人羊膜间充质干细胞体外传代培养对染色体核型的影响_崔冬冰

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不同保存时间人羊膜来源的间充质干细胞增殖能力比较

不同保存时间人羊膜来源的间充质干细胞增殖能力比较常克亮;关方霞;杨波;杜英;李祥生;宋来君;胡祥【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2008(012)025【摘要】背景:以往利用羊膜提取间充质干细胞的研究多将注意力放在新鲜的羊膜标本上,由于地域和时间的限制,对羊膜进行保存是必须面对的实际问题.目的:实验拟比较从不同保存时间人羊膜标本中分离培养的羊膜间充质干细胞的增殖能力.设计、时间及地点:体外进行的细胞对照观察,于2007～01/2008-02在郑州大学医学院和生物工程系完成.材料:正常剖宫产的健康产妇志愿捐献的羊膜12份,孕38周,检测乙肝5项、HCV、HIV、梅毒等其他相关传染性指标均呈阴性.方法:无菌条件下将每份新鲜完整的羊膜平均分成3组,即新鲜1 h组、4℃放置24～36 h组、4℃放置48～60 h组.将3组标本剪碎,胰蛋白酶,胶原酶联合消化,过滤后收集单细胞悬液,以2×108 L-1密度接种,加入含胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12培养基,贴壁法纯化扩增细胞.主要观察指标:倒置昆微镜下观察细胞形态,绘制生长曲线.取第3代细胞进行免疫组织化学检测和流式细胞仪鉴定.结果:①3组标本消化后都含有多种单个细胞成分,呈圆形、菱形、短梭形、多角形,细胞折光性良好,此外还有多个上皮细胞聚集所成的细胞团.接种后1～3 d各组细胞均为潜伏期;4～7 d新鲜1 h组与4℃放置24～36 h组进入对数生长期,细胞增殖活跃,细胞数目旱指数级递增,4℃放置48～60 h组仍处于潜伏期;7 d后前两组细胞已铺满瓶底,4℃放置48～60 h组刚开始指数级递增.②各组细胞神经元烯醇化酶、神经丝蛋白、巢蛋白均呈阳性表达,胶质纤维酸性蛋白呈阴性.各组细胞CD29,CD44均呈阳性表达.结论:保存时间在60h内的人羊膜都可以分离出具有增殖能力的间充质干细胞,但36h内的羊膜标本所分离的间充质干细胞具有较快的增殖能力.【总页数】5页(P4877-4881)【作者】常克亮;关方霞;杨波;杜英;李祥生;宋来君;胡祥【作者单位】郑州大学第一附属医院神经外科,河南省郑州市420052;郑州大学生物工程系,河南省郑州市450001;郑州大学第一附属医院神经外科,河南省郑州市420052;郑州大学基础医学院生物与免疫学研室,河南省郑州市450052;郑州大学第一附属医院神经外科,河南省郑州市420052;郑州大学第一附属医院神经外科,河南省郑州市420052;深圳市北科细胞程研究所,广东省深圳市518000【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.不同消化分离方法分离人羊膜间充质干细胞效果比较 [J], 肖盼;陈剑;王彦平;吴静;郭娴吟;杨筱曦2.人羊膜间充质干细胞不同移植方式治疗大鼠脊髓损伤疗效比较 [J], 马晶晶;廖旭勇;赵玉洁;喻皇飞3.不同传代倍数人羊膜来源的间充质干细胞成骨成脂分化平衡的研究 [J], 陈霞;尹晓娟4.不同来源人羊膜间充质干细胞的混合培养 [J], 王兆福;焦红亮;李建斌;单泓;郑文迪;谷晨熙;杜英;关方霞;杨波5.人羊膜和牙周膜来源间充质干细胞免疫表型与干性标志基因表达的比较分析 [J], 陈辉;杨琨;蒋珊珊;林风琴;何青;方宁;余丽梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人羊膜间充质干细胞的生物学特征

