图标,进入把持界面.UNICORN的把持界面分为四个窗口（Fig 3）Fig 3、Unicorn的把持界面2.2准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必需经过0.45µm的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用.当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇）,需在使用前用低频超声脱气10min.2.3清洗及管道准备首先将A泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液中,将B 泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中,在system control窗口点击工具栏内的manual,选择pump→pump wash explorer,选中A1,B1管道为ON, execute.泵清洗将自动结束.(Fig 4)Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗把持在manual里选择pump→flow rate,输入一定的低流速（Fig 5）,insert；选择Alarm&mon→alarm p ressure,设置high alarm（输入填料或层析柱的耐受压力,以较低者为设置值,具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到）,insert,execute（Fig 6）.待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下真个堵头卸失落接入管道连上紫外流动池.Fig 5、AKTA Explorer的流速设定把持Fig 6、AKTA Explorer的限压设定把持2.5开始纯化：1）在柱子平衡好之后（电导,pH的数值和变动趋势稳定）即开始上样了.此时应将紫外调零（Fig 7）,选择Alarm&mon→autozero,exectue.Fig 7、AKTA Explorer的紫外调零把持2）具体上样方式：AKTA系统的上样方式比力灵活,可以根据具体样品的条件进行上样,包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等,这里以用系统泵上样为例简单介绍上样过程.点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子.3）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线.在manual里选择pump→gradient,依照自己的工艺选择targetB （100％）和length（10CV）（Fig 8）.Fig 8、AKTA Explorer的洗脱条件设定把持4）设定收集：选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积,exectue（Fig 9）.结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900,exectue（Fig 10）.Fig 9、AKTA Explorer的组分收集设定把持Fig 10、AKTA Explorer的组分收集停止设定把持5）清洗泵及卸下层析柱：将A1和B1入口放入纯水中,启动pump wash purifier功能冲刷A泵和B泵及整个管路.然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中,同样把持将乙醇冲满整个管路保管.再给柱子一个慢流速,设置系统呵护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时候将堵头拧上,再拆柱子的上端,最后拧上上真个堵头.整个过程中应防止气泡进入.6）关闭电源：从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出,其他窗口不能独自关闭.然后关闭AKTA主机电源,关闭电脑电源.3、法式设定把持在method editor窗口点击工具栏内的method wizard,弹出窗口界面如Fig 11所示,可以分别在main selection、column以及column position三个下拉菜单中选择所要用到的层析方法、所用到的层析柱的参数以及所装置的层析柱在柱位选择阀的位置,选好之后,点击next按钮进入下一步波长和溶液进口的设定（Fig 12）,在此可以设定检测的波长,针对AKTA EXPLORER可以一次选择三个波长共同进行监控,并在此设定A泵和B泵的溶液进口,设定好之后,点击next,呈现如Fig 13所示窗口,可以在此设定对层析柱进行平衡的条件.Fig 11 Fig 12Fig 13 Fig 14完成之后,点击next呈现Fig 14的窗口,在此可以设定上样的条件,可选择的条件包括上样的方式,如上样环上样以及样品泵上样,对上样的体积也要进行设定.