人羊膜间充质干细胞的生物学特征1. 引言1.1 研究背景人羊膜间充质干细胞是一类重要的干细胞类型，具有广泛的临床应用前景。

研究人羊膜间充质干细胞的生物学特征是当前生物医学领域的热点之一。

通过对人羊膜间充质干细胞的深入研究，可以更好地了解其特性和潜在应用价值，为干细胞治疗和再生医学提供更多可能性。

人羊膜间充质干细胞来源广泛，易于获取，且具有较高的增殖活性和分化潜能。

这些特点使其成为一种理想的干细胞来源，可以用于治疗多种疾病和再生医学研究。

人羊膜间充质干细胞的免疫学特征较好，能够降低排斥反应的风险，为临床应用提供了有力支持。

1.2 研究意义人羊膜间充质干细胞的研究意义在于探索这一新型干细胞在临床应用中的潜力和机制。

人羊膜间充质干细胞具有广泛的多向分化潜能和免疫调节能力，因此可用于组织修复和再生医学领域。

研究人羊膜间充质干细胞的生物学特征，有助于深入了解其在不同疾病治疗中的作用机制，为开发新型干细胞治疗方案提供重要参考。

人羊膜间充质干细胞来源容易、获取成本低廉，具有较高的临床应用前景和潜力，可为医学研究和临床治疗提供新的思路和方法。

系统地研究人羊膜间充质干细胞的生物学特征，不仅有助于完善干细胞治疗技术，还能推动干细胞在临床应用中的更广泛应用，为促进医学进步和改善患者生活质量做出贡献。

2. 正文2.1 人羊膜间充质干细胞的来源人羊膜间充质干细胞的来源可以追溯到人羊膜组织。

人羊膜是胎儿在子宫内营养的一个重要器官，由外向内分别为羊膜皮层、羊膜绒毛层和羊膜上皮层。

羊膜上皮层中含有大量的间充质细胞，这些细胞具有一定的干细胞特性，具有自我更新、多潜能分化和抗衰老等特点。

人羊膜间充质干细胞的来源主要是通过孕妇在妊娠期间的羊水检查中获得。

一般来说，孕妇接受羊水穿刺检查时，抽取的羊水中会含有大量的羊膜间充质干细胞。

这些干细胞可以通过离心、培养和纯化等处理步骤，得到高纯度的人羊膜间充质干细胞，供科研和临床应用使用。

除了羊水检查外，人羊膜间充质干细胞还可以通过胎盘组织或胎盘血液等方式获得。

人羊膜间充质干细胞的分离与鉴定

人羊膜间充质干细胞的分离与鉴定崔冬冰;何志旭;李永念;舒莉萍;王黎龙【摘要】目的:探讨从人胎盘组织中分离羊膜间充质于细胞(hAMSCs).方法:收集剖宫产足月胎儿胎盘,采用组织块贴壁法分离出羊膜间充质干细胞并传代培养,对P1-P3代细胞进行细胞形态的观察,用流式细胞仪检测细胞膜表面阳性分子CD73-APC、CD90-FITC、CD44-PE、CD105-Cy5.5和阴性分子CD11 b-PE、CD19-PE、CD34-PE、CD45-PE、HLA-DR-PE,并采用六孔板法检测细胞增殖情况.结果:hAMSCs的细胞形态呈成纤维状,hAMSCs在培养3～6d达到对数增长期,通过流式检测,发现细胞可表达CD73、CD90、CD44和CD105,未表达CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR.结论:从体外成功分离培养出人羊膜间充质干细胞.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2014(039)001【总页数】5页(P8-11,17)【关键词】干细胞;细胞培养;胎盘;羊膜间充质干细胞;分离与鉴定【作者】崔冬冰;何志旭;李永念;舒莉萍;王黎龙【作者单位】贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院附院儿科学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院临床医学院,贵州贵阳550004;贵阳医学院免疫学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院免疫学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院实验动物中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R34-32胎盘是由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官，除含有滋养细胞外，还含有大量血管及间充质成分；胎盘间充质干细胞是近年来新发现的从胎盘获取的一类干细胞，与从脐带血或骨髓中提取的干细胞相比较，不但干细胞数量多而且可分化成多种类的组织细胞[1-2]。

骨髓间充质干细胞体外诱导和端粒酶活性的研究

骨髓间充质干细胞体外诱导和端粒酶活性的研究王海莲;鞠秀丽;李栋;侯怀水;时庆;孙念政;沈柏均【期刊名称】《临床血液学杂志》【年(卷),期】2007(20)6【摘要】目的:建立骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、纯化的方法,探讨其体外诱导条件和端粒酶活性。

方法:取正常成人骨髓用含10%小牛血清的LG-DMEM培养液培养、扩增。

流式细胞仪行细胞表面抗原检测,细胞化学染色鉴定其生物学特性,在特定培养条件下检测其向成骨和脂肪细胞分化的能力,采用TRAP(Telomerase repeat amplification protocol assay)-银染法测定其端粒酶的活性。

结果:分离培养获得的贴壁细胞,碱性磷酸酶染色阳性。

流式细胞仪检测CD34、CD45表达阴性,CD29、CD44、CD115、CD166表达阳性。

经向成骨和脂肪细胞诱导3周后,可得到成骨和脂肪细胞,经茜素红染色、油红O染色得到证实。

TRAP-银染法证实MSCs表达一定的端粒酶活性。

结论:体外分离培养的MSCs可以向成骨、脂肪诱导分化,表达一定的端粒酶活性,具有干细胞的生物学特性。

【总页数】4页(P363-366)【关键词】骨髓;干细胞;诱导分化;端粒酶活性【作者】王海莲;鞠秀丽;李栋;侯怀水;时庆;孙念政;沈柏均【作者单位】山东大学齐鲁医院儿科;山东大学齐鲁医院低温医学研究室【正文语种】中文【中图分类】R311.2【相关文献】1.端粒酶活性在骨髓间充质干细胞体外分化过程中的表达观察 [J], 何朝荣;刘先军;严世荣;张群林;王晓勋2.恒河猴骨髓间充质干细胞的体外培养及其端粒酶活性 [J], 王启伟;王万山;路艳蒙;朴英杰3.依达拉奉联合表皮生长因子诱导人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化中端粒酶活性的变化 [J], 胡资兵;曾荣;魏劲松;郑鸿;林颢;孙欣;吴少科4.骨髓间充质干细胞体外分化过程中端粒酶活性表达及意义 [J], 何朝荣;刘先军;严世荣;张群林;刘雪琴;王晓勋5.体外培养骨髓间充质干细胞的形态观察及其端粒酶活性 [J], 王启伟;王万山;路艳蒙;朴英杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的分离、体外培养及诱导分化

万方数据
万方数据
人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的分离、体外培养及诱导分化
作者：丛姗，宋瑾，张惠娟，李岩，白立恒，曹贵方， CONG Shan， SONG Jin， ZHANG Hui-Juan， LI Yan， BAI Li-Heng， CAO Gui-Fang
作者单位：丛姗,宋瑾,张惠娟,李岩,曹贵方,CONG Shan,SONG Jin,ZHANG Hui-Juan,LI Yan,CAO Gui-Fang(内蒙古农业大学兽医学院/动物组织胚胎学与发育生物学实验室,呼和浩特,010018)，白立恒,BAI Li-Heng(内蒙古
妇幼保健医院妇产科,呼和浩特,010020)
刊名：
农业生物技术学报
英文刊名：Journal of Agricultural Biotechnology
年，卷(期)：2015,23(1)
引用本文格式：丛姗.宋瑾.张惠娟.李岩.白立恒.曹贵方.CONG Shan.SONG Jin.ZHANG Hui-Juan.LI Yan.BAI Li-Heng.CAO Gui-Fang 人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的分离、体外培养及诱导分化[期刊论文]-农业生物技术学报 2015(1)。

人羊膜间充质干细胞体外传代培养对染色体核型的影响_崔冬冰

·基础研究·人羊膜间充质干细胞体外传代培养对染色体核型的影响崔冬冰１　范安然１　何志旭１，２＊　舒莉萍３１．贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心（贵阳，５５０００４）；２．贵州医科大学附属医学院儿科学教研室；３．贵州医科大学免疫学教研室摘　要　目的：分离培养人羊膜间充质干细胞（ｈＡＭＳＣｓ）并进行体外长期传代培养，通过对连续传代的细胞形态、膜表面标志、增殖、分化特性以及染色体核型进行研究，以观察体外培养对该细胞的影响，为其储备和临床应用提供实验依据。

方法：无菌条件下从新鲜人胎盘组织分离羊膜，采用组织贴壁法分离培养ｈＡＭＳＣｓ，并对原代细胞～Ｐ１１代细胞利用流式细胞技术检测其膜表面标志物；取Ｐ３～Ｐ４代细胞向神经细胞和成骨细胞诱导，免疫组化染色、ＰＣＲ检测基因表达情况；采用染色体Ｇ显带法制备染色体核型。