如果利用系统泵上样,在此无法进行设置,不外可以利用A泵和B泵的两个进口在后面的步伐中进行设置.在上步设置完成之后,点击NEXT呈现如Fig 15所示窗口,这里是针对流穿组分收集所进行一些设置,针对装置的分歧的收集器,具体内容可能有些不同,这里显示的界面是在装置了Frac-950收集器之后所呈现的界面,设置完成点击NEXT呈现如Fig 16所示的窗口,设置目标组分收集的一些参数,点击NEXT,呈现如Fig 17所示的窗口,针对具体的洗脱条件可以进行设置.当全部设置完成之后,点击finish,弹出Fig 18所示的窗口,可以再一次对所进行的设置进行进一步的修改,完成之后点击按钮,完成法式存盘把持.至此完成洗脱法式的设定工作,在应用自动洗脱法式时,可在SYSTEM CONTROL窗口点击文件菜单栏中的FILE→Run,在弹出的对话框中选择目标洗脱法式所在的位置并执行,之后会依次弹出一些对话框,主要是再次确认法式的设置条件,并选择洗脱结果文件的保管位置,全部设置完之后,洗脱将自动进行,结果将自动的保管在设定的文件夹中.Fig 15 Fig 16Fig 17 Fig 184、结果的浏览与简单处置在纯化完成后,Unicorn软件会自动的依照预先的设置保管结果文件,如果没有指定,那么结果文件会保管于一个文件名以manual N开头的文件中,N为系统依次生成的一个1-10之间的数字.对结果的浏览应在evaluation窗口（Fig 19）中进行,翻开文件及对文件进行普通编纂的菜单如Fig 20所示.Fig 19 Evaluation窗口Fig 20 纯化结果普通编纂菜单这里已经选择了一个纯化文件,翻开后,在结果浏览窗口点击鼠标右键,选择properties,可以弹出如Fig 21所示的把持菜单,可以分别对结果进行编纂,如改变曲线的颜色,设定横轴或纵轴的显示区间,进行文本文件的编纂等等.Fig 214、AKTA卵白纯化系统的日常维护4.1 每天,当实验完成系统使用结束后,应尽可能防止保管于缓冲液中过夜,尤以高盐浓度洗脱缓冲液为甚！假如,不能防止,则紧记第二天尽早用 System Wash Method完成以蒸馏水将系统完全清洗,再予以保管或再更新使用其它缓冲液,再次投入使用进行实验把持.用蒸馏水将余下的缓冲液完全冲刷出系统,这步伐至关重要.此举不单可以防止缓冲液对系统造成腐蚀机会,甚或因使用高盐浓度缓冲液保管过久造成盐结晶等的梗塞,对系统构成不需要的损害和损耗.4.2每周更换润洗缓冲液（20%乙醇）.若发现储液瓶液体增多,就说明泵内部有漏液,需要更换泵密封圈.若发现液体减少,需要检查润洗管接头,如果没有漏液,则泵膜或密封圈需要更换.4.3一定要坚持实验环境的清洁,以免灰尘造或泄漏的液体等造成仪器光学及电子元件的损坏.4.4 在长时间不应用系统进行试验的时候,应将系统管路布满20%的乙醇,并关闭紫外检测器,清洗PH探头,并保管于适当的缓冲液中.。
AKATA蛋白纯化系统
AKATA蛋白纯化系统
AKATA蛋白纯化系统
●操作步骤：
1.启动电脑，然后启动仪器。
2.启动Unicorn程序，进入控制程序
3.设置系统压力为10Mpa，流速5mL/min，点RUN
4.使用水进行清晰，然后用缓冲液平衡整个系统
5.清洗上样环2-3次，直至A280吸光值稳定
6.调整为柱子要求的流速和压力，装柱子，平衡
7.上样，洗脱，收集
8.使用洗脱液充分清洗柱子，然后用水冲洗整个系统，
及上样环，最后用20%乙醇充满整个系统
●注意事项：
1.使用前确认你已阅读使用说明（可从唐远平处获取光盘）
2.20%乙醇至少半个月换一次
3.使用前检查泵后腔循环管路，确认其充满了20%乙醇，
如有空气请吸出
4.若压力报警，首先确认样品经过高速离心或过滤，其次
检查柱子是否完好，若压力依然报警，更换在线滤片。
5.不使用pH电极时，绝不将其置于流动池中，也不宜用水
保存。
正确的保存方法为：从流动池中卸下pH电极，先用蒸馏水清洗，轻拭水份后，保存在饱和氯化钾中
6.每月定期保养，发现假峰时，拆下柱子，将所有缓冲液
入口置于1M NaOH中，执行systerm wash method，并以1mL/min流速清洗20min。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化体系操纵AKTA蛋白纯化体系是当前蛋白纯化工作经经常运用到的一组装备,主动化程度很高.AKTA体系根据不合的设置装备摆设,可以分为AKTA EXPLORER. AKTA PILOT.AKTA PURIFIER等多种型号的装备.以下以AKTA EXPLORER为例简略介绍AKTA蛋白纯化体系的一般操纵.1.熟悉AKTA.AKTA explorer 是为办法开辟及研讨运用而设计的全主动液相色谱体系.该色谱体系的分别装配有三个重要组件,在底部平台的左侧整洁堆起（Fig 1）.它们是：FIG 1.AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列.在AKTAexplorer 100,流速规模0.01-100 ml/min,压力高达10 Mpa（泵名为P-901）.在AKTA explore10,流速规模0.001-10 ml/min,压力高达25 Mpa （泵名为P-903）.• Monitor UV-900,同时监控190－700 nm 规模内高达 3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器.（针对部分AKTA PURIFIER机型,另有UPC-900监测器可供选择,光源为汞灯光源,一次可以监控一个波长,装配滤光片后,可以在选择的波长规模内进行切换.）• Monitor pH/C-900,在线电导和pH 监测的组合监测器.Fig 2.AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER体系的重要构成部件可以用模式图暗示（Fig 2）.构成部件,如混杂器.柱及不合的阀装配在右边部分.打开装阀的门可全体看到.柱被挂在装阀的门的外侧.分别装配由UNICORN 软件掌握.软件装配于一自力的电脑主机之中,在电脑与色谱体系之间的通讯由数据收集装配CU950进行掌握.2.一般操纵2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮,打开色谱体系,然后打开电脑电源.待仪器自检完毕（CU950上面的3个指导灯完整点亮其实不闪耀）.双击桌面上UNICORN图标,进入操纵界面.UNICORN的操纵界面分为四个窗口（Fig 3）Fig 3.Unicorn的操纵界面2.2预备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经由0.45µm的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用.当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈.甲醇）,需在运用前用低频超声脱气10min.2.3清洗及管道预备起首将A泵的进液管道（A1）放入缓冲液或均衡液中,将B 泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中,在system control窗口点击对象栏内的manual,选择pump→pump wash explorer,选中A1,B1管道为ON, execute.泵清洗将主动停滞.(Fig 4)Fig 4.AKTA Explorer的泵清洗操纵在manual里选择pump→flow rate,输入必定的低流速（Fig 5）,insert;选择Alarm&mon→alarm pressure,设置high alarm（输入填料或层析柱的耐受压力,以较低者为设置值,具体可在填料解释书或层析柱解释书中查到）,insert,execute（Fig 6）.待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下端的堵头卸失落接入管道连上紫外流淌池.Fig 5.AKTA Explorer的流速设定操纵Fig 6.AKTA Explorer的限压设定操纵2.5开端纯化：1）在柱子均衡好之后（电导,pH的数值和变更趋向稳固）即开端上样了.此时应将紫外调零（Fig 7）,选择Alarm&mon→autozero,exectue.Fig 7.AKTA Explorer的紫外调零操纵2）具体上样方法：AKTA体系的上样方法比较灵巧,可以根据具体样品的前提进行上样,包含用样品环上样.用体系泵上样.用样品泵上样等,这里以用体系泵上样为例简略介绍上样进程.点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到均衡液中持续清洗柱子.3）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线.在manual里选择pump→gradient,按照本身的工艺选择targetB（100％）和length（10CV）（Fig 8）.Fig 8.AKTA Explorer的洗脱前提设定操纵4）设定收集：选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积,exectue（Fig 9）.