结果：ｈＡＭＳＣｓ形态似长梭型，呈流水状生长，细胞活性高，冻存复苏后仍能保持正常形态，并可在体外稳定扩增，细胞生长曲线呈“Ｓ”型；细胞高表达ＣＤ９０、ＣＤ７３、ＣＤ４４、ＣＤ１０５；细胞经诱导后可以向神经细胞和成骨细胞分化，神经元特异性烯醇化酶和成骨细胞矿化结节检测为阳性，ＰＣＲ检测巢蛋白和骨桥蛋白基因表达为阳性；Ｐ３～Ｐ１０代的ｈＡＭＳＣｓ染色体核型均为正常二倍体核型。

结论：ｈＡＭＳＣｓ在体外经数代培养后能保持间充质干细胞的外显和遗传特性，并且未见染色体核型异常改变。

关键词　羊膜间充质干细胞；传代培养；核型ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－８１８９．２０１６．０４Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ａｍｎｉｏｔｉｃ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｎ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｋａｒｙｏｔｙｐｅＣＵＩ　Ｄｏｎｇｂｉｎｇ１，ＦＡＮ　Ａｎｒａｎ１，ＨＥ　Ｚｈｉｘｕ１，２＊，ＳＨＵ　Ｌｉｐｉｎｇ３１．Ｔｈｅ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ　ａｎｄ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５０００４；２．Ｄｅ－ｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ｔｈｅ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＨＥ　Ｚｈｉｘｕ，Ｅｍａｉｌ：ｈｚｘ＠ｇｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎＡｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ａｆｔｅｒ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｈｕｍａｎ　ａｍｎｉｏｔｉｃ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ（ｈＡＭＳＣｓ），ａｎｄ　ｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ　ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，ｔｈｅｎ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｎ　ｈＡＭＳＣｓ　ｂｙ　ｏｂｓｅｒｖｉｎｇ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｈＡＭＳＣｓ，ｔｈｅ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍａｒｋｓ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｋａｒｙｏｔｙｐｅ．Ａｎｄ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅ　ｅｘ－ｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｅｖｉｄｅｎｃｅｓ　ｆｏｒ　ｒｅｓｅｒｖｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈＡＭＳＣｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｈＡＭＳＣｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｈｕ－ｍａｎ　ｐｌａｃｅｎｔａ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍ－ｅｔｒｙ．Ｔｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｉｎｔｏ　ｎｅｒｖｅｓ　ａｎｄ　ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅ　ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎａｎｄ　ｎｅｓｔｉｎ　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ＰＣＲ　ａｎｄ　Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　Ｇｉｅｍｓａ　ｂａｎｄｉｎｇｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ｈＡＭＳＣｓ　ｗｅｒｅ　ｄｏｍｉｎａｔｅｄ　ａｓ　ｌｏｎｇ　ｓｐｉｎｄｌｅ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｈａｄ　ｇｒｏｗｎ　ｉｎ　ｗａｔｅｒ　ｓｈａｐｅｄ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｃｅｌｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ａｆｔｅｒ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｈＡＭＳＣｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｅｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄ　ｓｔａｂｌｙ　ａｎｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｙｐｉｃａｌ＇Ｓ＇ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ．Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ９０，ＣＤ７３，ＣＤ４４ａｎｄ　ＣＤ１０５ｉｎ　ｈＡＭＳＣｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｌ　ｈｉｇｈ．Ａｆｔｅｒ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｈＡＭＳＣｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｎｅｒｖｅ　ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ．Ｔｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｈａｄ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｏｆ　ａｌｉｚａｒｉｎ　ｒｅｄ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄｎｅｕｒｏｎ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｅｎｏｌａｓｅ．Ｎｅｓｔｉｎ　ａｎｄ　ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｉｎ　ｔｈｅｓｅ　ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ｏｆｈＡＭＳＣｓ　ｋｅｐｔ　ｎｏｒｍａｌ　ｄｉｐｏｉｄ　ｋａｒｙｏｔｙｐｅ　ａｆｔｅｒ　Ｐ３ｔｏ　Ｐ１０ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｆｔｅｒ　ｓｅｖｅｒａｌ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ，ｈＡＭＳＣｓ　ｃａｎ　ｋｅｅｐ　ｅｘｐｌｉｃｉｔ　ｆｅａｔｕｒｅｓ，ｇｅｎｅｔｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｈａｓ　ｎｏ　ａｎｙｃｈａｎｇｅ　ｉｎ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｋａｒｙｏｔｙｐｅ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ａｍｎｉｏｔｉｃ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ；Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ；Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ基金项目：贵州省科学技术厅贵阳医学院联合基金计划项目黔科合ＬＨ字［２０１４］７０７８收稿日期：２０１５－１１－２７　修回日期：２０１６－０３－１５＊通讯作者：ｈｚｘ＠ｇｍｃ．ｅｄｕ．ｃｎ６３２中国计划生育学杂志２０１６年４月第２４卷第４期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｆａｍ　Ｐｌａｎｎ，Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．４，Ａｐｒｉｌ　２０１６间充质干细胞（ＭＳＣｓ）是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层，是具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，因具有组织修复、免疫调控、支持造血、免疫原性低、易于分离培养、体外能大量扩增及冻存等特点而受到关注，是干细胞研究及应用的热点［１］。

浅谈人羊膜间充质干细胞的临床前研究进展

浅谈人羊膜间充质干细胞的临床前研究进展羊膜位于胎盘的最内层，主要由来源于外胚层的上皮细胞和来源于中胚层的间充质细胞构成。

其不含血管，细胞成分相对简单，在胎儿娩出后即成为废弃物。

人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells, hAMSCs)有着来源丰富、无需有创操作、取材几乎不受限制、分离培养方法简便、有向3个胚层来源的组织细胞分化的潜能、免疫原性低等多种优点，可能成为一种更加理想的间充质干细胞(mcscnchymal stem cells, MSC)临床研究及应用的来源。

1 hAMSC、的生物学特性1. 1免疫表型及基因表达目前，hAMSC、还没有统一的表面标志物，但是大多数表面抗原和骨髓间充质干细胞(bonemarrow mesenchymal stem cells, BM-MSCs)相似。

Kim等万Zes通过分离羊膜间充质细胞并在体外扩增至第2,3代后获得成纤维样细胞，通过不同的培养条件分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、神经元细胞。