停滞固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900,exectue（Fig 10）.Fig 9.AKTA Explorer的组分收集设定操纵Fig 10.AKTA Explorer的组分收集停滞设定操纵5）清洗泵及卸基层析柱：将A1和B1进口放入纯水中,启动pump wash purifier功效冲洗A泵和B泵及全部管路.然后再将A1和B1进口放入20％乙醇中,同样操纵将乙醇冲满全部管路保管.再给柱子一个慢流速,设置体系呵护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时刻将堵头拧上,再拆柱子的上端,最后拧上上端的堵头.全部进程中应防止气泡进入.6）封闭电源：从软件掌握体系的第一个窗口unicorn manager点击退出,其他窗口不克不及单独封闭.然后封闭AKTA主机电源,封闭电脑电源.3.程序设定操纵在method editor窗口点击对象栏内的method wizard,弹出窗口界面如Fig 11所示,可以分别在main selection.column以及column position三个下拉菜单中选择所要用到的层析办法.所用到的层析柱的参数以及所装配的层析柱在柱位选择阀的地位,选好之后,点击next按钮进入下一步波长和溶液进口的设定（Fig 12）,在此可以设定检测的波长,针对AKTA EXPLORER可以一次选择三个波长配合进行监控,并在此设定A泵和B泵的溶液进口,设定好之后,点击next,消失如Fig 13所示窗口,可以在此设定对层析柱进行均衡的前提.Fig 11 Fig 12Fig 13 Fig 14完成之后,点击next消失Fig 14的窗口,在此可以设定上样的前提,可选择的前提包含上样的方法,如上样环上样以及样品泵上样,对上样的体积也要进行设定.假如运用体系泵上样,在此无法进行设置,不过可以运用A泵和B泵的两个进口在后面的步调中进行设置.在上步设置完成之后,点击NEXT消失如Fig 15所示窗口,这里是针对流穿组分收集所进行一些设置,针对装配的不合的收集器,具体内容可能有些差别,这里显示的界面是在装配了Frac-950收集器之后所消失的界面,设置完成点击NEXT消失如Fig 16所示的窗口,设置目的组分收集的一些参数,点击NEXT,消失如Fig 17所示的窗口,针对具体的洗脱前提可以进行设置.当全体设置完成之后,点击finish,弹出Fig 18所示的窗口,可以再一次对所进行的设置进行进一步的修正,完成之后点击按钮,完成程序存盘操纵.至此完成洗脱程序的设定工作,在运用主动洗脱程序时,可在SYSTEM CONTROL窗口点击文件菜单栏中的FILE→Run,在弹出的对话框中选择目的洗脱程序地点的地位并履行,之后会依次弹出一些对话框,主如果再次确认程序的设置前提,并选择洗脱成果文件的保管地位,全体设置完之后,洗脱将主动进行,成果将主动的保管在设定的文件夹中.Fig 15 Fig 16Fig 17 Fig 184.成果的阅读与简略处理在纯化完成后,Unicorn软件会主动的按照预先的设置保管成果文件,假如没有指定,那么成果文件会保管于一个文件名以manual N开首的文件中,N为体系依次生成的一个1-10之间的数字.对于成果的阅读应在evaluation窗口（Fig 19）中进行,打开文件及对文件进行通俗编辑的菜单如Fig 20所示.Fig 19 Evaluation窗口Fig 20 纯化成果通俗编辑菜单这里已经选择了一个纯化文件,打开后,在成果阅读窗口点击鼠标右键,选择properties,可以弹出如Fig 21所示的操纵菜单,可以分别对成果进行编辑,如转变曲线的色彩,设定横轴或纵轴的显示区间,进行文本文件的编辑等等.Fig 214.AKTA蛋白纯化体系的日常保护4.1 天天,当实验完成体系运用停滞后,应尽可能防止保管于缓冲液中留宿,尤以高盐浓度洗脱缓冲液为甚！假如,不克不及防止,则紧记次日尽早用 System Wash Method完成以蒸馏水将体系完整清洗,再予以保管或再更新运用其它缓冲液,再次投入运用进行实验操纵.用蒸馏水将余下的缓冲液完整冲洗出体系,这步调至关重要.此举不单可以防止缓冲液对体系造成腐化机遇,甚或因运用高盐浓度缓冲液保管过久造成盐结晶等的堵塞,对体系构成不须要的伤害和损耗.4.2每周改换润洗缓冲液（20%乙醇）.若发明储液瓶液体增多,就解释泵内部有漏液,须要改换泵密封圈.若发明液体削减,须要检讨润洗管接头,假如没有漏液,则泵膜或密封圈须要改换.4.3必定要保持实验情况的干净,以免尘土造或泄露的液体等造成仪器光学及电子元件的破坏.4.4 在长时光不该用体系进行实验的时刻,应将体系管路充满20%的乙醇,并封闭紫外检测器,清洗PH探头,并保管于恰当的缓冲液中.。