免疫表型分析结果显示，其表达SSFA-3 , SSEA-4、胶原蛋白-Ⅰ、-Ⅱ、-Ⅲ、-Ⅳ、-Ⅷ、纤维连接蛋白、a-SMA ,波形蛋白(Vimcnti )、结蛋白、细胞角蛋18 (CK18),HCAM-1、成纤维细胞表面蛋白和人类白细胞抗原(HLA)-A BC;弱表达ICAM-1蛋白;不表达TRA-1-60, VCAM-1,vWF, PFCAM-1和H LA-DR。

用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测发现无论传至几代，一些基因[如:Oct-4,Rex-1,SCF、神经细胞熟附分子(nerve cellular adhesion molecul,NCAM)、巢蛋白(Nestin)、骨形态发生蛋白(bone morphogc-ncticprotcin, BMP) 4、心肌特异性转录因子DATA-、肝细胞核因子(hcpatocytc ncclcar factor, H NF)-4a,波形蛋白(Vimcn-ti),CK18]始终持续表达。

脐带间充质干细胞体外传代培养后细胞核型稳定性

脐带间充质干细胞体外传代培养后细胞核型稳定性崔冬冰;何志旭;李永念;王凤昌【摘要】目的:研究脐带间充质干细胞(UC-MSCs)在经过培养和传代后是否会出现染色体异常改变.方法:收集剖宫产足月胎儿脐带,采用胶原酶加胰酶消化法和机械法分离出UC-MSCs间充质干细胞贴壁培养传代,观察细胞形态、免疫表型及细胞增殖实验等生物学特性,利用G显带分析原代(P0)和第3～6代(P3～P6)细胞的染色体核型.结果:染色体核型分析显示,P0和P3～ P6 UC-MSCs均为正常二倍体核型,G显带未见染色体结构异常;UC-MSCs呈成纤维样形态生长,P3～P6代高表达CD73、CD90、CD44,并且UC-MSCs在培养2～3d时达到对数增长期.结论:UC-MSCs在体外连续传代培养6代以内染色体结构稳定,未出现染色体异常改变.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2013(038)005【总页数】6页(P449-453,457)【关键词】脐带;间充质干细胞;连续传代;核型分析;细胞,培养的【作者】崔冬冰;何志旭;李永念;王凤昌【作者单位】贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R349.5;R349.891.1 标本来源2例脐带取自贵阳仁爱医院产科健康足月新生儿剖宫产手术后，经家属同意捐献所得，新生儿性别为1男1女。

1.2 材料DMEM-低糖培养基(Gibco公司)、FBS(Hyclone公司)、Ⅱ型胶原酶(Gibco公司)、胰蛋白酶(Gibco公司)、流式抗体试剂盒(BD公司)、CO2细胞培养箱(Thermo公司)、流式细胞仪(BD公司)、Leica核型分析系统、染色体培养基、秋水仙碱、甲醇、冰乙酸、、姬姆萨染液、细胞培养瓶等。

成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性

成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性毕薇薇;郭巍;赵春明;郭立斌;李志刚【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2007(011)028【摘要】目的:观察成人骨髓间充质干细胞体外分离培养方法及其生物学特性,为骨髓间充质干细胞的临床应用奠定技术基础.方法:实验于2005-12在吉林省四平市中心医院中心实验室进行.实验材料:人骨髓间充质干细胞,Ficoll淋巴细胞分离液,胎牛血清,牛血清白蛋白,α-MEM培养基,胰蛋白酶,FITC标记的CD44和CD90.实验方法:①人骨髓间充质干细胞的分离与培养:采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,条件培养基培养和扩增,倒置光学显微镜下观察细胞形态及生长情况.②人骨髓间充质干细胞生长曲线的测定:取生长良好的P1,P5,P10细胞,用胰酶消化,接种于24孔板培养,每天各取3孔消化计数细胞,取平均值,连续培养7 d,绘制生长曲线.③人骨髓间充质干细胞表面标志的测定:取生长良好P5细胞进行免疫荧光染色鉴定(CD44,CD90并设同型对照).④人骨髓间充质干细胞的冻存及复苏:收集生长良好细胞,计数细胞密度及冻前存活率.将细胞加入到细胞冻存液中液氮冷冻保存.30 d后复苏细胞,每日倒置光学显微镜下观察细胞生长状况.结果:①倒置显微镜下观察细胞形态:倒置显微镜下观察细胞呈纤维形,漩涡状生长.②人骨髓间充质干细胞的生长曲线分析:传代的细胞生长较原代要快,从第10代开始细胞生长开始出现缓慢征象.③细胞表面标记检测结果:免疫荧光染色后细胞膜着色明显,CD44,CD90阳性率均大于90%.④细胞冻存及复苏生长特性分析:椎虫蓝计数细胞存活率90%以上,增殖能力强,和未冻存过的传代细胞具有同样的生长特性.结论:应用密度梯度法分离法能获得较高纯度的骨髓间充质干细胞,能在体外长期培养,在传代培养5代内生长旺盛且生物学特性稳定.【总页数】4页(P5519-5522)【作者】毕薇薇;郭巍;赵春明;郭立斌;李志刚【作者单位】四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000;四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000;四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000;四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000;四平市中心医院中心实验室,吉林省四平市,136000【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.成人骨髓间充质干细胞体外培养及其生物学特性鉴定 [J], 闫磊;慕晓玲2.兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性 [J], 李松;郭延伟;房殿吉3.兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性 [J], 李松;郭延伟;房殿吉4.体外培养慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的生物学特性 [J], 黄栋;李巍;刘羽;朱希山5.成人骨髓间充质干细胞体外培养扩增及其生物学特性研究 [J], 罗依;梁彬;余勤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同周期新辅助化疗后乳腺癌干细胞的分离培养和体外增殖特性

不同周期新辅助化疗后乳腺癌干细胞的分离培养和体外增殖特性刘伟;魏冬冬;韩立杰【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2015(000)036【摘要】背景：接受不同周期新辅助化疗的乳腺癌组织中是否都存在乳腺癌化疗微球体以及其对乳腺癌干细胞分离培养的影响尚不清楚。

<br> 目的：探讨不同周期新辅助化疗后乳腺癌组织乳腺癌干细胞的体外增殖特性。

<br> 方法：从不同周期新辅助化疗后的乳腺癌组织中分离微球体，绘制细胞生长曲线，免疫细胞化学检测乳腺癌干细胞标记物ALDH1表达情况。

<br> 结果与结论：从新辅助化疗1个周期的标本中无法获得微球体，化疗2，3，4个周期的部分标本中可以培养出微球体。

在培养的前3 d，化疗3个周期和化疗2个周期细胞数差异无显著性意义，但在3 d 之后，化疗3个周期的细胞增殖速度显著快于化疗2个周期，6 d 之后，化疗2个周期的细胞生长曲线呈现出平缓的状态，化疗3个周期则呈现出迅速上升的状态。

化疗3个周期标本的乳腺癌干细胞微球体中ALDH1阳性细胞比例大于化疗2个周期。

结果表明化疗2、3个周期的乳腺癌干细胞均具有一定的增殖和分化能力，从化疗后的乳腺癌组织中分离乳腺癌干细胞宜选取化疗3个周期及以上的标本。

%BACKGROUND:Whether there are breast cancer stem cel microspheres in the breast cancer tissues and whether these microspheres have an impact on isolation and culture of breast cancer stem cel s after different cycles of neoadjuvant chemotherapy are stil unclear. OBJECTIVE:To explore the proliferation and differentiation ofbreast cancer stem cel s in breast cancer tissues after different cycles of neoadjuvant chemotherapy. METHODS:Breast cancer stem cel microspheres were isolated from the breast cancer tissues after different cycles of neoadjuvant chemotherapy to drawn a cel growth curve. Immunocytochemical method was used to detect ALDH1 expression. RESULTS AND CONCLUSION:Microspheres could be obtained from the specimens of neoadjuvant chemotherapy for two, three and four cycles rather than one cycle. At 3 days prior to culture, there was no difference in the number of cel s isolated after two-and three-cycle neoadjuvant chemotherapy;but after 3 days, the cel s from the three-cycle neoadjuvant chemotherapy proliferated faster than those from the two-cycle neoadjuvant chemotherapy;after 6 days, the cel growth curve of two-cycle neoadjuvant chemotherapy was in the plateau stage, and the proliferation of cel s from the three-cycle neoadjuvant chemotherapy showed a rapid increase trend. The positive expression of ALDH1 in the microspheres from the three-cycle neoadjuvant chemotherapy was higher than that from the two-cycle neoadjuvant chemotherapy. These findings indicate that breast cancer stem cel s from the specimens of two-and three-cycle neoadjuvant chemotherapy both have proliferation and differentiation potentials, and the specimens of three-cycle neoadjuvant chemotherapy or above are preferred.【总页数】5页(P5806-5810)【作者】刘伟;魏冬冬;韩立杰【作者单位】沧州市中心医院肿瘤外三科，河北省沧州市 061001;沧州市中心医院肿瘤外三科，河北省沧州市 061001;沧州市中心医院肿瘤外三科，河北省沧州市 061001【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.AcSDKP对体外培养条件下人骨髓间充质干细胞增殖周期的影响 [J], 戴国;李烨;彭彬;徐倩;汪保和2.体外分离培养的心脏干细胞具有间充质干细胞的特性 [J], 王丽娜;宋祥和;刘艳华;苏位君;周曼倩;童玲玲;王宝玉;郑国光;李宗金3.不同周期新辅助化疗后乳腺癌干细胞的分离培养和体外增殖特性 [J], 刘伟;魏冬冬;韩立杰;4.不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生长增殖及生物学特性的影响[J], 马力;刘大军;李德天;刘沛田;边小慧5.不同分离及培养方法对大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖和生物学特性的影响 [J], 贾贵清;张明鸣;杨平;程惊秋;陆燕蓉;伍晓汀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

浅谈人羊膜间充质干细胞的临床前研究进展

浅谈人羊膜间充质干细胞的临床前研究进展羊膜位于胎盘的最内层,主要由来源于外胚层的上皮细胞和来源于中胚层的间充质细胞构成。

其不含血管,细胞成分相对简单,在胎儿娩出后即成为废弃物。

人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells, hAMSCs)有着来源丰富、无需有创操作、取材几乎不受限制、分离培养方法简便、有向3个胚层来源的组织细胞分化的潜能、免疫原性低等多种优点,可能成为一种更加理想的间充质干细胞(mcscnchymal stem cells, MSC)临床研究及应用的来源。

1 hAMSC、的生物学特性1. 1免疫表型及基因表达目前,hAMSC、还没有统一的表面标志物,但是大多数表面抗原和骨髓间充质干细胞(bonemarrow mesenchymal stem cells, BM-MSCs)相似。

Kim等万Zes通过分离羊膜间充质细胞并在体外扩增至第2,3代后获得成纤维样细胞,通过不同的培养条件分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、神经元细胞。

免疫表型分析结果显示,其表达SSFA-3 , SSEA-4、胶原蛋白-Ⅰ、-Ⅱ、-Ⅲ、-Ⅳ、-Ⅷ、纤维连接蛋白、a-SMA ,波形蛋白(Vimcnti )、结蛋白、细胞角蛋18 (CK18),HCAM-1、成纤维细胞表面蛋白和人类白细胞抗原(HLA)-A BC;弱表达ICAM-1蛋白;不表达TRA-1-60, VCAM-1,vWF, PFCAM-1和H LA-DR。

用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测发现无论传至几代,一些基因[如:Oct-4,Rex-1,SCF、神经细胞熟附分子(nerve cellular adhesion molecul,NCAM)、巢蛋白(Nestin)、骨形态发生蛋白(bone morphogc-ncticprotcin, BMP) 4、心肌特异性转录因子DATA-、肝细胞核因子(hcpatocytc ncclcar factor, H NF)-4a,波形蛋白(Vimcn-ti),CK18]始终持续表达。

人羊膜间充质细胞的分离培养及其生物学特性探讨

人羊膜间充质细胞的分离培养及其生物学特性探讨丁淑芹;樱川宣男【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2015(000)014【摘要】目的：对人羊膜间充质细胞（hAMC）的分离培养及其生物学特性进行探讨。

方法：取38～40周孕妇剖腹产术后羊膜，用多种酶消化分离提纯hAMC ，观察其体外生长的特征和形态学；用免疫细胞化学方法检测hAMC的神经及肝脏发生相关蛋白的表达；同时探讨其致瘤性。

结果：从羊膜中分离出高纯度hAMC ，并摸索出其最适合的培养条件；细胞成细长梭形或星形，胞质丰富，细胞核呈圆形，1～3个核仁，易贴壁，生长繁殖快，在体外可连续培养10代以上。

免疫细胞化学结果显示：神经发生相关蛋白（Musashi‐1、Nestin、Vimentin）阳性以及肝脏发生相关蛋白[Flt‐1、In‐tegrinβ1、HNF（3β、4α、1α）、C／EBPα、Albumin、AAT ]等阳性；主要组织相容性复合体Ⅱ（Human M HC Class Ⅱ）阴性，主要组织相容性复合体Ⅰ（Human M HC Class Ⅰ）弱阳性；癌化实验显示hAMC无致瘤性。

结论：羊膜中分离提纯的hAMC为一种具备多分化潜能的干细胞，至少可分化为神经及肝脏细胞。

hAMC具有低免疫源性、无致瘤性等特点，为再生医学研究提供新的细胞来源。

%Objective :For the use of human amniotic mesenchymal cells (hAMC) in regenerative medicine ,we attemp‐ted to establish the method for their isolation and to elucidate their biological characteristics .Methods :The amniotic membrane separated from the placenta of 38~40 weeks of pregnancy obtained by Caesarean section was treated with a enzyme mixture containing trypsin .Thusobtained cells were used for neurogenetics and hepato geneticstudies .The de‐gree of differentiation was assayed bymorphological ,biochemical and immunological methods .Results:We succeeded in obtaining highly purified hAMC and establishing appropriate culture methods for cell differentiation .The isolated cells showed bipolar spindle shape in morphology with one nucleus (often two‐three nuclei) in the center of rich cytoplasm . They rapidly grew and could be maintained more than 10 passages ,without transformation .Upon neuronal induction , thes e cell showed neuron markers ,such as Mushashi‐1 ,Nestin ,Vimentin and also upon hepatic induction ,Flt‐1 ,Inte‐grinβ1 ,HNF4(3β,4α,1α) ,C/EBPα,Albumin ,AAT .M HC‐class Ⅰ was weakly detected in some cells but M HC‐classⅡ was essentially absent in these cells .Conclusion:hAMC isolated from amniotic membrane contained cell populations to differentiate at least to neuronal cells and hepatocytic cells .hAMC ,with only weak M HC‐classⅠ ,do not transform . These results suggest that hAMC are suitable source for the regenerative medicine .【总页数】4页(P1824-1827)【作者】丁淑芹;樱川宣男【作者单位】首都医科大学附属北京佑安医院，北京市 100069;日本生物资源应用研究所【正文语种】中文【中图分类】R329【相关文献】1.人羊膜间充质细胞的神经生物学特性及其治疗帕金森模型小鼠的实验研究 [J], 蔡哲;左萍萍;贺春;徐杨;高艳;崔晓慧;周忠蜀;向青;胡景伟;潘琳;张岚;舒峻;徐波;梁妍2.体外培养人羊膜间充质细胞的神经生物学特点 [J], 胡景伟;贺春;徐杨;高艳;崔晓慧;蔡哲;周忠蜀;张岚;舒峻;潘琳;黄小杰;徐波;向青3.人羊膜上皮细胞的分离、纯化及其生物学特性研究 [J], 金玲;陈剑;吴静;徐锦堂;周清;刘小勇;赵松滨4.人羊膜间充质细胞的分离培养及向胰岛样细胞诱导分化 [J], 彭琳;王建;卢光绣5.人脐血间充质细胞体外分离培养方法及培养基特性 [J], 刘素芳;鄢文海;韩雪飞;阎明;邢莹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

体外扩增传代对骨髓间充质干细胞归巢相关因子的影响

体外扩增传代对骨髓间充质干细胞归巢相关因子的影响许雯;田晨;李芳;夏冰;郭青;张翼鷟【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2013(017)040【摘要】背景：间充质干细胞移植后在体内的归巢能力，会随着供体细胞在体外的培养传代而下降，从而严重影响了间充质干细胞对靶组织的修复作用。

目的：探讨体外扩增传代对人骨髓来源间充质干细胞归巢相关因子的影响。

方法：应用Ficol 密度梯度离心法将间充质干细胞自骨髓中分离出来，利用其贴壁生长的特性加以纯化，在常规培养条件下培养至第7代，观察原代及第3，5，7代细胞的形态学特点。

采用MTT法检测第3，5，7代间充质干细胞的生长增殖特性，并绘制生长曲线。

Real-time PCR法检测第3，5，7代间充质干细胞中归巢相关因子CXCR4、CXCR6、CXCL12（SDF-1）、CD44的表达，以2-△△Ct计算各代细胞目的基因的相对表达量，比较不同代次间充质干细胞中各细胞归巢因子表达的差异。

结果与结论：采用密度梯度离心法自骨髓获得单个核细胞，将其贴壁培养传至第3代，可获得纯度较高的间充质干细胞。

其在体外的增殖能力较强，但随着传代扩增次数增加，形态从细长梭形逐渐缩短变宽，增殖速率、总体扩增倍数以及CXCR4、CXCR6、CXCL12、CD44等细胞归巢因子的表达亦随传代培养而呈下降趋势。

结果显示，间充质干细胞的归巢能力随扩增传代而逐渐下降，其机制可能与CXCR4、CXCR6、CXCL12、CD44等归巢相关因子在间充质干细胞中的表达水平下降有关。

【总页数】8页(P7102-7109)【作者】许雯;田晨;李芳;夏冰;郭青;张翼鷟【作者单位】天津医科大学附属肿瘤医院血液科,天津市“肿瘤防治”重点实验室,天津市300060【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.特定序列寡核苷酸对人骨髓间充质干细胞体外扩增及成骨分化的影响 [J], 刘春秀;满大鹏;杜晓岩;康宁;董平;肖苒;王丽颖2.体外扩增对脐带血CD34+细胞归巢相关分子影响的研究 [J], 汪健;孙自敏;李庆;王翠翠3.体外扩增传代对骨髓间充质干细胞归巢相关因子的影响 [J], 许雯;田晨;李芳;夏冰;郭青;张翼鷟4.短期体外扩增对脐带血干/祖细胞归巢相关功能影响的研究 [J], 李桥川;邱录贵5.冠心病病人自身相关因素对体外扩增后骨髓间充质干细胞数量的影响 [J], 杨宇辉; 赵文强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人羊膜成纤维细胞的分离和鉴定

人羊膜成纤维细胞的分离和鉴定张啸环;段明华;闫玉礼;潘新;李海清;周长龙;赵天倚【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2018(044)004【摘要】目的:建立人羊膜成纤维细胞的体外培养方法,通过细胞的形态特征和免疫组织化学进行鉴定,从而获得人羊膜成纤维细胞,为后续的干细胞研究奠定基础.方法:从足月分娩人胎盘剥离羊膜,胰蛋白酶和胶原酶消化后分离人羊膜成纤维细胞,采用含表皮生长因子(EGF)的DMEM培养基进行培养.显微镜下观察细胞形态表现,采用HE染色和免疫组织化学染色分析细胞特征,采用流式细胞术(FCM)分析人羊膜成纤维细胞的纯度.结果:采用胰蛋白酶和胶原酶先后消化获得人羊膜成纤维细胞,显微镜下观察,细胞呈放射状或旋涡状生长.免疫组织化学染色,人羊膜成纤维细胞明显表达成纤维细胞标志物波形蛋白(Vimentin),不同程度地表达S100钙结合蛋白A4(S100A4),不表达上皮细胞标志物角蛋白19(CK19).流式细胞术分析,人羊膜成纤维细胞的纯度为86.1％.结论:成功建立了人羊膜成纤维细胞分离和鉴定方法,获得的细胞具有成纤维细胞的特异标志和表型特征.【总页数】5页(P845-848,封3)【作者】张啸环;段明华;闫玉礼;潘新;李海清;周长龙;赵天倚【作者单位】长春中医药大学药学院中药炮制教研室,吉林长春 130107;长春中医药大学药学院中药炮制教研室,吉林长春 130107;长春中医药大学药学院中药炮制教研室,吉林长春 130107;空军航空大学,吉林长春 130022;空军航空大学,吉林长春 130022;空军航空大学,吉林长春 130022;长春中医药大学药学院中药炮制教研室,吉林长春 130107【正文语种】中文【中图分类】Q813.1【相关文献】1.人胚胎成纤维细胞的分离、培养和鉴定及人胚胎生殖细胞体外生长所需细胞因子的表达 [J], 王英;何津;李玉林2.人羊膜间充质干细胞的分离与鉴定 [J], 崔冬冰;何志旭;李永念;舒莉萍;王黎龙3.人羊膜上皮细胞的分离、培养及鉴定 [J], 方宁;宋秀军;张路;章涛;陈代雄4.人胎盘羊膜上皮细胞的分离鉴定及多向诱导分化 [J], 李萍;王久存;陆瑶;许惠利;5.人胎盘羊膜上皮细胞的分离鉴定及多向诱导分化 [J], 李萍;王久存;陆瑶;许惠利因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人脱细胞羊膜与骨髓间充质干细胞复合体修复关节软骨缺损

人脱细胞羊膜与骨髓间充质干细胞复合体修复关节软骨缺损姜良斌;韦标方;冯志;岳永彬【摘要】背景:骨髓间充质干细胞在软骨组织工程研究中作为一种常见的种子细胞被广泛应用于软骨缺损修复.目的:以人脱细胞羊膜作为细胞支架负载兔骨髓间充质干细胞用以修复兔股骨髁间窝软骨缺损.方法:将兔骨髓间充质干细胞接种于人脱细胞羊膜上,体外共培养2周.建立兔股骨髁间窝区关节软骨缺损模型,右膝软骨缺损处设为空白对照组,不植入任何材料,左膝软骨缺损处为实验侧,分别植入人脱细胞羊膜-骨髓间充质干细胞和单纯人脱细胞羊膜.术后第8,12周,取膝关节软骨缺损部位新生组织,行大体观察、组织学检测,评估新生软骨质量.结果与结论:①大体观察结果:人脱细胞羊膜-骨髓间充质干细胞组有类软骨形成,质地较软,与周围正常软骨结合良好;人脱细胞羊膜组未形成软骨组织.空白对照组缺损区只由纤维样组织填充;②组织学观察结果:人脱细胞羊膜-骨髓间充质干细胞组新生出软骨细胞及软骨陷窝,并形成软骨基质,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性.软骨基质甲苯胺蓝染色较深.人脱细胞羊膜组仅有极少量的软骨细胞,甲苯胺蓝染色较浅,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阴性,无软骨基质形成.空白对照组为纤维组织修复,甲苯胺蓝染色较浅;③结果表明,人脱细胞羊膜有利于骨髓间充质干细胞的软骨化,软骨缺损处由类软骨组织填充,能够有效修复关节软骨缺损.%BACKGROUND: Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) as common seed cells have been widely used in tissue-engineered cartilage repair.OBJECTIVE: To use human amniotic membrane as a cell scaffold to carry rabbit BMSCs in order to repair articular cartilage defects in the femoral intercondylar fossa of rabbits.METHODS: Rabbit BMSCs were inoculated onto the human acellular amniotic membrane (HAAM) and co-cultured for 2 weeks. Articular defect models were made inthe femoral intercondylar fossa of rabbits. The defects of the right knees served as blank control. BMSCs/HAAM composite was transplanted into the defect of the left knee joint as composite group, and HAAM was implanted into the defect of the left knee joint as HAAM group. These rabbits were killed at 8 and 12 weeks after implantation and the newly cartilage samples were evaluated grossly and histologically and then graded.RESULTS AND CONCLUSION: Gross observation showed the defects were filled with cartilaginous tissues in the composite group, and there were no cartilage tissues in the HAAM group, while only fibrous tissues were seen in the blank control group. Histologically, the defect region was full of chondrocytes in the compositegroup,immunohistochemistry staining indicated that collagen II was rich in the tissue, and furthermore, the cartilage matrix was stained deeply by toluidine blue. In the the HAAM group, there were few chondrocytes, toluidine blue staining was weakly positive, and immunohistochemistry staining was negative, indicating there was no cartilage matrix. In the blank control group, the defects were filled of fibroblasts and toluidine blue staining was weakly positive. To conclude, the BMSCs/HAAM is a good scaffold for BMSCs chondrogenic differentiation to effectively repair articular cartilage defects.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2017(021)026【总页数】6页(P4113-4118)【关键词】生物材料;软骨生物材料;羊膜;骨髓间充质干细胞;软骨缺损;兔【作者】姜良斌;韦标方;冯志;岳永彬【作者单位】广州中医药大学,广东省广州市 510006;临沂市人民医院,山东省临沂市 276000;临沂市人民医院,山东省临沂市 276000;临沂市人民医院,山东省临沂市276000;广州中医药大学,广东省广州市 510006;临沂市人民医院,山东省临沂市276000【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言 Introduction关节软骨损伤是临床上较为常见的问题，软骨自我修复能力差，传统疗法效果不理想，长期困扰着医生和患者。

人骨髓间充质干细胞与羊膜间充质干细胞的研究进展

人骨髓间充质干细胞与羊膜间充质干细胞的研究进展陈锐憬【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2017(046)027【总页数】4页(P3863-3866)【关键词】间质干细胞;人骨髓间充质干细胞;羊膜间充质干细胞【作者】陈锐憬【作者单位】昆明医科大学第一附属医院血液科/云南省血液病研究中心 650032【正文语种】中文【中图分类】R321间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)广泛存在于机体的各种组织器官中，例如骨髓、脂肪、羊膜、脐带等。

最初MSC是在骨髓中被发现的，因此骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)被认为是干细胞的最好来源，并且用BMSC作为衡量其他组织干细胞来源的标准[1]。

在其他组织来源的MSC中，羊膜间充质干细胞(amniotic mesenchymal stem cells,AMSC)因具有增殖能力强、免疫原性低和来源无伦理学争议等特点备受专家学者们的关注，被视为BMSC的理想替代物。

本文就BMSC和AMSC的生物学特性、免疫调节机制及临床运用的潜在价值进行综述。

hBMSC主要来源于骨髓，需经有创操作进行采集，具有一定伦理学争议。

hBMSC常用的体内分离方法有4种：密度梯度离心法、全骨髓贴壁分离法、流式细胞仪分离法和免疫磁珠分离法。

其中密度梯度离心法应用最广泛也最为经典，此方法获得的hBMSC纯度高，增殖活性强，但操作复杂，故研究者常用简单易行的贴壁法与此结合。

最近，有学者探索使用一种BMSC过滤装置分离纯化MSC，这种滤过装置可快速、高效、可靠地分离BMSC，避免BMSC被外界污染物污染[2]。

BMSC最常用的培养液是含10%～20%胎牛血清的DMEM培养基。

MSC在骨髓中的含量稀少，大约1×105～1×106个单核细胞中含有1个MSC，体外分离培养、扩增纯化在科学研究及临床应用当中就显得尤为重要。

人羊膜间充质干细胞培养方法的改进

人羊膜间充质干细胞培养方法的改进崔冬冰;范安然;何志旭【摘要】目的：建立一种高效分离培养人羊膜间充质干细胞的方法。

方法：分别用酶消化法、传统组织块贴壁法和改进的组织块贴壁法分离出hAMSCs，观察3种方法所获得hAMSCs细胞形态、获得时间，流式细胞学检测其免疫表型；并用不同的诱导体系将hAMSCs向成骨细胞、成神经细胞进行诱导分化，鉴定其分化潜能。

结果：改进的组织块贴壁法获得hAMSCs细胞的纯度更高，传代次数更多，相同的培养时间里，获得的细胞数量是酶消化法的3~4倍，是传统组织块贴壁法的1~2倍；hAMSCs细胞高表达CD73、CD90、CD44和CD105，不表达CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR；茜素红染色和神经元特异性烯醇化酶检测证实hAMSCs细胞可诱导分化为成骨细胞和神经细胞。

结论：改进的hAMSCs分离培养方法可获得较大数量细胞，且保留了向神经细胞或成骨细胞可分化潜能。

%[ Abstract]Objective:To investigate and improve the method of human amnion mesenchymal stem cellsseparation and culture( hAMSCs). Methods:The hAMSCs were established with the methods oftrypsin,collagenase II,traditional and improved tissueattachment,respectively. The cell morphology and the growth time of hAMSCs were observed,and the immunophenotype were also detected with flow cytometry. In addition,hAMSCs were induced to differentiate into osteoblast and neuroblast with dif-ferent system and the derived osteoblast and neuroblast were identified then. Results:The hAMSCs obtained with the improved separation method obtain higher purity and can be passaged more times, and the quantity of obtained hAMSCs can bereached up to 3~4 times of enzyme digestion,and 1~2 times of traditional tissue attachment method within the same culture time;furthermore,the obtained hAMSCs highly express CD73,CD90,CD44 and CD105 while did not express CD11b,CD19,CD34, CD45 and HLA-DR;the alizarin staining and neuron-specific enolase detection demonstrated that hAMSCs could be induced into osteoblast and neuroblast. Conclusions:The methods of hAMSCs sepa-ration and culture are improved and will provide the basis for the research and application of hAMSC.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2016(041)004【总页数】5页(P414-417,426)【关键词】人羊膜间充质干细胞;细胞培养;鉴定;诱导【作者】崔冬冰;范安然;何志旭【作者单位】贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心，贵州贵阳 550004;贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心，贵州贵阳 550004;贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心，贵州贵阳 550004【正文语种】中文【中图分类】R329.3间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一类具有高度增殖和多向分化潜能的成体干细胞，来源广泛，可从多个器官或组织中分离获得，因具有低免疫原性等特点，而成为细胞疗法的主要种子细胞，有着广阔的应用前景[1]。

人羊膜间充质干细胞的培养及鉴定与诱导的开题报告

人羊膜间充质干细胞的培养及鉴定与诱导的开题报告一、研究背景与意义羊膜间充质干细胞（Amniotic mesenchymal stem cells，AMSCs）是一种来源于羊膜间充质层的多能干细胞。

AMSCs有着广阔的应用前景，在组织工程、再生医学、干细胞治疗等领域都有很大的潜力。

因此，对AMSCs的培养和鉴定及其诱导分化的研究具有重要的生物学和医学意义。

二、研究内容和方法本文主要研究AMSCs的培养和鉴定及其诱导分化。

研究方法包括：1. AMSCs的分离和培养：通过羊膜组织的分离和消化，获取羊膜间充质细胞。

将羊膜间充质细胞进行原代培养，筛选出AMSCs并进行扩增培养。

2. AMSCs的鉴定：通过流式细胞术（flow cytometry）检测AMSCs的表面标记物，如CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD146以及CD166等，以验证其特异性。

3. AMSCs的诱导分化：将AMSCs分别诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞，通过相关实验方法分别鉴定和验证其分化效果。

三、预期研究结果本研究预期能够成功分离和培养出AMSCs，并通过流式细胞术验证其特异性。

进一步实验表明，分别诱导AMSCs分化成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的实验结果符合预期的分化效果，即分别表现出特定的细胞形态和特异性标记物的表达，证明其具备多向分化能力。

四、结论本研究将为AMSCs的应用提供重要基础，对于深入研究其在组织工程、再生医学以及干细胞治疗等领域的应用前景有着重要的作用。

同时，本研究对于羊膜间充质细胞以及干细胞诱导分化等领域的研究也有所裨益。